CC BY
15
12. Miller, K. D. The detection and characterization of pigs with differing glycolytic potential levels within United States Swine populations / K. D. Miller // Ph.D. Thesis, University of Illinois, Urbana-Champaign. Illinois, 1998.
13. Effect of the RN genotype on growth and carcass traits in pigs / P. LeRoy [et al.] // 47th EAAP, Lillehammer, Norway. 1996.
14. Rendement Napole gene effects and a comparison of glycolytic potential and DNA ge-notyping for classification of Rendement Napole status in Hampshire-sired pigs / S. J. Moeller [et al.] // J. Anim. Sci. 2003. № 81. Р. 402-410.
15. Technological meat quality and the frequency of the RN-gene in purebred Swedish Hampshire and Yorkshire pigs / A. C. Enfalt [et al.] // 40th IcoMST, The Hague, Netherlands.
1994.
16. Sutton, D.S. The meat quality and processing characteristics of RN carrier and non-carrier pigs / D. S. Sutton // Ph. D. Thesis, University of Illinois, Urbana, IL. 1997.
17. Frequency of the Rendement Napole RN- allele in a population of American Hampshire pigs / K. D. Miller [et al.] // J. Anim. Sci. 2000. № 78. Р. 1811-1815.
18. Comparison of non-carrier and heterozygous and heterozygous carriers of the RN- allele for carcass composition, muscle distribution and technological meat quality in Hampshire-sired pigs / A. C. Enfalt [et al.] // Livestock Prod. Sci. 1997. № 47. Р. 221.
19. Growth performance, carcass composition, quality, and enhancement treatment of fresh pork identifed through deoxyribonucleic acid marker-assisted selection for the Rendement Napole gene / C.C. Carr [et al.] // J. An. Sci. 2006. №2 84. Р. 910-917.
20. Andersson, L. Identification and characterization of AMPK gamma3 mutations in the pig / L. Andersson // Biochem Soc Trans. 2003. Vol. 31. №2 1. Р. 232-235.
21. Методические рекомендации по применению ДНК-тестирования в животноводстве Беларуси / И. П. Шейко [и др.]. Жодино, 2006. 26 с.
22. Животовский, Л.А. Интеграция полигенных систем в популяциях / Л.А. Жи-вотовский. М., 1984.
23. Сохранение локальных пород / Н. А. Зиновьева [и др.] // Животноводство России. 2006. № 6. С. 46-47.
УДК 619:577.1:619:612.015:636.2
ФИЗИОЛОГО-БИОХИМИЧЕСКИЙ ПРОФИЛЬ В РЕПРОДУКТИВНЫХ ОРГАНАХ ТЕЛОК ПРИ ВЛИЯНИИ ГОРМОНАЛЬНО-ВИТАМИННИХ ПРЕПАРАТОВ
Л.Н. КОВАЛИВ Львовский национальный университет ветеринарной медицины и биотехнологий имени С.З.Гжицкого г. Львов, Украина, 79050
(Поступила в редакцию 25.01.2010)
Введение. Нарушение норм сбалансированного питания животных ведет к понижению регуляторных процессов в органах и тканях, уровня функционирования желез внутренней секреции, гипофункции яичников и матки, снижает воспроизводимую способность животных, увеличивает длительность сервис-периода с явлениями гипофункции воспроизводимых органов [2,7-11].
В биотехнологическом процессе при трансплантации эмбрионов животным предложены различные методы индукции полиовуляция, которые отличаются между собой схемой введения препаратов и природой вводимых гонадотропинов [6-11]. Однако не всегда можно получить надлежащий эффект, который зависит от эндокринного и био-
химического механизма реализации репродуктивной функции. Следовательно, существует непредусмотрительность и неизвестны причины неадекватной реакции животных на введение гонадотропных препаратов согласно существующих схем [1, 3-5].
Цель работы - физиолого-биохимически исследовать влияние по-лиовулюющих доз фоликотропина с другими биологически активными веществами и разработать пути коррекции обменных процессов в репродуктивной системе животных.
Материал и методика исследований. Нами проведено 2 опыта на коровах-донорах по проблеме индукции полиовуляции и вымыванию эмбрионов в хозяйствах Львовской области.
Первый опыт выполнен на двух группах клинически здоровых коров, черно-рябой породы 2-3 лактации. Вызывание эструса у подопытных животных проводили с помощью предыдущего внутримышечного введения простагландина Р2а -эстрофан.
У животных 1-й группы вызывали полиовуляцию на 10-й день полового цикла путем внутримышечного введения ФСГ по 4-дневной общей схеме.
У животных 2-й группы вызывали полиовуляцию по однодневной схеме путем внутримышечного введения гормонально-витаминного препарата (ГВП) на основе ФСГ. В состав ГВП входили гормоны, витамины А, Д, Е, В6 и фолиевая кислота.
После индукции полиовуляции, прихода в охоту и 2-разового осеменения на 7-й день эмбриогенеза коровы-доноры были забиты на мясокомбинате. При забое животных были взяты яичники и матки для визуальной оценки, получения маточного смыва и эмбрионов.
В сыворотке крови, взятой в течение эксперимента, и в отдельных тканях, взятых во время убоя животных, провели физиолого-биохимические исследования согласно общепринятым методам.
Второй опыт выполнен в том же направлении, разница лишь в том, что у коров 1-й группы вызывали полиовуляцию с помощью ГСЖК, а 2-й группы - ГСЖК в комплексе с ГВП.
Полученные результаты исследований были обработаны биометрически [6]. Результаты считали статистически достоверными при *Р<0,05, **Р<0,02, ***Р<0,01, ****Р<0,001.
Результаты исследований и их обсуждение. Анализ полученных результатов показал, что уровень исследуемых показателей зависел от физиологичного состояния животных и введения им гормонально-витаминного препарата. Установлено, что при одинаковом уровне общего белка в сыворотке крови, количество альбуминов увеличилось под воздействием ГВП (21,56±3,86% - 1-я группа и 31,82±2,20% - 2-я группа) и уменьшилось на 7-й день эмбриогенеза (33,32±0,94% - 1-я группа и 23,20+1,55% - 2-я группа). Возможно, ГВП стимулирует синтез альбуминов во время фоликулогенеза и эмбриогенеза. Подтверждением этого предположения является достоверное уменьшение содержания белков в яичниках и увеличения его в яйцеводах и желтом теле.
Уровень РНК существенно не изменялся. Содержание аминного азота увеличилось во время осеменения доноров и вымывания эмбрионов, соответственно, на 27,8% (Р<0,001) и 45,2% (Р<0,001) в яйцеводах и желтых телах.
Количество сульфгидрильных групп (SH-групп) в сыворотке крови доноров уменьшалось во время индукции полиовуляции, осеменения и вымывания эмбрионов и существенно не изменялось между группами животных. Хотя в тканях лимфоузлов и эндометрии (2-я опытная группа) отмечено увеличение их содержания на 7-й день эмбриогенеза (табл.1).
Таблица 1. Содержание белка, РНК, аминного азота и свободных 8Ы-групп в сыворотке крови и отдельных тканях коров-доноров во время индукции полиовуляции и получения эмбрионов, п=5
Ткани Группы животных
1-я | 2-я
Схемы введения
Классическая ФСГ 1-дневная ФСГ+ГВП
М ± т р* М ± т Р Р*
1 2 3 4 5 6
Растворимые белки, г %
Сыворотка крови: 1 7,23±0,248 7,26±0,373 >0,5
2 6,83±0,344 >0,2 6,85±0,267 >0,5 >0,5
3 7,17±0,085 >0,5 7,18±0,028 >0,5 >0,5
4 7,27±0,584 >0,5 7,47±0,217 >0,5 >0,5
Осеменение 7,61±0,403 >0,2 7,71±0,284 >0,5 >0,2
Вымывание 7,28±0,298 >0,5 7,51±0,228 >0,5 >0,2
Печень 17,61±0,271 19,26±0,765 >0,5
Лимфоузлы 11,68±0,444 12,46±0,718 >0,2
Эндометрий 2,50±0,273 2,69±0,251 >0,5
Яичники 5,35±0,187 4,17±0,236 <0,01
Яйцевод 2,23±0,083 2,75±0,196 <0,05
Желтые тела 4,47±0,431 5,25±0,127 <0,1
Маточный смыв 0,816±0,129 0,792±0,099 >0,5
В том числе альбумины, %
Сыворотка крови: 1 29,20±5,25 32,82±3,46 >0,5
2 30,60±2,53 >0,5 33,66±2,24 >0,2 >0,5
3 21,56±3,86 >0,2 31,82±2,2 <0,05 >0,5
4 29,68±1,08 >0,5 29,42±1,49 <0,2 >0,2
Осеменение 32,92±2,63 >0,5 32,48±3,5 >0,5 >0,5
Вымывание 33,32±0,94 >0,5 23,2±1,55 <0,001 <0,005
РНК мг %
Сыворотка крови: 1 2,44±0,43 3,36±0,53 >0,1
2 4,17±0,49 <0,05 3,56±0,31 >0,2 >0,5
3 2,38±0,55 >0,5 2,44±0,36 >0,5 >0,1
4 2,29±0,36 >0,5 3,36±0,46 >0,1 0
Осеменение 3,78±0,46 <0,1 4,45±0,5 >0,2 >0,1
Вымывание 3,71±0,47 <0,1 3,84±0,36 >0,5 >0,2
Печень 19,07±4,45 15,43±3,26 >0,5
Лимфоузлы 19,33±3,3 14,59±2,27 >0,2
Эндометрий 11,50±2,05 11,61±1,78 >0,5
Яичники 10,83±1,73 12,62±1,33 >0,2
Яйцевод 16,13±3,64 16,83±1,72 >0,5
Желтые тела 13,24±0,969 12,79±1,18 >0,5
Маточный смыв 9,71±2,02 7,77±1,53 >0,2
Окончание табл.1
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6
Аминний азот, мг %
Сыворотка крови: 1 4,01±0,96 4,62±0,28 >0,5
2 8,16±1,32 <0,05 6,29±0,62 >0,2 <0,01
3 9,65±0,54 <0,001 6,96±0,66 <0,05 <0,01
4 6,84±0,38 <0,05 6,24±0,4 >0,2 <0,001
Осеменение 4,76±0,46 >0,2 6,01±0,38 <0,1 <0,01
Вымывание 5±0,44 >0,2 7,26±0,8 <0,05 <0,01
Печень 18,91±1,14 21,04±1,52 >0,2
Лимфоузлы 13,8±1,31 15,48±0,329 >0,2
Эндометрий 7,22±0,15 7,77±0,321 >0,2
Яичники 4,55±0,36 4,9±0,315 >0,2
Яйцевод 5,67±0,44 6,27±0,596 >0,2
Желтые тела 3,59±0,152 4,49±0,328 <0,05
Маточный смыв 1,83±0,34 0,59±0,15 <0,01
Свободные сульфгидрильные группы, мкг/г
Сыворотка крови: 1 0,083±0,008 0,07±0,004
2 0,063±0,005 <0,1 0,057±0,002 >0,2 <0,02
3 0,054±0,004 <0,05 0,048±0,002 >0,2 <0,01
4 0,073±0,09 >0,2 0,062±0,004 >0,2 >0,1
Осеменение 0,065±0,005 >0,1 0,058±0,03 >0,2 <0,05
Вымывание 0,059±0,004 <0,05 0,052±0,004 >0,2 <0,01
Печень 3,58±0,557 3,79±0,159 >0,5
Лимфоузлы 0,19±0,009 0,311±0,023 <0,01
Эндометрий 0,702±0,053 0,883±0,08 <0,1
Яичники 1,42±0,092 1,21±0,052 >0,5
Яйцевод 1,52±0,333 1,80±0,2 >0,2
Желтые тела 2,22±0,325 2,19±0,129 >0,5
Маточный смыв 84,642±22,061 132,056±29,44 >0,2
Примечание: *-*** - степень достоверности - результаты маточного смыва перечислены на сухую массу.
Витаминный и антиоксидантний статус в организме животных в определенной мере был также зависим от влияния экзогенных препаратов и физиологичного состояния коров-доноров (табл. 2).
Таблица 2. Содержание каротина, витаминов А,Е,С и малонового диальдегида в сыворотке крови и отдельных тканях коров-доноров во время индукции полиовуляции и получения эмбрионов, п=5
Группы животных
Ткани 1-я 2-я
Схемы введения
Классическая ФСГ 1-дневная ФСГ+ГВП
М ± т р* М ± т Р р*
1 2 3 4 5 6
Каротин мкг/мл
Сыворотка крови: 1 4,51±0,049 4,31±0,061 <0,05
2 4,79±0,128 <0,05 4,62±0,173 >0,5 >0 ,1
3 4,25±0,133 <0,1 4,87±0,054 <0,01 <0,001
4 4,67±0,069 <0,1 4,89±0,09 <0,1 <0,001
Осеменение 3,98±0,07 <0,001 4,23±0,202 >0,2 >0,5
Вымывание 4,04±0,164 <0,05 4,31±0,109 >0,2 0
Окончание табл.2.
1 1 2 | 3 | 4 | 5 | 6
Витамин А, мкг%
Сыворотка крови: 1 27,36±1,32 25,34±0,41 >0,2
2 27,65±1,06 >0,5 28,99±1,41 >0,5 <0,05
3 27,6±0,48 >0,5 21,94±0,44 <0,001 <0,02
4 27,52±0,68 >0,5 21,94±0,18 <0,001 <0,001
Осеменение 27,41±0,53 >0,5 24,58±0,73 <0,01 >0,2
Вымывание 24,86±0,62 >0,1 23,47±0,43 <0,1 <0,02
Витамин Е, мкг %
Сыворотка крови: 1 18,45±0,7 18,2±0,35 >0,5
2 16,67±0,19 <0,05 16,53±0,25 >0,5 <0,01
3 17,22±0,85 >0,2 17,51±0,63 >0,5 >0,2
4 18,13±0,65 <0,2 16,82±0,2 <0,1 <0,02
Осеменение 20,55±0,56 <0,05 19,07±0,27 <0,05 <0,1
Вымывание 18,59±0,74 <0,5 18,42±0,37 >0,5 >0,5
Витамин С, мг %
Сыворотка крови: 1 0,947±0,071 0,795±0,046 <0,1
2 0,963±0,068 >0,5 0,96±0,084 >0,5 >0 ,1
3 0,98±0,069 >0,5 1,06±0,079 >0,5 <0,05
4 1,59±0,092 <0,001 1,87±0,199 >0,2 <0,01
Осеменение 2,28±0,092 <0,001 2,57±0,18 >0,2 <0,001
Вымывание 1,7±0,04 <0,001 2,61±0,174 <0,005 <0,001
Содержание витамина С в тканях, мг %
Печень 0,584±0,043 0,736±0,0015 <0,01
Лимфоузлы 0,63±0,003 0,772±0,015 <0,001
Эндометрий 0,356±0,011 0,28±0,024 <0,05
Яичники 0,686±0,015 0,762±0,009 <0,001
Яйцевод 0,66±0,018 0,767±0,011 <0,02
Желтые тела 0,709±0,03 0,656±0,023 >0,2
Малоновый диальдегид
Эндометрий 46,36±1,90 40,36 ±3,46
Яичники 35,90 ±3,28 26,46 ±1,77*
Яйцевод 47,75 ±2,97 40,64 ±1,92
Желтые тела 49,84 ±1,03 63,38±2,60***
Маточный смыв 6,57 ±2,06 8,29 ±1,69
Примечание: *-*** - степень достоверности - результаты маточного смыва перечислены на сухую массу.
Установлено повышение количества каротина в сыворотке крови доноров 2-й группы на седьмой день эмбриогенеза на 11 % (Р<0,001) и концентрации витаминов А и Е во время осеменения и вымывания эмбрионов - соответственно на 11,8 % (Р<0,02) и 6 % (Р<0,1).
Несмотря на дополнительное введение донорам витаминов А и Е (2-я опытная группа) их содержание в сыворотке крови через 24 часа было ниже при осеменении и вымывании эмбрионов сравнительно с контрольной группой.
Концентрация аскорбиновой кислоты в сыворотке крови доноров опытной группы повышалась во время введения животным простагла-ндина F2a, осеменения и вымывания эмбрионов. Кроме этого, дополнительное введение донорам аскорбиновой кислоты перед осеменением поддерживало высокое ее содержание в тканях печени, лимфоузлах,
яичниках, яйцеводах и желтых телах. Ее уровень уменьшился лишь в эндометрии. Известно, что интерстиций яичника и желтое тело способны накапливать аскорбиновую кислоту, но под воздействием гормонов, в частности ЛГ и прогестерона, может проходить ее окисление. Это свидетельствует о важной роли аскорбиновой кислоты в половых железах, особенно во время овуляции. В нашем случае, возможно, экзогенная витаминная добавка способствует накоплению аскорбиновой кислоты или тормозит уровень ее окисления.
Антиоксидантный статус по количеству конечного продукта окисления липидов - малоновому диальдегиду, был выше в сыворотке крови во время индукции полиовуляции (0,46±0,06 и 0,63±0,03 мкМ/%) и осеменения доноров (0,53±0,04 и 10,6б±0,04 мкМ/%), желтых телах и маточном смыве и меньше - в лимфоузлах, эндометрии, яичниках и яйцеводах.
Соответствующие физиолого-биохимические изменения в репродуктивной системе коров-доноров проявились в макроморфологиче-ском изменении в матке и яичниках (табл. 3). Из таблицы видно, что масса матки и маточного смыва несколько была повышенна у коров, которым вводили ФСГ с биологически активными веществами (2-я группа). Установлено положительное влияние ГВП на развитие разного диаметра, а также антральных фолликулов и качество эмбрионов. Уровень рН маточного смыва был в пределах 7,3-7,5 у животных обеих групп (табл. 3).
Таблица 3. Визуальная характеристика матки, яичников и эмбрионов коров-доноров, п= 5
Показатели Группа животных
1-я 2-я
Масса матки, г 446 ± 44,08 529 ± 37,79
Сухая масса матки, % 25,35 ± 1,33 26,34 ± 1,15
Сухая масса маточного смыва, % 0,86 ± 0,02 0,94 ± 0,05
Масса левого яичника 19,1 ± 3,40 22,0 ± 3,74
Количество желтых тел 6,6 ± 1,28 7,0 ± 0,92
Количество фолликулов
> 0,8 0,4 0,2
> 0,5 1,6 2,4
< 0,5 5,2 11,8
атрезированных 1,2 0,4
Масса правого яичника 20,2 ± 1,86 16,2 ± 3,01
Количество желтых тел 5,4 ± 1,24 4,8 ± 1,59
Количество фолликулов
> 0,8 0 0
> 0,5 1,2 1,6
< 0,5 5,4 19,4
атрезированных 1,2 0,4
В среднем по группам
Количество желтых тел 12,0 ± 0,94 11,8 ± 2,47
Количество полученных эмбрионов 10,0 9,6
В т.ч.: качественных 4,2 7,2
дегенерированных 4,8 1,6
яйцеклеток 1,0 0,8
Положительные результаты мы получили во втором опыте, в котором проводили индукцию полиовуляции у коров-доноров с помощью гормонально-витаминного препарата на основе ГСЖК. Путем ректального исследования, вымывания эмбрионов и их микроскопического исследования установлено, что количество желтых тел и вымытых эмбрионов, в том числе качественных, соответственно по 2-м группам составляло 5,8-6,2 (6,89 %); 5,0-5,6 (12,0 %) и 1,6-3,0 (87,5 %).
Полученные качественные эмбрионы замораживали. По мере подбора реципиентов и их подготовки полученые эмбрионы им пересаживали.
Заключение. Таким образом, вызывание полиовуляции у коров-доноров с помощью ФСГ или ГСЖК в масляной эмульсии с отдельными витаминами согласно однодневной схеме повышало выход качественных эмбрионов на 70-75% сравнительно с общей схемой. Кроме этого, введение коровам-реципиентам гормонально-витаминного препарата в масляной эмульсии во время трансплантации эмбрионов повышало эффективность их приживления на 13,3%
Результаты исследований позволяют утверждать, что комплексные препараты, которые включают отдельные витамины на основе ФСГ, владеют выраженным действием на процессы метаболизма репродуктивных органов и эффективность полиовуляции.
ЛИТЕРАТУРА
1. Rosbech, N.O. Aktuelle Ergebnisse zur Superovulation bim Rind Vet/ N.O. Ros-bech. Ved., 1980. V.35. №.13. P.516.
2. Бучко, А.М. Влияние гонадотропных препаратов и простагландина F2-альфа на окислительные процессы в митохондриях тканей телок /А.М. Бучко//Науч.-техн. бюлл. УкрНИИФБ с-х животных, 1986. Вып. 8/1. С.28-31.
3. Былицкий, Н.М. Влияние различных гонадотропинов на функциональную активность яичников и качество эмбрионов у КРС /Н.М. Былицкий// Известия Академии аграрных наук Беларуси, 1996. N° 4. С.69-71.
4. Эффективность использования различных гонадотропинов для обработки коров-доноров/ Н.М. Былицкий, Н.Х. Федосова, М.В. Давидович, И.А. Зеленко, В.И. Лавушев // Селекционно-генетические и биотехнологические проблемы разведения КРС: тез. докл. научно-практ. конф. Брест,1995. С. 47-48.
5. Былицкий, Н.М. Ответная реакция яичников на обработку гонадотропинами и результативность эмбриотрансплантации у телок-реципиентов / Н.М. Былицкий, Н.Х. Федосова, Е.В. Курыкин // Материалы респ. науч.-практ. конф. по животноводству и вет. медицине. Витебск, 1994. С. 11, 12
6. Клинский, Ю.Д. Результаты трансплантации эмбрионов у КРС в СССР / Ю.Д. Клинский, Н.И. Сергеев //Arch. Exper. Veter. Med., 1982. V.36. №.1. P. 55-60.
7. Ковалiв, Л.М. Вмют метаболтв в репродуктивних органах телиць шд впли-вом фолжотрошну на фош R-каротину i мжромагу / Л.М. Ковалiв // Науковий вюник АН ВАМ iia. С.З.Гжицького. Лымв, 2004. Т.6. №3. Ч.1. С. 126-129.
8. Ковалiв, Л.М. Вплив комплексних гормонально-вгамшних препарат1в на окремi показники обмшних процеав в органiзмi донорiв при шдукци полювуляцп / Л.М. Ковалiв //Науково-техн. бюл., 1997. В.19/1. С.62-65.
9. Ковалiв, Л.М. Вплив комплексних гормонально-вгамшних препаратiв на ефектившсть трансплантацiï ембрiонiв / Л.М. Ковалiв // Науково-техн. бюл., 1997. Вип. 19/1. С. 67-69.
10. Ковалiв, Л.М. Фiзiолого-бiохiмiчний профiль у репродуктивних органах корiв-донорiв при iндукцiï полювуляцп/ Л.М. Ковалiв // Науковий вюник ЛНАВМтаБТ iменi С.З.Гжицького. Львiв, 2004. Т.6. №3. Ч.3. С.86-89.
11. Прокофьев, М.И. Регуляция размножения с-х животных/ М.И. Прокофьев. Л.: Наука, 1983. 263 с.
