CC BY
132
Известия Тульского государственного университета Естественные науки. 2014. Вып. 1. Ч.1. С. 280-290
Биология ^
УДК 633.14:633.11:581.19:581.13:577.15
Функциональное состояние фотосинтетического аппарата проростков тритикале при хлоридном засолении
А. Р. Гарифзянов, Н. Н. Жуков, А. А. Кособрюхов, В. В. Иванищев
Аннотация. Показано, что экспонирование проростков тритикале на среде, содержавшей 120 мМ ^О, в течение 96 ч эксперимента приводило к структурно-функциональным изменениям фотосинтетического аппарата. Наблюдаемые изменения (до 12-24 ч) можно охарактеризовать как фазу стресс-реакции, в течение которой происходило снижение скорости фотосинтеза и проводимости устьиц, снижение активности ферментов карбоксилирующей фазы фотосинтеза и содержания пигментов, а также варьирование светозависимого восстановления ДХФИФ. Дальнейшие изменения указанных параметров можно охарактеризовать как фазу адаптации, в течение которой наблюдали восстановление пигментной системы, повышение скорости фотосинтеза и активности ферментов до исходных (или близких к ним) значений, при незначительном росте светозависимого восстановления ДХФИФ в расчете на 1 г сырой массы листьев тритикале.
Ключевые слова: тритикале, солевой стресс, интенсивность фотосинтеза, проводимость устьиц, активность ферментов фотосинтеза.
Введение
Засоление почв является одним из важнейших природных стрессоров, оказывающих негативное влияние на рост и развитие растений. По оценке ФАО засоленными являются приблизительно 22 % мировых земель, находящихся в сельскохозяйственном использовании. Согласно прогнозу, через 25 лет по этой причине могут стать непригодными до 30 % таких земель. В нашей стране эти цифры могут достичь ещё больших величин [1].
Повышенное содержание КаС1 в почве ведёт к ингибированию практически всех жизненно важных функций и рассматривается как отрицательный фактор. Виды растений различаются по степени чувствительности к солевому стрессу, но общим для них является
задержка роста [2]. Наблюдаемое снижение скорости ростовых процессов часто связывают с уменьшением скорости фотосинтеза, прежде всего в результате изменения активности световых реакций фотосинтеза на уровне фотосистемы II [3]. Однако литературные данные о влиянии засоления на фотосинтез противоречивы. Согласно одним авторам солевой стресс приводит к снижению фотосинтетической активности [4, 5], в то время как другие исследователи не показывают существенного эффекта воздействия NaCl на активность фотосинтетического аппарата [6]. Так, например, Abadia с соавт. [7] не выявили значимого влияния NaCl на фотосинтез Hordeum vulgare, в то время как Robinson с соавт. [4] показали достоверное снижение фотосинтетической активности в листьях Spinacia oleracea.
Реакция растений на засоление в основном носит неспецифический характер и аналогична их ответу на действие многочисленных стрессовых факторов. Влияние повышенной концентрации соли приводит к развитию в растениях окислительного стресса вследствие повышения содержания активных форм кислорода [8], которые оказывают как прямое, так и опосредованное действие на все системы организма. Поскольку генерация активных форм кислорода тесно связана с фотосинтетическим процессом, представлялось актуальным изучение структурно-функциональных изменений фотосинтетического аппарата в ответ на действие повышенной концентрации соли в зоне корневой системы.
В задачу нашей работы входило изучение активности световой и темновой стадий работы фотосинтетического аппарата сельскохозяйственного растения — тритикале при избытке ионов NaCl в растворе.
Материалы и методы
Растительный материал и условия выращивания. Объектами исследования являлись побеги и корни тритикале озимого (сорт «Дон»). Семена, стерилизованные в 2,5 %-ном растворе KMnO4, проращивали на фильтровальной бумаге в присутствии 1/10 среды Кнопа с микроэлементами по Хогланду. Десятидневные проростки пересаживали в вегетационные сосуды и выращивали в виде водной культуры на полной питательной среде, как описано в работе [9]. При достижении проростками фазы кущения, их переносили на питательный раствор, содержавший 120 мМ NaCl. В последующем, через 12, 24, 48, 72 и 96 часов экспозиции отбирали образцы для анализа структурно-функциональных изменений фотосинтетического аппарата.
Измерение интенсивности фотосинтеза и устьичной проводимости осуществляли с помощью инфракрасного газоанализатора LCPro+ фирмы АДС BioScientific Ltd (Великобритания), соединенного с листовой камерой-прищепкой.
Определение светозависимого восстановления ДХФИФ осуществляли во фракции, обогащённой тилакоидными компонентами хлоропластов. Для
этого навеску охлаждённых листьев гомогенизировали в среде, содержавшей
0,4 М сахарозы, 10 мМ NaCl, 25 мМ HEPES-HCl (pH 7,6), 5 мМ MgCl2, 0,2 % раствор поливинилпирролидона и 0,5 % раствор бычьего сывороточного альбумина. Полученный гомогенат центрифугировали 3 мин при 6000 об./мин. Осадок суспендировали 1 мин в среде 10 мМ NaCl, 25 мМ HEPES-HCl (pH 7,6) и 5 мМ MgCl2 и вновь центрифугировали 4 мин при 5000 об./мин. Осадок ресуспендировали в среде, содержавшей 0,2 М сахарозу, 10 мМ NaCl, 25 мМ HEPES-HCl (pH 7,6) и 5 мМ MgCl2. Полученную суспензию центрифугировали 1 мин при 4500 об./мин. Содержание хлорофилла в конечной суспензии составляло примерно 0,5 мг/мл.
Определение светозависимого восстановления ДХФИФ проводили с использованием реакционной смеси, содержащую 0,05 М фосфатный буфер рН 7,6; 20 мкМ 2,6-дихлорфенолиндофенола и суспензию тилакоидных мембран, соответствующей содержанию хлорофилла 5-10 мкг/мл. В две пробирки наливали по 5 мл реакционной смеси. Одна пробирка служила темновым контролем, вторую - освещали в течении 2 минут с помощью диапроектора ЛЭТИ. Оптическую плотность растворов определяли при 620 нм против контроля (вместо 2,6-ДХФИФ - дистиллированная вода). Рассчитывали изменение оптической плотности за время опыта. Скорость реакции выражали в микромоль восстановленного акцептора за 1 ч на 1 мг хлорофилла, используя миллимолярный коэффициент экстинкции 17,7/(мМ*см) [10].
Определение суммарной активности ферментов карбоксилирующей фазы фотосинтеза. Навеску листьев (5 г) гомогенизировали с 10 мл среды, содержавшей 0,05 М трис-HCl буфер (pH 8,0), 1мМ MgCl2, 0,1 мМ ЭДТА, 5 мМ дитиотрейтол (ДТТ). Гомогенат центрифугировали 20 мин при 10000
об./мин. Для определения активности ферментов к 1 мл полученного экстракта добавляли инкубационную среду, содержавшую 0,05 М трис-HCl буфер (pH 8,2), 5 мМ MgCl2, 5 мМ ДТТ, 50 мМ NaHCO3, 0,15 мМ НАДН. Реакцию запускали введением в среду смеси АТФ и рибозо-5-фосфата до конечной концентрации 1 мМ. Полученные результаты по изменению поглощения во времени при 340 нм использовали для определения суммарной активности ферментов карбоксилирующей фазы и выражали в мкмоль НАДН на 1 г сырой массы в минуту. Для расчётов использовали миллимолярный коэффициент экстинкции, равный 6,22/(мМ*см) [11].
Определение содержания пигментов. Содержание фотосинтетических пигментов в листьях проростков (хлорофиллов a, b и каротиноидов) определяли спектрофотометрически в этанольных экстрактах [12].
Статистическая обработка результатов. Опыты проводили в 3-4 аналитических и 3 биологических повторностях. Статистическую обработку данных осуществляли с помощью пакета прикладных компьютерных программ MS Excel 2003 и SigmaStat 3.1. На рисунках представлены средние арифметические значения определяемых величин и их стандартные ошибки (Р > 0,95).
Результаты
Характер изменения скорости фотосинтеза носил колебательный характер с первоначальным снижением до 30 % от исходного уровня в течение первых 24 часов действия повышенной концентрации соли на растения, увеличением в последующие сутки и снижением к 96 часам эксперимента до значений, соответствующих исходным (рис. 1).
О 24 48 72 96 0 24 48 72 96
Время эксшзиции, час
Время экспозиции, час
600 1
(г1
0 -I--------------1-------------1-------------1-------------Г-
0 24 48 72 96
Время экспозиции, час
Рис. 1. Динамика интенсивности фотосинтеза, устьичной проводимости и светозависимой скорости восстановления ДХФИФ в побегах тритикале под действием 120 мМ МаС!
Одним из факторов, влияющих на скорость фотосинтеза проростками тритикале в условиях повышенной концентрации соли в зоне корневой системы могло быть изменение проводимости устьиц, обеспечивающих поступление С02 внутрь листа, и далее - в хлоропласты. Однако характер изменения устьичной проводимости не совпадал с характером изменения скорости фотосинтеза растениями тритикале. В течение первых 48 часов наблюдали почти двукратное снижение устьичной проводимости. После 48 часов проводимость устьиц повышалась вплоть до 96 часов эксперимента, достигая значения 68,3±3,3 ммоль/м2 с.
Изменение транспирационного потока в системе целого растения, вызванное внесением МаС1 в зону корневой системы, могло обусловливать и характер поступления ионов натрия и хлора в проростки тритикале,
что подтверждается результатами нашей предшествующей работы по изучению этого вопроса [13]. Учитывая эти данные, можно говорить о том, что закрытие устьиц при засолении имело приспособительное значение, позволявшее ограничивать проникновение в растения токсичных ионов с транспирационным потоком.
Поскольку характер изменений двух процессов - фотосинтеза и проводимости устьиц не совпадал, и поступление С02 в лист могло быть лимитирующим фактором, то возникает вопрос - за счет чего могло происходить повышение активности фотосинтетического аппарата в период 24-48 часов?
Исследование активности световой стадии фотосинтетического аппарата по скорости светоиндуцированного восстановления ДХФИФ (в расчётах на 1 мг хлорофилла) показало повышение скорости процесса в первые 12-24 часов эксперимента, при незначительном снижении к 48 часам (рис. 1). В последующем (48-72 ч) происходило постепенное снижение скорости восстановления ДХФИФ. В результате в начальный период эксперимента активность световой стадии фотосинтетического аппарата не могла быть лимитирующим фактором снижения скорости фотосинтеза. При этом такая активность в пересчёте на 1 г сырой массы объекта исследования показала увеличение параметра только к 12 часам эксперимента с последующим 4-х-кратным падением величины к 24 часам и слабым постепенным ростом к концу эксперимента.
Наряду с высокой потенциальной активностью реакций световой стадии фотосинтетического аппарата, в период 12-48 часов, наблюдали повышение активности ферментов карбоксилирующей фазы фотосинтеза. Действительно, характер изменения потенциальной активности в целом совпадал с динамикой изменения скорости фотосинтеза (рис. 2).
45
О Н---------------1------------1--------------1------------г-
0 24 48 72 96
время, час
Рис. 2. Динамика активности ферментов карбоксилирующей фазы фотосинтеза в листьях тритикале в присутствии в среде 120 мМ
Снижение суммарной активности ферментов происходило только в первые 12 часов после действия солевого стресса, что может служить объяснением снижения скорости фотосинтеза в первые 12 часов, но не объясняет падение к 24 часам, т.е. через сутки после действия фактора на растения.
Дальнейшие наши исследования были направлены на изучение динамики содержания фотосинтетических пигментов в листьях растений. Анализ результатов о содержании фотосинтетических пигментов в листьях тритикале в условиях солевого стресса показал, что если в течение первых 12 часов не происходило заметного изменения хлорофиллов а и Ь, то через 24 часа наблюдали резкое снижение содержания пигментов (рис. 3).
Рис. 3. Содержание фотосинтетических пигментов в листьях тритикале в
условиях солевого стресса
После 24 часов засоления происходило постепенное повышение содержания фотосинтетических пигментов в листьях растений, и к 96 часам экспозиции на среде с повышенным содержанием соли оно приближалось к величинам, наблюдаемым в начале эксперимента. Полученные данные могут свидетельствовать о восстановлении структурной организации фотосинтетического аппарата в листьях тритикале. Восстановление содержания пигментов можно также объяснить наблюдавшимся снижением уровня активных форм кислорода, разрушающих пигменты, за счёт роста активности антиоксидантных ферментов [9].
Обсуждение
Исследование структурно-функциональных показателей фотосинтетичес-кого аппарата, при действии повышенной концентрации соли в зоне корневой системы, показало сложный характер изменения отдельных процессов в ходе продолжающегося воздействия фактора на растения (см. рис. 1). Логичное снижение интенсивности фотосинтеза одновременно
с уменьшением устьичной проводимости, объясняемое ограничением поступления одного из субстратов реакции карбоксилирования - СО2, сменялось разнонаправленными изменениями отмеченных параметров после 24 часов эксперимента.
Повышение скорости фотосинтеза после 24 часов вполне оправдано, если посмотреть на характер изменения светозависимого восстановления ДХФИФ, которое отчасти можно интерпретировать как возрастание скорости переноса электронов, в результате которого обычно образуются энергетические эквиваленты (АТФ и НАДФН), используемые в цикле Кальвина. Предполагаемой нехватки углекислого газа на протяжении данного периода времени, по-видимому, нет. Объяснением этому могут служить данные работы [14], в которой показано, что тилакоидные мембраны содержат некоторое количество (до 1 мкмоль НСОз-/мг Хл) связанного бикарбоната, который под действием карбоангидразы может высвобождать свободный СО2 вблизи центров карбоксилирования РБФКО. Предположение о возможной концентрирующей роли карбоангидразы, сложившееся на основании исследований ее роли у водорослей [15], высказывалось рядом исследователей и в отношении высших растений [16].
Изучение суммарной активности ферментов фазы карбоксилирования показало, что кривая зависимости (см. рис. 2) вполне соответствует повышенным возможностям образования восстановительных эквивалентов за счёт работы электрон-транспортной цепи (увеличение скорости восстановления ДХФИФ), которые используются в цикле Кальвина в данный период (12-48 ч) эксперимента. В то же время кривая зависимости активности ферментов повторяет характер кривой изменения интенсивности фотосинтеза проростков тритикале (см. рис. 1). Отсутствие роста интенсивности фотосинтеза в период 12-24 часов эксперимента может быть связано с продолжающимся снижением устьичной проводимости (см. рис. 1 б).
Значительный рост светозависимого восстановления ДХФИФ в расчёте на мг хлорофилла через 24 ч эксперимента, а при расчете на г сырой массы листьев - к 12 ч, на фоне снижения скорости фотосинтеза и устьичной проводимости, мог приводить к накоплению восстановительных эквивалентов и, следовательно, резкому снижению содержания конечного акцептора электронов (НАДФ+) в электрон-транспортной цепи фотосинтеза. Как следствие, нехватка НАДФ+ способствовала переносу электронов на кислород [17], что приводило к образованию повышенных количеств различных активных форм кислорода (АФК). Известно, что даже в обычных условиях в ФС I появление супероксидного радикала происходит в реакции Мёллера благодаря работе 4Ре-48-кластеров, ферредоксина и/или ферредоксин-НАДФН-редуктазы, а на уровне ФС II - предположительно в дА и дв сайтах [18]. При этом на образование супероксид-радикала может идти около 10-25 % всего нециклического электронного потока [19], который является основным источником появления пероксида водорода [20]. Поэтому
в условиях эксперимента, когда растения тритикале испытывали стресс, такой перенос может отчасти приводить к показанному ранее увеличению содержания пероксида водорода в объекте исследования к 12 ч с дальнейшим ростом к 24 ч эксперимента [21].
Известно, что сверхпродукция активных форм кислорода вызывает частичное (возможно, временное) повреждение комплексов ЭТЦ хлоропластов, например, деградацию белка D1 core-комплекса ФС11 [22], что можно отнести к прямому токсическому эффекту АФК. При этом в противодействие разрушительному влиянию возрастающих количеств АФК вовлекаются компоненты антиоксидантной системы. К ним относятся и пигменты фотосинтеза, в первую очередь, каротиноидной природы [17]. Поэтому ничего удивительного не было в том, что в первые 24 ч эксперимента наблюдали снижение их содержания (см. рис. 3). Восстановление пигментной системы фотосинтеза после 24 ч можно объяснить тем, что в нейтрализацию активных форм кислорода в проростках тритикале стали включаться иные механизмы детоксикации, требующие некоторого временного периода для индукции и/или запуска, например, ферментативные [9].
Стабилизация большинства исследованных показателей после 48 ч эксперимента может быть связана с открытием устьиц, что позволяло нормализовать газообмен и перевести проростки тритикале в новое стационарное состояние, которое описывается восстановлением устьичной проводимости, участников фотосинтетического процесса (пигментов и ферментов) и возобновлением транспирационного потока. Описанные процессы сопровождались поступлением в растения токсичных ионов солей [13]. Однако к этому времени в проростках тритикале, по-видимому, сложилась система нейтрализации ионов путём их перекачки в вакуоли [1], синтезом и накоплением осмотиков, важнейшим из которых считается пролин [23].
Несмотря на восстановление гомеостаза и работы фотосинтетического аппарата, описанные изменения всё же имели негативный характер в отношении проростков, что выражалось, прежде всего, в снижении накопления сухого вещества [21].
Таким образом, показано, что количество и функциональное состояние компонентов фотосинтетического аппарата проростков тритикале при их экспонировании на среде, содержавшей 120 мМ NaCl, характеризовалось фазой стресс-реакции (до 24 ч) и фазой адаптации (в последующий период). В ходе первой фазы наблюдали снижение устьичной проводимости, интенсивности фотосинтеза и содержания пигментов фотосинтеза при увеличении светозависимого восстановления ДХФИФ. В период адаптации почти все исследованные характеристики проростков тритикале к 96 часам эксперимента были восстановлены до исходных величин, наблюдавшихся в начале эксперимента.
Список литературы
1. Кошкин Е.И. Физиология устойчивости сельскохозяйственных культур. М.: Дрофа, 2010. С. 328-335.
2. Munns R., Termaat A. Whole plant responses to salinity // Aust. J. Plant Physiol. 1986. V. 13. P. 143-160.
3. Baker N.R. Possible role of photosystem II in environmental perturbations of photosynthesis // Physiologia Plantarum. 1991. V. 81. P. 563-570.
4. Robinson S.P., Downton W.J.S., Millhouse J.A. Photosynthesis and Ion Content of Leaves and Isolated Chloroplasts of Salt-Stressed Spinach // Plant Physiol. 1983. V. 73. P. 238-242.
5. Bong I G., Loreto F. Gas-exchange properties of salt-stressed olive (Olea europea L.) leaves // Plant Physiol. 1989. V. 90. P. 1408-1416.
6. Effects of combined NaCl and CaCl2 salinity on photosynthetic parameters of barley grown in nutrient solution / F. Morales [et al.] // Physiologia Plantarum. 1992. V. 86. P. 419-426.
7. Effects of salinity on the photosynthetic pigment composition of barley (Hordeum vulgare L.) growth under a triple-line-source sprinkler system in the field / A. Abadia [et al.] // J. Plant Physiol. 1999. V. 154. P. 392-400.
8. Гарифзянов А.Р., Жуков Н.Н. АФК-индуцированные процессы в клетках x-Triticosecale в условиях натрий-хлоридного засоления // Изв. ТулГУ. Естественные науки. 2013. Вып. 1. С. 241-250.
9. Жуков Н.Н., Гарифзянов А.Р., Иванищев В.В. Динамика активности антиоксидантных ферментов в органах Triticosecsle на фоне NaCl-засоления // Изв. ТулГУ. Естественные науки. 2012. Вып. 2. С. 285-291.
10. Гавриленко В.Ф., Жигалова Т.В. Большой практикум по фотосинтезу. М.: Академия, 2003. С. 54-57.
11. Романова А.К. Биохимические методы изучения автотрофии у микроорганизмов. М.: Наука, 1980. 160 с.
12. Lichtentaller H.K., Welburn A.R. Determinations of total carotenoids and chlorophylls a and b of leaf extracts in different solvents // Biochem. Soc. Trans. 1983. V. 11. № 6. P. 591-592.
13. Регуляция водного обмена у тритикале озимого в условиях NaCl-засоления / А.Р. Гарифзянов [и др.] // Вісник Харьківского національного аграрного університету. Серія біологія. 2013. Вып. 1 (28). С. 34-43.
14. Stemler A.B.L., Harlan J.R., J. M. J. de Wet The Sorghums of Ethiopia // Economic Botany. 1977. V. 31. P. 446-460.
15. The Role of Carbonic Anhydrase in Photosynthesis / M.R. Badger [et al.] // Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 1994. V. 45. P. 369-392.
16. Meyer M., Griffiths H. Origins and diversity of eukaryotic CO2-concentrating mechanisms: lessons for the future // J. Exp. Bot. V. 64. № 3. P. 769-786.
17. Колупаев Ю.Е., Карпец Ю.В., Обозный А.И. Антиоксидантная система
растений: участие в клеточной сигнализации и адаптации к действию
стрессоров // Вісник Харьківського національного університету. Сер. Біологія.
2011. Вип. 1 (22). С. 6-34.
18. Palatnik J.F., Carrillo N., Valle E.M. The role of photosynthetic electron transport in the oxidative degradation of chloroplastic glutamine synthetase // Plant Physiol. 1999. V. 121. P. 471-478.
19. Mittler R. Oxidative stress, antioxidants and stress tolerance // Trends in Plant Science. 2002. V. 7 (9). P. 405-410.
20. Гарифзянов А.Р., Жуков Н.Н., Иванищев В.В. Образование и физиологические реакции активных форм кислорода в клетках растений // Соврем. проблемы науки и образования. 2011. № 2. - URL: www.science-education.ru/96-4584 (дата обращения 27.07.2011).
21. Особенности NaCl-индуцированного окислительного стресса и динамики активности антиоксидантных ферментов в органах тритикале озимого / А.Р. Гарифзянов [и др.] // Докл. Российской академии сельскохозяйственных наук.
2012. № 2. С. 9-11.
22. Regulation of D1-protein degradation during photoinhibition of photosystem II in vivo: phosphorylation of the D1 protein in various plant groups / E. Rintamaki [et al.] // Planta. 1995. V. 195. № 3. P. 379-386.
23. Аккумуляция осмолитов в органах х Triticosecale в условиях солевого стресса / А.Р. Гарифзянов [и др.] // Современная наука: тенденции развития: матер. Междун. научно-практ. конф. Краснодар: Научно-издательский центр АПРИОРИ, 2012. С. 195-198.
Гарифзянов Андрей Рузильевич ([email protected]), к.б.н., доцент, кафедра химии, Тульский государственный педагогический университет им. Л.Н. Толстого.
Жуков Николай Николаевич ([email protected]), ассистент, кафедра биологии и технологий живых систем, Тульский государственный педагогический университет им. Л.Н. Толстого.
Кособрюхов Анатолий Александрович ([email protected]), д.б.н., руководитель группы экологии и физиологии фототрофных организмов (ЭФФО), Институт фундаментальных проблем биологии РАН, Пущино.
Иванищев Виктор Васильевич ([email protected]), д.б.н., зав. кафедрой, кафедра биологии и технологий живых систем, Тульский государственный педагогический университет им. Л.Н. Толстого.
Functional state of the photosynthetic apparatus triticale seedlings under chloride salinity
A.R. Garifzyanov, N.N. Zhukov, A. A. Kosobryukhov, V. V. Ivanishchev
Abstract. It has been shown that exposure of triticale seedlings in a medium containing 120 mM NaCl for 96 hours of the experiment resulted in structural and functional alterations in the photosynthetic apparatus. Observed changes (up
to 12-24 h) can be defined as the stress - response phase during which there was a decrease rate of photosynthesis and stomatal conductance, decreased enzyme activity of carboxylated photosynthetic phase and content of photosynthetic pigments as well as variation in light depended recovery DCPIP. Further changes in these parameters can be defined as the adaptation phase, during which the observed recovery of the pigment system, increasing the rate of photosynthesis and enzyme activity to the initial (or close to) values, with a slight increase in light depended recovery DCPIP per 1 g wet weight of triticale leaves.
Keywords: triticale, salt stress, the rate of photosynthesis, stomatal conductance, activity of photosynthetic enzymes.
Garifzyanov Audrey ([email protected]), candidate of biological sciences, associate professor, department of chemistry, Leo Tolstoy Tula State Pedagogical University.
Zhukov Nikolai ([email protected]), candidate of biological sciences, assistant, department of biology and technologies of living systems, Leo Tolstoy Tula State Pedagogical University.
Kosobryukhov Anatoly ([email protected]), doctor of biological sciences, head of group, Institute of Basic Biological Problems of RAS, Pushchino.
Ivanishchev Victor ([email protected]), doctor of biological sciences, head of department, department of biology and technologies of living systems, Leo Tolstoy Tula State Pedagogical University.
Поступила 16.01.2014
