CC BY
57
УДК б1 6-GG3. 812.GGG.1
ФУНКЦИОНАЛЬНО-МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ГЕНЕРАЛИЗОВАННОГО АМИЛОИДОЗА НЕФРОПАТИЧЕСКОГО ТИПА
А.Т. БЕЛИКОВА, В.Б. БРИН, К.М. КОЗЫРЕВ*
Для создания модели экспериментального нефропатического типа генерализованного амилоидоза у сирийских хомяков использовался способ подкожного введения нативной человеческой плазмы в течении 6G дней из расчета G,G5 мг/кг массы тела. Показали, что введение нативной человеческой плазмы приводит к функционально и морфологически подтвержденному генерализованному амилоидозу нефропатического типа.
Ключевые слова: экспериментальный амилоидоз, амилоидоз почек.
Парапротеинемии - группа страданий, характеризующихся патологической пролиферацией одного клона плазматических клеток с гиперпродукцией гомогенного моноклонального иммуноглобулина (парапротеина). В периферической крови могут циркулировать как целые молекулы иммуноглобулинов (Ig), так и их фрагменты - легкие и тяжелые цепи (у, а, ц). Наиболее распространенными заболеваниями данной группы является ами-лоидоз [2].
Амилоид - сложный гликопротеид, состоящий из фибриллярных и глобулярных белков и полисахаридов, фибриллы которого имеют специфическую р-складчатую конфигурацию. Амилоид обладает характерным свойством конгофилии и двойного лучепреломления в поляризованном свете, что отличает его от других фибриллярных белков. В зависимости от специфичности основного белка амилоида выделяют несколько форм амилоидо-за: А (амилоидный А-протеин), L (легкие цепи иммуноглобулинов), TTR (транстиретин), р2М (р2-микроглобулин), В (В-протеин), JAPP (островковый амилоидный полипептид) [5].
Обладая химической инертностью и иммунологической толерантностью, амилоид безудержно накапливается в органах и тканях, становясь морфологическим субстратом многих заболеваний человека и животных, проявляющихся атрофией и склерозом органов и развитием их функциональной недостаточности.
При изучении амилоидоза важное значение придается экспериментальному моделированию. Из существующих способов моделирования амилоидоза, большинство исследователей основывается на многократном введении животным биологических или химических агентов раздельно и в различных их сочетаниях с целью образования амилоидных фибрилл путем запуска иммуно-патобиохимических механизмов [7,8]. Существует способ получения амилоидоза путем введения казеината натрия подкожно животным [4]. Описан способ получения амилоидоза у хомяков путем их заражения кожным лейшманиозом. Имеются данные о развитии амилоидоза при введении лабораторным животным бактериальных вакцин. В литературе описаны различные способы амилоидогенеза с помощью химических веществ, чаще всего с канцерогенными и токсическими свойствами: 3-
methylcholanthrene, 4-(dimethylamino)azobenzene [б]. Также, описано развитие системного амилоидоза при заражении животных различными возбудителями хронических инфекций:
Mycobacterium butiricum [7]. Получены модели экспериментального генерализованного амилоидоза методом подкожного введения белым мышам нативного яичного альбумина [3], а также методом подкожного введения золотистым сирийским хомякам нативной свиной плазмы [1].
Цель исследования - изучение органоспецифических функциональных и структурных характеристик нефропатии, создаваемой путем моделирования генерализованного амилоидо-за у сирийских хомяков способом подкожного введения нативной человеческой плазмы.
Материалы и методы исследования. Объектом исследования служили сирийские хомяки - самцы массой 1GG-15G г. У фоновых и опытных групп животных исследовали б-часовой спонтанный диурез. Клубочковую фильтрацию определяли по клиренсу эндогенного креатинина, рассчитывали канальцевую рабсорбцию воды. Содержание натрия и калия в моче определяли методом пламенной фотометрии, содержание кальция - спектрофотометрически. Опытным животным через день в течении 6G
* Кафедры нормальной физиологии и патологической анатомии ГОУ ВПО СОГМА Минздравсоцразвития РФ, Россия, 362019, РСО-Алания, г. Владикавказ, ул. Пушкинская, 40. Телефон: 8672534617.
дней вводили нативную человеческую плазму, из расчета 0,05 мг/кг массы тела. Основные процессы мочеобразования и экскреция электролитов определялись по истечении 1 и 2 месяцев.
Спустя 2 месяца эксперимента животные забивались наркотизацией тиопенталом натрия в дозе 6 мг/200г массы животного внутрибрюшинно. Морфологическому изучению подверглись печень, почки, селезенка, крупные сосуды. Материал фиксировался в 10% растворе нейтрального и кислого формалина, заливался в парафин по общепринятой методике, изучались срезы почек и других органов толщиной 5-6 мкм, которые окрашивались гематоксилином и эозином, конго красным. Изучение срезов проводилось в проходящем свете при помощи микроскопа Мик-мед-1 под увеличением х 80, х 200, х 400, х 600.
Результаты и их обсуждение. Исследования показали, что в условиях спонтанного диуреза на фоне подкожного введения нативной человеческой плазмы отмечается увеличение объема спонтанного диуреза к концу первого месяца, а в конце второго месяца, наоборот, объем диуреза начинает снижаться. Увеличение диуреза было обусловлено повышением скорости клубочковой фильтрации (СКФ) и снижением канальцевой реабсорбции воды. В течение второго месяца эксперимента спонтанный диурез снижается из-за почти 2-кратного уменьшения СКФ, несмотря на значительное снижение канальцевой реабсорбции воды (табл. 1).
Таблица 1
Изменения объема спонтанного диуреза и основных процессов мочеобразования при формировании амилоидной нефропатии
Условия опыта Статистич. показатель Процессы мочеобразования Содержание белка мг/мл
Диурез мл/час/^ СКФ м/час/^ Реабсорбция %
Фон М±m G,13±G,GG4 21,GG±G,22G 99,39±G,G16 G,98±G,G3G
1 мес. эксперимента М±m G^iG^ 22,G6±G,3G4 99,28±G,G13 1,71±G,G79
2 мес. эксперимента М±m Q,12±G,GG3* 12,48±G,389* 99,G7±G,G13* 2,62±G,G43*
Примечание: * - достоверное отличие относительно фона
Под влиянием введения нативной человеческой плазмы отмечается прогрессивное увеличение протеинурии более чем в 2 раза на протяжении двух месяцев эксперимента (табл. 1).
Экскреция натрия под влиянием амилоидогена в условиях спонтанного 6-часового диуреза постепенно снижается на протяжении обоих месяцев. Экскреция калия и кальция по истечению двух месяцев влиянием вышеописанной смеси в качестве ами-лоидогена в условиях спонтанного диуреза снижается (табл. 2).
Таблица 2
Изменения экскреции электролитов с мочой при формировании амилоидной нефропатии
Условия опыт Статистич. показатель Электролитовыделительная функция
Экскреция № Экскреция К Экскреция Са
Фон М±m 1G,68±G,367 7,54±G,381 G,26±G,G14
1 мес. эксперимента М±m 8,63±G,227 8,85±G,272 G,3G±G,G14
2 мес. эксперимента М±m 6,62±G,377 5,68±G,952 G,19±G,GG9
Примечание: * - достоверное отличие относительно фона
Макроскопически (под лупой) при экспериментальном нефропатическом типе генерализованного амилоидоза почки были увеличены в объеме, на разрезе граница между корковым и мозговым слоями была нечеткая, отмечалось выраженное полнокровие обоих слоев, преимущественно мозгового.
Микроскопически при окраске срезов красным конго (рис. 1) отмечалось отложение конгофильных структур в клубочковых капиллярах, капсуле Боумена-Шумлянского, стенках сосудов почечного интерстиция и в базальных мембранах канальцев, гиперемия медуллы, плазматическое пропитывание и отек интер-стиция обоих слоев почки (рис. 2). Выраженная паренхиматозная дистрофия нефротелия.
В печени выявлялась очаговая конгофилия мембранных структур гепатоцитов, гиперемия, плазматическое пропитывание стенок сосудов всех калибров, отек ткани печени с резко выраженным расширением пространств Диссе. Отложение амилоида в печени отмечалось преимущественно в стенках сосудов системы
микроциркуляции и базальных мембран портальных триад (артерия, вена, желчный проток), центральных сегментах печеночных долек и портальном интерстиции.
Отложение амилоида имело место и в лимфоидных фолликулах селезенки, преимущественно в стенке их центральной артерии, а также в строме и сосудах системы микрогемоциркуляции органа.
Рис. 1. Амилоидоз почек. Отложение амилоида в базальных мембранах канальцев и клубочках почек. Выраженная паренхиматозная дистрофия канальцев. Окраска конго красным. х600
■г
Рис. 2. Отложение амилоида в стенках сосудов, в основном в интиме и мышечном слое. Утолщение и разрыхление стенок сосудов. Окраска конго красным. х400
Выводы:
1. Подкожное длительное введение нативной человеческой плазмы вызывает развитие нефропатического типа генерализованного амилоидоза.
2. Формирование морфологических признаков модели ами-лоидоза вызывает выраженную протеинурию, нарушение электролито- и водовыделительной функции почек.
Литература
1. Брин, В.Б. Функционально-морфологическая характеристика экспериментальной модели амилоидной нефропатии / Брин В.Б., Козырев К.М., Пухова И.У. // Вестник новых медицинских технологий, 2008.- Т. XV.- №3. С. 34-35.
2. Волкова, Н.Н. Ведение пациентов с парапротеинемиче-ской почечной патологией / Н. Н. Волкова // Российские медицинские вести, 2007.- Том 12.- №2.- С. 2б-30.
3. Заалишвили, Т. В. Способы моделирования амилоидоза у экспериментальных животных / Заалишвили Т. В., Брин В. Б., Козырев К. М. // Успехи современного естествознания, 2GG5.-№2.- Изд-во Акад. естествознания, М.- С. 78-79.
4. Капинус, Л.Н. Иммуноморфологическое изучение ранних стадий амилоидогенеза / Л.Н. Капинус // Бюлл. эксп. биол. Мед, 1987.- Т. 85.- №2.- С. 232-234.
5. Любченко, П.Н. Осложнение силикотуберкулеза амилои-дозом внутренних органов / Любченко П. Н., Широкова Е. Б., Л. Е. Гуревич, Кабанова Т. Г. // Пульмонология, 2GG8.- №4.- С. 113.
6. Akamatsu Y. Ikegami R. Induction of hepatoma and systemic amyloidosis in mice by 4-(dimethylamino) azobenzene feeding // Gann.- 19б8.- Vol. 59, №3.- P. 201- 20б.
7. Cui D., Kawano H., Takahashi M. et al. Acceleration of murine AA amyloi- dosis by oral administration of amyloid fibrils extracted from different species // Pathol Int.- 2002.- Vol. 52, N 1.- P. 4G-45.
8. Garcia-GarciaM., Mourad G., DurfortM., Garcia-Valero J., Argiles A. Vascular involvement and cell damage in experimental AA and clinical beta(2)-microglobulin amyloidosis //Nephrol. Dial. Transplant.- 2002.-Vol.17, №8.-P. 1450- 145б.
FUNCTIONAL AND MORPHOLOGICAL CHARACTERISTICS OF NEPHROPATICAL TYPE OF EXPERIMENTAL SYSTEMIC AMYLOIDOSIS
A. T. BELIKOVA, V. B. BRIN, K. M. KOZYREV
Northern Ossetia Medical Academy, Chair of Normal Physiology and Anatomical Pathology
To create the model of nephropathic type in Syrian hamsters' generalized amyloidosis the method of injecting native human plasma subcutaneously within б0 days at 0.05 mg/kg of body weight was applied. The injection of native human plasma leads to functionally and morphologically confirmed nephropathic type of generalized amyloidosis.
Key words: experimental amyloidosis, renal amyloidosis.
УДК: б15.834.477.8
СПЕЛЕОКЛИМАТОТЕРАПИЯ КАК ИННОВАЦИОННЫЙ МЕТОД ЗДОРОВЬЕСБЕРЕЖЕНИЯ
Е. В. ДОРОХОВ, О. А. ЖОГОЛЕВА*
В статье рассмотрены адаптогенные аспекты спелеоклиматотерапии, как метода профилактики дизрегуляторных изменений нейро-иммуноэндокринной системы, вызванных хроническим стрессом. В исследовании участвовало 117 студентов, обследование включало оценку иммунного статуса методом проточной цитометрии, вариационный анализ ритма сердца, тест тревожности Спилбергера. Результаты проведенного исследования показывают, что десятидневный курс спелеоклиматотерапии расширяет адаптационные резервы регуляторных систем и может служить методом профилактики болезней адаптации.
Ключевые слова: спелеоклиматотерапия, адаптоген, иммунный статус.
В современном мире повседневная деятельность людей часто бывает связана с информационными перегрузками, социальной напряженностью, межличностными конфликтами, что делает хронический стресс болезнью цивилизации. В условиях длительного психоэмоционального стресса при недостаточности адаптационных резервов нарушается взаимодействие между регуляторными системами, что приводит к формированию веге-тозов, или болезней адаптации [1,9,14]. По этой причине профилактика и своевременная коррекция дизрегуляторных нарушений является одной из важнейших задач современной валеологии. Одним из немедикаментозных лечебно-профилактических методов воздействия, обладающих адаптогенными возможностями, является спелеоклиматотерапия - использование специфического микроклимата сильвинитовых пещер в лечебных целях. Терапевтический эффект спелеоклиматотерапии основан на феномене перекрестной адаптации, связанном с перестройкой деятельности регуляторных систем и расширением приспособительных возможностей организма [4,5,8,1G,13].
Цель исследования - изучение здоровьесберегающих возможностей спелеоклиматотерапии в отношении здоровых лиц, подверженных действию хронического стресса.
Материалы и методы исследования. В исследовании принимало участие 117 студентов Воронежской государственной медицинской академии им. Н. Н. Бурденко в возрасте 17-2G лет. Исследование носило проспективный характер. В качестве модели хронического стресса был использован стресс, связанный с учебным процессом в ВУЗе [9,10]. Все исследуемые дали письменное информированное согласие на участие в эксперименте, составленное в соответствии с действующим пересмотром Хельсинкской декларации. Все исследуемые были разделены на две группы: экспериментальную, составившую 77 человек, студенты этой группы проходили курс спелеоклиматотерапии, и группу
* Воронежская государственная медицинская академия им. Н. Н. Бурденко, dorofov@mail.ru
