CC BY
80
УДК 619:616.995.1-085
ФАРМАКОКИНЕТИКА АВЕРСЕКТИНА С И ЕГО ОСТАТОЧНЫЕ КОЛИЧЕСТВА В ОРГАНАХ И ТКАНЯХ МАРАЛОВ
Е.А. ЕФРЕМОВА кандидат ветеринарных наук
В.А. МАРЧЕНКО доктор биологических наук
Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО Россельхозакадемии, п. Краснообск, Новосибирская область, e-mail: alfa parazit@mail ru Е.И. ЧЕРНЯК, С.В. МОРОЗОВ кандидаты химических наук Новосибирский институт органической химии им. Н.Н. Ворожцова СО РАН, г. Новосибирск, e-mail: moroz@nioch.nsc.ru
Методом ВЭЖХ определена концентрация авер-сектина С в плазме крови и его остаточные количества в органах и тканях маралов. На основании полученных данных рассчитаны основные фармакокинетические параметры аверсектина С, входящего в состав противопаразитарных кормовых гранул.
Ключевые слова: аверсектин С, фармакокинетика, маралы.
Мараловодство - одна из перспективных в экономическом отношении отраслей сельского хозяйства юга Западной Сибири. Для ее развития необходимо добиться значительного увеличения не только поголовья маралов, но и их продуктивности. Численность поголовья, продуктивность, качество продукции, полученной от пантовых оленей, во многом зависят от состояния их здоровья. Одной из причин, препятствующих развитию мараловодства, являются гельминтозы маралов.
В хозяйствах Республики Алтай и Алтайского края у маралов паразитарные болезни, протекающие ассоциативно, вызывают падеж поголовья (7-14 %) и вынужденный убой (3-7 %) животных, при этом пантовая продуктивность снижается на 9-12 % и выход приплода на 30-40 % [9]. При элафос-тронгилезе в сочетании с другими гельминтозами отмечают уменьшение пантовой продукции на 37 % [2, 8].
В настоящее время эпизоотическая обстановка в мараловодстве сложилась таким образом, что основными паразитозами, которым необходимо уделять первоочередное внимание, являются элафостронгилез, кишечные и легочные стронгилятозы, дикроцелиоз, ларвальные тениидозы и боопонуоз.
Поэтому разработка новых противопаразитарных препаратов и усовершенствование их лекарственных форм ориентированы на лекарственные средства, обладающие высокой эффективностью в отношении нематод, цес-тод, трематод и эктопаразитов. Вместе с тем, в мараловодстве при создании противопаразитарных лекарственных средств необходимо учитывать не только многообразие таксономических форм паразитов, но и этологические особенности животных, а также технологические характеристики ведения отрасли.
Препараты на основе макроциклических лактонов из Streptomyces aver-mitilis являются средствами выбора для лечения и профилактики паразитозов маралов. Авермектины - абамектин (дуотин), ивермектин ( ивомек инъекционный, ивомек пурон, ивомек премикс, и т. д), дорамектин (дектомакс), авер-сектин (фармацин); милбемицин - моксидектин (цидектин) широко применяются в мараловодстве. Терапевтическая эффективность макроциклических лактонов при нематодозах, арахнозах и энтомозах высокая [5, 7, 10]. Однако к недостаткам этих препаратов следует отнести отсутствие антигельминтной активности в отношении цестод и трематод, а также их парентеральное введение, требующее фиксации животных и как следствие, приводящее к высокому травматизму маралов, а в отдельных случаях к их гибели.
Поэтому с целью расширения спектра действия, повышения антигель-минтной эффективности и разработки эффективных технологий применения лекарственных форм нами разработана новая препаративная форма - проти-вопаразитарные кормовые гранулы (ПКГ) на основе аверсектина С и албен-дазола. ПКГ задают методом группового скармливания, что делает процесс дегельминтизации более физиологичным и исключает травматизм животных. Эффективность ПКГ при основных гельминтозах маралов составляет 79,2100 % [5].
Отсутствие информации по фармакокинетическим параметрам и остаточным количествам действующих веществ в органах и тканях животных разработанной новой препаративной формы затрудняет анализ ее биологических свойств и является препятствием для ее широкого внедрения в ветеринарную практику.
Целью настоящих исследований было определение основных фармакокинетических параметров аверсектина С, используемого в сочетании с албен-дазолом, и его остаточных количеств в органах и тканях маралов после его скармливания в форме кормовых гранул.
Материалы и методы
Опыты по определению содержания аверсектина С в плазме крови, в органах и тканях маралов проводили на 6 животных. Опытную и контрольную группы сформировали по принципу аналогов с учетом возраста, пола и массы тела. Подопытные животные в период испытаний находились в идентичных условиях содержания и кормления. Маралам подопытных групп ПКГ задавали в дозе 6 г/кг массы тела, что соответствует 0,2 мг/кг по ДВ, однократно, методом группового скармливания. Пробы крови отбирали через 9, 24, 48, 72, 96 и 168 ч после скармливания ПКГ.
Для предупреждения свертывания крови в пробирку добавляли (из расчета на 10 мл крови) 50 ЕД гепарина. Для получения плазмы стабилизированную кровь центрифугировали 10 мин при 3000 об./мин, после чего плазму удаляли пипеткой, оставляя на дне пробирки форменные элементы.
С целью определения аверсектина С в органах и тканях животных и сроков возможного использования продуктов животноводства на 1, 7, 14 и 21 сут после скармливания ПКГ для исследования отбирали образцы органов и тканей подопытных животных (печень, почки, мышечная ткань, жировая ткань). Масса одной пробы составила 50 г. Образцы до проведения исследований хранили при - 20 оС.
Аналогичным образом были взяты пробы крови, а также органов и тканей, полученных от 3 контрольных животных.
Методом определения концентрации антигельминтика группы макроли-дов в биологических жидкостях и продуктах питания является метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с флюоресцентным или ультрафиолетовым детектором [1, 3, 4, 6]. В настоящей работе определение
107
концентрации аверсектина С в плазме крови, органах и тканях овец проведено методом ВЭЖХ с ультрафиолетовым детектированием.
Методика и условия проведения ВЭЖХ для определения аверсектина С в плазме крови и образцах тканей животных следующие:
1. Подготовка проб к определению (экстракция и очистка экстрактов).
10 мл плазмы крови поместили в плоскодонную колбу вместимостью 50 мл, добавили 30 мл смеси метанол-хлороформ (1 : 2 по объему). Экстрагировали встряхиванием в течение 10 мин при температуре ~ 20 °С. Полученную эмульсию центрифугировали 15 мин при 5000 об./мин. Экстракт декантировали. Затем провели повторную экстракцию осадка 15 мл смеси метанол-хлороформ и центрифугировали.
Объединенный экстракт перенесли в делительную воронку с последующим отделением верхнего водно-метанольного слоя. Хлороформный слой упаривали на роторном испарителе досуха. Сухой остаток растворили в 10 мл метилтретбутилового эфира и перенесли в делительную воронку, промыли 5 мл 1%-ного раствора хлористого натрия при энергичном встряхивании. Верхний органический слой перенесли в круглодонную колбу и упарили досуха на роторном испарителе. Сухой остаток растворили в 0,1 мл метанола. Полученный раствор использовали для анализа методом ВЭЖХ.
К навескам мелкоизмельченных образцов ткани добавили 15 мл этилаце-тата. Масса проб тканей печени и жира составляла по 5 г, мышечной ткани -20 г. Экстракцию проводили при периодическом встряхивании в течение 24 ч при температуре ~ 50 °С, экстракт сливали после центрифугирования. Остаток повторно экстрагировали этилацетатом 2 х 15 мл в течение часа, после центрифугирования экстракт удалили. Объединенный этилацетатный экстракт упарили на роторном испарителе. Сухой остаток растворили в 20 мл метанола с использованием ультразвуковой бани в течение 15 мин. Раствор перенесли в делительную воронку, добавили 10 мл дистиллированной воды. Водно-метанольный раствор промыли 5-кратно гексаном порциями по 15 мл. Водно-метанольный раствор пропустили через концентрирующий патрон ДИАПАК С16, предварительно промытый метанолом и водой. Водно-метанольный элюат с патрона отбросили. Патрон высушили потоком воздуха, затем пропустили 10 мл метанола. Метанольный раствор собрали, упарили досуха на роторном испарителе, остаток растворили в 0,1 мл метанола для последующего анализа.
2. Условия ВЭЖХ-анализа.
Содержание аверсектина С определяли методом ВЭЖХ на жидкостном хроматографе «Милихром А-02» (производства ЭкоНова, Новосибирск) с использованием колонки, заполненной обращено-фазовым сорбентом Pronto-Sil 120-5C18AQ и градиентного элюирования в системе 0,1 % CF3COOH-МеОН : от 75 до 95 % за 20 мин.; от 95 до 100 % за 5 мин. Аналитическая длина волны X - 254 нм, скорость элюирования 120 мкл/мин.; температура 35 °С, объем пробы 10 мкл. Для расчета содержания аверсектина С применяли метод абсолютной калибровки с использованием чистого вещества аверсек-тина С.
Чувствительность метода - 0,005 мкг/мл плазмы. Погрешность определения ± 20 %. Степень извлечения аверсектина С из плазмы крови - 82±12 %.
Чувствительность метода при определении остаточных количеств аверсектина С в образцах ткани - 0,005 мкг/г анализируемой пробы. Погрешность определения ± 30 %. Степень извлечения аверсектина С - 75±15 %.
Фармакокинетические параметры рассчитаны с использованием компьютерной программы Bordgia, версия 1.03.
Результаты и обсуждение Динамика изменения концентрации аверсектина С в плазме крови животных характеризуется наличием двух пиков - максимальная концентрация аверсектина С установлена через 24 и 72 ч после скармливания им ПКГ -0,052 и
0,036 мкг/мл соответственно. Через 72 ч отмечена тенденция снижения содержания действующего вещества гранул в плазме крови и к 7 сут концентрация аверсектина С составила 0,012 мкг/мл (рис. 1). Установлено, что время достижения его максимальных концентраций в плазме крови приходится на 24 ч, время по-луэлиминации составляет 165 ч. Общий клиренс (способность организма к элиминации, Cl, мл/ч) равен 11514 мл/ч. Площадь под фармакокинетической кривой «концентрация-время» (AUS) составляет 13,8 мкг/мл-час.
Рис. 1. Изменение концентрации аверсектина С в плазме крови маралов
после скармливания ПКГ
Кинетический объем распределения (УД свидетельствующий о способности препарата распределяться по органам и тканям, составил 3448275 мл (табл. 1).
1. Фармакокинетические параметры аверсектина С в крови маралов при скармливании в форме противопаразитарных кормовых гранул
D (доза препарата), мкг 200000
C (максимальная концентрация) мкг/мл 0,052
T V (период полувыведения), ч 165
Vd (объем распределения), мл 3448275
AUS (площадь под кривой), мкг/мл-ч 13,8
Время достижения максимальной концентрации, ч 24
Cl (клиренс), мл-ч 14484
Остаточные количества авесектина С в максимальном количестве были отмечены на 4-е сутки после скармливания ПКГ и соответствовали следующим значениям: в пробах жировой ткани - 0,025 мкг/г, печени - 0,023, мышечной ткани - 0,015 мкг/г (табл. 2., рис. 2).
2. Концентрация аверсектина С в органах и тканях маралов после скармлива-__________ния его в форме противопаразитарных кормовых гранул__________
Орган или ткань Концентрация аверсектина С (мкг/г) при исследовании, сут
1 4 7 14 21
Печень 0,011 0,023 0,009 0,006 <0,005
Мышечная ткань 0,012 0,015 0,007 0,005 <0,005
Жировая ткань 0,017 0,025 0,011 0,005 <0,005
Почки 0,010 0,008 0,007 0,006 <0,005
Рис. 2. Изменение концентрации аверсектина С в органах и тканях маралов после скармливания его в форме ПКГ
Согласно нормативу, максимально допустимое содержание аверсектина С в животном жире и субпродуктах составляет 0,024 и 0,010 мкг/ г сответст-венно [6].
На 14 и 21 -е сутки после скармливания ПКГ зарегистрированы следы остаточных количеств ДВ препарата (0,005-0,008 мкг/г) во всех образцах органов и тканей маралов, взятых для исследований.
Исследованиями установлено, что уже через 14 сут после дегельминтизации маралов ПКГ в дозе 6 г/кг уровень аверсектина С соответствует его максимально допустимому количеству в продуктах ветеринарно-санитарного надзора.
Таким образом, изучена фармакокинетика и получены данные по остаточным количествам аверсектина С, действующего вещества противопарази-тарных кормовых гранул, которые применяют для лечения и профилактики экто- и эндопаразитозов маралов. Благодаря изученным параметрам аверсек-тина С можно расширить и оптимизировать использование препарата в ветеринарной практике.
Литература
1. Викторов А.В. // Биотехнология. - М., 1996. - № 6. - С. 55-62.
2. Всеволодов Б.П., Прядко Э.И. // Паразиты с.-х. животных Казахстана. -Алма-Ата, 1964. - Вып. 3. - С.123-128.
3. Григорьев А.В., Семенов С.В., Пристенский Д.В. и др. Определение ивермектина в органах животных //Тр. Всерос. ин-та гельминтол. - 2004. -Вып. 40. - С. 85-93.
4. Ефремова Е.А, Марченко В.А., Морозов С.В. и др. Эффективность кормовых гранул при паразитозах маралов // Сиб. вестник с/х науки. - Новосибирск, 2008. - № 1. - С. 90-94.
5. Марченко В.А., Ефремова Е.А., Бахтушкина А.И. и др. Методические рекомендации. - Новосибирск-Горно-Алтайск, 2008. - 78 с.
6. Методические указания по определению массовой концентрации авер-сектина С в продуктах питания методом флуоресцентной высокоэффективной жидкостной хроматографии, 2001. - 12 с.
7. Луницын В.Г. В кн.: Пантовое оленеводство России. - Барнаул, 2004. -
С.455-514.
8. Любимов М.П. Зараженность маралов гельминтами // Сб. науч. тр.
110
ЦНИЛПО. - Горно-Алтайск, 1959. - С. 164-215.
9. Тетерин В.В. Распространение паразитозов оленей // Тр. ин-та АСХИ. - Барнаул, 1990. - С. 93-97.
10. Шуклина Е.В. Особенности эпизоотологии и система лечебно-профилактических мероприятий при ассоциативной инвазии маралов: Авто-реф. дис. ... канд. вет. наук. - Барнаул, 2007. - 21 с.
Pharmacokinetic of aversectin C and its residual quantities in organs and tissues of marals
E.A. Efremova, V.A. Marchenko, S.V. Morozov, E.I.Chernjak
By the method of highly effective liquid chromatography concentration of aversectin C in plasma of blood and its residual quantities in organs and tissues of marals is defined. On the basis of the received data are designed pharmacokinetic parameters aversectin C, included in structure antiparasitic fodder granules.
Keywords: aBepceKTHH C, pharmacokinetics, marals.
