CC BY
100
ФОТОДИНАМИЧЕСКАЯ ТЕРАПИЯ
С. Э. Аветисов, В. Г. Лихващева, М. В. Будзинская, И. В. Гурова, Р. Н. Крупнов, С. А. Шевчик, В. Б. Лощенов, С. Г. Кузьмин, Г. Н. Ворожцов
ПЕРВЫЙ КЛИНИЧЕСКИЙ ОПЫТ ПРИМЕНЕНИЯ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ С ПРИМЕНЕНИЕМ ОТЕЧЕСТВЕННОГО ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОРА ФОТОСЕНС В ЛЕЧЕНИИ СУБРЕТИНАЛЬНЫХ НЕОВАСКУЛЯРНЫХ МЕМБРАН
Одной из причин слабовидения является субрети-нальная неоваскулярная мембрана (СНМ). Гистологической основой СНМ является псевдоопухолевая пролиферация фибробластов, развивающаяся на фоне не-оангиогенеза в ответ на ишемическое повреждение сетчатки и хориоидеи. Отсутствие единства взглядов и недопонимание патогенеза СНМ объясняет широкий спектр предложенных способов лечения, а также их низкую эффективность. Транслокационная хирургия макулы, эндовитреальное введение стероидов, антиоксидантная терапия, транспупиллярная термотерапия, аргоновая лазерокоагуляция — вот далеко не полный их перечень. Перспективной, а в ряде случаев безальтернативной, в лечении СНМ признана фотодинами-ческая терапия (ФДТ) с применением различных фотосенсибилизаторов (ФС).
Цель работы — дать скрининг-оценку эффективности ФДТ с применением отечественного ФС фото-сенс в лечении больных с СНМ.
Материалы и методы. ФДТ с препаратом фото-сенс проводили на лазерной установке для фотодиагностики опухолей и контроля ФДТ ЛЭСА-01-«Био-спек». ФДТ проводили на лазерной установке для ФДТ ЛФТ-630/675-01-«Биоспек» 15 пациентам с СНМ, ранее безуспешно лечившихся с помощью консерватив-
ГУ НИИ ГБ РАМН, ГУП МНКЦ «ИнтермедБиофизхим», ЦЕНИ ИОФ им. А. М. Прохорова РАН, Москва
ной терапии. Размеры, локализация, степень активности процесса варьировали. Возраст пациентов колебался от 35 до 75 лет. В диагностике и в качестве критериев эффективности использовали флюоресцентную ангиографию глазного дна, анализ толщины ; сетчатки (РТА), электрофизиологические методы.
[ Результаты. У всех 15 пациентов с СНМ имело место закрытие мембраны с запустеванием новообра-: зованных сосудов, нивелирование отечно-геморраги-
ческого компонента с постепенным формированием плоского атрофического рубца, что нашло отражение в ангиографической картине глазного дна, в показателях толщины и структурности сетчатки в центральных ее отделах, в электрофизиологических и функциональных показателях. Прирост зрительных функции колебался от 0,1 до 0,4, уменьшались зоны скотом. К сожалению, малые сроки наблюдения за больными не позволили судить о продолжительности лечебного эффекта.
Выводы. Полученные результаты следует расценивать как предварительные. Для полного анализа клинической эффективности необходимо большее количество пациентов и продолжительные сроки наблюдений. Однако первые данные свидетельствуют о перспективности применения метода при СНМ.
А. 3. Алъмяшев
НИЗКОИНТЕНСИВНОЕ ЛАЗЕРНОЕ ИЗЛУЧЕНИЕ В КОЛОПРОКТОЛОГИИ
ГОУВПО Мордовский государственный университет им. Н. П. Огарева, Саранск
Выяснение механизмов регуляторного воздей- ческой медицины с целью осознанного применения ствия различных физических факторов на биоткани лазерного излучения (ЛИ) в медицинской практике имеет не только теоретическое общебиологическое (флюоресцентная диагностика — ФД, фотодинамичес-значение, но и является крайне актуальным для клини- кая терапия — ФДТ и др.).
Задача исследования — оценить непосредственную (раннюю) эффективность и отдаленные результаты лечения у больных раком толстой кишки (РТК) после применения новых квантовых технологий в пред-, интра- и послеоперационном периодах.
Материалы и методы. В работе использован клинический диагностический комплекс для ФД и ФДТ рака — ДТК-3М (ЦЕНИ ИОФ им. A. M. Прохорова РАН, Москва). В комплексном лечении больных РТК нами применялась чрескожное, внутрикишечное и надсосудистое ЛИ отечественным терапевтическим полупроводниковым лазером с длиной волны 676 нм и светодиодной матрицей с длиной волны 660 нм (ЗАО «Биоспек», Москва).
Результаты. С целью иммунокоррекции и иммуномодуляции ЛИ мощностью 10-30 мВт проводилось на зону тимуса и рукоятки грудины, правую подвздошную область и правое подреберье — после операций на правом фланге ободочной кишки, левое подреберье и левую подвздошную область — на левом фланге, гипогастральную область и промежность — на прямой
кишке соответственно. Наружное ЛИ светодиодной матрицей (мощность излучения 40 мВт) сканирующим методом проводили на область предполагаемого разреза брюшной стенки и послеоперационную рану. Контроль за эффективностью лазерной терапии проводили на основании анализа: 1) времени купирование болевого синдрома и восстановление моторно-эвакуа-торной функции ЖКТ и мочевого пузыря; 2) биопта-тов слизистой анального канала и прямой кишки (выраженности воспалительного процесса, микроциркуляции, сроков эпителизации); 3) микробиологического пейзажа пристеночной и внутриполостной флоры (бактерицидного или бактериостатического эффекта).
Выводы. Новые лазерно-информационные методы позволяют достоверно детектировать РТК, определять локализацию, истинные размеры опухоли, оказывать реальную помощь больным с высоким риском хирургического вмешательства, уменьшая количество интра- и послеоперационных осложнений, лучевых эпителиитов и мукозитов, нормализуя нейрорефлек-торные нарушения.
Е. Г. Вакуловская, А. Н. Губин, Б. К. Поддубный, Е. С. Вакурова
ПЕРВЫЙ ОПЫТ ПРИМЕНЕНИЯ ФЛЮОРЕСЦЕНТНОЙ ЛАПАРОСКОПИИ С ПРЕПАРАТОМ АЛАСЕНС У БОЛЬНЫХ РАКОМ ЯИЧНИКА
Цель работы — разработать методику флюоресцентной лапароскопии (ФЛ) у больных раком яичника (РЯ) с фотосенсибилизатором аласенс (АС), оценить токсичность препарата, определить его флюоресцентную активность и диагностическую ценность.
Материалы и методы. ФЛ с препаратом АС проведена как открытое исследование 6 больным РЯ, находившимся на стационарном лечении в НИИКО ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН. Всем больным ранее проводили комбинированное лечение, признаков метастатического поражения брюшины клинически и инструментально выявлено не было. Препарат АС в виде раствора (1,5 г АС, растворенного в 200 мл негазированной питьевой воды) в дозе 20 мг/кг массы тела больной, приготовленного непосредственно перед приемом, вводился перорально. Спектрально-флюоресцентное обследование больных проводилось до и через
3 ч после введения АС во время выполнения диагностической лапароскопии. В качестве источника излучения, возбуждающего флюоресценцию протопорфирина IX в тканях, использовалась лазерная электронно-спектральная установка ЛЭСА-01 -«Биоспек» (ЗАО «Биоспек», Россия), для регистрации спектров флюоресценции и определения флюоресцентной контрастности на границе опухоль/норма — гелий-неоновый лазер, длина волны 633 нм, выходная мощность 1-10 мВт.
ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва
Результаты. При введении АС побочных реакций отмечено не было, не наблюдалось развития аллергических реакций, токсических проявлений со стороны желудочно-кишечного тракта, фототоксиче-ских реакций кожи лица и открытых участков кожи пациенток. При ФС у 5 из 6 больных РЯ были выявлены очаги флюоресценции размерами от 0,6 до 1,5 см, флюоресцентная контрастность колебалась в пределах 2,4-3,9 раза, отмечалась неоднородность распределения препарата в зоне флюоресценции. Проведена биопсия всех зон флюоресценции, морфологически верифицировано метастатическое поражение брюшины во всех случаях. У 1 больной при ФЛ и осмотре в белом свете поражения брюшины не выявлено.
Выводы. Проведение ФЛ с препаратом АС позволяет получать диагностически значимую информацию у больных РЯ, выявлять метастатическое поражение брюшины в начальной стадии, определять границы распространения процесса, выявлять субклинические очаги. ФЛ с АС характеризуется высокой чувствительностью и специфичностью. Препарат АС имеет высокую флюоресцентную активностью и не обладает токсичностью, за исключением кратковременного повышения чувствительности кожи к прямому солнечному свету.
М. Л. Гелъфонд, А. С. Барчук
ПРЕДВАРИТЕЛЬНЫЕ КЛИНИЧЕСКИЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ХИМИОСЕНСИБИЛИЗИРОВАННОЙ ФОТОМОДИФИКАЦИИ КРОВИ С ПРЕПАРАТОМ ФОТОДИТАЗИН® ПРИ РАСПРОСТРАНЕННЫХ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЯХ РАЗЛИЧНОЙ ЛОКАЛИЗАЦИИ
НИИ онкологии им. проф. Н. Н. Петрова М3 РФ, Санкт-Петербург
Метод фотохимиотерапии (ФХТ) или его частный случай — метод фотодинамической терапии (ФДТ) используются для сенсибилизированного красителями уничтожения опухолевых клеток, инактивации вирусов или микробов, а также для подавления иммунитета при трансплантации органов. Метод заключается во введении в организм раствора биохимически инертного в темноте красителя, который под действием света рождает активные формы кислорода (синглетный кислород, пероксиды и т. п.), уничтожающие онкологические опухоли, вирусы и микробы (инфекционные заболевания) или стимулирующие выделение клетками активных факторов иммунной защиты (цитокинов), вызывающих иммуносупрессию при трансплантации органов. При исследовании механизмов этих реакций in vivo оказалось, что в дополнение к прямому уничтожению клетки повреждение их мембран при ФДТ связано с выделением клетками воспалительных и иммунных посредников. Они, в свою очередь, запускают каскады событий, ответственных за дальнейшее развитие цитотоксического эффекта. Возрастающее число фактов указывает, что полное разрушение опухоли при ФДТ не обходится без вовлечения в этот процесс иммунной системы. Интенсивный воспалительный эффект при ФДТ может быть инициирующим событием для формирования не только эффективного противоопухолевого иммунитета, но и других эффектов (включая противовирусный иммунитет и разрушение атеросклеротических бляшек в артериальных сосудах).
В настоящее время онкологи часто сталкиваются с ситуациями, когда ФДТ не может быть выполнена в принципе. Это относится к множественному метастатическому поражению легких, печени, головного мозга, лимфатического аппарата, значительным по размерам рецидивам новообразований, когда лазерное излучение невозможно подвести непосредственно к опухолевым тканям.
Вместе с тем в онкологии сравнительно широко используется метод фотомодификации крови для воздействия на иммуномодулирующие клетки и для профилактики послеоперационных осложнений или осложнений, связанных с лучевой или полихимиотерапией.
Задача данного исследования — изучение эффективности цитотоксического воздействие на первичную
опухоль и ее метастазы с помощью фотомодифициро-ванной крови после предварительной химиосенсибилизации ее с помощью минимальных доз фотосенсибилизатора.
Преимущества предлагаемого способа заключаются в системном уничтожении опухолевой ткани и отдельных опухолевых клеток, где бы они ни находились, и в значительном расширении возможностей ФДТ злокачественных новообразований.
При экспериментальной разработке метода плазма крови как от здоровых доноров, так и онкологических больных предварительно подвергалась лазерному облучению в другом помещении после добавления фотосенсибилизатора.
После добавления фотомодифицированной плазмы отмечена 100% темновая гибель опухолевых клеток в различных культурах.
Реализация цитотоксического эффекта осуществляется, по-видимому, следующими путями:
1. Фотомодифицированные белки крови после их химиосенсибилизации фотодитазином либо непосредственно участвуют в процессах инициации апоптоза, либо инициируют иммунные реакции организма.
2. Не исключена непосредственная фотоактивация иммунокомпетентных клеток, что приводит к активизации противоопухолевого или противовирусного иммунитета.
3. Сочетание этих двух подходов.
Таким образом, помимо классической процедуры ФДТ возможен и другой, но не альтернативный путь ее проведения, при котором нет необходимости доставки света непосредственно к опухоли, что существенно расширяет возможности применения метода ФДТ.
Указанные противоопухолевые эффекты, в случае их доработки до уровня стандартной медицинской технологии и внедрения в клиническую практику, могут стать новым перспективным методом терапии онкологических больных, используемым как в сочетании с рутинными методами лечения онкологических заболеваний, так и самостоятельно.
Данный способ использован при лечении 6 больных в НИИ онкологии им. проф. Н. Н. Петрова. В половине случаев отмечен несомненный клинический
эффект, заключающийся в улучшении самочувствия, повышении работоспособности, купировании болевого синдрома. У 1 пациентки с метастазами рака молочной железы в головной мозг, легкие, лимфатические
узлы средостения в результате химиосенсибилизиро-ванной фотомодификации крови достигнут полный регресс метастатических образований. Клиническая ремиссия длится 2 года.
Н. П. Ермакова, О. И. Коняева, Е. Л. Членова, Н. Ю. Кульбачевская, М. А. Кортава,
Л. М. Михайлова
"ОСТРАЯ” ТОКСИЧНОСТЬ ФОТОСЕНСА В ЛИПОСОМАЛЬНОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЕ
Фотосенс (смесь натриевых солей ди-, три- и тетра-сульфофталоцианина гидроксиалюминия со средней степенью сульфирования ~3) — фотосенсибилизатор, применяемый для фотодинамической терапии рака, выпускается ФГУП ГНЦ НИОПИК в виде 0,2% раствора для инъекций. Для повышения избирательности фотосенсибилизирующего действия препарата разрабатывается новая лекарственная форма, которая представляет собой 0,2% липосомальную дисперсию фотосенса.
Цель настоящего исследования — изучение «острой» токсичности фотосенса в 0,2% липосомальной дисперсии при сравнении с 0,2% раствором фотосенса для инъекций.
Материалы и методы. Исследование проведено на мышах-самках Б1 (СВАхС57В1/б]). Фотосенс в ли-посомальной дисперсии вводили внутривенно в дозах 50, 100, 170, 250 и 300 мг/кг. В связи с необходимостью введения объемов, превышающих максимально-допустимые объемы жидкости, для введения мышам однократно препарат вводили 1-4-кратно с интервалом 1,5-2 ч между введениями в объемах 0,5-1,0 мл со скоростью 0,5 мл/30 с. В качестве препарата сравнения применяли фотосенс в 0,2% растворе для инъекций в дозе 300 мг/кг, а в качестве контроля животным вводили 0,9% раствор хлорида натрия в объемах, соот-
ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва
ветствующих максимально вводимым объемам фото-сенса. Срок наблюдения 30 дней.
В результате проведенных исследований установлено, что фотосенс в липосомальной лекарственной форме и фотосенс в 0,2% растворе для инъекций во всех изученных дозах не вызывал гибели животных и признаков интоксикации в течение всего срока наблюдения. Отмечалось обратимое умеренное снижение массы тела мышей при применении липосомальной лекарственной формы препарата в дозе 300 мг/кг. При превышении скорости введения препаратов более чем 0,5 мл/30 с в дозах 250 и 300 мг/кг отмечали гибель мышей (в первые 2 часа). При патолого-анатомическом исследовании макроскопически было обнаружено, что у мышей, получавших фотосенс в 0,2% липосомальной дисперсии (в отличие от 0,2% раствора фотосенса для инъекций), кроме окрашивания всех органов и тканей в синий цвет препарат обратимо прокрашивает в голубоватый цвет и ткани головного мозга.
Вывод. Липосомальная лекарственная форма фо-тосенса при внутривенном введении в максимально допустимых объемах, в дозах, превышающих однократную терапевтическую дозу для мышей в 50-300 раз, как и 0,2% раствор фотосенса для инъекций, не вызывает их гибели, изменения поведенческих реакций и клинических проявлений токсичности.
Н. И. Казачкина, Г. П. Крылова, А. А. Панкратов, В. В. Соколов, Р. И. Якубовская,
В. И. Чиссов
ПРОТИВООПУХОЛЕВАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ СОЧЕТАННОГО ПРИМЕНЕНИЯ ЛАЗЕРНОЙ ГИПЕРТЕРМИИ И ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ: ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
Цель исследования — разработка методик сочетанного применения фотодинамической терапии (ФДТ) с фотосенсом и лазерной гипертермии (ЛГТ).
МНИОИ им. П. А. Герцена, Москва
Материалы и методы. В работе использовали крыс с опухолью РС1, привитой подкожно с внешней стороны задней правой лапы. Лечение начинали, когда опухоль достигала 2-2,8 см в длину.
Работа выполнена с применением лазерного аппарата «Модуль ГФ», который генерирует модулированное излучение с длиной волн 670 (для ФДТ) и 1064 нм (для ЛГТ). При ЛГТ аппарат автоматически поддерживает заданную температуру по принципу обратной связи. ЛГТ создавали при температуре 41 или 43 °С и плотности мощности (Р8) 400, 600 или 800 мВт/см2. Температуру в опухоли контролировали внутритканевым термодатчиком, который внедряли под опухоль. Время поддержания ГТ — 30 мин.
Результаты. ФДТ проводили, используя следующую методику: фотосенс в дозе 2 мг/кг, интервал между введением фотосенса и облучением (670 нм, 75 Дж/см2, 71 мВт/см2) — 24 ч. ФДТ и ЛГТ применяли последовательно или одновременно. При сочетанном лечении ЛДГ проводили при температуре 41 и 43 °С с Р8 при нагревании 800 мВт/см2, при поддержании температуры — 400 или 800 мВт/см2.
Показано, что при ЛДГ опухолевая ткань нагрева-
лась до заданной температуры тем быстрее, чем выше была Р8. До 41 °С опухоли нагревались у 100 % крыс при всех использованных плотностях мощности, до 43 °С — у 100 % крыс при Р8 600 и 800 мВт/см2 и у 60 % крыс при Р8 400 мВт/см2.
Число полных регрессий опухоли в группе крыс, получавших ФДТ с последующей ЛГТ (43 °С, 800 мВт/см2) наблюдалось в 85,7 % случаев, при одновременном воздействии ФДТ и ЛГТ (41 °С
и 400 мВт/см2 или 43 °С и 800 мВт/см2) — в 100 % случаев. В группах ФДТ полные регрессии опухоли зарегистрированы у 66,7 % крыс, в группе ЛГТ при 43 °С — в 16,7 % случаев и в группе ЛГТ при 41 °С полной регрессии опухоли не наблюдали ни в одном случае.
Выводы. ЛГТ увеличивает противоопухолевый эффект ФДТ с фотосенсом в отношении опухоли крыс РС1 при применении различных схем сочетанного лечения при температурах от 41 °С и выше.
Г. В. Какурина, И. В. Кондакова, В. А. Евтушенко
ВЛИЯНИЕ ДОНОРА ОКСИДА АЗОТА НА ПРОТИВООПУХОЛЕВОЕ ДЕЙСТВИЕ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ
Одним из механизмов противоопухолевого действия фотодинамической терапии (ФДТ) является индукция апоптоза опухолевых клеток. Однако развитие устойчивости опухолевых клеток к ФДТ-опосредован-ному апоптозу представляет существенную проблему. В связи с этим целесообразно изучение использования доноров оксида азота (N0) для усиления противоопухолевого действия ФДТ в эксперименте.
Задача работы — исследовать возможность применения N0-доноров для повышения противоопухолевой активности фотодинамической терапии.
Материалы и методы. N0-донор (нитрозогуани-дин — НГ, 2,5 мг/кг) и фотогем (10 мг/кг) вводили вну-трибрюшинно на 4-е сутки после перевивки опухоли. Через 24 ч после введения препаратов животных подвергали облучению лазером на парах золота (Р = 300 шУ, X = 633,8, 1 = 1 мин) путем введения фотода внут-рибрюшинно. На 3-и сутки после облучения опухолевые клетки забирали из брюшной полости для дальнейших исследований. Противоопухолевый эффект оценивали по уменьшению объема асцита, общей кле-точности, по уровню апоптоза в опытной группе животных по сравнению с контрольной, не подвергавшейся ФДТ. Морфологическое исследование индук-
ГУ НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН, Томск
ции апоптоза проводили с использованием красителя Hoechst 33342.
Результаты. Исследования показали, что использование ФДТ приводило к уменьшению объема опухоли на 30 % и общей клеточности в 2 раза, к росту апоп-тотической гибели опухолевых клеток в 1,7 раза по сравнению с контролем. Комбинация ФДТ и НГ увеличивала индукцию апоптоза на 40 % по сравнению с группой животных, получавших ФДТ, остальные показатели при этом практически не изменялись. Результатом использования НГ в качестве фотосенсибилизатора явилось уменьшение объема опухоли в 10 раз и общей клеточности асцита в 2 раза по сравнению с группой животных, получавших стандартную ФДТ.
Выводы. Отмечено усиление противоопухолевой активности ФДТ под влиянием NO-донора, что показывает принципиальную возможность применения их комбинации в терапии злокачественных новообразований. Однако нужно учитывать, что NO-доноры неоднозначно действуют на процессы пролиферации и апоптоза опухолевых клеток. Поэтому требуются дополнительные и более детальные исследования для окончательных выводов о клиническом применении доноров оксида азота.
T. A. Ермакова1, Е. В. Филожнко1, A. В. Фeoфaнoв2, В. В. Соколов1, P. И. Якубов^ая1, В. И. Чжтв1
БИOРACПРEДEЛEHИE ФOTOCEHCИБИЛИЗATOРOB В TKA^X ЭKCПEРИMEHTAЛЬHЫX OПУXOЛEЙ ЖИBOTHЫX И В БAЗAЛИOME ЧEЛOBEKA
Эффективность фотодинамического воздействия и механизм повреждения ткани при фотодинамичес-кой терапии (ФДТ) зависят от целого ряда факторов, в т. ч. от уровня накопления и распределения фотосенсибилизатора (ФС) в опухоли.
Целью настоящей работы являлось изучение биораспределения ФС различной природы (фталоциани-нов, хлоринов и эндогенного протопорфирина IX) в тканях экспериментальных опухолей у мышей и в ткани базалиомы человека.
Материалы и методы. Методом флюоресцентной микроспектроскопии с использованием замороженных срезов тканей охарактеризовано накопление препарата фталосенс и производных циклоимида хлорина р6 в перевивных опухолях мышей, а также аласенс-ин-дуцированного протопорфирина IX, препаратов фото-сенс и радахлорин в базалиоме человека
Результаты. Выявлено, что все ФС накапливаются как в опухолевых клетках, так и в неопухолевых тканях. В опухолевом узле и прилежащих к опухоли
1 МНИОИ им. П. А. Герцена, Москва
2 Институт биоорганической химии РАН, Москва
неопухолевых структурах детектируется более высокое интегральное накопление ФС по сравнению с нормальными тканями, удаленными от зоны опухолевого роста. При этом относительное содержание флюоро-хромов в опухолевых клетках, строме, стенках кровеносных сосудов и в прилежащих неопухолевых тканях зависит от типа ФС и от времени после его введения. Характер биораспределения красителей свидетельствует о том, что в реализации эффекта фотодинамичес-кого воздействия с применением изученных ФС, наряду с прямым поражением опухолевых клеток, существенную роль играет фотоиндуцированное повреждение кровеносных сосудов и стромальных элементов, участвующих в поддержании жизнедеятельности опухоли.
Выводы. Данное исследование позволяет детализировать распределение ФС в ткани-мишени и уточнить временной интервал между введением ФС и световым воздействием, оптимальный для достижения наилучшего противоопухолевого эффекта ФДТ.
M. A. Kopmaвa1, H. В. Pябoвa2, A. П. Полозкова1, И. Г. Meepoвuч1, И. Ю. Kyбacoвa1, Е. В. Иг-нamьeвa1, Г. A. Meepoвuч2, A. A. Сmpamoннuкoв2, O. Г. Poгoвa1, O. Л. Opлoвa1, З. С. Смирнова1, H. A. Oбopomoвa1
COBEРШEHCTBOBAHИE ЛИПOCOMAЛЬHOЙ ЛЕ^РСТВЕНТОЙ ФOРMЫ ФOTOCEHCA
Цель исследования — совершенствование липосомальной формы фотосенса с целью повышения содержания препарата во внутрилипосомальном объеме.
Материалы и методы. Субстанция фотосенса получена в ФГУП ГНЦ НИОПИК, липиды предоставлены фирмой Lipoid. Для получения липосомальной дисперсии на основе фосфатидилхолина и холестерина использовался метод Бенгема с последующей соника-цией и экструзией для уменьшения размера везикул. Для стерической стабилизации липосом использовали PEG-2000-РЕ. Контроль размера липосом проводили на приборе Submicron Particle Sizer NIC0MP-380. Ко-
1 ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва
2 ЦЕНИ ИОФ им. А. М. Прохорова РАН, Москва
личественное определение эффективности включения фотосенса в липосомы проводили методом прямой УФ-спектрофотометрии с использованием величины удельного показателя поглощения (Е) при длине волны 678 нм. Невключившийся фотосенс отделяли методом гель-фильтрации, пропуская липосомальную дисперсию через хроматографическую колонку с Sephadex G-50. Для контроля степени включения препарата использовали также метод нейтрализации флюоресценции свободного фотосенса. Уровень накопления фотосенса в ткани опухоли Эрлиха и печени мышей BDF1 проверяли спектрально-флюоресцент-
ным методом с использованием спектроанализиатора ЛЭСА-01-«Биоспек».
Результаты. Получена липосомальная форма с высокой концентрацией фотосенса во внутрилипосо-мальном объеме. Установлено, что для эффективного включения фотосенса массовое соотношение липи-ды/фотосенс должно быть не ниже 10:1. Использова-
ние РБв-2000-РЕ для стерической стабилизации липосом позволило уменьшить в 1,5 раза их накопление в печени и увеличить на 30 % уровень накопления фотосенсибилизатора в опухоли.
Выводы. Получена стерически стабилизированная липосомальная форма фотосенса с включением препарата в липосомы до 80 %.
Е. K. Kpeчuнa, H. В. Ефpeмoвa
ФOTOДИHAMИЧECKAЯ TEРAПИЯ BOCПAЛИTEЛЬHЫX ЗAБOЛEBAHИЙ ПAРOДOHTA
Цeнmpaльный нayчнo-uccлeдoвameльcкuй uнcmumym cmoмamoлoгuu, Moc^a
Целью настоящего исследования явилось изучение возможности использования фотодинамической терапии (ФДТ) в комплексном лечении воспалительных заболеваний пародонта.
Материалы и методы. ФДТ была проведена у 30 человек с воспалительными заболеваниями пародон-та, из них у 8 — с катаральным гингивитом, у 12 — с пародонтитом легкой степени и у 10 — с пародонтитом средней степени. ФДТ состояла из нанесения на десневой край фотосенсибилизатора — 0,1% геля фо-тодитазина (ООО «Вета-гранд», Москва) на 20 мин и последующего лазерного воздействия с помощью полупроводникового аппарата «Аткус-2» (ЗАО «Полупроводниковые приборы», Санкт-Петербург), длиной волны 662 нм в непрерывном режиме, мощностью на выходе — 1 Вт, плотностью энергии —
80-100 Дж/см2; время экспозиции — 8-20 мин.
Результаты лечения оценивались на основании клинических данных и мониторинга состояния микроциркуляции методом лазерной допплеровской флюо-риметрии с использованием амплитудно-частотного анализа (ЛДФ), с помощью прибора ЛАКК-01 (НПО «Лазма», Москва).
По данным ЛДФ определялись следующие параметры: М (усл. ед.) — показатель микроциркуляции; 5 (усл. ед) — среднеквадратическое отклонение колебаний кровотока; Ку — коэффициент вариации, характеризующий вазомоторную активность микрососудов. По данным амплитудно-частотного анализа определя-
ли: уровень вазомоций — АЬБ/5; сосудистый тонус — 5/АЬБ, высокочастотные флуктуации — АНБ/5; пульсовые флуктуации — АСБ/5; индекс флаксмоций — ИФМ; внутрисосудистое сопротивление — АСБ/М.
Результаты. Анализ результатов после ФДТ показал нормализацию клинического состояния пародонта как при лечении катарального гингивита, так и пародонтита. По данным ЛДФ, через 3 нед. после ФДТ отмечалась нормализация параметров микроциркуляции. Уровень капиллярного кровотока повысился на 20-56 %, достигая нормальных значений, интенсивность кровотока возрастала на 40-80 %, вазомоторная активность микрососудов увеличивалась на 20-60 % и соответствовала норме. Анализ амплитудно-частотных характеристик допплерограмм показал повышение уровня вазомоций на 22-60 %, что свидетельствовало об усилении активной модуляции тканевого кровотока. Сосудистое сопротивление снижалось более чем в 1,5-2 раза и соответствовало уровню интактно-го пародонта, свидетельствуя о восстановлении пассажа в посткапиллярно-венулярном отделе микроцирку-ляторного русла. ИФМ свидетельствовал о его нормализации и восстановлении эффективности регуляции тканевого кровотока в микрососудах (ИФМ повысился на 17-57 % и соответствовал норме).
Выводы. Использование ФДТ при лечении воспалительных заболеваний пародонта оказывает положительный клинический эффект и активизирует микроциркуляцию в пародонте.
И. Ю. Кубасова1, 3. С. Смирнова1, Л. Н. Борисова1, А. С. Халанский3, Г. А. Меерович4,
А. Ю. Барышников1, Е. А. Лукъянец2, Г. Н. Ворожцов2
ИЗУЧЕНИЕ СЕЛЕКТИВНОСТИ НАКОПЛЕНИЯ ФОТОСЕНСА В ГЛИОМЕ С6 КРЫС
Драматический рост случаев заболеваемости опухолями головного мозга во всем мире заставляет исследователей искать новые подходы к лечению этих опухолей. В настоящее время для комбинированного лечения глиом применяют фотодинамическую терапию (ФДТ). Преимуществом ФДТ является адресность воздействия за счет светового облучения ограниченной области поражения головного мозга после введения фотосенсибилизатора.
Цель исследования — изучить динамику и селективность накопления препарата фотосенс (ФС) в глиоме С6 крыс с целью оптимизации дозы препарата и времени проведения последующего облучения.
Материалы и методы. В экспериментах использовали крыс-самок Wistar. Глиому С6 поддерживали in vitro как клеточную культуру. Перевивку опухоли осуществляли интракраниально по 100-103 опухолевых клеток в 5 мкл среды RPMI-1640. 0,2% раствор ФС для инъекций (ФГУП ГНЦ НИОПИК) вводили в/в однократно на 9-е сутки опыта в дозах 3,5 и 10 мг/кг. Уровень накопления оценивали по флюоресценции спектрально-флюоресцентным методом с использованием спектроанализатора ЛЭСА-«Биоспек». Возбуждение флюоресценции осуществляли гелий-неоновым лазером с длиной волны 632,8 нм. Интенсивность флюоресценции выражали в у. е. (отношение интегральной интенсивности флюоресценции к интенсивности рассеянной лазерной линии) и определяли в течение 24 ч
1 ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва
2 ФГУП ГНЦ НИОПИК, Москва
3 НИИ морфологии человека РАМН, Москва
4 ЦЕНИ ИОФ им. А. М. Прохорова РАН, Москва
после введения препарата. Селективность накопления оценивали как отношение уровня накопления ФС в опухолевой и нормальной тканях головного мозга и выражали в виде индекса селективности.
Результаты. Максимальная флюоресценция в опухоли, равная 12,6 у. е., наблюдалась через 4 ч после введения ФС в дозе 10 мг/кг. В здоровой ткани головного мозга крыс максимальное накопление ФС (4,3 у. е.) выявлялось через 0,4 ч после его введения. Через 24 ч уровень накопления препарата в опухоли и в нормальной ткани головного мозга оставался достаточно высоким (8,3 и 2,5 у. е. соответственно). Индекс селективности возрастал с 1,56 до 3,35 в течение суток за счет более быстрого выведения препарата из нормальной ткани головного мозга. Высокий уровень накопления ФС наблюдался при введении препарата и в дозе 3,5 мг/кг. Через 2 ч интенсивность флюоресценции составляла 8,9 у. е. в опухолевой ткани и 4,4 у. е. в здоровой ткани головного мозга. Высокий уровень накопления ФС сохранялся в глиоме С6 в течение 24 ч (8,4 у. е.), тогда как в нормальной ткани мозга снижался до 1,8 у. е. Индекс селективности в течение суток увеличился вдвое и составил 4,6 через 24 ч.
Выводы. Высокая селективность накопления фо-тосенса в глиоме С6 в течение суток позволяет рекомендовать проведение лазерного облучения опухоли через 24 ч после введения препарата в дозе 3,5 мг/кг.
И. Ю. Кубасова1, 3. С. Смирнова1, Л. Н. Борисова1, А. С. Халанский3, Г. А. Меерович4,
А. Ю. Барышников1, Е. А. Коган5, Е. А. Лукъянец2, Г. Н. Ворожцов2
ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ ПРЕПАРАТА ФОТОСЕНС ДЛЯ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ ГЛИОМЫ С6 КРЫС
Первичные злокачественные опухоли головного мозга составляют около 9 % среди всех новообразований человека и представляют собой серьезную проблему из-за невозможности адекватного оперативного
1 ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва
2 ФГУП ГНЦ НИОПИК, Москва
3 НИИ морфологии человека РАМН, Москва
4 ЦЕНИ ИОФ им. А. М. Прохорова РАН, Москва
5 ММА им. И. М. Сеченова, Москва
вмешательства. Поиск новых методов, дополнительных к лучевой и химиотерапии опухолей головного мозга, остается актуальной задачей онкологии.
Цель исследования — оценить эффективность
применения препарата фотосенс для проведения ФДТ глиомы С6 крыс.
Материалы и методы. Глиому С6 перевивали ин-тракраниально в область правого бокового желудочка мозга крыс "^БІаг по 200-103 опухолевых клеток в 5 мкл среды КРМІ-1640. Фотосенс, синтезированный в ФГУП ГНЦ НИОПИК (0,2% раствор для инъекций), вводили в/в однократно в дозе 3,5 мг/кг на 9-е сутки опыта. ФДТ проводили через 24 ч после введения фо-тосенса. Опухоли облучали лазером ЛФТ-630/670-01-«Биоспек»: плотность мощности 100 мВт/см2 в течение 15 мин. Оценку эффективности ФДТ проводили по изменению размеров опухоли по сравнению с контролем и патоморфозу глиомы С6 после проведенного лечения. Для патоморфологических исследований крыс усыпляли через 72 ч и через 7 дней после ФДТ. После фиксации в 10% формалине мозг разрезали через видимую часть опухоли параллельно стволовой части и перпендикулярно к лобной. Макроскопически оценивали площадь опухоли. Срезы толщиной 6-8 мкм окрашивали гематоксилин-эозином.
Результаты. Через 72 ч после проведения ФДТ площадь опухоли в опытной группе была в 3,4 раза меньше, чем в контрольной группе, и составляла 14,4
и 48,4 мм2 соответственно. На 7-е сутки после ФДТ из-за повреждения прилежащей к опухоли ткани мозга оценка результатов лечения проводилась только патоморфологически. При оценке патоморфоза глиомы С6 через 72 ч после ФДТ было выявлено, что площадь некроза выше в опытной группе (50 %) по сравнению с контрольной (10 %). В контрольной группе спонтанный некроз нарастал к 17-му дню эксперимента (27,5 %), тогда как в опытной группе уменьшался до 27 % за счет усиления репаративных процессов. Разрушение сосудов с кровоизлияниями, а также тромбоз сосудов в результате деструктивного васкулита в опухолях наблюдались только после ФДТ. Повреждения прилежащей к опухоли ткани мозга выявлялись в опытной группе в виде обширных полей некроза, кровоизлияний и выраженного отека мозга; в контрольной группе отмечались выраженные явления отека и продуктивный васкулит с лимфоидной инфильтрацией стенок.
Выводы. Полученные экспериментальные данные свидетельствуют об эффективности применения фото-сенса для ФДТ глиомы С6 крыс и перспективности дальнейших исследований по разработке метода ФДТ опухолей головного мозга.
В. Г. Лихванцева, М. В. Будзинская, С. А. Шевчик, О. А. Анурова, М. В. Верещагина,
Р. Н. Крупнов, В. Б. Лощенов, С. Г. Кузьмин, Г. Н. Ворожцов
ПЕРВЫЙ КЛИНИЧЕСКИЙ ОПЫТ ПРИМЕНЕНИЯ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ С ПРИМЕНЕНИЕМ ОТЕЧЕСТВЕННОГО ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОРА ФОТОСЕНС В ОФТАЛЬМООНКОЛОГИИ
Фотодинамическая терапия (ФДТ) как метод лечения в общей онкологии признан перспективным направлением во всех странах мира. В офтальмоонкологии он начал развиваться сравнительно недавно, исключительно за рубежом и только при внутриглазных опухолях. На территории Российской Федерации ФДТ с применением отечественных фотосенсибилизаторов (ФС) только вступила в стадию клинических испытаний.
Цель работы — раскрыть возможности применения отечественного ФС фотосенс в фотодиагностике (ФД) и ФДТ опухолей органа зрения.
Материалы и методы. ФД с препаратом Фотосенс проводили на лазерной установке для ФД опухолей и контроля ФДТ ЛЭСА-01-«Биоспек». ФДТ проводили на лазерной установке для ФДТ ЛФТ-630/675-01-«Биоспек». Лечение проводили у пациентки 25 лет с рецидивирующей рабдомиосаркомой орбиты (стадия I) в комбинации с нерадикальной циторедукцией, у 4
ГУ НИИ ГБ РАМН, ГУП МНКЦ «ИнтермедБиофизхим», ЦЕНИ ИОФ им. А. М. Прохорова РАН, Москва
пациентов с увеальными меланомами (стадия T3N0M0) и у 2 пациентов с прогрессирующими невусами конъюнктивы. Для опухолей различной локализации применяли различные дозы ФС, сроки проведения и режимы ФДТ.
[ Результаты. Фотосенс появлялся в конъюнктиве и новообразованиях конъюнктивы на 10-й секунде. Градиент контрастности между нормальными тканями глаза и опухолью достигал пика на 3-и сутки за счет экстравазального выхода препарата и его депонирования в опухоли. Избирательное накопление фотосенса, имеющего значительное поглощение в спектральном диапазоне 0,650-700 мкм, обеспечивало высокую контрастность патологического очага по сравнению с окружающими тканями, позволяло определить его границы, включая зону скрытого роста. Это значительно повышало надежность и точность лазерного терапевтического воздействия. Положительный результат в виде полной или частичной регрессии опухоли до-
стигнут во всех случаях. Однако непродолжительные сроки наблюдения за больными не позволяют судить
о клинической эффективности метода с позиций стандартных критериев оценки эффективности, принятых в онкологии.
Выводы. Представленные данные являются предварительными. Однако даже они позволяют думать
о перспективности метода в целом и наметить пути его развития, а также спектр опухолей органов зрения, для которых он может быть пригоден.
В. Г. Лихванцева, М. В. Будзинская, С. А Шевчик, Р. Н. Крупнов, В. Б. Лощенов,
С. Г. Кузьмин, Г. Н. Ворожцов
ВОЗМОЖНОСТИ ТРАНСИЛЛЮМИНАЦИОННОЙ ДИАГНОСТИКИ С ПРИМЕНЕНИЕМ ГЕЛИЙ-НЕОНОВОГО ЛАЗЕРА В ОФТАЛЬМООНКОЛОГИИ
ГУ НИИ ГБ РАМН, ГУП МНКЦ «ИнтермедБиофизхим», ЦЕНИ ИОФ им. А. М. Прохорова РАН, Москва
Беспигментные опухоли сосудистого тракта глаза составляют примерно одну третью часть от пигментированных опухолей хориоидеи. Их диагностика порой представляет неразрешимую задачу. Маркировка границ такой опухоли на операционном столе как предварительный этап подшивания радиоактивного аппликатора — одна из причин неудач брахитерапии.
Цель работы — оценка возможностей трансиллюминационной диагностики с применением гелий-неонового лазера.
Материалы и методы. Трансиллюминационную диагностику (ТД) проводили на лазерной установке для ФД опухолей и контроля ФДТ ЛЭСА-01-«Био-спек». При проведении ТД использовали диагностический режим гелий-неонового лазера с длиной волны 633 нм и мощностью 50 мВт/см2. Параллельно пытались определить границы опухоли традиционным трансиллюминационным методом с помощью обычного портативного световода. Полученные результаты регистрировали с помощью фоторегистрации, используя современные цифровые технологии анализа изображения.
В исследование вошло 5 пациентов с беспигмент-ными меланомами сосудистого тракта глаза. Диагноз подтверждали с помощью ультразвуковых методов ис-
следований и флюоресцентной ангиографии с флюо-ресцеином.
Результаты. Определение границ опухоли с помощью традиционного трансиллюминационного метода в 3 случаях оказалось неэффективно: тень опухоли на склере в проекции ее расположения не выявлялась. В двух положительных случаях тень была слабой и носила неубедительный характер. Трансиллюминационное просвечивание при длине волны 633 нм давало интенсивное затемнение на склере в проекции залегания опухоли. При этом размеры выявляемых образований на 1-2 мм превышали исходные размеры опухолей по результатам УЗИ. Это позволило предположить, что в зону затемнения на склере, выявленную с помощью ТД, вошли участки скрытого плоскостного роста опухоли, не определяемые с помощью УЗ-методов.
Выводы. ТД с применением гелий-неонового лазера является высоко информативным, достоверным и надежным методом диагностики границ беспигмент-ных внутриглазных опухолей.
Использованный нами принцип диагностики может быть положен в основу разработки отечественного портативного лазерного диагностического оборудования для лазерной трансиллюминационной диагностики внутриглазных опухолей.
В. Г. Лuxвaнцeвa, P. H. Kp^упнов, A. В. Peшemнuкoв
СКРИНИНГ-ОЦЕНКА ВОЗМОЖНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОРА РАДАХЛОРИН ® В ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ ОПУХОЛЕЙ ОРГАНА ЗРЕНИЯ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
ГУ HИИ ГБ PAMH, MocvLsa
Фотодинамическая терапия (ФДТ) как метод лече- ечественных фотосенсибилизаторов (ФС) раскрыло
ния опухолей органа зрения признана перспективным путь для изучения возможностей метода на террито-
направлением во многих странах мира. Появление от- рии Российской Федерации.
Цель работы — определить возможности применения отечественного ФС Радахлорин® в ФДТ опухолевых заболеваний глаза в эксперименте.
Материалы и методы. Эксперимент выполнен на 60 кроликах породы шиншилла (самцы массой 2 кг, 120 глаз). Модель эпибульбарной (ЭМ) и увеальной меланомы (УМ) создавали, прививая меланому В16 в эпибульбарное или субхориоидальное пространство глаза. Для проведения ФДТ использовали полупроводниковый лазерный диодный модуль «Лах-та-Милон» производства ЗАО «МИЛОН ЛАЗЕР» (Санкт-Петербург) и 0,35% раствор препарата Радахлорин® (РХ) для внутривенного введения, изготовленный в НИИ Фармакологии МЗ РФ по заказу ООО «РАДА-ФАРМА». ФДТ ЭМ и УМ проводили лазерным излучением с длиной волны 0,662 мкм. Использовали 2 режима облучения: плотность мощности 200 и 500 мВт/см2 при одинаковой экспозиции 5 мин. Анализировали 2 дозы РХ: 1,0 и 3,0 мг/кг массы тела. Контролем ФДТ ЭМ служили 2 группы животных, которых облучали в одном режиме (плотность мощности — 500 мВт/см2, экспозиция — 5 мин), но вводили РХ только в 1-й группе контроля (3,0 мг/кг). Контролем ФДТ УМ служили также 2 группы животных: в 1-й группе вводили 1,0 мг/кг РХ, не проводя ФДТ;
во 2-й группе проводили облучение (плотность мощности — 500 мВт/см2, экспозиция — 5 мин), не вводя РХ. Данные, полученные в экспериментальных и контрольных группах, сопоставляли.
Результаты. РХ появлялся в конъюнктиве и ЭМ на 5-й секунде, пик концентрации в тканях регистрировали через 90 мин. Градиент контрастности между конъюнктивой и ЭМ зависел от концентрации вводимого препарата и времени регистрации. Он развивался за счет экстравазального выхода препарата и его депонирования в ЭМ. Избирательное накопление РХ, имеющего максимум поглощения в спектральном диапазоне 0,662 мкм, обеспечивало высокую контрастность патологического очага по сравнению с окружающими тканями и позволяло точно определить его границы, включая зону скрытого роста, а также избирательно воздействовать на очаг с помощью ФДТ. Наибольшая регрессия опухоли отмечена при плотности мощности лазерного воздействия 500 мВт/см2, расчетной дозе РХ
3,0 мг/кг. При этом коэффициент абсолютного торможения в этой группе был выше, чем в других группах, а полная регрессия меланом отмечалась в 50 % случаях.
Выводы. Проведенные исследования являются скрининговыми, они раскрывают возможности ФДТ в офтальмоонкологии.
И. П. Maкoгoн
ВЛИЯНИЕ ПРEПAРATA AЛACEHC HA AKTOBHOC^ ФЕРМЕНТОВ CЫBOРOTKИ KРOBИ
ГУЗ Pecnyблuкaнcкuй oнкoлoгuчecкuй дucnaнcep, Сарана
Среди современных методов ранней диагностики рака наиболее перспективными в настоящее время считаются флюоресцентные методы с применением фотосенсибилизаторов, способных накапливаться в опухолевой ткани. Градиент накопления между здоровой тканью и патологической может составлять от 1:2 до 1:15 в зависимости от вида тканей, структуры опухоли, пораженного органа, типа сенсибилизатора. Альтернативным путем создания эффективных концентраций фотосенсибилизаторов в опухоли является стимуляция организма к продукции эндогенных фото-активных соединений посредством экзогенного введения их предшественников.
Задачи исследования — клиническая лазерная биоспектроскопия у больных раком желудка (РЖ) с применением диагностического комплекса ДТК — 3М (ЦЕНИ ИОФ им. А. М. Прохорова РАН, Москва) с препаратом аласенс (5-АЛК, ФГУП ГНЦ НИОПИК), являющимся предшественником эндогенного фотоак-тивного туморотропного протопорфирина IX. Оценка влияния аласенса на активность ферментов сыворотки крови.
Материалы и методы. Исследовали активность аспарагиновой и аланиновой аминотрансфераз (АСТ,
АЛТ), лактатдегидрогеназы (ЛДГ), гамма-глутамил-трансферазы (ГГТ), щелочной фосфатазы (ЩФ) в сыворотке крови у больных РЖ в контрольной и опытной группах до введения препарата, через 1, 7 и 14 суток после операции. Активность ферментов определяли на биохимическом комплексе «Фотофермент-01».
Результаты. Флюоресцентная диагностика с препаратом аласенс является эффективным методом ранней диагностики РЖ. Проведенные исследования не выявили отрицательного действия аласенса на ферментативные показатели цитолиза гепатоцитов (АСТ, АЛТ). Исследование сывороточной активности ЛДГ — одного из важнейших ферментов углеводного обмена в динамике послеоперационного процесса также не выявило каких-либо изменений, связанных с применением препарата. О реактивных изменениях эпителия желчевыводящих путей судили по уровню мембраносвязанных ферментов — ЩФ и ГГТ, которые являются индикаторами цитолитического и холестати-ческого синдромов. Как и предыдущие ферменты, их изменения связаны с ответной реакцией организма на стресс в результате оперативного вмешательства.
Выводы. Аласенс не обладает токсичностью в терапевтических дозах, хорошо переносится больными.
A. A. Пaнкpamoв1, H. И. Kaзачкина1, P. И. Якубов^ая1, В. В. Соколов1, В. И. Чжтв1,
В. M. Muern2
CBETOДИOДHЫE УТОЧНИМ ИЗЛУЧЕНИЯ В ЭKCПEРИMEHTAЛЬHOЙ ФOTOДИHAMИЧECKOЙ TEРAПИИ
Одним из путей развития метода фотодинамичес-кой терапии (ФДТ) злокачественных новообразований является разработка, создание, апробация в эксперименте и внедрение в клиническую практику новой аппаратуры для ФДТ.
В ФГУП ГНЦ НИОПИК разработаны светодиодные установки с максимумами излучения при длине волны 633±10 нм (для порфирин-опосредованной ФДТ) и 685±10 нм (для фталосенс-опосредованной ФДТ), характеризующиеся простотой и безопасностью в использовании, долгосрочностью службы и дешевизной.
Целью настоящей работы являлась апробация данных светодиодных установок как источников оптического излучения для ФДТ с препаратами аласенс (5-АЛК, эндогенный предшественник протопорфирина IX — ПШХ) и фталосенс на мышах с перевивными опухолями.
Материалы и методы. У мышей с опухолью Эрлиха, получавших 5-АЛК с последующим облучением при плотности мощности ~30 мВт/см2 до достижения световой дозы 100 Дж/см2, наблюдали развитие характерных для 5-АЛК-ФДТ реакций: формирование некротического струпа, задержку роста опухоли (90-75 %) и гибель части животных от общей фототоксичности (до 30 %). При сравнении противоопухоле-
1 МНИОИ им. П. А. Герцена, Москва
2 ФГУП ГНЦ НИОПИК, Москва
вых эффектов ФДТ с 5-АЛК при использовании в качестве оптического излучения светодиодной установки и лазера «Мехатрон», применяющегося в клинике, были получены сходные результаты.
Результаты. На мышах с карциномой толстой кишки С26 и лимфолейкозом Р388 показано, что при использовании в качестве источника света светодиодного излучателя противоопухолевая эффективность ФДТ с препаратом фталосенс проявлялась в ингибировании роста опухолей и их полной регрессии. Эффективность ФДТ пропорционально зависела от дозы фотосенсибилизатора и плотности энергии. Так, применение исследованных режимов ФДТ с препаратом фталосенс позволяло добиться длительного ТРО на 50-100 % у мышей с С26 и на 68-100 % у мышей с Р388, полной регрессии леченного опухолевого узла — у 30-100 % мышей с Р388, 25-60 % излеченнос-ти — у животных с С26.
Выводы. Апробированные светодиодные излучатели могут быть рекомендованы для проведения пор-фирин- и фталосенс-опосредованной экспериментальной ФДТ. Эти приборы могут служить основой для создания терапевтических источников светового излучения с максимумами при длине волн 633±10 и 685±10 нм для порфирин- и фталосенс-опосредован-ной ФДТ в клинике.
A. В. Pябosa1, M. A. Kopmasa2, Е. A. Лукъя^ц3, В. M. ^гримов^ий3, A. A. Сmpamoннuкos1, Г. A. Meeposuч1,
В. Б. Лoщeнos1, И. Ю. Губатва2, H. A. Oбopomosa2
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СТЕПЕНИ ВКЛЮЧЕНИЯ ФОТОСЕНСА ВНУТРЬ ЛИПОСОМ С ПОМОЩЬЮ МЕТОДА ТУШЕНИЯ ФЛЮОРЕСЦЕНЦИИ ПРИ КОМПЛЕКСООБРАЗОВАНИИ
Липосомальные формы препаратов для фотодина-мической терапии (ФДТ) имеют ряд преимуществ перед их водными растворами. Благодаря им удается повысить селективность накопления препарата в опухоли
и, соответственно, снизить концентрацию фотосенсибилизатора в коже, что очень важно для предотвращения кожной фототоксичности у пациентов после проце-
1 ЦЕНИ ИОФ им. А. М. Прохорова РАН, Москва
2 ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва
3 ФГУП ГНЦ НИОПИК, Москва
дуры ФДТ. Эффективность липосомальной формы фо-тосенса зависит от степени его включения внутри липо-сом, что делает актуальной задачу контроля за этим параметром. Существующие хроматографические методы дорогостоящи и требуют больших затрат времени.
Задача исследования — разработка метода оперативного контроля за степенью включения фотосенса
внутри липосом, основанного на нейтрализации флюоресценции фотосенса при образовании им комплексов с молекулами некоторых фталоцианинов.
Материалы и методы. В работе использовались растворы фотосенса, липосомальных дисперсий фото-сенса на основе фосфатидилхолина и холестерола с различной степенью включения фотосенса внутрь липосом и катионного производного фталоцианина — октакис(пиридинометил)фталоцианин хлоралюминия октохлорид (А1РсРут8). Возбуждение флюоресценции осуществлялось гелий-неоновым лазером с длиной волны 633 нм. Измерение флюоресценции и поглощения проводилось лазерным электронным спектральным анализатором ЛЭСА-01 -«Биоспек». В качестве контроля использовали также колоночную хроматографию.
Результаты. Водные растворы как чистого фото-сенса, так и А1РсРут8 имеют значительную флюоресценцию, однако, если оба вещества находятся в растворе, их молекулы образуют комплекс, что приводит
к тушению флюоресценции. При добавлении А1РсРут8 в раствор липосомального препарата фото-сенса в образовании комплексов будут участвовать лишь те молекулы фотосенса, которые находятся вне липосом, т. е. при постепенном добавлении А1РсРут8 представляется возможным определить по минимальным значениям интенсивности флюоресценции долю фотосенса, находящуюся вне липосом. Дополнительными опорными точками в этом анализе являются различия между максимумами флюоресценции чистого фотосенса, фотосенса высокой концентрации внутри липосом и А1РсРут8.
Выводы. Использование эффекта тушения флюоресценции фотосенсом при добавлении А1РсРут8 позволяет устанавливать степень включения фотосенса внутрь липосом с точностью до 5 %. Было проанализировано несколько отличающихся экспериментальных партий препарата липосомального фотосенса и установлено в них включение фотосенса внутрь ли-посом от 15 до 80 %.
В. П. Сажин, Д. Л. Koган, M. H. Дшин, В. M. Сaвeлъeв, T. A. Koган
ЭHДOCKOПИЧECKAЯ ФOTOДИHAMИЧECKAЯ TEРAПИЯ В ЛЕЧЕНИИ ЗЛOKAЧECTBEHHЫX OПУXOЛEЙ
MУЗ Hosoмocкoscкaя город^ая клuнuчecкaя болъница
Материалы и методы. За период с 2001 по 2005 г. методом фотодинамической терапии (ФДТ) пролечено 42 пациента. Женщин было 20, мужчин — 22. Средний возраст — 63 года.
Больные были разбиты на 3 группы. В 1-ю группу вошло 13 пациентов с опухолями полых органов: рак пищевода — 8 больных, рак желудка — 3, рак прямой кишки — 1, рак легкого — 1. 2-ю группу составили 18 больных со злокачественным поражением плевры первичного и метастатического характера. В 3-ю группу вошли 11 больных раком мочевого пузыря Т 1КхМ0.
На первом этапе выполнялась трансуретральная резекция опухоли мочевого пузыря. На втором этапе проводилась ФДТ.
Для проведения ФДТ использовали лазерную установку на парах золота «МЕТАЛАЗ-З» с длиной волны 627,8 нм, фиброэзофагогастроскоп фирмы ОЬУМ-РИБ СТБ Е, стандартные цистоскоп, ректоскоп. Использовали фотосенсибилизатор фотогем в дозе 1,5-3 мг/кг.
Результаты. После фотодинамической терапии начальных стадий рака пищевода и желудка (3 больных) был отмечен полный регресс опухолей. Рецидивов выявлено не было. При стенозирующих опухолях
начальный просвет составлял от 0,1 (опухоль пищевода) до 1,0 см (опухоль прямой кишки). После проведения ФДТ просвет полых органов восстанавливался до 1,0—1,2 см при опухолях пищевода и до 1,5 см при раке кардиоэзофагальной области. Уменьшался болевой эффект, восстанавливалась проходимость пищи. В 2 случаях через 3-4 мес. наблюдался рестеноз опухоли.
При злокачественных плевритах после ФДТ отмечался выраженный болевой синдром, который купировался назначением ненаркотических анальгетиков. Длительность болевого синдрома — 7-20 дней. Гипер-термический синдром наблюдался у 6 (33,3 %) пациентов. Осложнений не было. Полное исчезновение экссудации наблюдалось у 12 (66,6 %) пациентов, частичное — у 33,4 %. Отмечено уменьшение болевого синдрома, исчезновение одышки, улучшение общего самочувствия. Рецидив плеврита наблюдался у 1 пациентки через 3 мес. Сроки наблюдения составили от 2 до 15 мес.
При раке мочевого пузыря в 7 случаях был отмечен полный регресс опухоли, в 4 — частичный регресс. Рецидивы наблюдались в 4 (36,4 %) случаях.
Выводы. Эндоскопическая ФДТ эффективна при опухолях полых органов и плевры.
А. А. Штиль1, В. А. Ольшевская2, А. В. Зайцев2, И. Гофман3, В. Н. Калинин2
НОВЫЕ МЕТАЛЛОКОМПЛЕКСЫ КАРБОРАНИЛПОРФИРИНОВ: СИНТЕЗ И МЕХАНИЗМЫ ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО ДЕЙСТВИЯ
1 ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва
2 ИНЭОС им. А. Н. Несмеянова РАН, Москва
3 Медицинский университет г. Инсбрука, Австрия
На основе синтетического 2-формил-5,10,15,20-тет-рафенилпорфирина и природного протогемина IX разработаны эффективные, протекающие с высокими выходами методы синтеза борированных производных порфиринов для исследований в онкологии. Разработан синтез бифункциональных карборанилпорфиринов при реакции 2-формил-5,10,15,20-тетрафенилпорфирина и его медных, никелевых и цинковых комплексов с впервые полученными 1-литий-9-изоциано-о- и м-карборанами. Последовательная трансформация изоцианатной группы в уретановую, а затем в аммонийную приводила к водорастворимости полученных соединений. Новые производные 5,10,15,20-тетрафенилпорфи-рина, а также синтезированные нами ранее его бориро-ванные производные исследованы на способность вызывать гибель опухолевых клеток человека.
Наибольшая активность выявлена у цезиевой соли [2-(1’-клозо-монокарборанилгидроксиметил)-5,10,15,20-тетрафенилпорфиринато]меди (II) (!С50 ~5 мкМ для клеток рака толстой кишки, молочной железы, предстательной железы, яичников, меланомы и ге-мобластозов, а для неопухолевых фибробластов препарат оказался инертен до 100 мкМ). Соединение вызывало гибель клеток рака молочной железы, устойчивых ко многим противоопухолевым лекарствам; механизм гибели отличался от классического апоптоза и некроза.
Выявлен важнейший механизм цитотоксичности этого соединения — способность связываться с ДНК, ингибирование синтеза ДНК. Медный монокарборанилпорфи-рин предотвращал р53-индуцируемую активацию транскрипции. Эти свойства монокарборанилпорфиринов — новые для данного класса соединений. Наконец, синтезирована серия новых борированных производных про-тогемина IX, содержащих полиэдрические нейтральные о- и м-карборановые заместители, о-, м-С2В10Н12, анионный монокарборан, СВПН12, а также анионы нидо-7,8- и 7,9-дикарбаундекаборатов, нидо-7,8-С2В9Н12-и нидо-7,8-С2В9Н12-. Установлено, что 1,3,5,8-тетраме-тил-2,4-дивинил-6(7)-[2’-(клозо-монокарборан-1-ил)ме-токсикарбонилэтил-7(6)-(2-карбоксиэтил)порфиринато железо проявляет выраженный эффект при ФДТ экспериментальной саркомы.
Таким образом, разработаны стратегии синтеза различных борированных производных синтетических и природных порфиринов, отобраны активные соединения, изучен механизм их противоопухолевого действия и показана возможность их предклиническо-го применения.
Работа выполнена при поддержке грантов РФФИ 03-03-20007 совместно с Wissenschaftlich-Technisches Abkommen mit Russland 2004-2005 (No. I.11/04), Österreichischer Austauschdienst, Австрия.
