CC BY
195
УДК 615.32:582.998+615.224
И. С. ПОГОДИН щ Е. А. ЛУКША И
Омская государственная медицинская академия
ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ СОССЮРЕИ ГОРЬКОЙ
С целью поиска противогельминтных средств растительного происхождения изучены фармакологические свойства травы соссюреи горькой, имеющей обширный ареал произрастания на территории Омской области. В экспериментах на животных установлена противоописторхозная и гепатопротекторная активность этаноль-ных экстрактов соссюреи горькой.
Ключевые слова: лекарственные растения, соссюрея горькая, противоописторхоз-ная активность, гепатопротекторная активность.
Лечение паразитарных заболеваний желчевыводящей системы (описторхоз) — серьезная проблема, так как данные заболевания не имеют специфичной клинической картины, а длительное нахождение возбудителя в организме ведет к снижению иммунитета, проявлению различных аллергических реакций и другим не менее тяжелым осложнениям.
Актуальность исследования обусловлена высокой заболеваемостью данной патологией на территории Российской Федерации, особенно в районах Обь-Иртышского бассейна [1 — 3].
Необходимость поиска растительных противо-описторхозных средств определило отсутствие выбора препаратов для лечения данной патологии, поскольку используется синтетический препарат Бильтрицид (празиквантель), который имеет множество побочных эффектов и лечение которым должно проводиться только в условиях стационара [4 — 6].
Среди огромного разнообразия лекарственных растений значительный интерес в этом плане представляет род Соссюрея. Ряд его видов широко применяется в народной медицине для лечения заболеваний печени, почек, желудочно-кишечного тракта, а также при диарее, экземе и др. [7]. Достаточные сырьевые запасы соссюрей сосредоточены на территории Западной Сибири. Одним из перспективных видов является соссюрея горькая (Saussurea атага ^.) DC.), произрастающая на территории Омской области.
Проведенные ранее фитохимические исследования показали наличие в соссюреи горькой различного комплекса биологически активных веществ (сесквитерпеновые лактоны, флавоноиды, кумари-ны, фенолкарбоновые кислоты, полисахариды, аминокислоты, следы эфирного масла), способных проявлять противовоспалительную, антиоксидантную и противопаразитарную активность [8].
Цель работы — изучение фармакологических свойств извлечений надземной части соссюреи горькой и оценка целесообразности внедрения данного растения и препаратов из него в медицинскую практику.
Материал и методы исследования. Для фармакологических исследований использовали водно-спиртовые экстракты надземной части травы соссюреи горькой, собранной в период вегетации на территории Омской области. Жидкие экстракты получали лабораторным методом реперколяции по Чулкову
[9], сухие экстракты — из жидких путем удаления растворителя и последующего порошкования сухого остатка. В результате получали аморфные сыпучие порошки темно-коричневого цвета со слабым специфическим запахом и горьким вкусом.
Эксперименты по изучению острой токсичности извлечений при внутрижелудочном введении проводили в соответствии с Методическими указаниями по изучению общетоксического действия фармакологических веществ [10].
Острую токсичность образцов в каждой дозе исследовали на 10 беспородных мышах (5 самок и 5 самцов массой 18 — 22 г) и 10 беспородных крысах (5 самок и 5 самцов массой 250 — 300 г). Исследуемые образцы экстрактов вводили в виде суспензий в 1%-й крахмальной слизи.
Противоописторхозную активность исследовали в соответствии с Методическими указаниями по изучению антигельминтной активности фармакологических веществ [10].
В эксперименте по изучению специфической активности использовали 30 золотистых хомяков массой 50 — 60 г. Животные были разделены на три группы по 10 особей в каждой. 1-й группе вводили экстракт соссюреи горькой на 70%-м этаноле в дозе 2,0 г/кг, 2-й группе — экстракт соссюреи горькой на 40%-м этаноле в дозе 2,0 г/кг, 3-й группе — контроль растворителя. В качестве растворителя для всех препаратов использовали 1%-й раствор крахмальной слизи.
По литературным данным [10], выделение яиц гельминтов происходит к 20 — 22-м суткам после заражения, поэтому схему лечения начинали с 22-го дня после введения жизнеспособных метацеркари-ев в желудок животного. Введение осуществлялось ежедневно один раз в сутки, внутрижелудочно через зонд в течение семи дней. Наблюдение за состоянием животных производилось ежедневно.
После окончания лечения животных декапи-тировали под эфирным наркозом и производили вскрытие.
Наиболее точный метод учета эффективности дегельминтизации заключается в подсчете отошедших гельминтов, а при последующем вскрытии пролеченных животных — в подсчете оставшихся паразитов и математически выражается в рассчитывании коэффициента интенс-эффективности (ИЭ), по формуле:
ОМСКИЙ НАУЧНЫЙ ВЕСТНИК № 2 (114) 2012 МЕДИЦИНСКИЕ НАУКИ
МЕДИЦИНСКИЕ НАУКИ ОМСКИЙ НАУЧНЫЙ ВЕСТНИК № 2 (114) 2012
Таблица 1
Количество марит описторхов, выделенных из органов гепатобилиарной системы золотистых хомячков (п=5, М ± т, М — среднее значение, т — доверительный интервал)
Экспериментальные группы Cреднее число марит описторхов, шт. Показатель интенс-эффектив-ности,%
1-я группа (экстракт на 70%-м этаноле) 13±1 62,85±4,65
2-я группа (экстракт на 40%-м этаноле) 21±2 30,11±8,85
ИЭ= КкО х100% , (1)
где К — среднее число марит описторхов в контрольной группе; О — среднее число марит описторхов в экспериментальной группе.
На модели экспериментального токсического гепатита [10] определяли гепатопротекторную активность сухого экстракта соссюреи в дозе 200 мг/кг.
Фармакологические исследования проводили на 36 крысах-самцах массой 180 — 200 г в осенний период. Животных содержали в условиях вивария в пластмассовых клетках, при искусственном освещении на стандартной лабораторной диете. Работы в рамках экспериментальных методик выполняли с 10 до 15 часов.
Острый токсический гепатит вызывали подкожным введением 50%-го масляного раствора тетра-хлорметана (СС14) из расчета 0,4 мл на 100 г массы крыс ежедневно однократно в течение четырех суток.
Всех животных разделили на четыре группы. 1-й группе вводили экстракт соссюреи горькой на 70%-м этаноле в дозе 200 мг/кг в форме суспензии в 2%-й крахмальной слизи, 2-й группе — препарат сравнения — Легалон® 140 в дозе 100 мг/кг в форме суспензии в 2%-й крахмальной слизи, 3-й группе — контроль растворителя (2%-ю крахмальную слизь), 4-я группа — интактная. Первое введение производили через сутки после последней инъекции СС14.
Продолжительность фармакотерапии — семь дней, введение экстрактов осуществляли ежедневно однократно, через сутки после последнего введения препаратов крыс декапитировали.
Для оценки экскреторной и антитоксической функции печени в сыворотке крови определяли по результатам гексеналовой пробы и тесту ретенции бромсульфалеина (БСФ).
Для оценки степени выраженности воспалительной реакции на введение CCl4 после забора проб крови проводили вскрытие животных и изъятие печени. Печень взвешивали и рассчитывали коэффициент «масса печени/масса тела» в процентах. Степень выраженности цитолиза гепатоцитов в сыворотке крови оценивали с помощью активности аланинаминотрансферазы (АЛТ) и аспартатамино-трансферазы (АСТ).
Для оценки синтетической функции печени в сыворотке крови определяли содержание общего холестерина (ОХ) и липопротеидов высокой плотности (ЛПВП), в плазме крови — фибриногена (ФГ) и общего белка (ОБ), в цельной крови — глюкозы.
Статистическую обработку полученных результатов проводили путем расчета средней (Х) и средней квадратичной ошибки (m). О достоверности различий судили, используя параметрический (t-критерий Стьюдента) и непараметрический (U-критерий Манна-Уитни) методы. Значимость различий считали достоверной при pt, pu<0,05 [11]. Расчеты проводили с использованием программ STATISTICA 6.0 и SPSS 12.0.
Результаты и их обсуждение. Внутрижелудоч-ное введение экстракта соссюреи горькой на 40 и 70%-м этаноле в дозе 5,0 г/кг не вызывало гибели животных в обеих группах (самцов и самок). Это свидетельствует, что, острая токсичность экстрактов соссюреи горькой на 40 и 70%-м этаноле, соответствует 4-му классу опасности — «вещества малоопасные» [12].
В результате исследования противоописторхоз-ной активности (табл. 1) было установлено, что средняя приживаемость описторхов в печени подопытных животных составила 69%. Введение экстрактов соссюреи горькой на 70 и 40%-м этаноле приводило
Таблица 2
Влияние курсового (7 сут.) внутрижелудочного введения силимарина (100 мг/кг) и экстракта соссюреи горькой (200 мг/кг) на показатели функции печени (п = 8 М ± т, М - среднее значение, т - доверительный интервал)
Мт Мп К ПГС Р БCФ АЛТ АСТ ЛПВП ОХ ОБ ФГ Г
Интактные (n=10)
317±2 12,06±0,3 3,80±0,10 14,2±1,7 5,2±1,8 35,4±2,7 50,1±3,5 1,51±0,03 2,06±0,05 58,04±0,75 2,64±0,09 5,8±0,1
Контроль (n = 10)
322±3 15,82±0,2 4,91±0,11 28,3±1,4 11,9±1,2 50,6± 3,5 80,3±5,7 1,29±0,08 1,82±0,07 49,97±1,87 2,18±0,05 7,5±0,4
Легалон® 140 (n = 8)
311±6 13,17±0,4 4,23±0,16 17,4±2,1 7,4±1,7 39,8±1,8 57,2±2,4 1,48±0,09 1,89±0,02 54,81±1,62 2,69±0,10 5,9±0,5
^ссюрея горькая (n = 8)
306±4 13,26±0,5 4,33±0,17 20,6±1,6 7,7±1,3 40,1±2,2 62,4±3,8 1,54±0,12+ 1,98±0,04 54,36±0,88 2,68±0,12 6,3±0,7
Примечание:
Мт (г) — масса тела, Мп (г) — масса печени, К (%) — коэффициент «масса печени/масса тела», ПГС (мин) — продолжительность гексеналового сна, Р БСФ (%) — ретенция бромсульфалеина, АЛТ и АСТ (Е/л) — активность ферментов аланинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы в сыворотке крови, ЛПВП ( мМ/л) — липопротеидов высокой плотности, ОХ (мМ/л) — общего холестерина, ФГ и ОБ (г/л) — содержание в плазме крови фибриногена и общего белка, Г (ммоль/л) — уровень глюкозы в цельной крови крыс с острым токсическим гепатитом.
к дегельминтизации золотистых хомячков в разной степени: коэффициент ИЭ в 1-й группе, где животные получали экстракт соссюреи на 70%-м этаноле, составил 62,85±4,65%, а во 2-й группе, где животные получали экстракт соссюреи на 40%-м этаноле — 30,11±8,85%.
Таким образом, на основании проведенного исследования по изучению противоописторхозной активности соссюреи горькой, выявлена удовлетворительная активность экстракта соссюреи горькой на 70%-м этаноле, по-видимому, связанная с действием суммы сесквитерпеновых лактонов [13].
При исследовании гепатопротекторного действия экстрактов было установлено, что курсовое введение крысам экстракта соссюреи горькой после отравления CC14 улучшало функциональное состояние печени (табл. 2). Введение её препарата сдерживало развитие воспалительных процессов в печени: масса снизилась по сравнению с контролем на 16%. Продолжительность гексеналового сна была на 27% ниже контрольного показателя. Под действием экстракта улучшалась экскреторная функция печени: ретенция БСФ снижалась на 35% по сравнению с контролем. Активность фермента АСТ у леченых крыс данной группы была на 25% выше интактного показателя, но на 22% ниже контрольного, что говорит о способности экстракта активно предотвращать цитолиз гепатоцитов. В сыворотке повысилось содержание ЛПВП на 19%, в плазме — концентрация ОБ на 9% и ФГ на 23%. Уровень глюкозы в цельной крови снизился по отношению к контролю на 16%.
Таким образом, курсовое введение крысам с острым токсическим гепатитом экстракта соссюреи горькой приводит к выраженному гепатопротектор-ному эффекту. Под влиянием препарата улучшаются антитоксическая, экскреторная и синтетическая функции пораженной гепатотоксином печени. По выраженности гепатотропных эффектов экстракт соссюреи горькой не уступает препарату сравнения Легалон® 140, что связано, по-видимому, с высоким содержанием фенольных соединений.
Выводы
1. Этанольные экстракты соссюреи горькой не являются токсичными и соответствуют 4-му классу опасности — «вещества малоопасные».
2. Противоописторхозной и гепатопротекторной активностью обладает экстракт соссюреи горькой на 70%-м этаноле. Данная концентрация экстрагента рекомендуется для получения лекарственной формы.
Библиографический список
1. Бычков, В. Г. Описторхоз в Обь-Иртышском бассейне (вопросы этиологии и патогенеза) / В. Г. Бычков, Г. Г. Крылов,
А. О. Плотникова // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. — 2007. — № 4. — С. 1 — 6.
2. Ильинских, Е. Н. Актуальные вопросы изучения проблемы описторхоза в Сибири / Е. Н. Ильинских // Бюллетень сибирской медицины. — 2002. — № 1. — С. 63 — 69.
3. Бронштейн, М. А. Трематодозы печени: описторхоз, кло-норхоз / М. А. Бронштейн, В. И. Лучшев // РМЖ. — 1998. — Т. 6, № 3. - С. 140-148.
4. Патоморфологические изменения в печени и лимфоидных органах, зараженных описторхами, при лечении празик-вантелем / Д. Г. Баяндина [и др.] // Медицинская паразитология. - 1987. - № 5. - С. 37-41.
5. Завойкин, В. Д. Актуальность лечения паразитарных заболеваний / В. Д. Завойкин // Медицинская паразитология. -1994. - № 3. - С. 34-37.
6. Молокова, О. А. Патоморфология печени при лечении празиквантелем / О. А. Молокова, В. Е. Ярославский // Медицинская паразитология. - 1993. - № 4. - С. 53-56.
7. Растительные ресурсы СССР: цветковые растения, их химический состав, использование; семейство Asteraceae (Compositae). - СПб. : Наука, 1993. - 352 с.
8. Фитохимическое исследование надземной части соссюреи горькой (Saussurea атага Ь) / И. С. Погодин [др.] // Омский научный вестник. - 2010. - № 1(94). - С. 114-118.
9. Минина, С. А. Химия и технология фитопрепаратов / С. А. Минина, И. Е. Каухова. - М. : ГЭОТАР-МЕД, 204. - 560 с.
10. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. Р. У. Хабриева. - 2-изд. - М. : Медицина, 2005. - 832 с.
11. Медик, В. А. Руководство по статистике в медицине и биологии. В 2-х томах / В. А. Медик, М. С. Токмачев, Б. Б. Фишман // Под ред. проф. Ю. М. Комарова. Т. 1. Теоретическая статистика. - М. : Медицина, 2000. - 412 с.
12. ГОСТ 12.1007-76. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности. - М. : Госстандарт СССР, 1976. - 8 с.
13. Противоописторхозные свойства экстрактов из Се^аигеа scabiosa L. / И. П. Каминский [др.] // Растительные ресурсы. - 2010. - Т. 46, № 1. - С. 106-112.
ПОГОДИН Илья Сергеевич, старший преподаватель кафедры фармацевтической аналитической и токсикологической химии.
ЛУКША Елена Александровна, кандидат фармацевтических наук, доцент кафедры фармацевтической аналитической и токсикологической химии. Адрес для переписки: e-mail: [email protected]
Статья поступила в редакцию 12.09.2012 г.
© И. С. Погодин, Е. А. Лукша
Книжная полка
Иванников, С. В. Плазменная коагуляция в травматологии и ортопедии : моногр. / С. В. Иванников, Н. А. Шестерня, Д. А. Тарасов - М. : Бином. Лаборатория знаний, 2012. - 103 с. - ISBN 978-5-9963-0054-9.
В настоящей монографии представлен первый опыт клинического применения аргоновой плазмы при оперативных вмешательствах на опорно-двигательном аппарате. Убедительно показана эффективность бесконтактного способа коагуляции и элиминации тканей. Основная часть информации (1,3 Гб) представлена на компакт-диске в виде фото- и видеоматериалов. Для травматологов-ортопедов, хирургов.
ОМСКИЙ НАУЧНЫЙ ВЕСТНИК № 2 (114) 2012 МЕДИЦИНСКИЕ НАУКИ
