CC BY
63
© Коллектив авторов, 2022
Кокинос Е.К.1, Кузьмина Д.О.1, Кучур О.А.1, Цымбал С.А.1, Василичин В.А.1, Галочкина А.В.1' 2, Завирский А.В.3, Башарин В.А.3, Штро А.А.1 2, Штиль А. А.4, Духинова М.С.1
Фенотипический и функциональный анализ линии моноцитов THP-1 как модели воспаления
1 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Национальный исследовательский университет ИТМО» Министерства науки и высшего образования Российской Федерации, 197101, г. Санкт-Петербург, Российская Федерация
2 Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский институт гриппа имени А.А. Смородинцева» Министерства здравоохранения Российской Федерации, 197376, г. Санкт-Петербург, Российская Федерация
3 Федеральное государственное бюджетное военное образовательное учреждение высшего образования «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова» Министерства обороны Российской Федерации, 194044, г. Санкт-Петербург, Российская Федерация
4 Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-медицинский исследовательский центр онкологии имени Н.Н. Блохина» Министерства здравоохранения Российской Федерации, 115478, г. Москва, Российская Федерация
Резюме
Введение. Клеточная линия THP-1 - одна из общепринятых моделей для изучения иммунного ответа моноцитов и макрофагов. Однако основные характеристики моноцитов THP-1 в ответ на провоспалительные стимулы остаются малоизученными.
Цель исследования - сравнить активность клеток THP-1 после воздействия бактериального липополисахарида (ЛПС), вируса гриппа A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) и рентгеновского облучения.
Материал и методы. Фенотипические и функциональные параметры клеток линии THP-1 были исследованы методами полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией в реальном времени, световой микроскопии, проточной цитофлуори-метрии.
Результаты. Мы выяснили, что HSP90, HPRT или GAPDH являются стабильными генами домашнего хозяйства в случае воздействия на клетки ЛПС, вируса или облучения соответственно. Были выявлены гены-маркеры метаболических изменений на уровне транскрипции в ответ на ЛПС (GAPDH), вирус (HSP90, GAPDH) и облучение (B2M), которые могут служить новыми мишенями для профилирования моноцитов при патологическом воспалении. Наконец, воздействие различными стимулами селективно влияет на цитокиновый профиль и антиген-презентирующую активность моноцитов THP-1.
Заключение. Данное исследование описывает новые особенности поведения модели моноцитов при сравнительном анализе воспалительных стимулов и предлагает новые потенциальные маркеры для регуляции иммунного ответа при вирусной или бактериальной инфекции, а также при облучении (радиотерапии).
Ключевые слова: THP-1; моноциты; воспаление; вирус; радиотерапия; инфекция; гены домашнего хозяйства
Статья получена 08.04.2022. Принята к печати 15.05.2022.
Для цитирования: Кокинос Е.К., Кузьмина Д.О., Кучур О. А., Цымбал С. А., Василичин В. А., Галочкина А.В., Завирский А.В., Башарин В. А., Штро А.А., Штиль А.А., Духинова М.С. Фенотипический и функциональный анализ линии моноцитов THP-1 как модели воспаления. Иммунология. 2022; 43 (3): 277-287. DOI: https://doi. org/10.33029/0206-4952-2022-43-3-277-287
Финансирование. Данное исследование поддержано грантом РНФ № 20-75-10112. Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Вклад авторов. Концепция и дизайн исследования - Духинова М.С.; сбор и обработка материала -Кокинос Е.К., Кузьмина Д.О., Кучур О. А., Цымбал С. А., Василичин В. А., Галочкина А.В., Завирский А.В.; статистическая обработка - Кокинос Е.К., Кузьмина Д.О., Кучур О. А., Василичин В. А., Цымбал С.А.; написание текста - Кокинос Е.К., Цымбал С.А., Кучур О.А.; редактирование - Башарин В.А., Штро А.А., Штиль А.А., Духинова М.С.
Для корреспонденции
Духинова Марина Сергеевна -кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник химико-биологического кластера (СКАМТ), Университет ИТМО Минобрнауки России, Санкт-Петербург, Российская Федерация E-mail: dukhinova@scamt-itmo.ru, marina.dukhinova@gmail.com https://orcid.org/0000-0001-8118-9439
Kokinos E.K.1, Kuzmina D.O.1, Kuchur O.A.1, Tsymbal S.A.1, Vasilichin V.A.1, Galochkina A.V.1' 2, Zavirskyi A.V.3, Basharin V.A.3, Shtro A. A.1' 2, Shtil A. A.4, Dukhinova M.S.1
Phenotypic and functional characteristic analysis of THP-1 cell line as a model of inflammation
1 ITMO University of the Ministry of Science and High Education of the Russian Federation, 197101, Saint Petersburg, Russian Federation
2 Military Medical Academy named after S.M. Kirov of the Ministry of Defence of the Russian Federation, 194044, Saint Petersburg, Russian Federation
3 The Smorodintsev Research Institute of Influenza of the ministry of healthcare of the Russian Federation of the Ministry of Healthcare of the Russian Federation, 197376, Saint Petersburg, Russian Federation
4 N.N. Blokhin National Medical Research Center of Oncology of the Ministry of Healthcare ofthe Russian Federation, 115478, Moscow, Russian Federation
Abstract
Introduction. THP-1 cell line represents one of the common research models for mono-cyte/macrophage-mediated inflammation.
Aim - to study the properties of THP-1 monocytes activated with bacterial lipopolysaccha-rides (LPS), influenza virus strain A/Puerto Rico/8/34 (H1N1), and X-ray irradiation.
Material and methods. The cell phenotypic and functional profiles were studied with light microscopy, RT-PCR with reverse transcription, and flow cytometry.
Results. We determined that HSP90, HPRT, and GAPDH were suitable reference genes for mRNA expression normalization upon LPS, viral, or irradiation exposure, respectively. The gene metabolic markers of THP-1 cell responses to LPS (GAPDH), virus (HSP90, GAPDH), and irradiation (B2M) were determined suggesting the new targets for monocyte profiling in pathological inflammation. Finally, the comparison of pro-inflammatory cytokines and antigen-presenting activities of THP-1 cells showed the differential cytokine expression upon various stimuli.
Conclusion. The profiles of metabolic and functional activities can be further used for THP-1 and monocyte comparative analysis and confirm the utility of THP-1 cell line as a model of inflammation.
Keywords: THP-1; monocytes; inflammation; virus; radiotherapy; infection; housekeeping genes
Received 08.04.2022. Accepted 15.05.2022.
For citation: Kokinos Е.K., Kuzmina D^., Kuchur О.А., Tsymbal S^., Vasilichin V.A., Galochkina A.V., Zavirskyi A.V., Basharin V.A., Shtro А.А., Shtil А.А., Dukhinova М.S. Phenotypic and functional characteristic analysis of THP-1 cell line as a model of inflammation. Immunologiya. 2022; 43 (3): 277-87. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2022-43-3-277-287 (in Russian)
Funding. This work was supported by the Russian Science Foundation (Grant No. 20-75-10112). Conflict of interests. Authors declare no conflict of interests.
Authors' contribution. Study concept and design - Dukhinova M.S.; data generation and analysis - Kokinos Е.К., Kuzmina D^., Kuchur О.А., Tsymbal S.A., Vasilichin V.A., Galochkina A.V., Zavirskyi A.V.; statistical analysis -Kokinos Е.К., Kuzmina D^., Kuchur О. А., Vasilichin V.A., Tsymbal S.A.; text writing - Kokinos Е.К., Kuchur О.А., Tsymbal S.A.; text editing - Basharin V.A., Shtro ^^ Shtil ^^ Dukhinova М.S.
For correspondence
Marina S. Dukhinova -PhD, Leading Researcher of Chembio Cluster (SCAMT), ITMO University of the MSHE of Russia, Saint-Petersburg, Russian Federation E-mail: dukhinova@scamt-itmo.ru, marina.dukhinova@gmail.com https://orcid.org/0000-0001-8118-9439
Введение
Моноциты и макрофаги являются ключевыми компонентами иммунной системы. Использование первичных клеточных культур для исследования этих клеток или при лекарственном скрининге встречается со значительными ограничениями из-за фенотипической и функциональной вариабельности клеток, их низкой жизнеспособности в специфических условиях, таких как облучение или добавление препарата, а также из-за относительно ограниченной доступности и сложности
получения [1]. Культура клеток острого миелоидного лейкоза человека ТНР-1 используется как модельная моноцитарно-макрофагальная система при вирусных или бактериальных инфекциях, хроническом воспалении, противоопухолевом иммунном ответе и в других патологических и физиологических условиях [2-5].
Клетки ТНР-1 экспрессируют на поверхности клетки специфические маркеры СБ11Ъ, СБЗбЪ, СБ45 и другие, характерные для миелоидных клеток и моноцитов. Моноциты ТНР-1 проявляют способность к фагоцитозу, презентации антигена, про- или противовоспалитель-
ному ответу в зависимости от экспериментальных условий. В неактивированном состоянии THP-1 - это округлые суспензионные клетки, которые могут приобретать макрофагоподобный адгезионный фенотип, например после воздействия 12-О-тетрадеканоилфорболом-13-ацетатом (ТФА). Провоспалительная (М1) активация моноцитов и моноцитоподобных клеток может быть осуществлена при добавлении бактериального липо-полисахарида (ЛПС), вирусных или химических агентов. Воспалительный ответ запускает работу преобразователя сигнала и активатора транскрипции STAT1, STAT3, транскрипционного фактора NF-kB и других факторов, а также продукцию провоспалительных цитокинов -интерлейкина(ИЛ)-6, ИЛ-1Р, ИЛ-17, фактора некроза опухоли а (ФНОа) [6], а также экспрессию некоторых поверхностных маркеров, таких как HLA-DR, CD45 и CD86 [7]. Стимуляция клеток при помощи ИЛ-4, ИЛ-10, ИЛ-13 или неорганическими молекулами, например магнием, запускает противовоспалительную (М2) поляризацию моноцитов и макрофагов и широко используется для моделирования опухолевого микроокружения [8, 9]. Поскольку клетки линии THP-1 более устойчивы к лучевой или химиотерапии по сравнению с первичными моноцитами и макрофагами, эта клеточная линия привлекает особое внимание для изучения поведения иммунных клеток во время противоопухолевого лечения.
Несмотря на то, что клеточная линия THP-1 активно используется для изучения поведения моноцитов и макрофагов в широком спектре физиологических и патологических условий, данная экспериментальная система до сих пор недостаточно охарактеризована как фенотипически, так и функционально. В связи с этим целью данного исследования стало изучение и сравнение основных особенностей профиля транскрипции метаболических и цитокиновых генов моноцитов THP-1 после воздействия ЛПС, вируса или рентгеновского облучения.
Материал и методы
Клеточная культура
Клеточная культура THP-1 была получена из Американской коллекции типовых культур (ATCC). Клетки культивировали в среде RPMI-1640 (Biolot, Россия) с 10 % эмбриональной телячьей сывороткой (GE Healthcare Life Sciences, США) и добавлением антибиотиков пенициллина/стрептомицина 100 мкг/мл (Biolot, Россия), при 37 °C и 5 % CO2 (ТО2-инкубатор Sanyo МСО-18АС, Panasonic, Япония).
Воздействие вирусных частиц и бактериального липополисахарида
Штамм вируса гриппа A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) был получен из коллекции вирусов гриппа и атипичных пневмоний ФГБУ «НИИ гриппа им. А.А. Сморо-динцева» Минздрава России (Санкт-Петербург, Россия). Эксперименты с использованием вируса проводили в лаборатории химиотерапии вирусных инфекций Ин-
ститута гриппа. Общая множественность инфекции для образца (MOI) составляла 0,1. Клетки в количестве 5 • 105 высевали на 6-луночные планшеты и давали им восстановиться в течение 24 ч. Затем в культуральную среду добавляли вирусные частицы или бактериальный ЛПС Escherichia coli (Sigma, США) в концентрации 1 мкг/мл. После 24 ч инкубации образцы собирали для дальнейшего анализа.
Воздействие на клетки рентгеновским излучением
Клетки THP-1 высевали в матрасы, культивировали в течение 3 дней и затем облучали. Облучение проводилось в Военно-медицинской академии имени С.М. Кирова. Облучение в дозе 4 Гр проводили на рентгенотерапевтической установке РУТ-250-15-2 (РУМ-17) («Мосрентген», Москва, Россия) при следующих параметрах: сила тока - 10 мА, напряжение трубки - 180 кВ, фокусное расстояние - 50 см, фильтр -1 мм Al; 0,5 мм Cu, мощность дозы - 0,32 Гр/мин. Дозиметрический контроль осуществляли при помощи дозиметра ИД-11 с оценкой показателей на установке ГО-32. После облучения клеткам давали восстановиться в течение 24 ч, после чего образцы собирали для анализа. Выбранные условия облучения соответствуют применяемому в клинической онкологии курсу радиотерапии [10, 11].
Анализ экспрессии генов с помощью количественной полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией в реальном времени
Тотальную РНК выделяли из образцов с помощью набора ExtractRNA (Evrogen, Россия) в соответствии с протоколом производителя. Количественный и качественный анализ общей РНК, полученной после экстракции, проводили с помощью спектрофотометра NanoDrop (Thermo Fisher Scientific, США). Для обратной транскрипции брали тотальную РНК в количестве 2 мкг на пробу, количество РНК было одинаковым для всех образцов и экспериментов. Набор MMLV-RT (Evrogen, Россия) использовали для реакции обратной транскрипции в соответствии с протоколом производителя.
Полимеразную цепную реакцию с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) в реальном времени использовали для анализа экспрессии целевых и референсных генов и выполняли с помощью системы CFX Connect™ Real-Time PCR Detection System (BioRad Laboratories, США) с использованием смеси реагентов qPCRmix-HS SYBR (Evrogen, Россия). Последовательности прайме-ров к интересующим генам были подобраны с помощью платформы NCBI Primer-BLAST (NCBI, США) (табл. 1). Относительную экспрессию мРНК рассчитывали по формуле 2-AACq на основании нормирования пороговых циклов к выбранному референсному гену. Относительный уровень экспрессии контрольного образца был принят за 1.
Микроскопия
Наблюдение клеток THP-1 проводили с помощью оптического микроскопа БЛМ М-1 (ЛОМО, Россия).
Таблица 1. Последовательности праймеров для анализа экспрессии генов
Ген Прямой праймер (5'>3') Обратный праймер (5'>3')
IL6 ATGAGGAGACTTGCCTGGTG GCATTTGTGGTTGGGTCAGG
IL1B TGGAAGGAGCACTTCATCTGTT TCGCCAGTGAAATGATGGCT
CXCL10 AAGTGGCATTCAAGGAGTACCT GGACAAAATTGGCTTGCAGGA
CCL2 TCTCAAACTGAAGCTCGCAC CATTGATTGCATCTGGCTGAG
CD80 CGCCTCTCTGAAGATTACCCA TGTTCCTGGGTCTCCAAAGG
HSP90 CCAGGCACTTCGGGACAACTC CAAGGGAAAAGCCAGAAGATAGCA
GAPDH CCATCACCATCTTCCAGGAGCG AGAGATGATGACCCTTTTGGC
PPIA GCAGAGGCTTAAGGCGCAGACTAC TGCAAAACCTCAAAGCCTCCATAA
RPS18 ACGCCGCCGCTTGTGCT AGTTCTCCCGCCCTCTTGGTGA
B2M GATGAGTATGCCTGCCGTGT TGCGGCATCTTCAAACCTCC
HPRT1 TATATCCAACACTTCGTGGGGTC ACAGGACTGAACGTCTTGCTC
Рис. 1. Характеристика клеток THP-1 в контроле и после воздействия липополисахарида (ЛПС), вируса гриппа и облучения (в течение 24 ч)
Репрезентативные микроскопические изображения клеток THP-1: A - в контрольных условиях; Б - при воздействии бактериального ЛПС; В - при воздействии вируса гриппа (штамм A/Puerto Rico/8/34, H1N1); Г - после облучения. Мак-рофагоподобные клетки выделены кружками. Стрелками указаны кластеры (агрегаты клеток). Д - относительное увеличение числа кластеров клеток THP-1, активированных вирусом. Число агрегатов клеток в контроле принято за 1. Здесь и на остальных рисунках: данные представлены в виде среднего из 3 независимых биологических экспериментов, включающих по 3 технических повторности в группе; планки погрешностей показывают стандартное отклонение.
Количественный и визуальный анализ клеточных агрегатов, характерных для противовирусного ответа, проводили для контрольных образцов и образцов с вирусными частицами.
Проточно-цитометрический анализ
Для анализа экспрессии поверхностных рецепторов необлученные (контрольные) и облученные при 4 Гр клетки THP-1 промывали PBS 1 раз. Окрашивание антителами HLA-DR-APC (BioLegend, США) проводили в темноте при 4 °C в течение 20 мин. После дополнительных стадий промывки клетки THP-1 анализировали на проточном цитометре CytoFLEX B2-R2-V0 (Beckman Coulter, США) с использованием программного обеспечения CytExpert (Beckman Coulter, США). Среднюю интенсивность флуоресценции APC рассчитывали по результатам трех независимых экспериментов.
Статистический анализ данных проводили с помощью программы GraphPad, версия 8.0.1 (GraphPad Software, США). Для каждого исследования было проведено не менее 3 независимых биологических экспериментов, включающих по 3 технических повторности на группу. Данные анализировали с помощью непарного двухвыборочного /-теста или одностороннего ANOVA. Статистически значимыми считали различия между группами при р < 0,05 (*p < 0,05, **p < 0,01, ***p < 0,001, ****p < 0,0001).
Результаты
Морфологические изменения в клетках THP-1 при активации
Морфология миелоидных клеток связана преимущественно с моноцитарным/суспензионным или макрофа-гоподобным/адгезионным фенотипом. В соответствии с ранее опубликованными исследованиями мы наблюдали присутствие отдельных макрофагоподобных клеток (обведены кружком) при стимуляции ЛПС [12] (рис. 1Б). В контрольных образцах подобные клетки отсутствовали (рис. 1А). Инкубация с частицами вируса гриппа или облучение не приводила к развитию адгезионного фенотипа; морфология клеток была схожа
с таковой в контрольных образцах (рис. 1В, Г). При этом клетки ТНР-1 образовывали скопления, или кластеры, в присутствии вирусного агента (рис. 1В). Отдельные малочисленные клеточные кластеры присутствовали и в контрольных образцах, но полностью исчезали в культурах, активированных ЛПС или облученных, что предполагает изменение характера межклеточных взаимодействий в зависимости от условий. Следует особо отметить, что облучение также привело к снижению жизнеспособности клеток ТНР-1 (данные не показаны).
Изучение стабильности экспрессии генов домашнего хозяйства в клетках ТНР-1 при вирусном, бактериальном и радиационном воздействии
Для дальнейшей оценки влияния внешних стимулов мы исследовали транскрипционные профили моноцитов ТНР-1 в контрольных условиях и при воздействии ЛПС, вируса гриппа или облучения. Для этого были измерены уровни экспрессии 6 широко используемых генов домашнего хозяйства (референсных): ОАРБИ (глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа), ИБР90 (белок теплового шока 90), РР1А (пептидилпролилизоме-раза А), ЯР818 (рибосомальный белок 188), ИРКТ (гипо-ксантин-гуанинфосфорибозилтрансфераза) и В2М (Р2-микроглобулин). Пороговые циклы (Cq) генов-кандидатов в гены домашнего хозяйства сравнивали в контрольных и экспериментальных условиях. Следует отметить, что вариации экспрессии генов не обнару-
25-|
20-
1? О
s
з
«
2 10-1
о
а.
о
С
5-
Fii
GAPDH HSP90 PPIA □ Контроль □ ЛПС
RPS18 HPRT В2М U Вирус ■ Облучение
Рис. 2. Пороговые циклы для часто используемых генов домашнего хозяйства в покоящихся и активированных клетках ТНР-1
Стабильность пороговых значений сравнивали между клетками в контроле и при воздействии липополисахарида (ЛПС), вируса или облучения в течение 24 ч.
жены в пределах биологических реплик из независимых экспериментов, однако присутствие активирующих стимулов приводило к нестабильности генов, вовлеченных в жизненно важные процессы метаболизма. Мы определили, что в зависимости от экспери-
Э
СО ^
Hei
о
□ Контроль ■ ЛПС
Xj. л
PPIA RPS18 GAPDH HPRT1 В2М
э
со ^
«й
з s
и й
Э
4 п
а ^
3-
2-
° ! Н еm
о
□ Контроль H Вирус
Л1
HSP90 PPIA RPS18 GAPDH В2М
□ Контроль ■ Облучение
ш
HSP90 PPIA RPS18 HPRT В2М
Рис. 3. Относительные уровни экспрессии генов домашнего хозяйства в клетках ТНР-1 после воздействия липополисахарида (ЛПС) (А), вируса гриппа (Б) или облучения (В)
ИБР90, ИРКТ или ОАРБИ были использованы в качестве референсного гена для анализа уровней мРНК клеток ТИР-1 под действием ЛПС (А), вируса гриппа (Б) или облучения (В) соответственно.
0
0
Э
л 10 000-,
1000-
100-
10-
1-
0,1
п
л
□ Контроль ■ ЛПС
д
д
1L6 1L1B CCL2 CXCL10
л 10 000-,
ffl ^
1000-
100-
□ Контроль ■ Вирус
Э
1000-,
□ Контроль ■ Облучение
У
10-
1-
0,1
*
i ul
XU X
1L6 1L1B CCL2 CXCL10
1L6 1L1B CCL2 CXCL10
Рис. 4. Относительные уровни экспрессии генов цитокинов в клетках ТНР-1 после воздействия липополисахарида (ЛПС) (А), вируса гриппа (Б) или облучения (В)
НБР90, ЯРЯТ или ОЛРБН были использованы в качестве референсных генов для анализа уровней мРНК клеток ТНР-1, обработанных ЛПС (Л), вирусом гриппа (Б) или облучением (В) соответственно.
ментальных условий вариабельность Cq генов специфически и селективно менялась (рис. 2). На основании полученных данных были выявлены гены с наиболее стабильным Cq для каждой модельной системы: НБР90 для ЛПС-опосредованной активации, ЯРЯТ при вирусном воздействии и ОЛРБН для рентгеновского облучения. Эти гены были выбраны в качестве референсных для дальнейшего анализа.
Далее была исследована экспрессия генов, обычно используемых для нормализации данных ПЦР, но не показавших ожидаемой стабильности в исследуемых условиях. Cq и уровни экспрессии некоторых генов не менялись достоверно, что позволяет предположить, что они все еще могут служить в качестве подходящих референсных генов. Такими эталонными генами были ЯРЯТ и ЯР818 при ЛПС-опосредованной активации, РР1Л и КР818 при вирусном воздействии, РР1Л и ЯРБ18 в облученных клетках (рис. 2). В то же время были обнаружены изменения в экспрессии отдельных генов домашнего хозяйства. Предположительно, белки, кодируемые этими генами, могут играть важную роль в ответе моноцитов в исследуемых условиях. Так, воздействие ЛПС привело к повышению экспрессии гена ОЛРБН в моноцитах ТНР-1 в 3,5 раза (рис. 3А). В присутствии частиц вируса гриппа наблюдали увеличение уровня мРНК Н8Р90 (в 2,5 раза) и снижение уровней мРНК ОЛРБН и РР1Л (рис. 3Б). Во всех исследованных условиях отмечалась тенденция к повышению экспрессии В2М, однако только после облучения эти изменения были статистически значимы: уровень мРНК В2М был повышен в 3,5 раза (рис. 3В). Анализ взаимодействия транскрипционных факторов и генов-мишеней показал, что ген НБР90, уровень мРНК которого был повышен в модели вирусного воспаления, содержит сайты связывания с провоспалительными транскрипционными факторами, включая №-кВ, регуляторный фактор интерферона (1№) 1-3 и 8ТАТ4 [13]. На данный момент считается, что экспрессия НРЯТ не связана с основными факторами транскрипции №-кВ, 1КРб или §ТАТб, вовлеченными в воспалительный ответ [13]. Этот факт
частично может объяснить стабильность HPRT в исследованных условиях и делает HPRT одним из наиболее подходящих внутренних контролей для анализа экспрессии генов в моделях воспаления моноцитов/ макрофагов.
Влияние внешних стимулов на экспрессию генов цитокиновой сети
Продукция цитокинов является функциональным признаком активации моноцитов/макрофагов и используется для оценки активности клеток THP-1. В данном исследовании уровни мРНК цитокинов были измерены в клетках THP-1 в контрольных условиях или после инкубации с ЛПС, вирусом гриппа и облучения (рис. 4).
Цитокины ИЛ-6, ИЛ-1Р, MCP-1 (CCL2) и CXCL10 были выбраны в качестве функциональных маркеров воспалительной активации. ЛПС индуцировал гиперэкспрессию всех исследованных генов цитокиновой сети (рис. 4 А). При воздействии вируса и радиации количество мРНК CCL2 и CXCL10 также возрастало (рис. 4).
Презентация антигена при активации моноцитов THP-1
Наконец, мы рассмотрели антиген-презентирующую активность клеток THP-1. Обнаружено, что поверхностная экспрессия HLA-DR была увеличена в клетках, обработанных ЛПС или рентгеновским облучением (рис. 5Б). Экспрессия мРНК корецептора CD80, необходимого для презентации антигена, также была повышена во всех исследуемых условиях (рис. 5А).
Обсуждение
Клеточная линия THP-1 широко используется для изучения физиологических или патологических параметров моноцитов и макрофагов человека [4]. В данном исследовании мы сравнивали фенотип и функциональную активность клеток THP-1 при воздействии бактериальным ЛПС, вирусом гриппа типа A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) и клинической дозой рентгеновского облучения,
э
1000 -i
а ^
é о
100 -
10-
1 -
0,1
*
I
A-1 Í А® <$>
30 000 -,
® S
a S
о я
И и
щ я
И °
к ш
я &
« !=
и а.
О
25 000 -
20 000 5000
2500-
**
Ш-
Ö
#
Рис. 5. Антиген-презентирующая активность клеток ТНР-1
А - уровни мРНК СВ80 в клетках ТНР-1 после воздействия липополисахарида (ЛПС), вируса гриппа или облучения; Б - уровень поверхностной экспрессии НЬА-БК на клетках ТНР-1 после воздействия ЛПС или облучения.
А*
*
0
а также влияние указанных воздействий на процессы метаболизма, продукции цитокинов и презентацию антигена.
Бактериальная и вирусная инфекции, а также облучение, которое зачастую используется в противоопухолевой терапии, - известные провоспалительные стимулы, которые приводят к М 1-поляризации как моноцитов, так и макрофагов вместе со сдвигом в их метаболической активности. Последнее приводит к нестабильности ре-ференсного гена в изучаемых условиях и, как следствие, к необходимости поиска надежных маркеров. Мы определили наиболее стабильные гены домашнего хозяйства для моноцитов THP-1 под действием ЛПС (HSP90, HPRT), вируса гриппа H1N1 (HPRT) и рентгеновского облучения (GAPDH), а также обнаружили метаболические маркеры, которые могут быть потенциально вовлечены в клеточный воспалительный ответ.
В соответствии с этим ключевые молекулярные факторы, которые необходимы для клеточного метаболизма и классически используются для нормализации экспрессии генов, также могут принимать активное участие в воспалительном ответе моноцитов и макрофагов. Полученные нами данные дополняют результаты ранее опубликованных исследований вклада соответствующих факторов в развитие воспаления и иммунного ответа.
Так, HSP90 вносит основной вклад в защиту организма от стресса и может накапливаться в тканях при тепловом или окислительном стрессе [14, 15]. HSP90 также вовлечен в ответ на респираторные вирусные инфекции, поскольку перемещается в ядро клетки и выполняет функцию транскрипционного фактора, активируя синтез мРНК индуцибильной синтазы оксида азота (iNOS) и, как следствие, повышая уровень активных форм кислорода in vivo или в клеточных культурах макрофагов [16]. Более того, находясь в ядре, HSP90 взаимодействует с белками вируса гриппа (H1N1) NS1, PB1 и PB2, способствуя вирусной репликации в различных типах клеток, включая моноциты/макрофаги [17, 18]. Наши данные впервые демонстрируют, что транскрип-
ция НБР90 стимулируется в НШ1-инфицированных клетках ТНР-1, моделируя патологию, связанную с репликацией вируса, и прогрессирование заболевания.
Экспрессия В2М находится под контролем №-кВ и других провоспалительных транскрипционных факторов. р-цепь МНС класса I, кодируемая геном В2М, вовлечена в широкий спектр воспалительных реакций моноцитов [19, 20]. Особый интерес представляет тот факт, что стимуляция ЛПС и инфицирование вирусом гриппа типа А (НШ1) приводит к повышению уровня экспрессии В2М в макрофагах, однако, согласно нашим данным, этого не происходит в клетках ТНР-1 (рис. 2) [21, 22]. В2М также связан с радио- и иммунорезистент-ностью в опухоль-ассоциированных клетках, эпители-ально-мезенхимальным переходом и канцерогенезом. Нами обнаружено, что экспрессия этого гена также повышена после облучения, но не других воздействий [23, 24]. Мы также выяснили, что уровни мРНК В2М и СБ80, а также поверхностная экспрессия НЬА-БЯ были повышены после облучения, что предполагает активацию антиген-презентирующей способности и МНС класса I, и МНС класса II в облученных клетках (рис. 2, 5) [25]. В то же время повышение экспрессии В2М и МНС класса I в раковых клетках способствует уходу опухоли от иммунной системы. Таким образом, В2М может рассматриваться как диагностический маркер для оценки ответа на радиотерапию у больных раком. Учитывая эти данные, необходимы новые исследования ЖР90 и В2М как метаболических маркеров моноцитоподобных клеток.
Уровни мРНК воспалительных цитокинов повышены в активированных клетках ТНР-1. Наши данные свидетельствуют о том, что профили цитокинов варьируют в зависимости от исследуемых условий. Как и ожидалось, ЛПС индуцировал наиболее сильное увеличение транскрипции всех исследованных генов цитокинов (1Ь6, !Ь1В, ССЬ2 и СХСЫ0) и стимулировал антиген-презентирующую активность моноцитов ТНР-1 (рис. 4, 5). Вирусная нагрузка повышала уровни мРНК 116, СС12 и СХСЫ0, но не 1Ь1Ь, в то время как
экспрессия IL6 не менялась в клетках THP-1 при облучении. Экспрессия мРНК CD80, гена, кодирующего костимулирующий гликопротеин, необходимый для образования иммунных синапсов и активации Т-клеток, была сопоставима в клетках после действия вируса и облучения (рис. 5).
Изученные модели активации THP-1 выявили определенное сходство с поведением моноцитов периферической крови (МНПК) в тех же условиях. Например, МНПК демонстрируют более значительное повышение уровня мРНК IL6 по сравнению с IL1B через 24 ч после стимуляции ЛПС [26]. Транскрипционный профиль облученных клеток THP-1 также был аналогичен описанному в моделях рентгеновского облучения in vitro и in vivo [27]. Важно отметить, что данные наших исследований предполагают участие B2M, CXCL10 и CCL2
в ответе на облучение моноцитов; при лучевой терапии эти секретируемые факторы могут способствовать миграции опухолевых клеток и метастазированию [28].
Подобные эффектыописаны в облученныхпервичных миелоидных субпопуляциях, включая МНПК и микро-глию, и отражают негативное влияние радиотерапии на иммунную систему [29, 30].
Заключение
Полученные данные позволяют предполагать, что клетки ТНР-1 воспроизводят ключевые особенности первичных моноцитов/макрофагов при воздействии воспалительных стимулов, что позволяет выявлять новые функциональные и метаболические механизмы, участвующие в бактериальном, вирусном или опосредованном облучением воспалении.
■ Литература
1. Будихина А.С., Муругина Н.Е., Максимчик П.В., Дагиль Ю.А., Николаева А.М., Балясова Л.С., Муругин В.В., Чкадуа Г.З., Пине-гин Б.В., Пащенков М.В. О роли гликолиза в продукции провоспали-тельных цитокинов макрофагами. Иммунология. 2019; 40 (5): 11-22. DOI: https://doi.org/10.24411/0206-4952-2019-15002
2. Gan X., Wang H., Yu Y., Yi W., Zhu S., Li E. et al. Epigenetically repressing human cytomegalovirus lytic infection and reactivation from latency in THP-1 model by targeting H3K9 and H3K27 histone demeth-ylases. PLoS One. 2017; 12 (4): e0175390. DOI: https://doi.org/10.1371/ journal.pone.0175390
3. Barcia-Macay M., Seral C., Mingeot-Leclercq M.P., Tulkens P.M., Van Bambeke F. Pharmacodynamic evaluation of the intracellular activities of antibiotics against Staphylococcus aureus in a model of THP-1 macrophages. Antimicrob. Agents Chemother. 2006; 50 (3): 841-51. DOI: https://doi.org/10.1128/AAC.50.3.841-851.2006
4. Chanput W., Mes J.J., Wichers H.J. THP-1 cell line: an in vitro cell model for immune modulation approach. Int. Immunopharmacol. 2014; 23 (1): 37-45. DOI: https://doi.org/10.1016/j.intimp.2014.08.002
5. Caras I., Tucureanu C., Lerescu L., Pitica R., Melinceanu L., Neagu S. et al. Influence of tumor cell culture supernatants on macrophage functional polarization: In vitro models of macrophage-tumor environment interaction. Tumori. 2011; 97 (5): 647-54. DOI: https://doi.org/ 10.1177/030089161109700518
6. Гудима Г.О., Хаитов Р.М., Кудлай Д.А., Хаитов М.Р. Моле-кулярно-иммунологические аспекты диагностики, профилактики и лечения коронавирусной инфекции. Иммунология. 2021; 42 (3): 198-210. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2021-42-3-198-210
7. Dukhinova M., Kokinos E., Kuchur P., Komissarov A., Shtro A. Macrophage-derived cytokines in pneumonia: linking cellular immunology and genetics. Cytokine Growth Factor Rev. 2021; 59: 46-61. DOI: https://doi.org/10.1016/j.cytogfr.2020.11.003
8. Sun L., Li X., Xu M., Yang F., Wang W., Niu X. In vitro immunomodulation of magnesium on monocytic cell toward anti-inflammatory macrophages. Regen. Biomater. 2020; 7 (4): 391-401. DOI: https://doi. org/10.1093/rb/rbaa010
9. Medvedeva G.F., Kuzmina D.O., Nuzhina J., Shtil A.A., Dukhi-nova M.S. How macrophages become transcriptionally dysregulated: a hidden impact of antitumor therapy. Int. J. Mol. Sci. 2021; 22 (5): 2662. DOI: https://doi.org/10.3390/ijms22052662
10. Frey B., Hehlgans S., Rödel F., Gaipl U.S. Modulation of inflammation by low and high doses of ionizing radiation: implications for benign and malign diseases. Cancer Lett. 2015; 368 (2): 230-7. DOI: https://doi. org/10.1016/j.canlet.2015.04.010
11. Di Maggio F.M., Minafra L., Forte G.I., Cammarata F.P., Lio D., Messa C. et al. Portrait of inflammatory response to ionizing radiation treatment. J. Inflamm. (United Kingdom). 2015; 12 (1): 1-11. DOI: https:// doi.org/10.1186/s12950-015-0058-3
12. Wan J., Shan Y., Fan Y., Fan C., Chen S., Sun J. et al. NFB inhibition attenuates LPS-induced TLR4 activation in monocyte cells. Mol.
Med. Rep. 2016; 14 (5): 4505-10. DOI: https://doi.org/10.3892/mmr. 2016.5825
13. TFBS - Home. URL: http://tfbsdb.systemsbiology.net/ (date of access May 21, 2021)
14. Moniruzzaman M., Ghosal I., Das D., Chakraborty S.B. Melatonin ameliorates H2O2-induced oxidative stress through modulation of Erk/Akt/NFkB pathway. Biol. Res. 2018; 51 (1): 17. DOI: https://doi. org/10.1186/s40659-018-0168-5
15. Prodromou C. Regulatory mechanisms of Hsp90. Biochem. Mol. Biol. J. 2017; 3 (1): 2. DOI: https://doi.org/10.21767/2471-8084.100030
16. Yan M., Hou M., Liu J., Zhang S., Liu B., Wu X. et al. Regulation of iNOS-derived ROS generation by HSP90 and Cav-1 in porcine reproductive and respiratory syndrome virus-infected swine lung injury. Inflammation. 2017; 40 (4): 1236-44. DOI: https://doi.org/10.1007/s10753-017-0566-9
17. Zhang C., Yang Y., Zhou X., Yang Z., Liu X., Cao Z. et al. The NS1 protein of influenza a virus interacts with heat shock protein Hsp90 in human alveolar basal epithelial cells: Implication for virus-induced apoptosis. Virol. J. 2011; 8 (1): 1-9. DOI: https://doi.org/10.1186/1743-422X-8-181
18. Cline T.D., Beck D., Bianchini E. Influenza virus replication in macrophages: Balancing protection and pathogenesis. J. Gen. Virol. 2017; 98 (10): 2401-12. DOI: https://doi.org/10.1099/jgv0.000922
19. Holm C.K., Rahbek S.H., Gad H.H., Bak R.O., Jakobsen M.R., Jiang Z. et al. Influenza A virus targets a cGAS-independent STING pathway that controls enveloped RNA viruses. Nat. Commun. 2016; 7 (1): 1-9. DOI: https://doi.org/10.1038/ncomms10680
20. Menachery V.D., Schäfer A., Burnum-Johnson K.E., Mitchell H.D., Eisfeld A.J., Walters K.B. et al. MERS-CoV and H5N1 influenza virus antagonize antigen presentation by altering the epigenetic landscape. Proc. Natl Acad. Sci. USA. 2018; 115 (5): E1012-21. DOI: https://doi. org/10.1073/pnas.1706928115
21. Tanaka A., To J., O'Brien B., Donnelly S., Lund M. Selection of reliable reference genes for the normalisation of gene expression levels following time course LPS stimulation of murine bone marrow derived macrophages. BMC Immunol. 2017; 18 (1): 43. DOI: https://doi.org/10.1186/ s12865-017-0223-y
22. Liu L., Zhou J., Wang Y., Mason R.J., Funk C.J., Du Y. Proteome alterations in primary human alveolar macrophages in response to influenza A virus infection. J. Proteome Res. 2012; 11 (8): 4091-101. DOI: https://doi.org/10.1021/pr3001332
23. Qin Y., Yu M., Zhou L., Jiang L., Huang M. Durable response to combination radiotherapy and immunotherapy in EP-resistant lung large-cell neuroendocrine carcinoma with B2M and STK11 mutations: a case report. Immunotherapy. 2020; 12 (4): 223-7. DOI: https://doi.org/10.2217/ imt-2019-0166
24. Nomura T., Huang W.C., Zhau H., Josson S., Mimata H., Chung L. B2-microglobulin-mediated signaling as a target for cancer therapy. Anticancer Agents Med. Chem. 2014; 14 (3): 343-52. DOI: https://doi.org/10. 2174/18715206113139990092
25. Reits E.A., Hodge J.W., Herberts C.A., Groothuis T.A., Chakraborty M., Wansley E.K. et al. Radiation modulates the peptide repertoire, enhances MHC class I expression, and induces successful antitumor immunotherapy. J. Exp. Med. 2006; 203 (5): 1259-71. DOI: https:// doi.org/10.1084/jem.20052494
26. Biondillo D.E., Konicek S.A., Iwamoto G.K. Interferon-y regulation of interleukin 6 in monocytic cells. Am. J. Physiol. Lung Cell. Mol. Physiol. 1994; 267 (5): 564-8. DOI: https://doi.org/10.1152/ ajplung.1994.267.5.l564
27. Groves A.M., Johnston C.J., Williams J.P., Finkelstein J.N. Role of infiltrating monocytes in the development of radiation-induced pulmonary fibrosis. Radiat. Res. 2018; 189 (3): 300. DOI: https://doi.org/10.1667/ RR14874.1
28. Tu M.M., Abdel-Hafiz H.A., Jones R.T., Jean A., Hoff K.J., Duex J.E. et al. Inhibition of the CCL2 receptor, CCR2, enhances tumor response to immune checkpoint therapy. Commun. Biol. 2020; 3 (1): 1-12. DOI: https://doi.org/10.1038/s42003-020-01441-y
29. Mikhalkevich N., O'Carroll I.P., Tkavc R., Lund K., Sukumar G., Dalgard C.L. et al. Response of human macrophages to gamma radiation is mediated via expression of endogenous retroviruses. PLoS Pathogens. 2021; 17 (2): e1009305. DOI: https://doi.org/10.1371/J0URNAL. PPAT. 1009305
30. Osman A.M., Sun Y., Burns T.C., He L., Kee N., Oliva-'Vilar-nau N. et al. Radiation triggers a dynamic sequence of transient microglial alterations in juvenile brain. Cell Rep. 2020; 31 (9): 107699. DOI: https:// doi.org/10.1016/j.celrep.2020.107699
■ References
1. Budikhina A.S., Murugina N.E., Maksimchik P.V., Dagil' Yu.A., Nikolaeva A.M., Balyasova L.S., Murugin V.V., Chkadua G.Z., Pinegin B.V., Pashchenkov M.V. On the role of glycolysis in pro-inflammatory cytokine production by macrophages. Immunologiya. 2019; 40 (5): 11-22. DOI: https://doi.org/10.24411/0206-4952-2019-15002 (in Russian)
2. Gan X., Wang H., Yu Y., Yi W., Zhu S., Li E., et al. Epigenetically repressing human cytomegalovirus lytic infection and reactivation from latency in THP-1 model by targeting H3K9 and H3K27 histone demeth-ylases. PLoS One. 2017; 12 (4): e0175390. DOI: https://doi.org/10.1371 /journal.pone.0175390
3. Barcia-Macay M., Seral C., Mingeot-Leclercq M.P., Tulkens P.M., Van Bambeke F. Pharmacodynamic evaluation of the intracellular activities of antibiotics against Staphylococcus aureus in a model of THP-1 macrophages. Antimicrob. Agents Chemother. 2006; 50 (3): 841-51. DOI: https://doi.org/10.1128/AAC.50.3.841-851.2006
4. Chanput W., Mes J.J., Wichers H.J. THP-1 cell line: an in vitro cell model for immune modulation approach. Int. Immunopharmacol. 2014; 23 (1): 37-45. DOI: https://doi.org/10.1016/j.intimp.2014.08.002
5. Caras I., Tucureanu C., Lerescu L., Pitica R., Melinceanu L., Neagu S., et al. Influence of tumor cell culture supernatants on macrophage functional polarization: In vitro models of macrophage-tumor environment interaction. Tumori. 2011; 97 (5): 647-54. DOI: https://doi. org/10.1177/030089161109700518
6. Gudima G.O., Khaitov R.M., Kudlay D.A., Khaitov M.R. Molecular immunological aspects of diagnostics, prevention and treatment of coronavirus infection. Immunologiya. 2021; 42 (3): 198-210. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2021-42-3-198-210 (in Russian)
7. Dukhinova M., Kokinos E., Kuchur P., Komissarov A., Shtro A. Macrophage-derived cytokines in pneumonia: linking cellular immunology and genetics. Cytokine Growth Factor Rev. 2021; 59: 46-61. DOI: https://doi.org/10.1016/j.cytogfr.2020.11.003
8. Sun L., Li X., Xu M., Yang F., Wang W., Niu X. In vitro immunomodulation of magnesium on monocytic cell toward anti-inflammatory macrophages. Regen. Biomater. 2020; 7 (4): 391-401. DOI: https://doi. org/10.1093/rb/rbaa010
9. Medvedeva G.F., Kuzmina D.O., Nuzhina J., Shtil A.A., Dukhi-nova M.S. How macrophages become transcriptionally dysregulated: a hidden impact of antitumor therapy. Int. J. Mol. Sci. 2021; 22 (5): 2662. DOI: https://doi.org/10.3390/ijms22052662
10. Frey B., Hehlgans S., Rödel F., Gaipl U.S. Modulation of inflammation by low and high doses of ionizing radiation: implications for benign and malign diseases. Cancer Lett. 2015; 368 (2): 230-7. DOI: https://doi. org/10.1016/j.canlet.2015.04.010
11. Di Maggio F.M., Minafra L., Forte G.I., Cammarata F.P., Lio D., Messa C., et al. Portrait of inflammatory response to ionizing radiation treatment. J. Inflamm. (United Kingdom). 2015; 12 (1): 1-11. DOI: https:// doi.org/10.1186/s12950-015-0058-3
12. Wan J., Shan Y., Fan Y., Fan C., Chen S., Sun J., et al. NFB inhibition attenuates LPS-induced TLR4 activation in monocyte cells. Mol. Med. Rep. 2016; 14 (5): 4505-10. DOI: https://doi.org/10.3892/mmr. 2016.5825
13. TFBS - Home. URL: http://tfbsdb.systemsbiology.net/ (date of access May 21, 2021)
14. Moniruzzaman M., Ghosal I., Das D., Chakraborty S.B. Melatonin ameliorates H2O2-induced oxidative stress through modulation of Erk/Akt/NFkB pathway. Biol. Res. 2018; 51 (1): 17. DOI: https://doi. org/10.1186/s40659-018-0168-5
15. Prodromou C. Regulatory mechanisms of Hsp90. Biochem. Mol. Biol. J. 2017; 3 (1): 2. DOI: https://doi.org/10.21767/2471-8084.100030
16. Yan M., Hou M., Liu J., Zhang S., Liu B., Wu X., et al. Regulation of iNOS-derived ROS generation by HSP90 and Cav-1 in porcine reproductive and respiratory syndrome virus-infected swine lung injury. Inflammation. 2017; 40 (4): 1236-44. DOI: https://doi.org/10.1007/s10753-017-0566-9
17. Zhang C., Yang Y., Zhou X., Yang Z., Liu X., Cao Z., et al. The NS1 protein of influenza a virus interacts with heat shock protein Hsp90 in human alveolar basal epithelial cells: Implication for virus-induced apoptosis. Virol. J. 2011; 8 (1): 1-9. DOI: https://doi.org/10.1186/1743-422X-8-181
18. Cline T.D., Beck D., Bianchini E. Influenza virus replication in macrophages: Balancing protection and pathogenesis. J. Gen. Virol. 2017; 98 (10): 2401-12. DOI: https://doi.org/10.1099/jgv.0.000922
19. Holm C.K., Rahbek S.H., Gad H.H., Bak R.O., Jakobsen M.R., Jiang Z., et al. Influenza A virus targets a cGAS-independent STING pathway that controls enveloped RNA viruses. Nat. Commun. 2016; 7 (1): 1-9. DOI: https://doi.org/10.1038/ncomms10680
20. Menachery V.D., Schäfer A., Burnum-Johnson K.E., Mitchell H.D., Eisfeld A.J., Walters K.B., et al. MERS-CoV and H5N1 influenza virus antagonize antigen presentation by altering the epigenetic landscape. Proc. Natl Acad. Sci. USA. 2018; 115 (5): E1012-21. DOI: https://doi. org/10.1073/pnas.1706928115
21. Tanaka A., To J., O'Brien B., Donnelly S., Lund M. Selection of reliable reference genes for the normalisation of gene expression levels following time course LPS stimulation of murine bone marrow derived macrophages. BMC Immunol. 2017; 18 (1): 43. DOI: https://doi.org/10.1186/ s12865-017-0223-y
22. Liu L., Zhou J., Wang Y., Mason R.J., Funk C.J., Du Y. Proteome alterations in primary human alveolar macrophages in response to influenza A virus infection. J. Proteome Res. 2012; 11 (8): 4091-101. DOI: https://doi.org/10.1021/pr3001332
23. Qin Y., Yu M., Zhou L., Jiang L., Huang M. Durable response to combination radiotherapy and immunotherapy in EP-resistant lung large-cell neuroendocrine carcinoma with B2M and STK11 mutations: a case report. Immunotherapy. 2020; 12 (4): 223-7. DOI: https://doi.org/10.2217/ imt-2019-0166
24. Nomura T., Huang W.C., Zhau H., Josson S., Mimata H., Chung L. B2-microglobulin-mediated signaling as a target for cancer therapy. Anticancer Agents Med. Chem. 2014; 14 (3): 343-52. DOI: https://doi.org/10. 2174/18715206113139990092
25. Reits E.A., Hodge J.W., Herberts C.A., Groothuis T.A., Chakraborty M., Wansley E.K., et al. Radiation modulates the peptide repertoire, enhances MHC class I expression, and induces successful antitumor immunotherapy. J. Exp. Med. 2006; 203 (5): 1259-71. DOI: https:// doi.org/10.1084/jem.20052494
26. Biondillo D.E., Konicek S.A., Iwamoto G.K. Interferon-y regulation of interleukin 6 in monocytic cells. Am. J. Physiol. Lung Cell. Mol. Physiol. 1994; 267 (5): 564-8. DOI: https://doi.org/10.1152/ ajplung.1994.267.5.l564
27. Groves A.M., Johnston C.J., Williams J.P., Finkelstein J.N. Role of infiltrating monocytes in the development of radiation-induced pulmonary fibrosis. Radiat. Res. 2018; 189 (3): 300. DOI: https://doi.org/10.1667/ RR14874.1
28. Tu M.M., Abdel-Hafiz H.A., Jones R.T., Jean A., Hoff K.J., Duex J.E., et al. Inhibition of the CCL2 receptor, CCR2, enhances tumor response to immune checkpoint therapy. Commun. Biol. 2020; 3 (1): 1-12. DOI: https://doi.org/10.1038/s42003-020-01441-y
Сведения об авторах
Кокинос Елена Константиновна - инженер химико-биологического кластера (СКАМТ), Университет ИТМО Минобрнауки России, Санкт-Петербург, Российская Федерация
E-mail: kokinos@scamt-itmo.ru https://orcid.org/0000-0003-3539-4380
Кузьмина Дарья Олеговна - студент, химико-биологический кластер (СКАМТ), Университет ИТМО Ми-нобрнауки России, Санкт-Петербург, Российская Федерация
E-mail: kuzminad16@gmail.com https://orcid.org/0000-0002-0045-0410
Кучур Олег Александрович - мл. науч. сотр. химико-биологического кластера (СКАМТ), Университет ИТМО Минобрнауки России, Санкт-Петербург, Российская Федерация E-mail: kuchur@scamt-itmo.ru https://orcid.org/0000-0002-3700-4131
Цымбал Сергей Алексеевич - мл. науч. сотр. химико-биологического кластера (СКАМТ), Университет ИТМО Минобрнауки России, Санкт-Петербург, Российская Федерация E-mail: zimbal@scamt-itmo.ru https://orcid.org/0000-0003-2230-6767
Василичин Владислав Александрович - инженер химико-биологического кластера (СКАМТ), Университет ИТМО Минобрнауки России, Санкт-Петербург, Российская Федерация E-mail: vasilichin.vlad@mail.ru
Галочкина Анастасия Валерьевна - канд. биол. наук, вед. науч. сотр. лаб. химиотерапии вирусных инфекций НИИ гриппа им. А.А. Смородинцева Минздрава России; инженер химико-биологического кластера (СКАМТ), Университет ИТМО Минобрнауки России, Санкт-Петербург, Российская Федерация E-mail: nastyagalochkina@yandex.ru https://orcid.org/0000-0002-3208-8006
Завирский Александр Владимирович - канд. мед. наук, преподаватель каф. военной токсикологии и медицинской защиты, ВМА им. С.М. Кирова Минобороны России, Санкт-Петербург, Российская Федерация E-mail: zyaver@mail.ru https://orcid.org/0000-0002-2456-2409
29. Mikhalkevich N., O'Carroll I.P., Tkavc R., Lund K., Sukumar G., Dalgard C.L., et al. Response of human macrophages to gamma radiation is mediated via expression of endogenous retroviruses. PLoS Pathogens. 2021; 17 (2): e1009305. DOI: https://doi.org/10.1371/JOURNAL.PPAT.1009305
30. Osman A.M., Sun Y., Burns T.C., He L., Kee N., Oliva-Vilarnau N., et al. Radiation triggers a dynamic sequence of transient microglial alterations in juvenile brain. Cell Rep. 2020; 31 (9): 107699. DOI: https://doi. org/10.1016/j.celrep.2020.107699
Authors' information
Elena K. Kokinos - Engineer of Chembio Cluster (SCAMT), ITMO University of the MSHE of Russia, Saint Petersburg, Russian Federation E-mail: kokinos@scamt-itmo.ru https://orcid.org/0000-0003-3539-4380
Daria O. Kuzmina - Student, Chembio Cluster (SCAMT), ITMO University of the MSHE of Russia, Saint Petersburg, Russian Federation E-mail: kuzminad16@gmail.com https://orcid.org/0000-0002-0045-0410
Oleg A. Kuchur - Junior Researcher of Chembio Cluster (SCAMT), ITMO University of the MSHE of Russia, Saint Petersburg, Russian Federation E-mail: kuchur@scamt-itmo.ru https://orcid.org/0000-0002-3700-4131
Sergey A. Tsymbal - Junior Researcher of Chembio Cluster (SCAMT), ITMO University of the MSHE of Russia, Saint Petersburg, Russian Federation E-mail: zimbal@scamt-itmo.ru https://orcid.org/0000-0003-2230-6767
Vladislav A. Vasilichin - Engineer of Chembio Cluster (SCAMT), ITMO University of the MSHE of Russia, Saint Petersburg, Russian Federation E-mail: vasilichin.vlad@mail.ru
Anastasia V. Galochkina - PhD, Leader Researcher of Lab. of Antiviral Chemotherapy, A.A. Smorodintsev RII of the MOH of Russia; Engineer, Chembio Cluster (SCAMT), ITMO University of the MSHE of Russia, Saint Petersburg, Russian Federation E-mail: nastyagalochkina@yandex.ru https://orcid.org/0000-0002-3208-8006
Alexander V. Zavirskyi - PhD, Docent of the Dept. of Military Toxicology and Medical Defense, S.M. Kirov MMA of the MOD of Russia, Saint Petersburg, Russian Federation
E-mail: zyaver@mail.ru https://orcid.org/0000-0002-2456-2409
Башарин Вадим Александрович - д-р мед. наук, проф., нач. каф. военной токсикологии и медицинской защиты, ВМА им. С.М. Кирова Минобороны России, Санкт-Петербург, Российская Федерация E-mail: basharin1@mail.ru https://orcid.org/0000-0001-8548-6836
Штро Анна Андреевна - канд. биол. наук, зав. лаб. химиотерапии вирусных инфекций НИИ гриппа им. А. А. Смородинцева Минздрава России; науч. сотр. химико-биологического кластера (СКАМТ), Университет ИТМО Минобрнауки России, Санкт-Петербург, Российская Федерация
E-mail: anna.shtro@influenza.spb.ru https://orcid.org/0000-0002-2295-1881
Штиль Александр Альбертович - д-р мед. наук, зав. лаб. механизмов гибели опухолевых клеток НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина Минздрава России, Санкт-Петербург, Российская Федерация E-mail: shtilaa@yahoo.com https://orcid.org/0000-0001-6469-0221
Духинова Марина Сергеевна - канд. биол. наук, вед. науч. сотр. химико-биологического кластера (СКАМТ), Университет ИТМО Минобрнауки России, Санкт-Петербург, Российская Федерация E-mail: dukhinova@scamt-itmo.ru,
marina.dukhinova@gmail.com https://orcid.org/0000-0001-8118-9439
Vadim A. Basharin - MD, Prof., Head of the Dept. of Military Toxicology and Medical Defense, S.M. Kirov MMA of the MOD of Russia, Saint Petersburg, Russian Federation
E-mail: basharin1@mail.ru https://orcid.org/0000-0001-8548-6836
Anna A. Shtro - PhD, Head of Lab. of Antiviral Chemotherapy, A.A. Smorodintsev RII of the MOH of Russia; Research Scientist, Chembio Cluster (SCAMT), ITMO University of the MSHE of Russia, Saint Petersburg, Russian Federation E-mail: anna.shtro@influenza.spb.ru https://orcid.org/0000-0002-2295-1881
Alexander A. Shtil - MD, Head of Lab. of Cancer Cell Death Mechanisms, «N.N. Blokhin NMRCO» of the MOH of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: shtilaa@yahoo.com https://orcid.org/0000-0001-6469-0221
Marina S. Dukhinova - PhD, Leader Researcher of Chembio Cluster (SCAMT), ITMO University of the MSHE of Russia, Saint Petersburg, Russian Federation E-mail: dukhinova@scamt-itmo.ru,
marina.dukhinova@gmail.com https://orcid.org/0000-0001-8118-9439
