CC BY
72
УДк 616-006.04-092.4/.9:б15.831.011
Z.S. Smirnova1,I.G. Meerovich1, Е.А. Lukyanets2, G.A. Meerovich3, V.M. Derkacheva2,
N.A. Oborotova1, A.A. Stratonnikov3, I. Yu. Kubasova1, L.M. Borisoval, G.K. Gerasimova1, A.P.Polozkova1, O.L. Orlova1, V.B. Loschenov3, G.N. Vorozhtzov2, A. Yu. Baryshnikov1
PHENYLTHIOSUBSTITUTED PHTHALOCYANINES AS NEW PHOTOSENSITIZERS OF NEAR-INFRARED RANGE
JN.N. Blokhin Russian Cancer Research Center RAMS, Moscow 2State Research Center "NIOPIK”, Moscow 3Natural Sciences Center of A.M. Prokhorov General Physics Institute RAS, Moscow
ABSTRACT
This work is devoted to investigation of possibility to use the liposomal forms of phenylthio derivatives of phthalocyanines as photosensitizers of near-infrared range. High selectivity of accumulation in tumor comparing to normal tissue of mice is observed for hydroxyaluminium tetra 3-phenylthiophthalocyanine. High photodynamic efficiency of liposomal drug forms of hydroxyaluminium tetra-3-phenylthiophthalocyanine and non-metal tetra-3-phenylthio-tetra 5 t buthylphthalocyanine is shown on mice bearing Erlich tumor (ELD) and lympholeucosis P 388. Liposomal forms of these substances can be used to develop new effective photosensitizers for photodynamic therapy.
Key words: photosensitizer; photodynamic therapy; PDT; fluorescence; absorbance; tumor; pharmacokinetics; phthalocyanine
3.C. Смирнова1, И.Г. Меерович1, Е.А. Лукъянец2, Г.А. Меероеич3, В.М. Деркачева2,
Н.А. Оборотова1, А.А. Стратонников3, И.Ю. Кубасова1, Л.М. Борисова1, А.П. Полозкова1, О.Л. Орлова1, Г.К. Герасимова1, В.Б. Лощеное3, Г.Н. Ворожцов2, А.Ю. Барышников1
ФЕНИЛТИОЗАМЕЩЁННЫЕ ФТАЛОЦИАНИНЫ -НОВЫЕ ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОРЫ БЛИЖНЕГО ИНФРАКРАСНОГО ДИАПАЗОНА
‘ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва 2 ФГУП "Государственный научный центр "НИОПИК”, Москва 3Центр естественно-научных исследований Института общей физики
им. А.М. Прохорова РАН, Москва
РЕЗЮМЕ
Работа посвящена исследованию возможности использования липосомальных форм фенилтиозаме-щённых фталоцианинов в качестве фотосенсибилизаторов ближнего инфракрасного диапазона. Показана высокая селективность накопления липосомальной лекарственной формы тетра-3-фенилтиофталоциа-нина гидроксиалюминия в опухолевой ткани мышей по сравнению с нормальными тканями. На опухоли Эрлиха и лимфолейкозе Р 388 выявлена высокая фотодинамическая активность липосомальных лекарственных форм тетра-3-фенилтиофталоцианина гидроксиалюминия и безметального тетра-3-фенилтио-тетра-5-и^ет-бутилфталоцианина. Липосомальные формы этих соединений могут стать основой для создания эффективных фотосенсибилизаторов для фотодинамической терапии.
Ключевые слова: фотосенсибилизатор; фотодинамическая терапия; ФДТ; флюоресценция; поглощение; опухоль; фармакокинетика; фталоцианин
ВВЕДЕНИЕ
Фотодинамическая терапия (ФДТ) и флюоресцентная диагностика (ФД) новообразований интенсивно исследуются в экспериментальной и клинической онкологии в поисках и выборе фотосенсибилизаторов (ФС) с улучшенными характеристиками. Важной характеристикой при выборе ФС, наряду с высокой фотодинамической эффективностью, является высокий коэффициент поглощения ФС в определенном спектральном диапазоне, что связано с глубиной фотодинамического воздействия на новообразование. Наиболее перспективны для флюоресцентной диагностики и фотодинамической терапии ФС с поглощением и флюоресценцией в ближнем инфракрасном диапазоне (700-800 нм), в котором собственное поглощение биологической ткани минимально [5]. Это обеспечивает возможность наиболее глубокого проникновения возбуждающего излучения в ткань и - как следствие - высокую эффективность диагностики и терапии.
В обзорах [3; 6; 10], посвященных изучению механизмов фотодинамического эффекта и выбору потенциальных агентов для ФДТ, обсуждается возможность создания ФС ближнего инфракрасного диапазона на основе производных бактери-охлорофилла, нафталоцианинов и фталоциани-нов. Фотодинамические свойства наиболее длинноволновых ФС на основе производных бактери-охлорофилла детально изучались T.J. Daugherty et al. [9; 17]. A. Scherz et al. проводили экспериментальные исследования ФДТ с использованием бак-териохлорофиллид-серина [5; 19; 22; 23] и бакте-риофеофорбида палладия [12]. Спектральный максимум поглощения этих ФС лежит в диапазонах 770-780 и 750-760 нм соответственно. В настоящее время активно изучается возможность их использования для ФДТ меланомы [22; 23], рака простаты [12] и ряда других новообразований. Однако существующая технология получения этих ФС очень сложна.
Shopova et al. [20] детально изучали в качестве ФС ближнего ИК-диапазона липосомальные лекарственные формы производных 2,3-нафталоцианина. Однако эффективность этих ФС оказалась недостаточно высокой.
ФС тексафирин лютеция с максимумом поглощения на 720 -740 нм изучался Kostenich et al. [И]. Было обнаружено, что фотодинамическая эффективность этого ФС несколько ниже по сравнению с Фотофрином и хлоринами.
Недорогие, технологичные и эффективные синтетические ФС - производные фталоцианинов - широко изучаются в экспериментальных и клинических работах, в основном с возбуждением в красном диапазоне. М. Rodgers et al. [7; 8] показали возможность создания инфракрасных ФС с максимумом поглощения около 750 нм на основе октабутил фталоцианинов. Известны также ФС ряда фосфинил-метилзамещенных фталоцианинов с поглощением в диапазоне 690-740 нм [4; 15; 16].
Мы рассмотрели возможность использования в качестве ФС ближнего инфракрасного диапазона
фенилтиозамещённых фталоцианинов (PhSPc) общей формулы:
[3 (PhS)4 5 R4 РсМ],
где R = Н, t-C4H9; М = НН, АЮН, Zn.
Наличие фенилтиогрупп в бензольных кольцах макроцикла существенно смещает длинноволновую полосу поглощения соответствующих фталоцианинов в длинноволновую область по сравнению с их незамещенными и трет-бутилзамещенными аналогами, что позволяет использовать эти соединения в качестве ФС, чувствительных в ближней ИК области спектра.
В настоящей работе изучались свойства тет-ра-3-фенилтио-фталоцианина гидроксиалюминия [3-(PhS)4-PcA10H] и безметального тетра-3-фенил-тио-тетра-5-трет-бутилфталоцианина [3-(PhS)4-5-(t-Bu)4-PcH2],
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
В качестве исходных соединений для синтеза PhSPc были использованы 3-фенилтио-фталодинит-рил [1] и З-фенилтио-5-т^ет-бутилфталодинитрил [2]. Взаимодействием 3-фенилтио-фталодинитрила с хлористым алюминием был получен 3-(PhS)4-PcA10H, а для синтеза 3-(PhS)4-5-(t-Bu)4-PcH, использовано де-металлирование действием кислот литиевого комплекса, полученного нагреванием 3-фенилтио-5-я1^ет бутил-фталодинитрила в диметиламиноэтаноле в присутствии соответствующего алкоголята лития.
Учитывая гидрофобность PhSPc, для их исследования in vivo были разработаны липосомальные композиции на основе лецитина, холестерина и кар-диолипина с молярным соотношением 12 : 6 : 1 и соотношением “общий липид: фталоцианин”, равным 15:1. Липосомы приготовляли по методу Бен-гема [13; 14] смыванием водной фазой однородной пленки, полученной упариванием хлороформного раствора смеси липидов и ФС с применением ультразвуковой соникации для уменьшения размеров везикул. Средний размер полученных липосом составлял 430-480 нм для 3-(PhS)4-PcA10H и 230-270 нм для 3-(PhS)4-5-(t-Bu)4-PcH2
Уровень накопления PhSPc в нормальной ткани (коже) и опухоли оценивали спектрально-флюоресцентным [14] и двухволоконным абсорбционным [21] методами с использованием спектроанализатора “ЛЭСА-01-Биоспек” (“Биоспек”, Россия). Для оценки селективности накопления соединений в опухоли вычисляли индекс селективности как соотношение интенсивности их флюоресценции в опухоли и коже при возбуждении He-Ne лазером с длиной волны излучения 633 нм.
Эффективность ФДТ оценивали на опухоли Эрлиха и лимфолейкозе Р-388. Опухоль Эрлиха перевивали мышам-гибридам первого поколения внутримышечно в область бедра асцитной жидкостью по 0,1 мл, содержащей 500 тыс. опухолевых клеток. ФС вводили мышам однократно внутривенно на 5-6-й день после перевивки, когда размер опухолевого узла составлял 1500-1800 мм3. Лимфолейкоз Р 388 перевивали мышам-гибридам
первого поколения ВВР1 подкожно в область бедра асцитной жидкостью по 0.1 мл, содержащей 500 тыс. опухолевых клеток. ФС в липосомальной форме вводили мышам однократно внутривенно в дозах 4 мг/кг и 10 мг/кг на 6-й день после перевивки, когда размер опухолевого узла составлял 700-800 мм3.
При проведении ФДТ опухоли облучались излучением лампового источника света Ц35-РОТ (“Био-спек”, Россия) с перестраиваемым интерференционным фильтром. Длина волны излучения в экспериментах составляла 720-800 нм, плотность мощности 250-500 мВт/см2, плотность дозы 250-600 Дж/см2. Эффективность ФС при ФДТ оценивалась по торможению роста опухоли Эрлиха и лимфолейкоза Р-388 (ТРО, %) в разные сроки наблюдения. Торможение роста опухоли (ТРО) вычисляли по формуле:
ТРО (%)-(Ук“Уо)х100,
V к
где Ук - средний объем опухолей в контрольной группе, мм3; Уо - средний объем опухолей в опытной группе, мм3.
0,25
Опытные группы формировали из 5-6, а контрольную - из 8-10 мышей.
Статистическую обработку полученных результатов проводили по методу Фишера-Стьюдента. Разницу считали достоверной при р < 0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Изучение уровня накопления фенилтиозамещенных фталоцианинов в липосомальной лекарственной форме в коже и опухоли
Исследования показали, что спектр поглощения 3-(РЬ8)4-РсАЮН в биологической ткани представляет собой узкую полосу с максимумом на 720 нм и полушириной около 40 нм (рис.1, А), а спектр флюоресценции при возбуждении Не-Ые лазером - узкую полосу с максимумом на 730 нм (рис.1, Б).
По изменению поглощения 3-(РЬ8)4-РсАЮН в солидной опухоли Эрлиха установлено, что уровень накопления этого ФС в сенсибилизированной опухолевой ткани возрастает в течение 20-30
ч, а затем начинает медленно снижаться (рис.2). Примерно такой же характер носит изменение интенсивности флюоресценции сенсибилизированной опухолевой ткани (рис. 3, табл. 1). Интенсивность флюоресценции в течение первых двух суток растет, в течение третьих и четвертых остается примерно на одном уровне, а затем снижается. Уровень накопления ФС в коже через 1 ч после его введения в дозе 4 мг/кг в 1,5-2 раза ниже, чем в опухоли, и достаточно быстро снижается до уровня, когда интенсивность его флюоресценции становится соизмеримой с аутофлюоресценцией тканей (рис.З, табл.1). Индекс селективности 3-(РЬ8)4-РсАЮН в липосомальной лекарственной форме составляет примерно 1,5 через 0,5 ч после его введения и в последующие 5 ч быстро возрастает до 6, после чего скорость роста замедляется. Через 24 ч индекс селективности составляет 6,3, за последующие двое суток достигает максимального
Длина волны, нм
1000
6 800 ,
^ і
к 1
§ 600 I
я і
4)
&
1 400
о
2 |
ч 1
6
200
600
650
700
Длина волны, нм
750
800
Рис. 1. Спектры поглощения (А) и флюоресценции (Б) опухолевой ткани мыши, сенсибилизированной тетра 3 феиилтиофталоцианином гидроксиалюминия, через 24 часа после внутривенного введения в дозе 4 мг/кг.
Полоса 633 нм на спектре флуоресценции - рассеянное излучение Не-Ие лазера
5
И
V
В
о
в
о
И
9 8 | 7
6 I
5 •
4
З і 2 1 0
0,1
1 10 Время после введения, ч
100
Рис. 2. Оптическое поглощение тетра-3-фенилтио-фталоцианина гидроксиалюминия в ткани опухоли Эрлиха в зависимости от времени после его введения в дозе 4 мг/кг
1,4 1,2 *І і І
£ 0,8 &
І °,6 І
І0’4
0,2
ОД
0,05
1000
Время, ч
Рис. 3. Зависимость интенсивности флюоресценции тетра-3-фенилтиофталоцианина гидроксиалюминия от времени после введения в дозе 4 мг/кг мышам с опухолью Эрлиха:
- ■- опухоль;
-о- нормальная ткань
значения 8,16, после чего начинает медленно снижаться.
Спектр поглощения 3-(РЬ8)4-5-(1-Ви)4-РсН2 в биологической ткани представляет собой широкую полосу в диапазоне 720-790 нм со слабо выраженными максимумами при 730-740 нм и 770-790 нм (рис.4, А).
В спектре флюоресценции этого ФС при возбуждении Не-№ лазером наблюдаются 2 полосы со спектральными максимумами на 740 и 810 нм (рис.4, Б).
Изучение интенсивности полосы флюоресценции 3-(РЬ8)4-5-(1-Ви)4-РсН2 со спектральным максимумом на 740 нм на мышах с опухолью Эрлиха показало, что ее значения в опухоли и коже максимальны через 0,5 ч после введения ФС и затем монотонно снижаются с достаточно высоким клиренсом (рис. 5, табл. 2).
650
300
700 750 800
Длина волны, нм
850
Длина волны, нм
Рис. 4. Спектры поглощения (А) и флюоресценции (Б) безметального тетра-фенилтио-тетра-5-трет-бутилф-талоцианина в опухолевой ткани мыши через 24 ч после внутривенного введения в дозе 4 мг/кг:
Полоса 633 нм на спектре флуоресценции - рассеянное излучение Не-Ые лазера
Таблица 1
Зависимость интенсивности флюоресценции 3-(РЬ8)4-РсАЮН от времени после его введения в липосомальной лекарственной форме в дозе 4мг/кг, опухоль Эрлиха
Время, ч Интенсивность флюоресценции, у.е. Индекс селективности
опухоль кожа
0,5 0,39 0,26 1,50
3 0,50 0,14 3,58
5 0,74 0,12 6,19
24 0,85 0,14 6,29
48 1,00 0,13 7,53
72 1,01 0,13 8,04
96 1,02 0,12 8,16
192 0,82 0,13 6,56
1,8 1,6
1 4 Г
| 1,2 \
! 1 |°,8 | °>6 О
0,2 0
0,1 1
Рис. 5. Зависимость интенсивности флюоресценции безметального тетра-фенилтио-тетра-5-трет-бутилф-талоцианина от времени после введения фотосенсибилизатора в дозе 10 мг/кг:
-щ- опухоль;
-о- нормальная ткань
1000
Исследование фотодинамической эффективности фенилтиозамещенных фталоцианинов в липосомальной лекарственной форме
ФДТ с использованием 3-(РЬ8)4-РсАЮН в липосомальной лекарственной форме в дозе 4 мг/кг проводилась на опухоли Эрлиха через 3 ч после введения ФС, а на мышах с лимфолейкозом Р-388 -через 17 ч. В течение 1 сут после облучения на поверхности облученной опухоли формировался некротический струп. При изучении фотодинамической активности липосомальной лекарственной формы 3-(РЬ8)4-РсАЮН показано, что ФС тормозит рост опухоли Эрлиха на 80 % и лимфолейкоза Р-388 на 84% (табл. 3).
Как показали предварительные эксперименты, фотодинамическая активность 3-(РЬ8)4-5-(1>Ви)4-РсН2 проявляется только при облучении в спектральном диапазоне 730-740 нм. ФДТ с использованием липосомальной формы этого ФС проводилась на мышах с опухолью Эрлиха через 1,5-3 ч после введения. После ФДТ с этим ФС в течение 1 сут на
Таблица 3
Фотодинамическая активность липосомальной лекарственной формы 3-(РЬ8)4-РсАЮН
Опухоль Группа ТРО, %' (дни после облучения)
1-3 5-7 8-10 12-14 17 21 24
ФС в дозе 4мг/кг + облучение 41 49 62* 80* 77* 80* 78*
Эрлиха ФС в дозе 4мг/кг без облучения 12 +10 +21 +12 +14 0 4
Облучение 21 29 17 21 18 22 23
Р-388 ФС в дозе 4мг/кг + облучение 21 74* 84* 84* - - -
Примечания. Режим облучения опухоли Эрлиха: длина волны излучения 730 нм, плотность мощности - 300 мВт/см2, время облучения - 20 мин (плотность дозы 360 Дж/см2); Режим облучения Р-388: длина волны излучения 730 нм, плотность мощности - 400 мВт/см2, время облучения - 20 мин (плотность дозы 480 Дж/см2);
* - р < 0,05 по отношению к контролю;
знак «+» означает стимуляцию роста опухоли.
Таблица 4
Изучение фотодинамической активности липосомальной лекарственной формы 3-(РЬ8)4-5-^-Ви)4-РсН2, опухоль Эрлиха
Доза, мг/кг ТРО, % (дни после облучения)
3 7 10 15 18 21 24
4 18 33 53 74 87 91 96*
10 15 35 57 74 85 90 96**
Примечания.
Режим облучения: длина волны излучения 730 нм, плотность мощности - 220 мВт/см2, время облучения - 20 мин (плотность дозы 260 Дж/см2).
* В группе излечено 2/6 мышей (33%);
** В группе излечено 4/6 мышей (67%)_______________________________________________________________________
Таблица 2
Зависимость интенсивности флюоресценции 3-(РЬ8)4-5-(*-Ви)4-РсН2 от времени после его введения в липосомальной лекарственной форме в дозе 10 мг/кг, опухоль Эрлиха
Время, ч Интенсивность флюоресценции, у.е. Индекс селективности
опухоль кожа
0,5 1,06 1,36 0,78
1,5 0,78 0,76 1,03
24 0,35 0,34 1,03
120 0,08 0,04 2,00
Индекс селективности 3-(РЬ8)4-5-(1>Ви)4-РсН2 постепенно возрастает, достигая через 1,5 ч значения
1, а к 5 суткам - значения 2 (см. табл. 2).
поверхности облученной опухоли формируется некротический струп. Рост опухоли Эрлиха после ФДТ тормозится на 96% с излечением мышей в 33-67 % случаев (табл. 4).
ВЫВОДЫ
1. Тетра-З-фенилтиофталоцианин гидроксиа-люминия в липосомальной лекарственной форме обладает как фотосенсибилизатор следующими свойствами:
• высоким поглощением в спектральном диапазоне 710-740 нм, которое намного превышает собственное поглощение несенсибилизированной ткани;
• высоким индексом селективности, достигающим 8;
• высокой фотодинамической эффективностью: тормозит рост опухоли Эрлиха на 80 % и лим-фолейкоза Р 388 на 84 %.
Фотодинамическую терапию с использованием 3-(PhS)4-PcA10H наиболее целесообразно проводить через 15-30 ч после введения, когда концентрация ФС в опухоли и селективность его накопления по сравнению с нормальными тканями близки к максимальным значениям.
Высокая селективность накопления 3-(PhS)4-PcA10H в опухоли и особенности спектра его флюоресценции при возбуждении He-Ne лазером позволяют предположить возможность использования этого ФС и для флюоресцентной диагностики.
2. Безметальный тетра-З-фенилтио-тетра-5-трет-бутилфталоцианин в липосомальной лекарственной форме характеризуется как фотосенсибилизатор следующими свойствами
• поглощением в спектральном диапазоне 720-750 нм, превышающим собственное поглощение несенсибилизированной ткани;
• высокой скоростью выведения из кожи;
• высокой фотодинамической активностью: торможение роста опухоли Эрлиха составляет 96%, при этом полное излечение животных наблюдается в 1/3-2/3 случаев.
Т етра-3-фенилтиофталоцианин гидроксиалюми-ния и безметальный тетра-З-фенилтио-тетра-5-трет-бутилфталоцианин могут быть рекомендованы для углубленных предклинических исследований.
Работа выполнена в рамках научно-технической программы "Разработка и внедрение в медицинскую практику новых методов диагностики и лечения онкологических и других заболеваний” при финансовой поддержке Правительства г. Москвы и Министерства промышленности, науки и технологий Российской Федерации.
ЛИТЕРАТУРА
1. Деркачева В.М., Лукъянец Е.А. Фталоцианины и родственные соединения. XVIII. Фенокси- и фенилтиоза-мещенные фталоцианины // Журнал общей химии. -1980. - Т. 50, № 10. - С. 2313-2318.
2. Долотова О.В., Бундина Н.И., Деркачева В.М. и др. Фталоцианины и родственные соединения. XXXV. Синтез и координационная химия замещенных фтало-
цианинов марганца // Журнал общей химии. - 1992. -Т. 62, № 9. - С. 2064-2075.
3. Красновский А.А., мл. Синглетный молекулярный кислород и первичные механизмы фотодинамического действия оптического излучения, в кн.: Итоги науки и техники. Современные проблемы лазерной физики, Т.
3, Москва, ВИНИТИД990. - С. 63-135.
4. Меерович Г.А., Торшина Н.Л., Коган Е.А. и др. Новые фотосенсибилизаторы на основе фосфонилметильных производных фталоцианинов // Материалы
11 Всероссийского съезда фотобиологов, Пущино, 8-
12 июня 1998 г. - С. 379-381.
5. Меерович И.Г., Кубасова И.Ю., Меерович Г.А. и др. Изучение возможности применения бактериохлоро-филлид-серина в качестве фотосенсибилизатора для фотодинамической терапии // Российский Биотерапев-тический Журнал. - 2003. - Т. 2, № 4. - С. 14-18.
6. Миронов А.Ф. Фотосенсибилизаторы на основе пор-фиринов и родственных соединений для фотодинамической терапии рака, в кн.: Итоги науки и техники. Современные проблемы лазерной физики, Т.З, Москва, ВИНИТИ, 1990. - С. 5-62.
7. Cuomo V., Jori G., Rihter В. et al. Tumour-localizing and photosensitizing properties of liposome-delivered Ge(IV)-octabutoxy-phthalocyanine//Br. J. Cancer.-1991.-Vol. 64, N. l.-P. 93-95.
8. Ford W.E., Rihter B.D., Kenney M.E., Rodgers M.A. Photoproperties of alkoxy-substituted phthalocyanines with deep-red optical absorbance // Photochem. Photobiol.
- 1989. - Vol. 50, N. 3. - P. 277-282.
9. HendersonB. W., Sumlin A.B., OwczarczakB.L., Dougherty T.J. Bacteriochlorophyll-a as photosensitizer for photodynamic treatment of transplantable murine tumors II J. Photochem. Photobiol., B: Biol. - 1991. - Vol. 10, N. 6.-P. 303-312.
10. Jori G. Far-red-absorbing-photosensitizers: their use in the photodynamic therapy of tumours // J. Photochem. Photobiol., A: Chem. - 1992. - Vol. 62. -P. 371-378.
11.Kostenich G., Orenstein A., Roitman L. et al. In vivo photodynamic therapy with the new near-IR absorbing water soluble photosensitizer lutetium texaphyrin and a high intensity pulsed light delivery system HI. Photochem. Photobiol., B: Biol. - 1997. - Vol. 39. - P. 36^-2.
\2.Koudinova N.V., Pinthus J.H., Brandis A. et al. Photodynamic therapy with Pd-bacteriopheophorbide (TOOKAD): Successful in vivo treatment of human prostatic small cell carcinoma xenografts // Int. J. Cancer.
- 2003. - Vol. 104, N. 6. - P. 782-789.
13. Liposomes: a practical approach, in Rickwood D. and Hames B.D. (eds.) Practical Approach Series, 1990, Oil Press at Oxford University Press, Oxford.
14. Loschenov V.B., Luckjanetz E.A., Stratonnikov A.A. et al. The noninvasive evaluation of absolute fluorochrom concentration in various tissues in vivo by means of standard samples with modeled optical properties // Proc. SPIE. - 1995. - Vol. 2326. - P. 415-419.
15.Meerovich G.A., Luk’yanets E.A., Yuzhakova O.A. et al. Photosensitizer for PDT based on phoaphonate phthalocyanine derivatives // Proc. SPIE. - 1997. - Vol. 2924. - P. 86-90.
16.Meerovich G.A., Lukyanets E.A., Yuzhakova O.A. et al. Phosphosubstituted phthalocyanine derivatives as effective photosensitizer for PDT // Proc. SPIE. - 1998. -Vol. 3191.-P. 193-197.
Xl.Pandey K., Shiau F.-Y., Dougherty T.J., Smith K.M. Synthesis of new Bacteriochlorins and their Antitumor Activity // Bioorg. Med. Chem. Lett. - 1994. - Vol. 4, N.
10.-P. 1253-1257.
18. Preparation of liposomes, in Gregoriadis G. (ed.) Liposome technology, 1984, CRC Press, Boca Raton, FL.
19. Rosenbach-Belkin V., Chen L., Feodor L. et al. Serine
Conjugates of Chlorophyll and Bacteriochlorophyll: Photocytotoxicity in vitro and Tissue Distributuon in Mice Bearing Melanoma Tumors // Photochem. Photobiol. -1996. - Vol. 64, N. 1. - P.174-181.
20. Shopova M., Wohrle D., Stoichkova N. et al. Hydrophobic Zn (Il)-naphthalocyanines as photodynamic therapy agents for Lewis lung carcinoma // J. Phorochem. Photobiol., B: Biol. - 1994. - Vol. 23, N. 1. - P. 35^2.
21.Stratonnikov A.A, Edinac N. E„ Klimov D.V. et al. The control of photosensitizer in tissue during photodynamic therapy by means of absorption spectroscopy II Proc.
SPIE. - 1996. - Vol. 2924. - P. 49-60.
ll.Zilberstein J., Blomberg A., Frantz A. et al. Light-dependent oxygen consumption in bacteriochlorophyll-serine-treated melanoma tumors: on-line determination using a tissue-inserted oxygen microsensor // Photochem. Photobiol. - 1997. - Vol. 65, N. 6. - P. 1012-1019.
23. Zilberstein J., Schreiber S., Bloemers M. C. et al. Antivascular treatment of solid melanoma tumors with bacteriochlorophyll-serine-based photodynamic therapy // Photochem. Photobiol. - 2001. - Vol. 73, N. 3. - P. 257 -266.
