CC BY
36
УДК 636. 2 . 053. 087: 612. 3
ФОРМИРОВАНИЕ КИШЕЧНОГО МИКРОБИОЦЕНОЗА, ОБМЕН ВЕЩЕСТВ И ИНТЕНСИВНОСТЬ РОСТА ТЕЛЯТ ПРИ СКАРМЛИВАНИИ КОРМОВОЙ ДОБАВКИ «КРИПТОЛАЙФ»
Е. А. ДОЛЖЕНКОВА УО «Витебская ордена «Знак Почета» государственная академия ветеринарной медицины», г. Витебск, Республика Беларусь, 210026
(Поступила в редакцию 31.01.2015)
Введение. Современные мясные породы животных и кроссы птицы отселекционированы на максимальную продуктивность, что предполагает функционирование их организма на пределе физиологических возможностей и требует строгого соблюдения технологии их содержания и кормления. Однако высокая концентрация поголовья на ограниченных территориях (сопровождающаяся постоянной циркуляцией высоковирулентных патогенов), несбалансированные и недоброкачественные корма (часто обсемененные патогенной и условно-патогенной микрофлорой и содержащие микробные токсины, продукты окисления жиров, ксенобиотики и пр.), технологические стрессы являются причиной заболеваемости животных [1].
Наиболее распространенными в условиях интенсивного ведения животноводства являются заболевания, вызванные снижением резистентности молодняка животных и птицы (вследствие ослабления иммунной системы) и нарушением микробиоценоза желудочно-кишечного тракта. В последнем случае происходит изменение качественного и количественного состава микрофлоры, которая участвует в регуляции роста и развития организма, усвоении питательных веществ, выработке антибиотических веществ, поддержании кислотности среды в различных отделах кишечника, а также влияет на эффективность пищеварения, резистентность к инфекциям и др.
До недавнего времени для борьбы с кишечными расстройствами использовали преимущественно антибиотические средства. Антибиотики эффективно подавляли развитие заболеваний, однако при частом и бессистемном применении оказывали серьезные побочные эффекты. Так, у патогенных микроорганизмов вырабатывалась устойчивость к антибиотикам, что периодически требовало применения новых, более мощных препаратов. У животных из-за расстройства под действием
51
антибиотиков нормальной микрофлоры кишечника возникала диарея как вторичный, фоновый синдром, сопутствующий развитию основного заболевания и утяжеляющий его течение. Следовательно, задачей кормопроизводства является создание добавок, которые быстро и эффективно усваиваются, восполняя в организме животных и птицы недостаток энергетических, пластических, биологически активных веществ, регулируют протекание физиологических функций и биохимических реакций и оказывают лечебно-профилактическое действие [2].
Кормовые добавки лечебно-профилактического действия особенно востребованы в связи со значительным снижением (в странах с высокими стандартами содержания, кормления и гигиены животных) или полным запретом (в странах ЕС законодательно установленным с 2006 г.) использования антибиотиков при выращивании скота и птицы. В качестве альтернативы в кормопроизводстве все более широкое использование находят пробиотики и, в последние годы, пребиотики [3]. О масштабах их производства и использования можно судить на основании того, что в 2014 г. мировой рынок пробиотиков вырос до 32,6 млрд. доларов США, причем доля Европы и Азии составила 42 и 30 % соответственно. Среднегодовой темп роста пробиотиков в период 2009-2014 гг. предположительно достиг 12,6 %. Для сравнения: в 2011 г. мировой рынок препаратов про- и пребиотического действия, а также производных с их использованием продуктов питания и кормов, едва достигал 1,1 млрд. доларов США.
Анализ источников. Значительные усилия ученых и компаний, занимающихся производством пищевых и кормовых добавок пробиоти-ческого действия, сосредоточены на повышении эффективности выявленных штаммов, в том числе и за счет придания им новых свойств. Основу кормовых добавок пробиотического действия традиционно составляют бактерии рр. Lactobacillus, Lactococcus, Bifidobacterium, Streptococcus, Enterococcus, Bacillus [4], реже - консорциумы бактерий рр. Lactobacillus и Rhuminococcus [5], рр. Lactobacillus, Rhuminococcus и Bacillus [6], бактерий р. Lactobacillus и дрожжей р. Saccharomyces [78], бактерий рр. Lactobacillus, Lactococcus, Streptococcus, Leuconostoc и дрожжевых грибов рр. Saccharomyces, Torulopsis, Torulaspora, Candida, Kluyveromyces [9].
Механизм действия пробиотиков обеспечивается образованием органических кислот, антибиотикоподобных веществ, конкуренцией за места адгезии и питательные субстраты, стимуляцией иммунной системы и другими факторами.
Примером пробиотиков на основе спорообразующих, бифидо- и молочнокислых бактерий, содержащих монокультуры или консорциумы пробионтов, являются созданные в Институте микробиологии НАН Беларуси препараты Бацинил-К (Bacillus subtilis), Энатин (B. pumilus), ДКМ (Lactobacillus acidophilus), Билавет и Билавет-С (консорциум бактерий Bifidobacterium adolescentis, B. adolescentis БИМ и Lactobacillus plantarum) [10].
На основе внеклеточных метаболитов бифидо- и молочнокислых бактерий, представленных витаминами, аминокислотами, ферментами, иммуномодуляторами, бактериоцинами, органическими кислотами и другими биологически активными веществами, а также компонентов их клеточных стенок в Институте разрабатываются также пробиотики метаболитного типа [11].
Использование пробиотиков, как правило, в той или иной мере улучшает процессы пищеварения и усвоения питательных веществ, стимулирует неспецифический иммунитет животных и птиц, повышает аппетит, увеличивает привесы, активизирует защитные функции их организма, снижает заболеваемость и сокращает сроки выздоровления [3].
Антагонистическая активность и возможный пробиотический потенциал обнаружен также у различных штаммов дрожжей Cryptococ-cus albidus, Cryptococcus laurentii, Rhodotorula glutinis, Rhodosporium toruloidis, Saccharomyces cerevisiae [12]. Однако препараты пробиоти-ческого действия, содержащие указанные дрожжевые грибы, в качестве самостоятельного и единственного компонента - пробионта - пока не производятся.
Пребиотики представляют собой сахариды, в том числе полисахариды и галактоолигосахариды, различной степени полимеризации, которые практически не разрушаются в верхних отделах желудочно-кишечного тракта, в неизменном виде поступают в толстую кишку, где и ферментируются присутствующей там микрофлорой, преимущественно бифидо- и лактобактериями, реализуя свое пребиотическое действие. Галактоолигосахариды различного химического строения получают ферментативным синтезом с использованием клеток микроорганизмов-продуцентов р-галактозидаз или очищенного ферментного белка, преимущественно иммобилизованного на различных носителях [13]. Среди дрожжей свойством продуцировать р-галактозидазу, катализирующую синтез галактоолигосахаридов in vitro, обладают Bullera singularis (синоним Sporobolomyces singularis), Candida pseudotropicalis, Kluyvermyces fragilis, K. lactis, K. bulgaricus, K. marxianus, Rhodotorula
53
minuta, Saccharomyces fragilis, Sacch. anamensis, Sacch. lactis, Sirobasid-ium magnum, Sterigmatomyces elviae, Saccharopolyspora rectivirgula, Cryptococcus laurentii и др. [13]. Однако невысокий уровень продукции ими ß-галактозидазы исключает возможность использования их для синтеза галактоолигосахаридов in vivo и обусловливает необходимость проведения процесса in vitro с участием частично очищенного ферментного белка. Выделение же фермента, имеющего, как правило, внутриклеточную локализацию, и его очистка являются длительными, мате-риало- и энергозатратными технологическими операциями, существенно снижающими рентабельность получения галактоолигосахаридов.
Описаны штаммы дрожжей Cryptococcus laurentii IFO 0372, Rhodotorula lactosa IFO 1423, Pichia polymorpha IFO 1166, Sporobolo-myces singularis ATCC 24193, Kluyveromyces lactis IFO 0433, Debary-omyces cantatrellii IFO 1189, Candida curvata IFO 0732, Torulopsis candida IFO 0380, Trichosporon pullulans IFO 0114, Bullera alba IFO 1192, Brettanomyces anomalus IFO 0642, Lipomyces lipofer IFO 0673, Lipomyces NKD-14 (FERM P-8948), клетки которых проявляют ß-галактозидазную активностью и in vitro осуществляют активный синтез галактоолигоса-харидов [14]. Для получения с их использованием галактоолигосаха-ридов требуется отделение клеток от культуральной жидкости и последующая лиофильная сушка получаемого продукта. В случае использования иммобилизованных клеток дрожжей процесс дополняется стадией их включения в структуру полиакриламида, являющегося канцерогеном.
Известны также представители рода Cryptococcus - продуценты ß-галактозидазы, которая in vivo катализирует реакцию трансгликози-лирования лактозы с образованием смеси галактоолигосахаридов различной степени полимеризации или с преобладанием в ней одного из олигомеров (преимущественно O-ß-D-галактопиранозил-(1^4)-O-ß-D-галактопиранозил-(1^4)-Э-глюкопиранозы) при условии совместного культивирования штамма-продуцента и одного из видов дрожжей pp. Saccharomyces, Schizosaccharomyces, Kluyveromyces, Candida, Lod-deromyces или Hanseniaspora. В этом случае для получения галакто-олигосахаридов возникает необходимость их достаточно длительного, а при совместном выращивании нескольких микробных культур практически трудно контролируемого процесса культивирования в питательных средах сложного состава.
В патентной и научно-технической литературе нами не обнаружены представители рода Cryptococcus, продуцирующие одновременно
54
полисахариды и галактоолигосахариды, за исключением штамма Cryp-tococcus flavescens БИМ Y-228 Д [14].
В последние годы в большинстве животноводческих хозяйств западных стран нормой становится использование кормов, включающих живые клетки дрожжей в основном рода Torula и различных штаммов Saccharomyces cerevisiae, а также их комбинаций с про- и/или пребио-тиками. Сегодня, по сообщению Американской Ассоциации по Контролю Питания (AAFCO), зарегистрировано 10 видов кормовых добавок на основе дрожжей, применяемых в рационах животных. Сообщается о стимуляции дрожжами Saccharomyces cerevisiae роста целлюло-золитических бактерий, чувствительных к кислотности среды предже-лудков жвачных животных, и о возможности их использования для профилактики ацидозов рубца и профилактики расстройств желудочно-кишечного тракта.
В Институте микробиологии НАН Беларуси в сотрудничестве с Витебской государственной ордена «Знак Почета» академией ветеринарной медицины на основе аспорогенных капсулированных дрожжей Cryptococcus flavescens БИМ Y-228 Д, растущих в средах с молоком или отходами его переработки и in vivo продуцирующих олиго- и полисахариды [14], разработана жидкая биологически активная кормовая добавка КриптоЛайф.
Цель работы - изучить влияние кормовой добавки на основе штамма дрожжей Cryptococcus flavescens БИМ Y-228 Д, продуцирующего олиго- и полисахариды на показатели выращивания телят и формирования у них кишечного микробиоценоза.
Материал и методика исследований. Объектом исследования были телята месячного возраста, а предметом - кормовая добавка «КриптоЛайф» со штаммом дрожжей C. flavescens БИМ Y-228-Д. При оценке влияния кормовой добавки испытанию было подвергнуто 20 телят белорусской черно-пестрой породы, разделенных на 2 группы: опытную и контрольную по 10 голов в каждой. Телят обеих групп кормили в соответствии со схемой опыта (табл. 1).
Т а б л и ц а 1. Схема опыта
Группы Количество животных в группе Продолжительность опыта, дн. Особенности кормления
Контрольная 10 35 основной рацион*
Опытная 10 35 основной рацон*+ добавка «Криптолайф»
Основной рацион* - сено злаковых многолетних трав, молоко цельное, комбикорм КР-1.
Животные в подопытные группы были отобраны по принципу пар-аналогов. Средняя живая масса телят составляла 51 кг, возраст 1 месяц. Опыт продолжался 35 дней в ОАО «Возрождение» Витебского района. Телята содержались в индивидуальных домиках.
Различия в кормлении животных опытной и контрольной групп заключались в том, что опытной группе в дополнение к основному рациону скармливалась исследуемая добавка в количестве 3 мл с молоком, а контрольной группе - только основной рацион.
Химический состав кормов определяли на кафедре кормления сельскохозяйственных животных им. проф. В. Ф. Лемеша, биохимические показатели крови - в лаборатории НИИ ПВМиБ УО ВГАВМ. Кровь отбирали от пяти телят из каждой группы. В крови определяли уровень общего белка, альбуминов, глобулинов, мочевины, триглице-ридов, креатинина, кальция, неорганического фосфора, железа, исследовали лизоцимную и бактерицидную активность сыворотки крови. Анализы проводили в начале и конце опыта. Учет живой массы проводили путем индивидуального взвешивания животных.
Для бактериологического исследования содержимого кишечника его стерильно отбирали в стерильную посуду. В бактериологическом боксе производили последовательные десятикратные разведения фекалий (масса навески для приготовления исходного разведения - 1 г) на стерильном физиологическом растворе с последующим высевом 0,1 см3 разведений на соответствующие агаризованные питательные среды для выделения культур микроорганизмов: для селективного выделения бифидобактерий использовали бифидобактериум агар, лакто-бактерий - среду МРС агаризованную, для выделения кишечной палочки и других бактерий семейства Enteшbacteriaceae - агар Эндо, для выделения культур микромицет использовали агар Сабуро.
Результат вычисления выражали числом от 1,1 до 9,9 х 10п колони-еобразующих единиц (КОЕ) в 1 г (см3) содержимого кишечника.
Результаты исследований и их обсуждение. Рационы кормления подопытных животных по фактически съеденным кормам представлены в табл. 2.
В связи с тем, что рационы подопытных телят обеих групп были фактически одинаковыми, поступление энергии, сырого протеина, углеводов и жиров оказалось примерно равным.
56
Т а б л и ц а 2. Состав рационов подопытных животных
Наименование корма Контрольная группа Опытная группа
кол-во корма, кг структура рациона, % кол-во корма, кг структура рациона, %
Сено злак. многол. трав 0,2 3 0,2 3
Молоко цельное 6,0 62 6,0 61
Комбикорм КР-1 0,8 35 0,85 36
Концентрация энергии в 1 кг сухого вещества рационов составила 1,6 ЭКЕ, уровень сырого протеина 30,6 %, сырой клетчатки 4,6 %, крахмала + сахара 25 %, отношение кальция к фосфору находилось в пределах 1,1:1.
Использование добавки «КриптоЛайф» в определенной степени повлияло на формирование у телят кишечной микрофлоры. По результатам исследований выяснено, что у телят (до начала опыта) обеих групп в кишечном бактериоценозе преобладали бифидобактерии (1,5х1109; 3,5 хШ10 КОЕ/г), количество лактобактерий в среднем было на порядок ниже и колебалось у разных телят в пределах 4,5х107 -1,2х 1109 КОЕ/г. В достаточно высоких количествах выделены факультативные представители кишечного бактериоценоза (кишечные палочки) - 3,0х1107 - 4,5х1108 КОЕ/г. Количество выделенных плесневых грибов (транзиторная микрофлора) также несколько превышало показатели в норме и составляло 1,0х1104 КОЕ/г.
После 20-дневного применения телятам опытной группы испытуемой добавки их кишечный бактериоценоз претерпел изменения в сторону увеличения количества облигатной микрофлоры (на 2 порядка -до 1011, 1012 КОЕ/г) и некоторого уменьшения факультативной (на 1 порядок) таким образом, что соотношение между ними стало оптимальным. Количество выделенных транзиторных микроорганизмов не превышало показатели здоровых телят (до 103 КОЕ/г). В то же время у животных контрольной группы количественные показатели кишечного бактериоценоза достоверно не изменились: по-прежнему высоким оставалось содержание эшерихий (способных при достижении количества выше допустимого уровня проявлять атипичные свойства и вызывать эндогенную инфекцию) и микромицетов.
В конце опыта в кишечном бактериоценозе телят опытной группы по-прежнему преобладали грамположительные неспорообразующие представители: количество бифидобактерий - на уровне 1012, лактоба-
ктерий - 1011 КОЕ/г. Содержание эшерихий - на несколько порядков ниже. Содержание транзиторных представителей в содержимом кишечника этих животных не превышало допустимого для здоровых телят уровня. В то же время у животных контрольной группы произошло некоторое увеличение количества эшерихий в кишечном содержимом -достигло уровня лактобактерий, что является пограничным дисбакте-риозу состоянием.
Т а б л и ц а 3. Содержание элементов питания в рационах
Элемент питания Содержание
контрольная группа опытная группа
Кормовые единицы 2,9 2,95
ЭКЕ 2,6 2,63
Обменная энергия, МДж 26,0 26,5
Сухое вещество, кг 1,6 1,64
Сырой протеин, г 492 502,0
Переваримый протеин, г 441,0 449,0
Сырой жир, г 308,0 311,0
Сырая клетчатка, г 75,0 77,0
Крахмал, г 180,0 184,0
Сахар, г 255,0 259,0
Кальций, г 14,5 15,0
Фосфор, г 14,1 14,2
Магний, г 3,4 3,45
Сера, г 7,8 7,85
Калий, г 13,0 13,2
Железо, мг 224,0 226,0
Медь, мг 19,3 19,6
Цинк, мг 120,0 122,0
Марганец, мг 78,0 80,0
Кобальт, мг 1,5 1,53
Йод, мг 2,4 2,45
Селен, мг 2,0 2,05
Каротин, мг 62,0 64,0
Витамин Д, тыс. МЕ 0,83 0,85
Витамин Е, мг 35,0 37,0
Согласно результатам микробиологических исследований, увеличивается содержание в кишечнике животных бифидо- и лактобактерий при снижении количества бактерий группы кишечной палочки и микро-мицетов, что приводит к оптимизации соотношения между облигатными и факультативными представителями кишечного микробиоценоза. В результате формируется полноценный, здоровый молодняк животных.
Исследуемая кормовая добавка не оказывает отрицательного влияния на состояние обмена веществ животных. Об этом свидетельствуют исследования крови, выполненные в начале и в конце опыта (табл. 4).
Т а б л и ц а 4. Биохимические показатели крови телят
Начало опыта Конец опыта
Показатели контрольная опытная контрольная опытная
группа группа группа группа
Общий белок, г/л 33,19±7,33 32,77±6,78 50,84±2,45 56,99±2,18
Альбумины, г/л 26,12±4,58 29,15±0,70 39,28±1,74 39,48±1,77
Глобулины, г/л 7,07±2,75 9,08±0,87 11,36±0,69 17,71±0,44
Мочевина, ммоль/л 4,26±0,71 2,94±0,55 4,45±0,60 5,13±0,46
Креатинин, мкмоль/л 138,17±14,06 129,36±19,36 134,82±11,57 142,69±12,92
Триглицериды, ммоль/л 0,29±0,06 0,30±0,03 0,36±0,06 0,47±0,07
Кальций, моль/л 2,11±0,17 2,23±0,10 2,53±0,10 2,84±0,12
Фосфор, ммоль/л 1,64±0,13 2,06±0,18 1,85±0,11 2,13±0,31
Железо, мкмоль/л 9,68±3,09 10,82±2,83 15,81±2,50 18,68±1,90
БАСК 28,77±4,51 27,97±4,02 52,85±8,42 71,69±35,37
ЛАСК 2,30±0,70 3,22±0,78 1,62±0,30 2,40±0,83
В происследованных образцах крови на начало опыта у телят опытной и контрольной групп выявлено низкое содержание общего белка, альбуминов, глобулинов, мочевины, кальция, фосфора, железа, снижена бактерицидная и лизоцимная активность сыворотки крови. Низкое содержание общего белка указывает на недостаточный синтез белковых компонентов печеночной тканью при нарушении всасывания продуктов распада белка через слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта (энтериты). Недостаточный уровень глобулинов является следствием низкой активности иммунной системы и способствует снижению естественной резистентности, что подтверждается низкими значениями бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови. Дефицит минеральных компонентов в крови (кальция и фосфора) может быть обусловлен недостаточной обеспеченностью организма витамином Д. Недостаточность железа в сыворотке крови
может быть обусловлена снижением всасывания его из-за воспалительных процессов верхнего отдела кишечника. Дефицит железа ведет к развитию анемии, которая сопровождается снижением насыщения организма кислородом и накоплением недоокисленных промежуточных продуктов обмена веществ, кроме того низкая концентрация железа способствует развитию иммунной недостаточности.
При иследовании сыворотки крови в конце опыта выявлено увеличение содержания общего белка, альбуминов и глобулинов в обеих группах, при этом в опытной группе уровень общего белка выше, чем в контрольной на 12,1 %, глобулинов - на 55,89 %. Концентрация мочевины в крови опытных телят увеличилась по сравнению с первоначальным исследованием, когда отмечался ее дефицит. Характер данных изменений свидетельствует об усилении белоксинтетической функции печени на фоне приема исследуемой добавки. В ходе эксперимента отмечалось значительное увеличение уровня минеральных компонентов крови: кальция, фосфора и железа. Содержание кальция в опытной группе по сравнению с контрольной было выше на 12,25 %, фосфора - на 15,13 %, железа - на 18,15 %. Данный факт указывает на улучшение усвоения минеральных веществ организмом телят. Показатели естественной резистентности организма телят также претерпевали некоторые изменения. Так, бактерицидная активность сыворотки крови в опытной группе по сравнению с первоначальным показателем возросла на 37,75 %, оставаясь высокой и по сравнению с контрольной группой на 35,64 %. Лизоцимная активность сыворотки крови в ходе исследования снижалась в обеих группах. Однако в крови опытных телят ЛАСК была значительно выше.
Формирование кишечного микробиоценоза у телят опытной группы положительно сказалось на обменных процессах в их организме, что привело к увеличению интенсивности роста (табл. 5).
Т а б л и ц а 5. Изменение живой массы телят в ходе опыта, кг
Контрольная группа Опытная группа
начальная живая масса живая масса в конце опыта начальная живая масса живая масса в конце опыта
51,5±0,51 78,6±0,74 50,7±0,55 79,9±0,53
Контрольная группа
Среднесуточный прирост за опыт 27,1/35=0,774 кг Опытная группа
Среднесуточный прирост за опыт 29,2/35=0,834 кг
В результате скармливания телятам исследуемой кормовой добавки «КриптоЛайф» среднесуточный прирост в опытной группе увеличился по сравнению с контрольной на 0,06 кг, или на 7,7 %, при этом расход кормов на один колограмм прироста живой массы снизился с 3,49 ЭКЕ в контрольной группе до 3,25 ЭКЕ в опытной.
Заключение. Применение исследуемой добавки «КриптоЛайф» телятам в месячном возрасте на протяжении 35 дней в количестве 3 мл на голову в сутки оказало положительное влияние на формирование у них кишечного микробиоценоза, что активизировало обменные процессы в организме животных. Это привело к увеличению среднесуточных приростов телят на 7,7 % и снижению рахода кормов на 6,9 % по сравнению с контролем, а в крови опытных телят отмечалось усиление белоксинтетической функции печени, что проявилось в увеличении содержания общего белка, альбуминов и глобулинов, восстановлении нормальной концентрации мочевины. Применение препарата способствует улучшению усвоения минеральных веществ организмом телят, усилению бактерицидной активности сыворотки крови.
ЛИТЕРАТУРА
1. Б о г а т ы р е в, И. Н. Современное комбикормовое производство и перспективы его развития / И. Н. Богатырев. -М.: МПА, 2003. - С. 84-88.
2. Г о л о в н е в а, Н. А. Микробные биотехнологии: Фундаментальные и прикладные аспекты / Н. А. Головнева, В. А. Щетко, Н. Е. Рябая. - Минск, Беларуская навука,
2012. - Т. 4. - С. 119-132.
3. Пат. 2428055 (C2) Россия; заявка № 20080142749; заявл. 27.03.07; опубл. 10. 09.11.
4. Пат. 2190332 (C2) Россия; заявка № 20000108252; заявл. 03.04.00; опубл. 10.10.02.
5. Пат. 2266747 (d) Россия; заявка № 20040108554; заявл. 22.03.04; опубл. 27.12.05.
6. Пат. 2436408 (d) Россия; заявка № 20100115711; заявл. 20. 04.10; опубл. 20.12.11.
7. Пат. 2345553 (C1) Россия; заявка № 2007126664/13; заявл. 12.07.07; опубл. 10.02.09.
8. Пат. 2350101 (C2) Россия; заявка № 20060145493; заявл. 20.12.06; опубл. 27.03.09.
9. Пат. 102210343 (A) Китай; заявка № 20090126450; заявл. 08.10.07; опубл. 20.01.11.
10. Пат. 2009796 (B) Япония; заявка № 19840108547; заявл. 30.05.84; опубл. 05.03.90.
11. С а п у н о в , Л. И., К о с т е н е в и ч, А .А., Л о б а н о к, А. Г. // Заявка № а 20121015 от 09.06.2012 г. на выдачу патента РБ.
12. С в е р ч к о в а, Н. В. Микробные биотехнологии: Фундаментальные и прикладные аспекты / Н. В. Сверчкова, Н. С. Заславская, Г. В. Жук. - Минск: Беларуская навука,
2013. - Т. 5. -С. 323-331.
13. Т а р а к а н о в Б. В. Прошлое, настоящее и будущее зоотехнической науки / Б. В. Тараканов, Т. А. Николичева, В. В. Алешин. - Труды ВИЖа. - 2004. - Вып. 62, Т. 63. -С. 69-73.
14. P a r k, A.-R., Oh D.-K. // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2010. - Vol. 85. - P. 1279-1286.
61
