CC BY
121
Литература
1. Зиганшина, Л.Е. Сравнительное изучение эффективности димефосфона и ксидофона при стероидном остеопорозе у крыс / Л.Е. Зиганшина, З.А. Бурнашева, И.Х. Валеева // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2002. - № 6. - С.55-56.
2. Королюк, М.А. Метод определения активности каталазы / М.А. Королюк // Лаб. дело. - 1988. - №1. -С.16-19.
3. Окислительный стресс: Патологические состояния и заболевания / Е.Б. Меньщикова, Н.К. Зенков, В.З. Ланкин [и др.]. - Новосибирск: АРТА, 2008. - 284 с.
4. Определение резистентности к окислению липопротеинов низкой плотности сыворотки крови: метод. рекомендации / Ю.И. Рагина, М.И. Душкин. - Новосибирск, 1998. - 11 с.
5. Павлова, В.Н. Хрящ / В.Н. Павлова. - М.: Медицина, 1988. - 320 с.
6. Стальная, И.Д. Современные методы в биохимии / И.Д. Стальная. - М.: Медицина, 1977. - 391 с.
7. Gulko, P.S. Glucocorticoid-induced osteoporosis: pathogenesis, prevention anf treatment / P.S. Gulko,
A.L. Mulloy // Clin. Exp. Rheumatol. - 1996. - Р. 199-206.
8. Laihia, J.K. Lucigenin and linoleate enhanced chemiluminescent assay for superoxide dismutase activity / J.K. Laihia, C.T. Jansen, M. Ahotupa// Free Radic. Biol. Med. - 1993. - Vol. 14.- P. 457-461.
УДК 619:618.24:636.2 Н.В. Гребенькова
ФОРМИРОВАНИЕ И РАЗВИТИЕ ОРГАНОВ РАЗМНОЖЕНИЯ В ПРЕНАТАЛЬНОМ ОНТОГЕНЕЗЕ
С помощью гистологических и гистохимических методов исследования изучено формирование и развитие органов размножения коров в период от 20 до 90 суток пренатального онтогенеза. Во время стадии закладки органов раннего этапа развития (20-34 сут.) происходит формирование гонад. Во время среднего этапа и в начале позднего этапа развития формируются основные структуры яичника, завершается процесс дивергентной дифференцировки пола (34-45 сут.), происходит размножение половых клеток в овариальных железах, образование яйцепроводов, матки и влагалища (45-90 сут.).
Ключевые слова: корова, пренатальный онтогенез, репродуктивные органы, матка.
N.V. Grebenkova REPRODUCTIVE ORGAN FORMATION AND DEVELOPMENT IN THE PRENATAL ONTOGENESIS
Formation and development of cow reproductive organs in period from 20 to 90 days of prenatal ontogenesis by means of histological and histochemical techniques are studied. Gonads formation occures in the early period of organ formation( 20 to 34 days). At the middle stage and at the beginning of the later stage of development, basic ovarian structures form and the process of sex divergent difference completes (34-45 days); genital cells generation in ovarian glands and fallopian tubes, uterine and vagina formation take place.
Key words: cows, prenatal ontogenesis, reproductive organs, uterine.
Введение. Нарушения формирования и развития органов размножения в период их закладки приводят к врожденному бесплодию животных. Поэтому интерес к изучению репродуктивных органов в пренатальном онтогенезе имеет большое практическое значение [4-6]. Формирование, рост и развитие репродуктивных органов необходимо исследовать с ранних сроков онтогенеза, начиная с появления зачатков гонад, так как уже в этот период могут формироваться аномалии развития, такие, как пороки генетического пола (наследственная гипоплазия гонад, химеризм по половым хромосомам), пороки гонадного пола (гермафродитизм, фримартинизм). Развитие половой системы является сложным процессом, включающим большое
количество различных механизмов, реализующихся на протяжении нескольких стадий развития [1; 3]. Выяснение этих механизмов позволит ясно определить причины врожденной патологии репродуктивной системы.
Поэтому целью наших исследований стало изучение формирования и развития органов размножения коров в среднем этапе (34-60 суток) и в начале раннеплодной стадии позднего этапа (60-90 суток) пренатального онтогенеза. В задачи исследований входило: изучение формирования гонад и трубчатых гениталий коров на ранних стадиях эмбриогенеза; определение основных закономерностей развития органов размножения на ранних сроках пренатального онтогенеза с помощью гистологических и гистохимических методов.
Материалы и методы исследований. На мясокомбинате проводили тщательное послеубойное исследование туш и органов коров. Плоды крупного рогатого скота извлекали из маток коров. Всего было исследовано 35 плодов следующих возрастов: 9 плодов - 20-34-е сутки (стадия закладки органов раннего этапа развития, фаза закладки временных органов), 8 плодов - 34-45-е сутки (раннепредплодная стадия среднего этапа развития), 8 плодов - 45-60-е сутки (позднепредплодная стадия среднего этапа развития), 10 плодов - 60-90-е сутки (начало раннеплодной стадии позднего этапа развития). Возраст плодов определяли с учетом данных искусственного осеменения, а также по длине и массе тела. У более крупных плодов определяли массу матки, яйцепроводов, яичников. Материал, полученный с дорсо-каудальной части туловища 20-60-суточных зародышей, а также матки, яйцепроводы и яичники 60-90-суточных плодов, фиксировали в жидкости Карнуа или 10%-м растворе нейтрального формалина, обезвоживали и заливали в парафин. Полученные срезы после депарафинации окрашивали гематоксилином Майера и эозином [1]. Гликоген исследовали по А.Л. Шабадашу (1949), дезоксирибонуклеопротеиды и рибонуклеопротеиды по L. Einarson (1951), J. Brachet (1953), по R.U. Felgen, H. Rossenbec (1924), щелочную фосфатазу по Берстону в модификации Ллойда и др. (1982).
Результаты исследований и их обсуждение. В конце раннего этапа развития (от 20 до 34 суток пренатального онтогенеза) у предплодов крупного рогатого скота появляются зачатки гонад. Вначале отмечается пролиферация целомического эпителия на вентромедиальной поверхности мезонефроса (рис. 1). Ядра эпителиоцитов овальные или округлые, располагаются апикально или базально, содержат 2-3 ядрышка. Хроматин мелкодисперсный.
В дальнейшем в результате деления мезенхимных и эпителиальных клеток зачатки гонад выявляются в виде небольших утолщений на вентромедиальной поверхности мезонефроса и покрыты однослойным многорядным эпителием. От подлежащей ткани эпителий отделен хорошо сформированной базальной мембраной, которая дает положительную реакцию на гликопротеиды. На апикальных поверхностях клеток эпителия видны секреторные гранулы, содержащие белково-углеводные компоненты и являющиеся продуктом апокриновой секреции.
Рис. 1. Вентромедиальная поверхность мезонефроса 30-суточного эбриона. Пролиферация целомического эпителия. Окраска гематоксилин и эозин
Под базальной мембраной гонад располагаются небольшие отростчатые клетки с более темными, чем у эпителиоцитов, ядрами и светлой цитоплазмой. Среди соматических клеток нередко затруднительно обнаружить половые элементы. Последние отличаются от мезенхимоцитов большими размерами, округлой или овальной формой, крупным пузырьковидным ядром с шаровидным ядрышком и сетевидным хроматином. Ядра оогоний обычно расположены эксцентрично, цитоплазма оптически пустая, а гистохимически в ней выявляется высокое содержание гликогена, рибонуклеопротеидов и щелочной фосфотазы.
Таким образом, в недифферецированной гонаде зародышей коров наблюдается целомический эпителий, мезенхимная основа, формирующиеся синусоидные капилляры и единичные оогонии. Эпителиоциты и мезенхимоциты активно митотически делятся, потом гонады быстро растут и становятся самостоятельными органами.
У 34-45-суточных предплодов первичную почку составляют уже регрессирующие канальцы, мезонеф-ротические и парамезонефротические протоки. Мезонефротический проток начинает дегенерировать на ранних стадиях развития плода.
По мере роста гонады происходит выпячивание валика. Постепенно появляющиеся и углубляющиеся борозды отделяют гонаду с латеральной стороны от первичной почки, а с дорсомедиальной стороны - от зачатка надпочечника. Появляется брыжейка гонады, которая остается связанной только со средней частью первичной почки. В середине ножки обнаруживается большое количество сосудов, формирующих сосудистую сеть. Клетки ножки мезонефроса мелкие, ядра различной формы, окрашиваются более интенсивно основными красителями по сравнению с клетками гонады.
Таким образом, раннепредплодная стадия (34-45 суток) характеризуется формированием основных структур яичника (рис. 2). В гонаде 34-суточных предплодов начинается процесс дивергентной дифферен-цировки пола, который завершается к 45 суткам развития.
Рис. 2. Тотальный срез через каудальную часть тела 45-суточного эмбриона. Яичник отделен от мезонефроса. Окраска гематоксилин и эозин
В позднепредплодной стадии (45-60 суток) происходит активный процесс размножения половых клеток в овариальных железах. В раннеплодную стадию (60-90 суток) яичник увеличивается в объеме. В конце второго месяца внутриутробного развития появляются парамезонефротические (мюллеровы) протоки, из которых у эмбрионов женского пола образуются яйцепроводы, матка и влагалище. Они формируются рядом с протоками первичной почки в результате желобообразного впячивания целомического эпителия в мезенхимную основу латеральной поверхности краниального полюса мезонефроса параллельно протокам мезонефросов. Желобок (будущая воронка яйцепровода) каудальнее переходит в эпителиальный клеточный тяж, который формируется на вентромедиальной поверхности мезонефротического протока за счет пролиферации клеток целомического эпителия и закрытия желобков.
Несколько позднее начинает формироваться воронка мюллерова протока. Каудальнее воронки, в клеточном тяже парамезонефротического протока, появляется просвет. Последний на уровне краниального по-
люса гонады не обнаруживается, а продолжающаяся клеточная масса вскоре исчезает. Часть мюллерова протока от воронки до каудального конца мезонефроса остается узкой и образует яйцепровод. Эпителий яйцепровода на всем протяжении неоднозначный. Так, за воронкой эпителий однорядный цилиндрический, а на уровне середины яичника он остается многорядным.
После направляющей связки яичника мюллеров проток продолжается как рог матки. Эпителий рога остается многорядным. Стенка его представлена 2-4 рядами мезенхимных клеток. Сформированный ранее генитальный тяж растет краниально и каудальная часть парамезонефротических протоков заключается в стенку тяжа, формируя будущее тело матки. На этом уровне мюллеровы протоки еще разъединены толстым слоем мезенхимных клеток. При приближении генитального тяжа к шейке мочевого пузыря протоки сближаются и теперь имеют одну общую медиальную стенку. Это уровень образования шейки матки.
После окончания роста генитального тяжа в краниальном направлении можно определить границу между рогом и телом матки. Парамезонефротические протоки сливаются на уровне шейки и каудального участка тела матки. Теперь половую трубку можно разделить на яйцепровод, рог, тело и шейку матки. Усложняется строение стенки всех отделов половой трубки, но обособления оболочек еще не наблюдается.
К 90-м суткам позднего этапа развития в яйцепроводе не обнаруживаются складки слизистой, а эпителий рога, тела и шейки матки из многорядного преобразуется в однорядный цилиндрический. Ядра эпите-лиоцитов овальной формы, богаты хроматином, лежат на разных уровнях. Поверхность эпителия волнистая. Впервые на апикальной поверхности клеток эпителия обнаруживаются и отделяются в просвет в виде капель. Констатировали выраженную реакцию на щелочную фосфатазу эпителия эндометрия, особенно в апикальной части клеток. На этой стадии развития эпителий уже обладает выраженной способностью к секреции. Начинает образовываться мышечная оболочка. Формирование мышечной оболочки матки по отношению к мускулатуре соседних органов запаздывает. Отдельные мышечные клетки прослоены толстыми тяжами формирующейся соединительной ткани. Вначале это преимущественно циркулярно расположенные пучки. Циркулярный слой прогрессивно увеличивается, оставаясь слабовыраженным в области дна матки. Позднее появляется наружный слой, состоящий из продольных мышечных пучков.
Заключение. Было установлено, что у предплодов крупного рогатого скота в конце раннего этапа развития (20-34 суток) появляются зачатки гонад. У 34-45-суточных предплодов первичную почку составляют уже регрессирующие канальцы, мезонефротические и парамезонефротические протоки. Формируется сосудистая сеть и основные структуры яичника. В гонаде 34-суточных предплодов начинается процесс дивергентной дифференцировки пола, который завершается к 45-суткам развития. В 45-60-е сутки отмечается размножение половых клеток в овариальных железах. В 60-90-е сутки яичник увеличивается в объеме. В конце второго месяца внутриутробного развития появляются парамезонефротические (мюллеровы) протоки, из которых у эмбрионов женского пола образуются яйцепроводы, матка и влагалище. К 90 суткам начинает образовываться мышечная оболочка.
Полученные результаты исследований позволят уточнить этиопатогенез различных акушерско-гинекологических патологий, формирующихся на ранних стадиях пренатального онтогенеза, в том числе вызывающих бесплодие, и сформировать мероприятия по их диагностике, лечению и профилактике.
Литература
1. Дыбан, А.П. Раннее развитие млекопитающих / А.П. Дыбан. - Л., 1988. - 228 с.
2. Меркулов, Г.А. Курс патогистологической техники / Г.А. Меркулов. - Л., 1969. - 424 с.
3. Карлсон, Б. Основы эмбриологии по Пэттену / Б. Карлсон. - М., 1983. - Т. 2. - 390 с.
4. Никитин, А.И. Проблемы ранней дифференцировки гонад млекопитающих. Эмбриональный гистогенез и механизм регуляции / А.И. Никитин // Арх. анат., гистолог. и эмбриолог. - 1985. - № 8. - С. 5-17.
5. Сковородин, Е.Н. Развитие половых органов телок в пренатальном онтогенезе / Е.Н. Сковородин // Сельскохозяйственная биология. - 1997. - № 6. - С. 61-66.
6. Сковородин, Е.Н. Морфогенез гениталий самок крупного рогатого скота на предплодном этапе развития / Е.Н. Сковородин, И.В. Ирикина // Возрастная морфофизиология и профилактика болезней животных в сельскохозяйственных предприятиях различного типа: сб. науч. тр. - Иваново, 1994. - С. 32-37.
