CC BY
19
тор III, наряду с большинством показателей системы ПОЛ—АОЗ плазмы, входит и содержание лизоФХпл., который является одним из метаболитов ФЛ, образующихся в ходе их деградации вследствие активации фосфолипазы А2. Образующиеся в ходе ферментативного гидролиза ненасыщенные жирные кислоты становятся удобным субстратом для ПОЛ и преобразуются в ДКпл. Таким образом, несмотря на единое (липидное) происхождение большинства изученных компонентов двух систем, результаты факторного анализа, показавшие «расщепление» показателей по разным факторам, говорят о том, что системы организованы и функционируют на разных метаболических уровнях. Объединяет их то, что нарушения в них происходят на самых ранних этапах развития ХГН (нередко даже на фоне полного отсутствия клинико-лабораторных проявлений болезни) и что обе системы являются важными звеньями в неиммунных механизмах возникновения и прогрессирования ХГН.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Таким образом, проведенный с помощью современного математического аппарата анализ системы ПОЛ—АОЗ и ФЛ-спектра крови больных с ХГН с сохранной функцией почек позволил выявить множественные корреляции между отдельными параметрами двух систем. Показано, что основным субстратом для образования продуктов ПОЛ являются ФХпл. и СФМпл. в составе ЛПНП и ЛПОНП. Изменение ФЛ спектра плазмы способствует истощению как наружной (ФХэр.+СФМэр.), так и внутренней (ФСэр.+ФЭАэр.) части бислоя мембраны эритроцитов. Компоненты внутренней части бислоя являются основным источником образования продуктов ПОЛ в клетках. Избыточная липопероксидация приводит в конечном итоге к истощению общих липидных компонентов клеток, что еще более дестабилизирует клеточную мембрану. При этом в каче-
стве компенсаторной реакции на усиленную пероксидацию в эритроцитах возрастает уровень антиоксидантов — токоферола и восстановленных тиоловых групп.
Несмотря на тесную взаимосвязь между системами, они организованы и функционируют достаточно автономно друг от друга. Однако нарушения в обеих системах начинаются на самых ранних этапах развития ХГН и обе системы участвуют в неиммунных механизмах развития и прогрессирования ХГН.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК
1. Климов А.Н., Гуревич B.C., Никифорова A.A. и др. Ан-тиоксидантная активность липопротеидов высокой плотности ivvivo/УБюлл. экспер. биол,— 1992,—№ 7.—С. 40-42.
2. Климов А.Н., Кожемякин Л.А., Плесков В.М., Андреева Л.М. Антиоксидантный эффект липопротеидов высокой плотности при перекисном окислении липопротеидов низкой плотности // Бюлл. экспер. биол.—1987.—№ 5.— С. 550-552.
3. Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Липиды, липопротеиды и атеросклероз.—СПб.: Питер Пресс, 1995.—С. 91.
4. Рахов Д.А., Юданова Л.С., Рубин В.И. Функциональные свойства мембран эритроцитов у больных хроническим гломерулонефритом // Урол. и нефрол.—1992.—№ 4—6.— С. 31-33.
5. Смирнов A.B., Кожевников А.Д. Нарушения липидного и углеводного обменов при нефротическом синдроме // Нефротический синдром / С.И. Рябов,—СПб.: Гиппократ, 1992.—С. 196-214.
6. Торховская Т.И., Лобова H.M., Левитова E.H. Некоторые изменения в составе фосфолипидов липопротеидов сыворотки крови у больных атеросклерозом // Кардиология.— 1976,—Т. 16, № 2.—С. 46-49.
7. Тугушева Ф.А., Куликова А.И., Зубина И.М., Сазо-нец Г.И. Взаимосвязь липопероксидации с клинико-лабо-раторными показателями у больных с заболеваниями почек на фоне нефротического синдрома // Нефрология. Рабочее совещание нефрологов Северо-Запада России: Сборник материалов.—СПб., 1996.—С. 48-52.
8. ЭггертВ., БлейберР., Шмидт Г. и др. Влияние хронической почечной недостаточности на содержание липидов и структуру эритроцитов // Вопр. охр. мат.—1981.—№ 4.— С. 32-35.
Поступила в редакцию 19.12.99 г.
© О.Д. Ягмуров, 2000
УДК 611.41.018:612.015.1:616.61 -008.64-036.12-092
О.Д. Ягмуров
ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ МОРФОЛОГИЯ СЕЛЕЗЕНКИ В УСЛОВИЯХ РАЗВИТИЯ И ПРОГРЕССИРОВАНИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ ПОЧЕЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ
O.D. Yagmourov
THE SPLEEN FUNCTIONAL MORPHOLOGY UNDER CONDITIONS OF THE DEVELOPMENT AND PROGRESSION OF CHRONIC RENAL FAILURE
Кафедра патологической анатомии Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П. Павлова, Россия
РЕФЕРАТ
Проведено изучение функциональной морфологии селезенки 8 условиях развития и прогрес-сирования хронической почечной недостаточности (ХПН). Гистоэнзимологическими методами оценивали активность ферментов, ответственных за контрольно-информационную систему, белковосинтетические, энергетические и транспортные процессы клеток-эффекторов специфической паренхимы селезенки. Показана взаимосвязь между развитием и прогрессировани-ем ХПН и структурно-функциональными изменениями селезенки. Делается вывод о том, что селезенка играет существенную роль в регуляции склеротических процессов и в механизмах прогрессирования ХПН.
Ключевые слова: хронический гломерулонефрит, патогенез, селезенка. ABSTRACT
The functional morphology of the spleen was studied under conditions of the development and progression of chronic renal failure (CRF). Histoenzymological methods were used to estimate the activity of enzymes responsible for the control and information system, for the energetic, transport and protein synthesis processes in the spleen specific parenchyma cells-effectors. The interconnection between the development and progression of CRF and the structural-functional changes in the spleen was established. A conclusion is made that the spleen plays a substantial role in the regulation of sclerotic processes and in the mechanisms of progression of CRF.
Keywords: chronic glomerulonephritis, pathogenesis, spleen.
ВВЕДЕНИЕ
Одним из достижений последних лет уходящего столетия явилось клиническое и экспериментальное обоснование роли иммунной системы в возникновении, развитии и прогрессирова-нии хронического гломерулонефрита [1—•4]. Казалось бы накопленные данные достаточно определенно свидетельствуют о регуляции механизма развития и прогрессирования хронической и почечной недостаточности (ХПН) со стороны иммунной системы [1—5]. Однако до сих пор существуют ряд противоречий между клиническим проявлением ХПН, ее прогрессировани-ем и структурными проявлениями, которые не позволяют считать данную проблему решенной. Согласно клиническим и экспериментальным данным, нетрудно представить, что регуляция иммунной системой механизмов прогрессирования ХПН будет зависеть от структурно-функци-ональной состоятельности лимфоидных органов и, в первую очередь, селезенки.
Исходя их этого, целью исследования явилось изучение структурно-функциональных изменений селезенки при ХПН, развившейся в исходе хронического гломерулонефрита.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Исследование проведено на секционном материале 22 умерших, больных хроническим гло-мерулонефритом. По степени проявления хронической почечной недостаточности материал был распределен на три группы: 1-я — ХПН I ст. (8 случаев); 2-я — ХПН II ст. (8 случаев); 3-я — ХПН III ст. (6 случаев). Для исключения влияния фактора пола и возраста все группы были сформированы из мужчин в возрасте 46-60 лет. Объектом исследования послужили кусочки селезенки, полученные при ранних аутопсиях, осуществленных в пределах 1ч с момента констатации биологической смерти. Для гистоэнзимологического исследования все образцы ткани селезенки замораживали в жидком
азоте. Исследование проводили на криостатных срезах толщиной 10 мкм с выявлением ферментов НАДН2-дегидрогеназы по Берстону, нуклеиновых кислот (ДНК/РНК) по Эйнарсону и белкового синтеза. Выбор этих гистохимических методик обусловлен тем, что, как известно, в лимфоидных органах формирование регулятор-ных процессов сопровождается интенсивными реакциями бласттрансформации, пролиферации и миграции различных клеточных форм, т. е. усилением функциональной активности специфических клеток-эффекторов.
В то же время известно, что функциональная активность клетки определенным образом зависит от активности ядерных нуклеиновых кислот (НК). Это послужило основанием для применения данной методики при анализе клеток специфической паренхимы селезенки. Суммарное содержание белка, отражающее процессы синтеза белка, связанного с изменениями функционального состояния клеток, определяли с помощью реакции кислотным красителем — бромфеноловым синим.
Так как процессы синтеза в клетках обеспечиваются усиленным потреблением энергии, была поставлена задача анализа активности НАДН,-дегидрогеназы, связанной с митохонд-риальными ферментами.
Активность ферментов оценивали в лимфоцитах Т- и В-зависимых зон белой пульпы и в эндотелии синусоидов маргинальной зоны красной пульпы селезенки (5-нуклеотидаза). Параллельно кусочки ткани селезенки после фиксации в Са-фармоле заливались в парафин. Гистологические срезы толщиной 5 мкм окрашивали гематоксилином и эозином, пикрофук-сином по Ван-Гизону и азуром—эозином по Романовскому.
Статистическую обработку цифровых данных проводили с использованием программного пакета «$1а1§гарЫс5».
РЕЗУЛЬТАТЫ
При гистологическом исследовании селезенки лиц, умерших от хронической почечной недостаточности, были выявлены морфологические признаки структурной перестройки, касающиеся специфической паренхимы - белой пульпы селезенки. Изменения наблюдались во всех зонах белой пульпы. При этом для лиц, умерших на I ст. ХПН, было характерным стирание зонального подразделения белой пульпы и уменьшение размеров специфической паренхимы — фолликулов. Однако, несмотря на это, в некоторых наблюдениях в фолликулах выявлялись центры размножения, а в В-зависимых зонах белой пульпы — недифференцируемые клетки в состоянии бласттрансформации (бла-
стные формы клеток). Уменьшение размеров специфической паренхимы сопровождалось расширением границ маргинальной зоны белой пульпы и «разжижением» плотного мантийного слоя лимфоцитов. В синусоидах маргинальной зоны отмечались пролиферация и набухание эндотелиоцитов.
Для ХПН II ст. были характерными нарастающее уменьшение размеров фолликулов и увеличение доли бластных форм клеток. У лиц, умерших на III ст. ХПН, отмечалось полное стирание границ специфической паренхимы, уменьшение клеточности фолликулов, исчезновение зародышевых центров, атрофия фолликулов, периваскулярный склероз центральных артерий и увеличение количества синусоидов пе-рифолликулярной зоны белой пульпы (рис.1).
Mi
Рис.1. Гистологические изменения селезенки лиц, умерших в условиях ХПН II ст. Уменьшение клеточности фолликулов, периваскулярный склероз центральных артерий и увеличение доли бластных форм клеток. Окраска азуром—эозином по Романовскому. Ув. 480.
Гистоэнзимологическое изучение ферментативных реакций выявило глубокие изменения клеток-эффекторов специфической паренхимы селезенки, касающиеся изученных сторон метаболизма лимфоцитов. Больше всего это касалось активности ферментов, отражающих контрольно-информативные и белково-синтетиче-ские процессы. Развитие ХПН и ее прогресси-рование сопровождалось резким снижением активности ядерных нуклеиновых кислот (НК) в лимфоцитах как Т-, так и B-зависимых зон белой пульпы селезенки (рис. 2). При этом глубокое снижение активности НК отмечалось в лимфоцитах мантийной зоны v лиц, умерших от ХПН III ст.
Параллельно изменению активности НК прогрессирование ХПН сопровождалось таким
а б В
Рис.2. Активность ядерных нуклеиновых кислот (НК) в клетках белой пульпы селезенки лиц, умерших от ХПН I ст. (а), ХПН II ст. (б), ХПН III ст. (в).
Здесь и на рис. 3-4: по оси ординат — условные единицы оптической плотности.
же угнетением активности энергетических процессов лимфоцитов - НАДН,-дегидрогеназы (рис. 3).
Е
0,25 0,2 0,15 0,1 0,05 0
а б в
Рис.3. Активность фермента НАДН2-дегидрогеназы в клетках белой пульпы селезенки лиц, умерших от ХПН I ст. (а), ХПН II ст. (б), ХПН III ст. (в).
Анализ параметра трансэндотелиального транспорта — 5-нуклеотидазы показал, что активность данного фермента в эндотелии сину-соидов маргинальной зоны при ХПН I сг. снижена. Однако прогрессирование ХПН сопровождается достоверным повышением уровня активности 5-нуклеотидазы, достигая наибольших значений при ХПН Ш ст. (рис. 4).
Итак, в процессе развития и прогрессиро-вания ХПН в белой пульпе селезенки обнару-
Е
а б в
Рис.4. Активность фермента 5-нуклеотидазы в клетках белой пульпы селезенки лиц, умерших от ХПН I ст. (а), ХПН II ст. (б), ХПН III ст. (в).
живается значительная перестройка структурных компонентов, выявляемая как при гистологическом, так и при гистохимическом исследовании.
ОБСУЖДЕНИЕ
В настоящее время известно, что хронический гломерулонефрит возникает как иммунное заболевание и характеризуется прогрессирова-нием гломерулосклероза и, как следствие, развитием хронической почечной недостаточности. Известно также, что механизм склерозирования напрямую зависит от процессов пролиферации и функциональной активности гломерулярных клеток. Исследованиями последних лет доказана существенная роль лимфоидной инфильтрации в повреждении гломерулярного аппарата, в развитии и прогрессировании хронического гломерулонефрита [2, 6, 12]. Однако следует отметить, что усиление или уменьшение скорости развития склеротических процессов в клубочке может зависеть не только от наличия лимфоидной инфильтрации, но и от качественного состава субпопуляций этих клеток в клубочковом аппарате. Постоянство последних, как известно, определяется продукцией клеток в селезенке, экспортом их в периферическую кровь и миграцией в гломерулярный аппарат почки. Таким образом, определяющим фактором в механизме регуляции гломерулосклероза является структурно-функциональная состоятельность селезенки как органа, ответственного за поставку иммунорегуляторных клеток.
Полученные данные гистологического и ги-стоэнзимологического изучения селезенки свидетельствуют о значительных изменениях селезенки при развитии и прогрессировании ХПН у лиц, страдавших хроническим гломерулонеф-ритом. Эти изменения соответствовали морфологическим признакам развивающейся имму-нодепрессии. Однако, несмотря на атрофию специфической паренхимы селезенки, в белой пульпе на стадии ХПН I ст. выявлялись признаки усиленной пролиферации клеток в виде бласттрансформации лимфоцитов Т- и В-зави-симых зон фолликулов и появления большого количества бластных форм клеток. Возможно, это объясняется тем, что селезенка, как иммунный орган, в ответ на деструктивные процессы в клубочковом аппарате начинает активную выработку молодых недифференцированных форм лимфоцитов, способных участвовать в процессах восстановления. Вероятно, это связано и с тем, что таким образом селезенка начинает продуцировать лимфоциты, способные замедлить процесс развития соединительной ткани, тем самым поддерживая физиологическую регенерацию в клубочке.
