CC BY
39
После лечения наблюдалась аналогичная картина: имелись дискордантные изменения активности всех исследуемых ферментов.
Список литературы
1. Баранов, А. В. Эпидемиологические и клинические особенности хронического гепатита С / А. В. Баранов, В. В. Малеев // Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2008. - № 2. - С. 32-35.
2. Нарциссов, Р. П. Применение n-нитротетразолия фиолетового для количественной цитохимии дегидрогеназ лимфоцитов человека / Р. П. Нарциссов // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. - 1969. - № 5. - С. 85-91.
3. Николаева, Л. И. Иммунитет при разных формах гепатита С / Л. И. Николаева, Л. В. Оленина, Е. Ф. Колесанова // Russian J. оf Immunology. - 2009. - T. 4, № 2. - C. 91-112.
4. Онищенко, Г. Г. Распространение вирусных гепатитов как угроза национальной безопасности / Г. Г. Онищенко, Л. А. Дементьева // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2003. - № 4. - С. 93-99.
5. Пигаревский, В. Е. Зернистые лейкоциты и их свойства / В. Е. Пигаревский. - М. : Медицина, 1978. - 128 с.
6. Пигаревский, В. Е. Полиморфноядерный лейкоцит и макрофаг в реакциях воспаления и гиперчувствительности / В. Е. Пигаревский // Архив патологии. - 1983. - Т. 15, № 11. - С. 14-22.
7. Фрейдлин, И. С. Иммунная система и ее дефекты / И. С. Фрейдлин. - СПб. : НТФФ «Поли-сан», 1998. - 112 с.
8. Фрейдлин, И. С. Система мононуклеарных фагоцитов / И. С. Фрейдлин. - М. : Медицина, 1989. - 272 с.
9. Belkaid, Y. Natural regulatory T cells in infectious disease / Y. Belkaid, B. T. Rouse // Nature Immunol. - 2005. - Vol. 6, № 4. - P. 353-360.
10. Cabrera, R. An immunomodulatory role for CD4(+) CD25(+) regulatory T lymphocytes in hepatitis C virus infection / R. Cabrera, Z. Tu, Y. Xu et al. // Hepatology. - 2004. - Vol. 40, № 5. -P.1062-1071.
11. Desmet, V. J. Classification of chronic hepatitis : diagnosis, grading and staging / V. J. Desmet, M. Gerber, J. H. Hoofnagle // J. Hepatol. - 2004. - Vol. 19, № 6. - P. 1513-1520.
Алиева Алтынай Асылбековна, очный аспирант третьего года обучения кафедры инфекционных болезней, ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России, 414011, г. Астрахань, ул. Началовское шоссе, д. 7, тел. : 8-917-098-55-61, e-mail: altynai_aibolit@mail.ru.
Галимзянов Халил Мингалиевич, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой инфекционных болезней, ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, д. 121, тел.: (8512) 52-41-43, e-mail: agma@astranet.ru.
УДК 616.12-008.331.1:611-018.74
© А.Х. Ахминеева, О.С. Полунина, Л.П. Воронина, И.В. Севостьянова, 2013
А.Х. Ахминеева, О.С. Полунина, Л.П. Воронина, И.В. Севостьянова
ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ, ГЕНЕТИЧЕСКИЕ И БИОХИМИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ СОСТОЯНИЯ СОСУДИСТОГО ЭНДОТЕЛИЯ ПРИ ГИПЕРТОНИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ
ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России
Проведена диагностика поражения сосудистого эндотелия у больных гипертонической болезнью на основе изучения полиморфизма гена эндотелиальной синтазы оксида азота, состояния вазорегулирующей функции эндотелия, эндотелина-1 и уровня натрийуретического пептида типа С. Было обследовано 30 больных ГБ и 27 соматически здоровых лиц Астраханского региона в качестве контрольной группы. У больных гипертонической болезнью наблюдалось развитие эндотелиальной дисфункции, преимущественно умеренно выраженной. Выявлено влияние У№1"Я-полиморфизма на функциональное состояние сосудистого эндотелия и продукцию эндотелина-1 и натрийуретического пептида типа С при гипертонической болезни.
Ключевые слова: гипертоническая болезнь, полиморфизм гена эндотелиальной синтазы оксида азота, эндотелин-1, натрийуретический пептид типа С, эндотелиальная дисфункция.
40
A.H. Akhmineeva, O.S. Polunina, L.P. Voronina, I.V. Sevostyanova
THE FUNCTIONAL, GENETIC AND BIOCHEMICAL MARKERS OF THE STATE OF THE VASCULAR ENDOTHELIUM IN HYPERTENSIVE DISEASE
The diagnosis of the damage of the vascular endothelium in patients with hypertensive disease based on the study of polymorphism of the gene of endothelial nitric oxide synthase, the condition of vasoregulating function of endothelium, endothelin-1 and the level of type C of natriuretic peptide were carried out. 30 patients with HD and 27 somatically healthy individuals of the Astrakhanian region as a control group have been examined. Patients with HD demonstrated the development of endothelial dysfunction mainly with moderate manifestation. The influence of VNTR-polymorphism on the functional state of vascular endothelium and the production of endothelin-1 and type C of natri-uretic peptide at hypertensive disease were revealed.
Key words: hypertensive disease, polymorphism of the gene of endothelial nitric oxide synthase, endothelin-1, type C of natriuretic peptide, endothelial dysfunction.
Введение. Артериальная гипертензия в настоящее время является одним из самых распространенных заболеваний. Становление гипертонической болезни (ГБ), перевод нормальной регуляции артериального давления в сторону прогрессирующей болезни осуществляет не центральный - нервный механизм, а изменения, происходящие в периферическом сосудистом русле. Очевидно, эндотелий регулирует местные процессы гемостаза, пролиферации, адгезии, миграции клеток крови в сосудистую стенку, и наконец, сосудистый тонус. Под эндотелиальной дисфункцией (ЭД) понимают дисбаланс между факторами, обеспечивающими все эти процессы. Понимание важности ЭД в прогрес-сировании патологических процессов делает эндотелий важной мишенью для раннего вмешательства в патогенез ГБ [2].
Цель: оптимизировать диагностику поражения сосудистого эндотелия у больных гипертонической болезнью на основе изучения полиморфизма гена эндотелиальной синтазы оксида азота (eNOS), состояния вазорегулирующей функции эндотелия, эндотелина-1 и уровня натрийуретического пептида типа С.
Материалы и методы исследования. Работа выполнена в рамках реализации гранта Президента РФ по государственной поддержке молодых ученых-кандидатов наук за проект «Эндотелиаль-ная дисфункция и оксидативный стресс в развитии респираторно-кардиальной коморбидности» (МК-5572.2013.7). Для выполнения поставленной цели в условиях ГБУЗ АО «Городская клиническая больница № 4 имени В.И. Ленина» обследовано 30 больных ГБ и 27 соматически здоровых лиц.
Исследование функционального состояния сосудистого эндотелия проводилось методом лазерной допплеровской флоуметрии. Определение натрийуретического пептида типа С в плазме крови осуществлялось методом иммуноферментного анализа с помощью коммерческих тест-систем «NT-proCNP» («Biomedica Medizinprodukte GmbH&Co KG», Австрия). Определение эндотелина-1 в образцах плазмы осуществлялось с помощью иммуноферментного набора для количественного определения («Biomedica», Германия). Генотипирование по полиморфному маркеру гена NOS3 проводили на геномной ДНК, выделенной из цельной крови пациентов. Полиморфные участки гена NOS3 ампли-фицировали с помощью полимеразной цепной реакции. Аллели полиморфного участка eNOS4b/4a идентифицировали путем анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ) [1]. Фрагменты ДНК окрашивали бромистым этидием и визуализировали в УФ-свете на приборе UV-VIS IMAGER-II (США). Статистическую обработку данных проводили при помощи программы Statistica 7.0, (Stat Soft Inc., USA) [5].
Результаты исследования и их обсуждение. В ходе лазерной допплеровской флоуметрии вычисляли коэффициент вазорегулирующей функции эндотелия - КЭФ [4]. В зависимости от значения КЭФ, выделяли пациентов с нормальным функциональным состоянием сосудистого эндотелия (КЭФ > 1); пациентов с умеренной дисфункцией эндотелия (КЭФ < 1, но > 0,8) и пациентов с выраженной дисфункцией эндотелия (КЭФ < 0,8).
Значение медианы КЭФ в группе больных ГБ составило 0,87, что было не только статистически значимо ниже, чем в группе соматически здоровых лиц, но и ниже 1, как и значения интерквартиль-ных и интерпроцентильных размахов, составивших при ГБ [0,78; 0,96] и [0,74; 0,99], соответственно. То есть у больных ГБ наблюдалось развитие ЭД, преимущественно умеренно выраженной. В группе больных ГБ пациенты без нарушений функционального состояния микрососудистого эндотелия выявлены не были. Умеренная ЭД была выявлена у 69 % пациентов, выраженная ЭД - у 31 % пациен-
тов, однако различия были статистически незначимы (х2 = 3,27; df = 1; р2 = 0,071).
Далее изучали типы реагирования микрососудов на ионофорез эндотелий-зависимого вазоди-лататора [3]. У 31 % больных ГБ был выявлен нормореактивно-декрементный тип реагирования микрососудистого эндотелия. Гиперреактивно-декрементный тип, характеризующийся повышенной чувствительностью рецепторов микрососудистого эндотелия и быстрым истощением эндотелиальных ферментных систем и меньшей продолжительностью вазодилатации, выявлялся у 69 % больных ГБ. Таким образом, для реагирования микрососудистого эндотелия при ГБ характерно преобладание гиперреактивности эндотелиальных рецепторов (69 %) и уменьшение продолжительности продукции и выделения вазодилататоров.
Была предпринята попытка оценить состояние сосудистого эндотелия у больных ГБ, исследуя содержание эндотелина-1 (ЭТ-1) и натрийуретического пептида типа С (НУПС). Медиана, интер-квартильные и интерпроцентильные (5; 95) размахи уровня ЭТ-1 при ГБ составили 7,1 [4,8; 11,2], [3,9; 15,3] пг/мл, против [3,0; 3,9] пг/мл в группе соматически здоровых лиц, что отражало гиперпродукцию данного пептида при ГБ и развитие эндотелиальной дисфункции. Медиана, интерквартиль-ные и интерпроцентильные [5; 95] размахи уровня НУПС у больных ГБ составили 10,1 [7,9; 13,9], [7,5; 18,6] пг/мл. Таким образом, у больных ГБ можно подтвердить наличие ЭД, проявляющейся гиперпродукцией ЭТ-1 и НУПС.
Далее изучили полиморфизм гена eNOS. Частота встречаемости 4а/4Ь генотипа в группе соматически здоровых лиц составила 37 %, что было сопоставимо с частотой встречаемости 4b/4b генотипа -63 % (х2 = 1,22; df = 1; р = 0,296). В группе больных ГБ частота встречаемости 4а/4Ь генотипа составила 51 %, 4b/4b генотипа - 49 % (х2 = 0,02; df = 1; р = 0,890). Различия в частоте встречаемости как 4а/4Ь (х2 = 0,49; df = 1; р = 0,484), так и 4b/4b генотипа (х2 = 0,37; df = 1; р = 0,544) с группой соматически здоровых лиц были статистически незначимы, хотя и прослеживалась тенденция к увеличению частоты встречаемости 4а/4Ь генотипа. При исследовании частоты встречаемости аллелей 4а и 4b гена eNOS было выявлено статистически значимое преобладание 4b аллеля в группе соматически здоровых лиц (Х2 = 14,93; df = 1; р6 < 0,001), в группе больных ГБ (х2 = 11,31; df = 1; р6 < 0,001).
Таким образом, не было выявлено значимого увеличения частоты встречаемости 4а/4Ь генотипа при ГБ, что не позволяет с уверенностью говорить о значении VNTR-полиморфизма (variable number of tandem repeats) в развитии данного заболевания.
Далее изучали уровень ЭТ-1 у больных ГБ в зависимости от генотипа (4а/4Ь и 4b/4b) гена эндотелиальной синтазы оксида азота. У пациентов с генотипом 4a/4b уровень ЭТ-1 был статистически значимо (Mann-Whitney test) выше по сравнению с пациентами с генотипом 4b/4b, что отражает увеличение продукции ЭТ-1 у лиц VNTR-полиморфизмом. Так, в группе соматически здоровых лиц у пациентов с 4a/4b уровень ЭТ-1 составил 3,7 [3,4; 5,9] пг/мл и был статистически значимо (р = 0,049) выше, чем у пациентов с генотипом 4b/4b. Среди больных ГБ у пациентов с генотипом 4a/4b уровень ЭТ-1 составил 10,8 [6,9; 16,5] пг/мл, что было статистически значимо выше по сравнению с пациентами с генотипом 4b/4b (р < 0,001). При сравнении с группой соматически здоровых лиц уровень ЭТ-1 в группе больных ГБ был статистически значимо выше как у пациентов с генотипом 4a/4b (р < 0,001), так и у пациентов с генотипом 4b/4b (р = 0,021). Таким образом, было выявлено влияние VNTR-полиморфизма на функциональное состояние эндотелия и продукцию ЭТ-1 как при ГБ, так и у соматически здоровых лиц. В то же время гиперпродукция ЭТ-1 при ГБ как при 4a/4b, так и при 4b/4b генотипе отражает воздействие на сосудистый эндотелий других повреждающих факторов, например, увеличение напряжения сдвига в сосудах и изменение их растяжимости со стимуляцией эндоте-лиоцитов, характерных для артериальной гипертензии.
В группе соматически здоровых лиц у пациентов с 4a/4b уровень НУПС составил 7,0 [5,3; 11,7] пг/мл и был сопоставим (р6 = 0,152) с уровнем НУПС у пациентов с генотипом 4b/4b - 6,5 [4,3; 8,5] пг/мл. В группе больных ГБ у пациентов с генотипом 4a/4b уровень НУПС составил 13,2 [9,9; 19,6] пг/мл, что было статистически значимо выше по сравнению с пациентами с генотипом 4b/4b (р < 0,001). Таким образом, у больных ГБ было выявлено влияние VNTR-полиморфизма на продукцию НУПС, чего не наблюдалось у соматически здоровых лиц. То есть гиперпродукция компенсирующего вазодилататора НУПС становится необходимой только при развитии заболевания (ГБ), сопровождающегося дисфункцией эндотелия. При сравнении с группой соматически здоровых лиц уровень НУПС у больных ГБ был статистически значимо выше как у пациентов с генотипом 4a/4b (р < 0,001), так и у пациентов с генотипом 4b/4b (р = 0,011). То есть при ГБ гиперпродукция НУПС вызвана не только наличием VNTR-полиморфизма, а также может быть стимулирована другими воздействиями.
Заключение. У больных гипертонической болезнью наблюдалось развитие эндотелиальной дисфункции, преимущественно умеренно выраженной, проявляющейся уменьшением выраженности эндотелий-зависимой вазодилатации, гиперпродукцией эндотелина-1 и натрийуретического пептида типа С. Для микрососудистого эндотелия при ГБ характерно преобладание гиперреактивности эндо-телиальных рецепторов (69 %) в сочетании с уменьшением продолжительности продукции и выделения вазодилататоров. Не было выявлено значимого увеличения частоты встречаемости 4а/4Ь генотипа при ГБ, что не позволяет с уверенностью говорить о значении VNTR-полиморфизма в развитии данного заболевания. Выявлено влияние VNTR-полиморфизма на функциональное состояние сосудистого эндотелия и продукцию эндотелина-1 как при ГБ, так и у соматически здоровых лиц. Влияние VNTR-полиморфизма на продукцию натрийуретического пептида типа С было выявлено только у пациентов с ГБ, чего не наблюдалось у соматически здоровых лиц. Выявлено, что гиперпродукция эндотелина-1 и натрийуретического пептида типа С при гипертонической болезни происходит как при 4а/4Ь, так и при 4Ь/4Ь генотипе. Это отражает воздействие на сосудистый эндотелий других повреждающих факторов, например, увеличение напряжения сдвига в сосудах и изменение их растяжимости со стимуляцией эндотелиоцитов, характерных для артериальной гипертензии.
Список литературы
1. Баранов, В. С. Генетический паспорт - основа индивидуальной и предиктивной медицины / В. С. Баранов, Т. Э. Иващенко, Е. В. Баранова и др.; под ред. В. С. Баранова. - СПб. : ООО «Изд-во Н-Л», 2009. - 527 с.
2. Васькина, Е. А. Артериальная гипертензия : окислительный стресс и эндотелиальная дисфункция : автореф. дис. ... д-ра мед. наук / Е. А. Васькина. - Новосибирск, 2004. - 38 с.
3. Воронина, Л. П. Пат. 2449282 Рос. Федерация, МПК G01N 33/483 Способ диагностики эн-дотелиальной дисфункции по типам реагирования микрососудистого эндотелия / Л. П. Воронина, Е. А. Полунина, И. В. Нуржанова, О. С. Полунина, С. А. Голубкина; заявитель и патентообладатель ГОУ ВПО АГМА Росздрава. - № 2010132337/15; заявл. 02.08.10; опубл. 27.04.12. Бюл. №12.
4. Нуржанова, И. В. Пат. 2436091 Рос. Федерация, МПК G01N 33/483 Способ оценки функционального состояния микрососудистого эндотелия у больных бронхиальной астмой / И. В. Нуржа-нова, О. С. Полунина, Л. П. Воронина, Е. А. Полунина; заявитель и патентообладатель ГОУ ВПО АГМА Росздрава. - № 2010124218/15; заявл. 11.06.10; опубл. 10.12.11. Бюл. № 34.
5. Реброва, О. Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA / О. Ю. Реброва. - М. : МедиаСфера, 2002. - 312 с.
Ахминеева Азиза Халиловна, кандидат медицинских наук, доцент кафедры факультетской терапии и профессиональных болезней с курсом последипломного образования, ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, д. 121, тел.: (8512) 52-4143, e-mail: agma@astranet.ru.
Полунина Ольга Сергеевна, доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой внутренних болезней педиатрического факультета, ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, д. 121, тел. (8512) 52-41-43, e-mail: agma@astranet.ru.
Воронина Людмила Петровна, доктор медицинских наук, доцент кафедры внутренних болезней педиатрического факультета, ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, д. 121, тел. (8512) 52-41-43, e-mail: agma@astranet.ru.
Севостьянова Ирина Викторовна, кандидат медицинских наук, ассистент кафедры внутренних болезней педиатрического факультета, ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, д. 121, тел. (8512) 52-41-43, e-mail: agma@astranet.ru.
