CC BY
146
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2003
ФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ И ФЛУОРИМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ АМИНАЗИНА И ТРИФТАЗИНА С ПОМОЩЬЮ
СУЛЬФОРОДАМИНА В
ЯРАНЦЕВА Н.Д.*, ЖЕБЕНТЯЕВ А.И.**, ЖЕРНОСЕК А.К.*
Витебский государственный медицинский университет, кафедра фармацевтической химии*, кафедра токсикологической и аналитической химии**
Резюме. Определены оптимальные условия экстракции ионных ассоциатов аминазина и трифтазина с анионным красителем сульфородамином В. Изучены основные химико-аналитические свойства ассоциатов. Разработаны высокочувствительные методики экстракционно-фотометрического и экстракционно-флуориметрического определения аминазина и трифтазина в лекарственных формах.
Ключевые слова: аминазин, трифтазин, сульфородамин В, экстракционная фотометрия, экстракционная флуориметрия.
Abstract. The optimum extraction conditions of ion associates of aminazine (chlorpromazine) and triphthazine (trifluoperazine) with an anionic dye sulforhodamine B (C.I. 45100) are determined. Chemical-analytical properties of the associates are studied. Highly sensitive procedures for extractive-photometric and extractive-fluorimetric determination of aminazine and triphthazine in drug forms are worked out.
Сульфородамин В (лиссаминродамин RB 200, родамин 200B, Acid Red 52), C.I. 45100 -анионный органический реагент из группы ро-даминовых красителей. Используется в качестве материала для изготовления лазеров, а также как флуоресцентная метка для различных белков [2].
Несмотря на ряд ценных химико-аналитических свойств: большой молярный коэффициент светопоглощения, интенсивная флуоресценция, существование в виде аниона в широком интервале рН, сульфородамин В практически не используется в качестве реагента для определения органических соединений. В работе [3] сульфородамин В был предложен в качестве
Адрес для корреспонденции: 210023, г.Витебск, пр.Фрунзе, 27, Витебский государственный медицинский университет, кафедра фармацевтической химии -Яранцева Н.Д.
(C2Hs)2N^^/0^^/N(C2H5)2
флуоресцирующего противоиона для экстрак-ционно-флуориметрического и экстрационно-фотометрического определения катионных поверхностно-активных веществ в водных растворах и технических продуктах. Чувствительность разработанных методик в 2 раза выше, чем при использовании эозина, а предел обнаружения (1 -10-8 моль/л) почти на порядок ниже.
Целью настоящего исследования является определение оптимальных условий проведения экстракционной реакции аминазина (АМ) и трифтазина (ТРИ) с сульфородамином В, изучение основных химико-аналитических характеристик экстрагирующихся ассоциатов и разработка методик экстракционно-фотометрического и экстракционно-флуориметрического определения изучаемых лекарственных веществ.
Экспериментальная часть
В работе использовали рабочие стандартные образцы аминазина (1) и трифтазина (2), соответствующие требованиям нормативной документации, и образец сульфородами-на (Sigma), содержащий 85% основного вещества.
HCl
N
I /
ch2-ch2-ch2-n
CH3
Статистическую обработку и графическую интерпретацию экспериментальных данных проводили с помощью пакета статистических программ STATISTICA 5.0 и электронных таблиц Excel 2000.
Результаты и обсуждение
Определение оптимальных условий для экстракции ассоциатов:
Экстракция ассоциатов аминазина и трифтазина с сульфородамином В зависит от рН водной фазы. Максимум экстракции достигается при рН 2,5-3,5 для ассоциата аминазина и 2-4 для ассоциата трифтазина (рис. 1). Уменьшение светопоглощения и интенсивности флуоресценции экстрактов ассоциатов при рН < 2 можно объяснить экстракцией свободного красителя.
>2HCl
CH3
N CF3 /
I 3 /
ch2-ch2-ch2-n
Л
\____/
N-CH
3
1
2
Значения рН при исследовании влияния кислотности водной фазы на экстракцию создавали разбавленными растворами HCl и NaOH. В других экспериментах постоянное значение рН поддерживали цитратным буферным раствором [1]. В качестве экстрагента применяли хлороформ фармакопейной чистоты. Экстракцию проводили при комнатной температуре в делительных воронках, а при построении градуировочных графиков и исследовании лекарственных форм - в пенициллиновых флаконах. Объёмы водной и органической фаз в большинстве экспериментов были одинаковыми (10 мл или 5 мл), при исследовании влияния рН на экстракцию объём водной фазы составлял 25 мл, органической - 10 мл.
Интенсивность флуоресценции измеряли с помощью флуориметра БИАН-130, оптическую плотность - с помощью спектрофотометра СФ-46 и фотометра КФК-3 в кюветах с толщиной поглощающего слоя 1 -2 см. Значения рН водной фазы контролировали с помощью ионо-мера И-130 М, используя в качестве индикаторного стеклянный электрод.
Такое предположение подверждается тем, что, во-первых, при рН < 2 наблюдается резкое увеличение сигнала контрольного опыта и, во-вторых, тем, что уменьшение экстрагируемости при таких значениях рН наблюдается и в случае ас-социатов других третичных аминов (димедрола, ципрофлоксацина) и четвертичных аммони-
Рис. 1. Влияние рН на светопоглощение хлороформных экстрактов трифтазина (1) и аминазина (2) с сульфородамином В 1 • 10-6 М АМ; 1 • 10-6 М ТРИ; 4-10"6 М СР; 555 нм (1); 554 нм (2); l = 1 см
евых соединений (декамина, квалидила) и лишь ных экстрактов ассоциатов. Значения Хмакс ас-
незначительно зависит от природы катиона. Вер- социатов приведены в табл. 1.
Таблица 1
Химико-аналитические характеристики ассоциатов аминазина и трифтазина с сульфородамином В
Характеристика Ассоциат
АМ-СР ТРИ-СР
^макс? нм 553-556 554-557
£ -10-3 смакс 1'-/ 96±2 87±2
А 1% 1 0-3 А1см -10 2,7 1,8
ш8-103, мкг/см2 3,7 5,6
Ск, мкг/мл 0,19 0,28
Я, % 97,3±2,1 96,9± 1,7
№ 1,6±0,3 1,5±0,2
хний интервал рНопт экстракции, очевидно, связан с увеличением экстрагируемости аминазина и трифтазина при рН > 4.
Исследовано влияние добавок этанола на экстракцию ассоциатов. В присутствии 20-40 % об. этанола оптическая плотность и интенсивность флуоресценции хлороформных экстрактов увеличивается примерно в 1,5 раза (с учётом увеличения сигнала контрольного опыта). Тем не менее, добавление этанола с целью оптимизации методики экстракционно-фотометрического или флуориметрического определения нерационально, поскольку приводит к появлению заметного сигнала контрольного опыта и ухудшению воспроизводимости результатов анализа.
Определены оптимальные концентрации сульфородамина В для экстракционно-фотометрического и экстракционно-флуориметрическо-го определения аминазина и трифтазина. Оптимальная концентрация красителя для фотометрического определения составляет 5 -10-5 моль/ л. Зависимость светопоглощения экстрактов остаётся линейной в случае использования спектрофотометра до 2-10-5 моль/л аминазина и трифтазина. Флуориметрическое определение следует проводить при меньших концентрациях реагента (1-10-5 моль/л). Зависимость интенсивности флуоресценции остаётся линейной до 5-10-6 моль/л определяемых веществ.
Химико-аналитические свойства ассоциатов:
Сняты спектры поглощения хлороформ-
Определены значения кажущихся молярных и удельных коэффициентов светопоглощения ассоциатов, рассчитаны значения коэффициентов Сендела (шк), а также Коха и Коха-Де-дица (Ск) (табл. 1). Чувствительность определения аминазина и трифтазина с помощью суль-фородамина В выше, чем при использовании других описанных в литературе экстракционных реагентов [4]. Нижние границы определяемых концентраций (в исходном растворе) при использовании экстракционно-фотометрического варианта определения составляют 0,2 мкг/ мл (1,7 нмоль в пробе) в случае аминазина и 0,3 мкг/мл (1,9 нмоль в пробе) в случае трифтазина; при измерении интенсивности флуоресценции экстрактов возможно определение до
0,1 мкг/мл веществ.
Методом повторных экстракций рассчитаны значения степени однократной экстракции и коэффициентов распределения ассоциатов (табл. 1).
Методом изомолярных серий определено соотношение компонентов в экстрагирующихся ассоциатах. На рис. 2 показана изомолярная кривая для ассоциата трифтазина с сульфоро-дамином В. Максимум на кривой соответствует экстракции ассоциата с соотношением компонентов 1:1. Аналогичные данные получены и для ассоциата аминазина: уравнения прямых у = 1,84х + 0,06 и у = -1,91х + 1,91. Трифтазин и аминазин находятся в водном растворе при рНопт экстракции ассоциатов в виде дикатионов (например, у аминазина рКвн+ равны 9,3 и ~4),
0 0,5 х(ТРИ) 1
Рис. 2. Изомолярная кривая трифтазина с сульфородамином В.
¿С = 4-10-5 моль/л; рН 3; 555 нм, 1 = 1 см.
поэтому можно предположить, что в хлороформ переходят ассоциаты, содержащие анион красителя и неорганический анион, например, С1-
Методика фотометрического и флуори-метрического определения аминазина и триф-тазина.
На основании результатов определения оптимальных условий экстракции и изучения химико-аналитических свойств ассоциатов раз-
работаны методики экстракционно-фотометрического и экстракционно-флуориметрического определения аминазина и трифтазина в драже и растворах для инъекций. Правильность определения аминазина и трифтазина была подтверждена методом «введено-найдено». Ниже в качестве примера приведена методика фотометрического определения трифтазина в драже 0,005 г, которая может быть использована для определения однородности дозирования данного вещества.
Одно драже растворяют в воде очищенной в мерной колбе вместимостью 500,0 мл. Раствор тщательно перемешивают. В пенициллиновый флакон вносят 1,00 мл полученного раствора, прибавляют 2,00 мл воды очищенной, 1,0 мл 2,5-104 Мсульфородамина В;1,0 мл цитратного буферного раствора (рН 3) и 5,00 мл хлороформа. Проводят экстракцию в течение 2-х минут. После разделения фаз необходимое количество хлороформного слоя с помощью делительной воронки переносят в сухую пробирку и далее измеряют оптическую плотность экстракта при 555 нм в кювете с толщиной слоя 1 см. Расчет количественного содержания трифтазина проводится методом градуировочного графика, для построения которого в пенициллиновый флакон вносят V
Таблица 2
Результаты определения трифтазина в драже 0,005 г (серия 251200 «Здоровье», Харьков)
Масса драже, г Найдено трифтазина, мг Метрологические характеристики (Р = 0,95)
ш ± Аш 0 *!-
5,09
0,2193 5,06 5,09±0,08 6,9
5,13
4,76
0,1752 4,79 4,76±0,07 6,3
4,73
4,99
0,1996 5,03 5,01±0,05 4,0
5,01
5,13
0,2030 5,18 5,15±0,06 4,9
5,15
мл (V = 0,50 - 3,00 мл) раствора трифтазина (5,00 мкг/мл) и (3,00-V) мл воды очищенной и далее все реагенты, как указано выше. Уравнения градуировочного графика хорошо воспроизводятся и не содержат свободного члена, поэтому расчёт количественного содержания трифтазина можно проводить и методом одного стандартного раствора (2 мкг/мл в конечном объёме водной фазы).
Результаты экстракционно-фотометрического определения трифтазина в драже приведены в таблице 2.
Таким образом, сульфородамин В исследован в качестве фотометрического и флуори-метрического реагента для количественного определения аминазина и трифтазина.
Bывoды
1. Определены оптимальные условия экстракции ионных ассоциатов аминазина и трифтазина с сульфородамином В.
2. Mетодами физико-химического анализа установлено соотношение аминазина (триф-тазина) и сульфородамина В в ионных ассоци-атах.
3. Разработаны методики фотометрического и флуориметрического определения аминазина и трифтазина с применением сульфоро-дамина В.
Литература
1. Лурье Ю.Ю. Справочник по аналитической химии.
- M.: Химия, 1989. - С. 268 - 269.
2. Справочник биохимика / Р. Досон, Д. Эллиот, У. Эллиот, К. Джонс. - M.: M^, 1991. - С. 326.
3. A new application of Rhodamine 2GGB (Sulfo Rhodamine B) / N.O. Mchedlov-Petrossyan, S.A. Shapovalov, S.I. Egorova et al. // Dyes and Pigments.
- 1995. - Vol. 28, № і. - P. 7 - 18.
4. Tarasiewicz M., Wolyniec E, Puzanowska-Tarasiewicz H. Analytical application of the reactions of 2,1G-disubstitued phenothiazines with organic substances // Pharmazie - 1998. - Vol. 53, № 3. - P. 151-155.
Поступила 20.09.2001 г. Принята в печать 10.01.2003 г.
