CC BY
84
Лечение и профилактика
УДК 619:615.284
ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ЦИПЕРИЛА
И.А. ПРОХОРОВА кандидат ветеринарных наук
Научно-производственное объединение «Нарвак»
Изучены фармако-токсикологические показатели циперила на лабораторных животных. ЛД50 циперила при введении в желудок белым крысам составляет 2080 мг/кг, белым мышам 1160 мг/кг. В терапевтической дозе циперил не обладает кож-но-раздражающим, резорбтивно-токсическим сенсибилизирующим действиями.
Ключевые слова: белые крысы, мыши, острая токсичность, циперил.
Циперил является инсектоакарицидным средством и применяется в форме 5 и 10%-ного раствора наружно. Препарат содержит в качестве действующего вещества синтетический пиретроид циперметрин, который хорошо изучен [1, 4, 7, 8]. ЗАО «НПО Нарвак» разработало лекарственную форму этого препарата под названием циперил. В состав циперила кроме циперметрина входят другие компоненты, которые могут оказать воздействие на биодоступность и фармако-токсикологические свойства. В связи с этим нами поставлена цель - изучить фармако-токсикологические свойства циперила на лабораторных животных.
Материалы и методы
Изучение параметров острой токсичности циперила проводили согласно «Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» [6] на 60 белых мышах массой тела 18-22 г и 36 белых крысах массой тела 180-200 г.
Из мышей было сформировано 5 подопытных и одна контрольная группы по 10 животных. Мышам пяти подопытных групп циперил в форме 10%-ного раствора вводили в желудок с помощью шприца и иглы с булавовидным утолщением на конце в дозах 10, 15, 20, 25 и 30 мг на животное (соответственно 500; 750; 1000; 1250 и 1500 мг/кг).
Аналогичные опыты проведены на белых крысах при введении в желудок. Циперил вводили крысам подопытных групп в дозах 300, 350, 400, 450 и 500 мг на животное (соответственно 1500, 1750, 2000, 2250 и 2500 мг/кг). В каждой группе было по шесть крыс.
Контрольным животным вводили в желудок соответствующий объем дистиллированной воды.
Наблюдение за животными проводили в течение 14 сут. При этом учитывали общее состояние, прием корма и воды, состояние шерстного покрова, поведение и активность.
Для расчета параметров острой токсичности использовали метод пробит-анализа по Литчфильду и Уилкоксону [2], который основан на учете смертности животных от вводимых доз изучаемого препарата. Класс опасности препарата определяли согласно ГОСТ 12.1.007-76.
Изучение субхронической токсичности циперила проводили на 24 крысах (2 подопытные и 1 контрольная группы по 8 животных) с исходной мас-
109
сой тела 140-160 г. Циперил вводили в течение 28 сут ежедневно перорально в дозах 1/10 и 1/20 от ЛД50 (установленной ранее 2080 мг/кг) - соответственно 208 и 104 мг/кг массы тела. Контрольная группа получала дистиллированную воду в соответствующих объемах. Суммарная доза составила соответственно 5824 и 2912 мг/кг.
В течение всего периода проводили наблюдение за общим состоянием животных, приростом массы тела, видимыми физиологическими функциями.
В конце опыта животных всех групп подвергли эвтаназии; отбирали пробы крови для определения гематологических и биохимических показателей; взвешивали основные органы для определения массовых коэффициентов; проводили макроскопическое исследование печени, почек, селезенки, легких и других органов.
Определение основных гематологических показателей проводили на анализаторе «Гематоскрин» (Италия). Биохимические показатели сыворотки крови определяли на анализаторе «Clima MC15» (Испания).
Аллергизирующие свойства циперила изучали на морских свинках методом гистаминного шока [3]. В опыте использовали 12 (6 подопытных и 6 контрольных) клинически здоровых морских свинок массой 200-300 г. Подопытным свинкам вводили перорально препарат в дозе 125 мг на животное. Животным контрольной группы препарат не назначали. Гистамин вводили подкожно в дозе 5 мг/г одновременно морским свинкам обеих групп через 6 и 12 ч после введения препарата подопытным животным.
Раздражающее действие циперила при нанесении на кожу оценивали в опыте на 15 крысах (две подопытные группы и одна контрольная по 5 животных в каждой). Крысам подопытных групп препарат наносили в дозах 2000 и 2500 мг/кг. Животным контрольной группы наносили дистилли-рованную воду. Исследовали состояние кожи, обращая внимание на покраснения, наличие трещин, изъязвлений, кровоизлияний, появления сухой корки и т. д.
Состояние кожи оценивали с учетом развития возможной эритемы и интенсивности отека кожи (по измерению толщины кожной складки, в мм) согласно Методическим указаниям [5].
Изучение действия циперила на слизистую глаза проводили на 3 взрослых кроликах, которым в левый глаз закапывали циперил, а правый глаз служил контролем (вносили воду). Циперил закапывали в конъюнктивальный мешок с помощью пипетки однократно по 1-2 капли.
Состояние глаз контролировали через 15 мин, 1, 24, 48 и 72 ч после внесения циперила. Обследовали визуально. Реакцию оценивали в баллах по шкале: 0 - видимой реакции нет; 1 - легкое покраснение конъюнктивы; 2 -покраснение конъюнктивы и частично склеры (в направлении к роговице); 3 - резкое покраснение конъюнктивы и всей склеры, гнойный офтальмит.
Результаты и обсуждение
После введения в желудок мышам циперила в дозе 500 мг/кг не отмечали признаков токсического действия препарата. Аналогичные результаты получены и на крысах при введении препарата в желудок в дозе 1500 мг/кг. У животных не отмечали изменений в поведении и состоянии после введения препарата в этих дозах.
При повышении дозы препарата до 750 мг/кг через 1-2 ч у животных начали отмечать признаки интоксикации, выражающиеся в беспокойстве животных и нарушении координации движений. От этой дозы пало две мыши из 10.
При дальнейшем повышении дозы препарата признаки интоксикации проявлялись более выражено. Увеличилась гибель животных - она составила после введения препарата в дозе 1000, 1250 и 1500 мг/кг соответственно 50, 80 и 100 % (табл. 1).
Таблица 1
Результаты изучения острой токсичности циперила на белых мышах и крысах по методу Литчфильда и
Уилкоксона (введение в желудок)
Доза, Наблю- Наблюдав- Ожидаемый % Разница между Слагаемые, х2 Сумма сла- Табличные Величина для вычисления
мг/кг давшийся шийся эф- эффекта ожидаемым и гаемых, ум- значения х2 при доверительных границ ЛД50
эффект фект, % наблюдавшимся ноженная на Р=0,05
эффектом число свобод S n' f
Белые мыши
500 0/10* - 0,03 0,03 -
750 2/10 20,0 12,0 8,0 0,07
1000 5/10 50,0 64,0 14,0 0,05
1250 8/10 80,0 85,0 5,0 0,02
1500 10/10 99,7 99,9 0,2 0,0015 1,415 3,84 1,3 10 0,9
Белые крысы
1500 0/6 - 0,01 0,03 -
1750 1/6 16,6 12,0 4,6 0,06
2000 3/6 50,0 60,0 10,0 0,04
2250 4/6 66,6 83,0 16,4 0,17
2500 6/6 99,7 99,9 0,2 0,0015 1,629 5,99 1,4 6 1,1
.Примечание: * - числитель - количество павших животных, знаменатель - количество животных в группе.
Токсическое действие циперила на белых крысах было менее выражено и проявилось через 2-3 ч нарушением координации движений и гибелью животных. После введения крысам циперила в дозе 1750, 2000, 2250 и 2500 мг/кг пало соответственно 1, 3, 4 и 6 из 6 животных. Гибель крыс от токсических доз препарата отмечали в первые 1-3 сут после введения.
Результаты определения параметров острой токсичности препарата ци-перил при введении в желудок белым мышам и крысам приведены в таблице 2. При анализе полученных результатов установлено, что ЛД50 препарата для мышей составила 1160, а для крыс 2080 мг/кг.
По степени токсичности согласно ГОСТа 12.1.007-76 препарат циперил относится к III классу опасности (вещества умеренно опасные).
При ежедневном введении циперила в двух тестированных дозах (208 и 104 мг/кг массы тела) внешних признаков токсикоза и гибели крыс не наблюдали в течение всего опытного периода. Шерстный покров был чистым и блестящим. Животные охотно потребляли корм и воду; отсутствовало возбуждение или угнетение, мышечные подергивания, тремор, парезы, выделения из носа, глаз, ротовой полости или иные признаки интоксикации.
В таблице 3 приведены данные по динамике прироста массы тела у подопытных и контрольных крыс. Еженедельные приросты и конечные показатели массы тела, а также процент к исходной массе тела у крыс, которым вводили циперил, в количественном отношении не отличались от данных показателей у контрольных животных.
В таблице 4 приведены значения массовых коэффициентов органов крыс, получавших циперил в дозах 208 и 104 мг/кг/сут.Как следует из данных таблицы, массовые коэффициенты органов у животных двух подопытных групп колебались в пределах контрольных значений и физиологической нормы для данного вида животных. В частности, значение относительной массы печени у крыс, получавших циперил в дозах 1/10 и 1/20 от ЛД50, составило 31,6±1,22 и 31,7±1,20 против контрольного значения 32,4±1,21 г; почек -7,1±0,17 и 7,3±0,21 против 7,5±0,22 в контроле и сердца - 3,6±0,11 и 3,7±0,12 против 3,6±0,12 в контроле.
В таблице 5 представлены результаты изучения гематологических показателей у крыс, получавших циперил в двух дозах, и у контрольных животных.
Данные таблицы 5 свидетельствуют о том, что препарат в дозах 208 и 104 мг/кг/сутки не оказал достоверного влияния на целый ряд анализированных гематологических показателей. В частности, уровень гемоглобина у крыс, получавших препарат в дозах 208 и 104 мг/кг/сутки, равнялся 108,4±7,0 и 111,4±7,2 против контрольного значения 114,2±7,4 г/%; количество эритроцитов составило 5,11±0,60 и 5,48±0,56 против 5,74±0,66 млн/мм3; число лейкоцитов равнялось 6,94±0,80 и 7,61±1,16 против 8,40±1,20 тыс./мм3.
Важно отметить, что введение циперила не привело к изменению лейко-граммы (табл. 5).
В таблице 6 приведены биохимические показатели сыворотки крови крыс, которым вводили циперил в дозах 208 и 104 мг/кг, и у контрольных животных.
Таблица 2
Параметры острой токсичности циперила (10%-ный раствор)
Вид животных Путь введения ЛДо ЛД16 ЛД50 (доверительные границы) ЛД84 ЛД100
Белые В желудок 500 730 1160 1270 1560
мыши (1029-1280)
Белые В желудок 1500 1710 2080 2370 2580
крысы (1920-2170)
Таблица 3
Динамика прироста массы тела у крыс при введении в желудок циперила в течение 28 сут (п=8)
Период Доза, мг/кг в сутки Контроль
208 104
До введения 146,3±4,6 148,8±4,0 146,2±4,5
Через 1 неделю 180,1±5,0 179,2±5,3 177,4±5,0
Через 2 недели 209,7±5,3 209,5±4,9 207,2±6,1
Через 3 недели 229,6±6,2 233,2±6,0 231,4±5,6
Через 4 недели 260,3±7,6 264,1±6,6 265,2±5,7
Процент к исходной массе тела 177,9±7,6 177,5±6,7 181,4±7,2
Примечание: Разница несущественная (Р > 0,05).
Таблица 4
Влияние циперила на массовые коэффициенты органов (n=8)
Орган Доза, мг/кг в сутки Контроль
208 104
Сердце 3,6±0,11 3,7±0,12 3,6±0,12
Легкие 6,7±0,14 7,0±0,18 7,0±0,15
Печень 31,6±1,22 31,7±1,20 32,4±1,21
Селезенка 2,8±0,18 2,8±0,17 2,7±0,20
Почки 7,1±0,17 7,3±0,21 7,5±0,22
Примечание: Разница несущественная (Р > 0,05).
Таблица 5
Влияние циперила на гематологические показатели крыс (n=8)
Показатели Доза, мг/кг в сутки Контроль
208 104
Гемоглобин, г/% Эритроциты, 106/мм3 Тромбоциты, 103/мм3 Лейкоциты, 103/мм3 Средний объем эритроцитов, мкм3 Гематокрит, % Среднее содержание гемоглобина в одном эритроците, ПК Средний объем тромбоцитов, мкм3 Тромбокрит, % 108,4±7,0 5,11±0,60 169,0±8,16 6,94±0,80 52,84±1,41 26,04±2,62 21,92±1,10 7,52±0,36 0,12±0,02 111,4±7,2 5,48±0,56 171,4±8,46 7,61±1,16 51,74±1,20 27,54±2,40 21,30±1,22 7,42±0,30 0,12±0,03 114,2±7,4 5,74±0,66 174,7±7,80 8,40±1,20 51,40±1,16 27,82±2,36 20,53±1,18 7,22±0,35 0,12±0,03
Лейкограмма, %о
Лимфоциты, % Эозинофилы, % Моноциты, % Сегментоядерные, % 69,58±1,54 3,20±0,30 3,10±0,20 24,12±2,16 69,56±1,40 3,30±0,32 3,44±0,33 23,70±2,40 70,48±1,42 3,14±0,30 3,28±0,31 23,10±2,12
Примечание: Разница несущественная (Р > 0,05).
113
Таблица 6
Влияние циперила на биохимические показатели крыс (n=8)
Показатели Доза, мг/кг в сутки Контроль
208 104
Общий белок, г/л 49,62±3,20 53,02±3,12 54,20±3,10
Альбумин, г/л 34,02±2,96 32,15±3,30 31,40±3,22
Креатинин, мкмоль/л 75,44±6,26 73,14±5,72 69,12±6,31
Мочевина, моль/л 12,41±1,26 11,60±1,20 10,85±1,02
Глюкоза, моль/л 6,30±0,80 5,90±0,62 5,54±0,48
Билирубин, моль/л 7,72±0,60 6,72±0,50 6,42±0,56
АЛТ, Е/л 93,20±1,50* 70,07±4,20 63,47±5,30
АСТ, Е/л 524,46±23,16* 410,18±24,55 385,42±24,16
Щелочная фосфатаза, Е/л 71,40±5,20* 58,40±4,40 53,13±5,02
Амилаза, Е/л 524,32±24,20 517,14±26,18 476,32±27,23
Примечание: * - Разница существенная (Р < 0,05).
Полученные результаты нуждаются в обсуждении. Нами было изучено 10 основных биохимических показателей, отражающих состояние обмена веществ в организме животных. При анализе данных таблицы 6 можно прийти к выводу, что введение циперила в дозе 208 мг/кг/сутки привело к достоверному повышению активности аланин- и аспартатаминотрансфераз и щелочной фосфатазы, что свидетельствует о нарушении функционального состояния печени. Кроме того, при применении циперила в дозе 208 мг/кг/сутки отмечали тенденцию к повышению активности амилазы. Введение препарата в дозе 104 мг/кг/сутки не изменило ни один из тестируемых биохимических показателей у животных по сравнению с контролем.
Функциональное состояние почек не претерпело отрицательных изменений при обеих дозах препарата, поскольку уровень креатинина и мочевины был сравним с контрольными значениями.
Суммируя в целом результаты изучения субхронической токсичности, можно констатировать, что циперил в двух тестированных дозах 208 и 104 мг/кг/сутки (суммарные дозы 5824 и 2912 мг/кг соответственно) не изменял общего состояния и поведения животных, прием корма и воды, динамику прироста массы тела и гематологические показатели. Однако, циперил в дозе 208 мг/кг/сутки привел к достоверному повышению активности аланин- и аспартатаминотрансфераз и щелочной фосфатазы. Доза 104 мг/кг/сутки изменений биохимического профиля сыворотки крови крыс не вызывала.
На основании вышеизложенного можно сделать вывод, что доза 1/10 от ЛД50 является пороговой.
Полученные результаты изучения аллергизирующих свойств циперила свидетельствуют о том, что он в испытанной дозе не обладает антигистамин-ной активностью, так как не предотвращает смерть животных от введенной дозы гистамина, а также и не ускоряет ее, что указывало бы о гистаминном аллергизирующем действии (табл. 7).
Таблица 7
Результаты изучения аллергизирующих свойств циперила (метод гистаминного шока, морские свинки)
Группа животных Срок введения гистамина после циперила, ч Время наступления гистаминного шока, мин
Подопытная 6 19,3±0,20
Контрольная 6 19,2±0,22
Подопытная 12 19,2±0,22
Контрольная 12 19,1±0,23
114_
Российский паразитологический журнал, 2009, № 2
Примечание: Р > 0,05.
Все животные подопытной и контрольной групп пали приблизительно в одни и те же сроки. При введении гистамина морским свинкам через 6 ч после введения циперила время наступления гистаминного шока равнялось 19,3±0,20 мин, через 12 ч - 19,2 ±0,22 мин, а у контрольных животных соответственно 19,2±0,22 и 19,1±0,23 мин. Разница в показателях животных подопытной и контрольной групп была несущественной (Р > 0,05).
Таким образом, циперил не обладает аллергизирующим действием.
При нанесении циперила на кожу животных наблюдали адекватную реакцию на нанесение чужеродного вещества. Каких-либо симптомов интоксикации, изменений состояния и поведения крыс не наблюдали в течение всего периода наблюдений (табл. 8).
Таблица 8
Результаты оценки действия циперила на кожу крыс
Критерий оценки раздражающего действия на кожу Наличие или отсутствие (+/-)
Эритема Увеличение кожной складки Трещины, изъязвления и т.п. Температура кожи В норме
Как следует из приведенных в таблице 8 данных, препарат по вышеизложенным критериям не оказывал отрицательного воздействия на неповрежденную кожу крыс. Через 10-12 сут после нанесения препарата кожа покрылась ровным шерстным покровом.
При изучении влияния циперила в разведении 1 : 10 и 1 : 20 на конъюнктиву глаза кроликов наблюдали адекватную реакцию на внесение инородного тела. Выраженность реакции на препарат соответствовала 0 баллов. Никаких других признаков не наблюдали, включая таковые, свидетельствующие о раздражающем действии препарата (покраснение, слезотечение, отечность, инъекция склеры и т. п.).
Однако при нанесении препарата в неразведенном виде отмечали легкое покраснение конъюнктивы глаза кроликов в первые сутки. На 3-4-е сутки наблюдений изменений не отмечали.
Таким образом, циперил проявил раздражающее действие в легкой степени на слизистые оболочки глаза кроликов. Препарат при разведении 1 : 10 и 1 : 20 не проявил раздражающего действия.
Заключение
Циперил относится к умеренноопасным веществам (III класс опасности согласно ГОСТ 12.1.007-76). При введении в желудок ЛД50 препарата составила для белых мышей 1160 мг/кг и 2080 мг/кг для белых крыс.
При изучении субхронической токсичности циперила установлено, что препарат в дозах 1/10 и 1/20 от ЛД50, равных соответственно 208 и 104 мг/кг, при введении в течение 28 сут не влияет на организм белых крыс, не снижает прирост массы тела животных, не вызывает падеж и не оказывает влияния на морфологические и биохимические показатели крови крыс, за исключением повышения активности аланин- и аспартатаминотрансфераз и щелочной фосфатазы при дозе 208 мг/кг (суммарная доза 5824 мг/кг).
Циперил не обладает аллергизирующим действием и при разведении 1 : 10 и 1 : 20 не проявляет раздражающего действия на слизистую оболочку глаз кроликов.
115
Литература
1. Аббасов Т.Г., Рустамов Ю.М. // Сб. науч. тр. ВНИИ веет. санитарии, гигиены и экологии. - 1998. - Т. 106. - С. 70-75.
2. Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. - Л.: Госмедиздат, 1963. - 152 с.
3. Гершанович М.Л. Воспроизведение заболеваний у животных для экспериментальных терапевтических исследований. - М., 1954. - С. 24-48.
4. Козлова И.К. // Сб. науч. тр. ВНИИ веет. санитарии, гигиены и экологии. - 1992. - Вып. II. - С. 70-75.
5. Методические рекомендации по изучению раздражающих свойств и обоснованию предельно допустимых концентраций веществ в воздухе рабочей зоны. - 1980. - 25 с.
6. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - 2005. - 23 с.
7. Рустамов Ю.М. // Сб. науч. тр. ВНИИ веет. санитарии, гигиены и экологии. - 1992. - Вып. II. - С. 70-75.
8. International Program on Chemical Safety. Environmental Health Criteria 82. Cypermethrin. - 1989.
Pharmaco-toxicological properties of cyperil I.A. Prohorova
Pharmaco-toxicological properties of cyperil on laboratory animals are investigated. LD50 of cyperil at introduction in stomach to white rats makes 2080 mg/kg, to white mouses - 1160 mg/kg of body weight. Cyperil in therapeutic doze has no irritating and allergic actions.
