CC BY
56ИССЛЕДОВАНИЕ СВОЙСТВ ВЕЩЕСТВ И ПРОДУКЦИИ АПК
УДК 634.86:547.973:577.127.4
Фенольный комплекс столового сорта винограда Молдова и его изменения при длительном хранении
С. В. ЛЕВЧЕНКО, канд. с.-х. наук; В. А. БОЙКО, канд. с.-х. наук; И. А. ВАСЫЛЫК, канд. с.-х. наук; Д. Ю. БЕЛАШ
ВННИИ винограда и пина «Магарач» РАН, г. Ялта
Введение. Одним из биохимических показателей, характеризующих товарную и биологическую ценность винограда, является содержание веществ фенольной природы [1]. Фенольные соединения являются важными участниками физиологических и биохимических изменений, происходящих в течение вегетации виноградного растения: регулируют пролиферацию и апоптоз растущих частей растения, принимают участие в процессе фотосинтеза и могут связывать ионы тяжелых металлов в устойчивые комплексы, препятствуют проникновению патогенов и потере воды при механических повреждениях [2—5]. Основной особенностью фенольных соединений винограда является их биологическая активность, и наиболее важными фенольными соединениями, обладающими выраженной биологической активностью, являются антоцианы, процианидины, катехины и флавонолы [6—8]. Формирование качества винограда напрямую связано с содержанием этих компонентов и их превращением в процессе хранения и переработки, так как известно, что в процессе хранения винограда полифенолы выступают в качестве субстратов окислительных ферментов [9— 11 ]. В настоящее время широко изучен фенольный комплекс сортов технического направления, произрастающих в Крыму [12-15], однако состав и содержание фенольных соединений и их изменение при хранении столовых сортов винограда практически не изучены. В связи с этим целью нашей работы является изучение качественного и количественного состава фенольных соединений и динамики их трансформации в процессе хранения столовых сортов винограда на примере сорта Молдова.
Материалы и методы. Экспериментальные исследования проводились на базе филиала «Морское» ПАО «Массандра» и отдела хранения и переработки винограда и плодоовощной продукции ФГБУН «ВННИИ-ВиВ «Магарач» РАН» в 2016—2017 гг. Хранение винограда проводилось в промышленном холодильнике с аммиачной системой охлаждения. Идентификация фенольных соединений проводилась на хроматографе Shimadzu LC 20 Prominence с диодно-матричным детектором ультрафиолетового и видимого диапазона. Объем пробы 2 мкл, детектирование при 280 нм, 310 нм, 330 нм, 525 нм с частотой сканирования 3 Гц. Элюиро-вание производили в градиентном режиме возрастания доли раствора В (смесь AcCN: МеОН: НСЮ4 в соотношении 40:40:20, рН 2,5) в смеси с раствором А (водный
раствор НСЮ4 рН 1,8) в течение 80 мин. Идентификацию производили по спектральным характеристикам и временам выхода в соответствии со стандартными образцами [16—18]. Для выявления значимых отличий фенольного комплекса исследуемых объектов использовали методы дисперсионного и дискриминантного анализов. Выявление статистически значимых различий между дифференцирующими группами проводили по критерию Стъюдента или Манна-Уитни при вероятности ошибочного результатар < 0,01 мр < 0,05. Математическую обработку данных проводили с использованием пакета статистических программ SPSS Statistics 6.0.
Результаты исследований. Наибольшее количество веществ антоцианового ряда у сорта Молдова содержится в кожице винограда, данный показатель составил в свежих ягодах 13 874,16мг/кг.
Флавонолы в кожице находятся в пределах 278,34мг/кг, а процианидины и катехины — 4050,15 и 82,23 мг/кг соответственно. Идентифицированы стильбеновые соединения, их концентрация составила 19,5 мг/кг, при этом в кожице — 16,1 мг/кг, или 82,8%. Исследование свежего винограда показало, что в семени локализована основная часть катехинов (95,5%), оксикоричных кислот — 72,7%, а проциани-динов — 24,5% от общего содержания этих веществ в структурных частях ягоды. К концу хранения отмечено увеличение концентрации всех компонентов фенольного комплекса на 10% и выше, что обусловлено большим преобладанием скорости процессов увяливания ягоды над процессами окислительного распада данных соединений. Отмечено также интенсивное накопление веществ стильбенового ряда в процессе хранения, что является реакцией винограда на микробиологические повреждения при хранении (табл. 1).
Идентифицированные вещества антоциановой группы сорта Молдова представляют собой производные антоцианидинов, гликозидированные по 3-му положению и дигликозидированные по положениям 3 и 5, а также их производные, ацилированные по 6-му положению глюкозы уксусной или п-кумаровой кислотой (табл. 2).
В результате исследований было установлено, что вещества антоциановой группы в ягодах винограда в основном представлены моно- и дигликозидами маль-видина. Концентрация мальвидин-З-О-р-О-гликозида в свежих ягодах составила 5510мг/кг, или 39,4%, доля
Таблица 1
Состав фенольных веществ винограда сорта Молдова, мг/кг
Компоненты фенольного профиля Вариант Структурные части ягоды
кожица мякоть семя
Антоцианы Свежий виноград Конец хранения 13 874,16 15 315,56 34,50 30,52 75,86 91,24
Оксикоричные кислоты Свежий виноград Конец хранения 50,97 246,38 0,78 1,21 137,90 431,20
Флавонолы Свежий виноград Конец хранения 278,34 519,29 1,24 0,44 17,61 44,69
Катехины (катехин и эпикатехин) Свежий виноград Конец хранения 82,23 147,99 0,00 0,00 1762,40 5120,49
Процианидины (димерные формы флаванолов) Свежий виноград Конец хранения 4050,15 4671,20 14,35 11,28 1316,00 2955,58
Стильбеновые соединения Свежий виноград Конец хранения 16,11 21,21 1,40 1,07 1,95 1,76
Таблица 2 Содержание антоцианов в ягодах винограда сорта Молдова
Массовая доля компонентов, мг/кг Свежий виноград Конец хранения
Дельфинидин-3,5-0-р-0-дигликозид 3,61 2,73
Цианидин-3,5-0-р-0-дигликозид 47,99 73,04
Петунидин-3,5-0-р-0-дигликозид 0,0 ОО
Дельфинидин-З-О-р-О-гликозид 2868,72 3161,5
Пеонидин-3,5-0-р-0-дигликозид 0,45 2,08
Цианидин-З-О-З-О-гликозид 255,78 241,62
Мальвидин-3,5-0-р-0-дигликозид 3241,11 3593,03
Петунидин-З-О-р-О-гликозид 9,4 5,26
Пеонидин-З-О-р-Э-гликозид 464,37 473,29
Мальвидин-З-О-р-О-гликозид 5510,44 6082,01
Дельфинидин-З-О-р-О-гликозид-б'-О-ацетат 32,24 34,38
Мальвидидин-З-О-р-Э-гликозид-б'-О-ацетат 614,03 722,29
Мальвидин-З-О-р-Р-гликозид-б'-О-п-кумарат 937,04 1278,71
I антоцианов 13985,20 15437,32
Mean 1075,78 1205,38
f-value -0,182
df 24
Р 0,86
Std. dev. 1722,25 1902,92
F-ratio Variances 1,22
P Variances 0,74
Примечание. Mean — среднее значение в группе; i-value — значение рассчитанного программой f-критерия Стьюдента; df— число степеней свободы; Р— вероятность справедливости гипотезы о том, что сравниваемые средние значения не различаются; Std. dev — стандартное отклонение выборки; F-ratio Variances — значение F-критерия Фишера.
мальвидин-3,5-0-Р-0-дигликозида — 23,1%, мальви-дин-З-О-р-О-гликозид-б'-О-п-кумарата — 6,7%. Также в высокой концентрации (2868,72мг/кг, или 20,5%) идентифицирован дельфинидин-З-О-Р-О-гликозид. Отмечена тенденция увеличения концентрации антоцианов в процессе хранения.
В табл. 3 представлены данные о содержании димер-ных форм флаванолов. Установлено, что основными флаванолами сорта Молдова являются Процианидин В7 (3747,54мг/кг) и Процианидин В5 (679,36мг/кг). За период хранения происходит существенное увеличение содержания процианидинов, массовая доля
основного компонента Процианидина В7 возросла на 23%, до 4636,5 мг/кг. Накопление процианидинов при хранении винограда обусловлено процессами лигни-фикации оболочки семени. Преобладание суммарной концентрации димерных форм флаван-3-олов над мономерными связанно с длительным вегетационным периодом сорта Молдова, который сопряжен с более глубоким протеканием полимеризационных процессов в виноградной ягоде.
В процессе проведенного дисперсионного анализа можно сделать вывод, что статистически значимые
различия содержания антоцианов и процианидинов
Таблица 3
Содержание димерных форм флаванолов в ягодах винограда сорта Молдова
Компонент Массовая доля, мг/кг
свежий виноград конец хранения
Процианидин В3 Катехин-4 -~> 8-катехин 105,59 240,26
Процианидин В, Эпикатехин-4 -> 8-катехин 127,16 243,38
Процианидин В8 Катехин-4 -> 6-эпикатехин 105,57 144,33
Процианидин В4 Катехин-4 —> 8-эпикатехин 126,75 344,16
Процианидин В6 Эпикатехин-4 6-эпикатехин 332,89 739,3
Процианидин В2 Эпиатехин-4 -»8-эпикатехин 155,64 139,4
Процианидин В7 Катехин-4 6-катехин 3747,54 4636,53
Процианидин В5 Эпикатехин-4 6-катехин 679,36 1150,71
Г процианидинов 5380,50 7638,06
Mean 672,56 954,76
f-value -0,40
df 14
Р 0,69
Std. dev. 1257,91 1528,36
F-ratio Variances 1,47
P Variances 0,62
между началом и концом хранения отсутствуют, так как вероятность справедливости гипотез Р > 0,05. Значение Б-критерия Фишера, с помощью которого проверяется гипотеза о равенстве дисперсий в сравниваемых выборках для антоцианов, составило 1,22; для процианидинов — 1,47.
Выводы. Проведенные исследования позволили охарактеризовать состав комплекса фенольных соединений столового сорта Молдова, идентифицировано пять групп соединений (антоцианы, флаванолы, окси-
коричные кислоты, флавонолы и стильбеновые соединения). Установлено, что основными компонентами фенольного комплекса винограда сорта Молдова являются антоцианы мальвидин-3-0-|3-0-гликозид и мальвидин-3,5-0-3-0-дигликозид. При Р > 0,05 статистически значимые различия содержания антоцианов и процианидинов между началом и концом хранения отсутствуют. Определены особенности трансформации комплекса фенольных соединений при длительном хранении (150 сут).
Литература
1. Модонкаева, А. Э. Особенности качественного и количественного состава биологически активных веществ фенольной природы столового винограда, как важнейшая характеристика его биологического потенциала / А. Э. Модонкаева [и др.] // Виноградарство и вшоробс-тво. Межведомственный тематический научный сборник. - Вып. 49. - 2012. - С. 139-148.
2. Модонкаева, А. Э. Сортовые особенности качественного и количественного состава фенольных веществ основных вегетативных органов виноградного куста / А. Э. Модонкаева [и др.] // «Магарач». Виноградарство и виноделие. - 2012. - №2. - С. 11-14.
3. Bourzeix, М. Etude des catechines et des procianidols de la grappe de raisin du vin deautres derives de la vigue / M. Bourzeix, D. Weyland, N. Heredia // Bull. О. I. V. — 1986.-№59.-P. 1174-1254.
4. Bombardelli, E. Vitis vinifera L. / E. Bombardelli, P. Moraz-zoni // Fitoterapia. - 1995. - LXVI. - №4. - P. 291-317.
5. V.A.P. Freitas Characterization of Oligomeric and Polymeric Procyanidins from Grape Seed by Liquid Secondary ion
Mass Spectrometry/V. A. P. Freitas, Y. Glories, G. Borqeois
References
1. Modonkaeva, A. Je. Osobennosti kachestvennogo i kolichest-vennogo sostava biologicheski aktivnyh veshhestv fenol'noj prirody stolovogo vinograda, kak vazhnejshaja harakteristika ego biologicheskogo potencíala / A. Je. Modonkaeva [i dr.] // Vinogradarstvo i vinorobstvo. Mezhvedomstvennyj temat-icheskij nauchnyj sbornik. — Vyp. 49. — 2012. — S. 139— 148.
2. Modonkaeva, A. Je. Sortovye osobennosti kachestvennogo i kolichestvennogo sostava fenol'nyh veshhestv osnovnyh veg-etativnyh organov vinogradnogo kusta / A. Je. Modonkaeva [1 dr.] // «Magarach». Vinogradarstvo i vinodelie. — 2012. — №2.-S. 11-14.
3. Bourzeix, M. Etude des catechines et des procianidols de la grappe de raisin du vin deautres derives de la vigue / M. Bourzeix, D. Weyland, N. Heredia // Bull. O. I. V. -1986. — №59. — R. 1174-1254.
4. Bombardelli, E. Vitis vinifera L. / E. Bombardelli, P. Moraz-zoni // Fitoterapia. - 1995. - LXVI. - №4. - P. 291-317.
5. V. A.P. Freitas Characterization of Oligomeric and Polymeric Procyanidins from Grape Seed by Liquid Secondary ion Mass Spectrometry/V. A. P. Freitas, Y. Glories, G. Borqeois
[et al.] // Phytochemistry. - 1998. - №49 (5). - P. 1435-1441.
6. Авидзба, A. M. Биологическая активность продуктов переработки сортов винограда новой селекции / А. М. Авидзба [и др.] // Виноделие и виноградарство. — 2007. — №6. -С. 26-28.
7. Левченко, С. В. Специфичность фенольного комплекса сортов винограда сложной генетической структуры / С. В. Левченко [и др.] // «Магарач». Виноградарство и виноделие». — 2009. — № 2. — С. 9-12.
8. Маркосов, В. А. Биологическая активность вин, производимых в Краснодарском крае / В. А. Маркосов, H. М. Агеева, P.A. Ханферян // Виноградарство и виноделие. - 2010. - № 1. - С. 35-37.
9. Остроухова, Е. В. Оксидазная активность винограда: динамика в ходе настаивания мезги и роль в формировании фенольного комплекса сусла // «Магарач». Виноградарство и виноделие. — 2011. — № 2. — С. 16-18.
10.Модонкаева, А. Э. Изучение активности окислительных ферментов столового винограда при хранении в связи с внекорневой подкормкой / А. Э. Модонкаева, В. А. Бойко // Виноградарство и виноделие. — Ялта, 2011. — T. XLI. — Ч. 1,-С. 50-52.
11. Абдуллабекова, Д. А. Хранение сорта Молдова при различных режимах / Д. А. Абдуллабекова [и др.] // Виноделие и виноградарство. — 2014. — № 1. — С. 43-45.
12.Levchenko, S. V. Phenolic compounds in the Crimean autochthonous grape varieties / S.V. Levchenko [et al.] // Fruits for the Future Book of Abstracts. — 2017. — P. 50.
13.Остроухова, E.B. Технологическая оценка винограда красных сортов из разных природно-климатических зон Крыма / Е. В. Остроухова, И. В. Пескова, П. А. Пробей-голова // «Магарач». Виноградарство и виноделие. —
2014,-№2.-С. 21-23.
М.Аристова, Н. И. Исследование виноматериала из технического сорта винограда новой селекции по составу флавоидных и нефлавоноидных форм полифенолов в условиях южного берега Крыма / Н.И. Аристова // Информация как двигатель научного прогресса. Сборник статей Международной научно-практической конференции. — 2016. — С. 26—29.
15.Пескова, И. В. Фенольный комплекс виноматериалов из винограда красных сортов, произрастающих в Крыму / И. В. Пескова [и др.] // Плодоводство и виноградарство юга России. - 2016. - №38 (02). - С. 62-67.
16. Аппазова, H. Н. К вопросу оптимизации пробоподготов-ки и метода анализа биологически активных веществ фенольной природы столового винограда / Н. Аппазова [и др.] // Бюллетень Государственного Никитского ботанического сада. - 2011. - № 103. - С. 113-116.
17. Модонкаева, А. Э. К вопросу оптимизации процесса разделения антоциановых пигментов столового винограда / А.Э. Модонкаева, В.А. Бойко, H.H. Аппазова// Сор-товивчення та охорона прав на сорти рослин. — 2012. — №3(17).-С.40-41.
18.Модонкаева, А. Э. Методические рекомендации по оценке столовых сортов винограда / А. Э. Модонкаева [и др.] — Ялта, 2012. — 62 с.
[et al.] // Phytochemistry. — 1998. — №49 (5). — R. 1435— 1441.
6. Avidzba, A. M. Biologicheskaja aktivnost' produktov pere-rabotki sortov vinograda novoj selekcii / A. M. Avidzba [i dr.] // Vinodelie i vinogradarstvo. — 2007. — № 6. — S. 26-28.
7. Levchenko, S. V. Specifichnost' fenol'nogo kompleksa sortov vinograda slozhnoj geneticheskoj struktury / S. V. Levchenko [i dr.] // «Magarach». Vinogradarstvo i vinodelie». — 2009. — №2.-S. 9-12.
8. Markosov, V.A. Biologicheskaja aktivnost'vin, proizvodimyh v Krasnodarskom krae / V.A. Markosov, N.M. Ageeva, R. A. Hanfetjan // Vinogradarstvo i vinodelie. — 2010. — №1,-S. 35-37.
9. Ostrouhova, E. V. Oksidaznaja aktivnost1 vinograda: dina-mika v hode nastaivanija mezgi i roi' v formirovanii fenol'nogo kompleksa susla // «Magarach». Vinogradarstvo i vinodelie. - 2011. - №2. - S. 16-18.
10. Modonkaeva, A. Je. Izuchenie aktivnosti okislitel'nyh fermen-tov stolovogo vinograda pri hranenii v svjazi s vnekornevoj podkormkoj / A.Je. Modonkaeva, V.A. Bojko // Vinogradarstvo i vinodelie. — Jalta, 2011. — T. XLI. — Ch. 1. — S. 50-52.
11.Abdullabekova, D.A. Hranenie sorta Moldova pri razlichnyh rezhimah / D.A. Abdullabekova [i dr.] // Vinodelie i vinogradarstvo. - 2014. - № 1. - S. 43-45.
12. Levchenko, S. V. Phenolic compounds in the Srimean autochthonous grape varieties / S. V. Levchenko [et al.] I I Fruits for the Future Book of Abstracts. — 2017. — P. 50.
13.Ostrouhova, E. V. Tehnologicheskajaocenka vinograda kras-nyh sortov iz raznyh prirodno-klimaticheskih zon Kryma / E. V. Ostrouhova, I. V. Peskova, P. A. Probejgolova // «Magarach». Vinogradarstvo i vinodelie. — 2014. — №2. — S. 21-23.
14.Aristova, N. I. Issledovanie vinomateriala iz tehnicheskogo sorta vinograda novoj selekcii po sostavu flavoidnyh i nefla-vonoidnyh form polifenolov v uslovijah juzhnogo berega Kryma / N. I. Aistova // Informacija kak dvigatel' nauch-nogo progressa. Sbornik statej Mezhdunarodnoj nauchno-prakticheskoj konferencii. — 2016. — S. 26—29.
15. Peskova, I. V. Fenol'nyj kompleks vinomaterialov iz vinograda krasnyh sortov, proizrastajushhih v Krymu / I. V. Peskova [i dr.] // Plodovodstvo i vinogradarstvo juga Rossii. — 2016. - № 38 (02). - S. 62-67.
16.Appazova, N.N. K voprosu optimizacii probopodgotovki i metoda analiza biologicheski aktivnyh veshhestv fenol'noj prirody stolovogo vinograda / N. Appazova [i dr.] // Bjul-leten' Gosudarstvennogo Nikitskogo botanicheskogo sada. —
2011, — №103. — S. 113-116.
17. Modonkaeva, A. Je. K voprosu optimizacii processa razdele-nija antocianovyh pigmentov stolovogo vinograda / A.Je. Modonkaeva, V.A. Bojko, N.N. Appazova // Sor-tovivchennja ta ohorona prav na sorti roslin. — 2012. — № 3 (17).-S. 40-41.
18. Modonkaeva, A. Je. Metodicheskie rekomendacii po ocenke stolovyh sortov vinograda / A. Je. Modonkaeva [i dr.] — Jalta,
2012.- 62 c.
Фенольный комплекс столового сорта винограда Молдова и его изменения при длительном хранении
Ключевые слова
антоцианы; оксикоричные кислоты; стильбеновые соединения; столовый виноград; фенольные вещества; флаванолы; флавонолы; хранение.
Реферат
Формирование качества винограда напрямую связано с содержанием этих компонентов и их превращением в процессе хранения и переработки, так как известно, что в процессе хранения винограда полифенолы выступают в качестве субстратов окислительных ферментов. В настоящее время широко изучен фенольный комплекс сортов технического направления, произрастающих в Крыму, однако состав и содержание фенольных соединений и их изменение при хранении столовых сортов винограда практически не изучены. В рамках проведенных исследований дана характеристика качественного и количественного состава фенольных соединений и динамики их трансформации в процессе хранения столовых сортов винограда на примере сорта Молдова. Методом высокоэффективной жидкостной хроматографии на хроматографе Shimadzu LC 20 Prominence с диодно-матричным детектором ультрафиолетового и видимого диапазона идентифицировано пять групп соединений (антоцианы, флаванолы, оксикоричные кислоты, флавонолы и стильбеновые соединения). Наибольшее количество веществ антоцианового ряда в ягодах сорта Молдова содержится в кожице винограда и составляет 13874,16мг/кг. Флавонолы в кожице находятся в пределах 278,34 мг/кг, а процианидины и катехины — 4050,15 и 82,23 мг/кг соответственно. Идентифицированы стильбеновые соединения, их концентрация составила 19,5 мг/кг, при этом в кожице — 16,1 мг/кг. Установлено, что основными компонентами фенольного комплекса винограда сорта Молдова являются антоцианы мальвидин-3-O-p-D-гликозид и мальвидин-3,5-0-(3-0-дигликозид. Установлено, что при р > 0,05 статистически значимые различия содержания антоцианов и процианидинов между началом и концом хранения отсутствуют. Отмечено интенсивное накопление веществ стиль-бенового ряда в процессе хранения, что является реакцией винограда на микробиологические повреждения при хранении.
Авторы
Левченко Светлана Валентиновна, канд. с.-х. наук;
Бойко Владимир Александрович, канд. с.-х. наук;
Васылык Ирина Александровна, канд. с.-х. наук;
Белаш Дмитрий Юрьевич
ВННИИ винограда и вина «Магарач» РАН,
298600, РФ, Республика Крым, г. Ялта, ул. Кирова, д. 31,
[email protected], [email protected], [email protected],
The Phenolic Complex of Moldova Table Grapes and Its Transformation During Long-Term Storage
Key words
anlhocyanins; oxycinnamic acids; stilbene compounds; table grapes; phenolic substances; flavanols; flavonols; storage.
Abstract
The formation of the quality of grapes is directly related to the content of these components and their transformation during storage and processing, as it is known that polyphenols act as substrates for oxidative enzymes during storage of grapes. The phenolic complex of winemaking varieties cultivated in Crimea has been widely explored, however, the composition and content of the phenolic compounds and their variation during storage of table grapes remains largely unstudied. Within the framework of research, qualitative and quantitative composition of phenolic compounds of the grapes and the dynamics of their transformation during storage was described using Moldova grapes as an example. Five groups of compounds (anthocyanins, flavanols, oxycinnamic acids, flavonols and stilbene compounds) were identified using high performance liquid chromatography method done with Shimadzu LC 20 Prominence chromato-graph with diode array detector of the ultraviolet and visible range. The greatest amount of anthocyanin substances in the berries of Moldova grapes was found in the berry skins and constituted 13,874.16 mg/kg. Skin flavonols made around 278.34 mg/kg, while procyanidins and catechins constituted 4,050.15 and 82.23 mg/kg, respectively. Stilbene compounds were identified as well. Their concentration made 19.5 mg/kg, while their concentration in the skins was 16.1 mg/kg. It was established that anthocyanins malvidin-3-O-p-D-glycoside and malvidin-3,5-0-p-D-diglycoside were the main components of the phenolic complex of Moldova grapes. It was found that when p > 0.05, there were no statistically significant differences in the content of anthocyanins and procyanidins in the beginning and at the end of storage. Intensive accumulation of stilbene-type substances during storage was registered, which was a response of grapes to microbiological damage sustained during storage.
Authors
Levchenko Svetlana Valentinovna, Candidate of Agricultural Science;
Bojko Vladimir Aleksandrovich, Candidate of Agricultural Science; Vasylyk Irina Aleksandrovna, Candidate of Agricultural Science; Belash Dmitrij Jur'evich
All-Russian National Research Institute of Viticulture
and Winemaking «Magarach» of RAS,
31 Kirov St., Yalta, Republic of the Crimea, 298600, Russia,
