CC BY
59
I (что также было характерно и для группы МД «НУ»), так и на этапе II исследования. При этом в большинстве случаев на этапе I для испытуемых данной группы было характерно преобладание степени включения дыхательной системы в процесс достижения результата в эмоционально напряженные эпизоды обучения (Лчсс<Лчдд), а на этапе II периодически определялось преобладание системы гемодинамики и торможение дыхательной системы (ЛчСС>Лчдд). Кроме того, анализ динамики значений показателя р выявил на этапе II расширение диапазона с 0,050-0,3656 до 0,057- 0, 6181 , как и у лиц группы МД «НУ» (табл. 3).
Также, учитывая индивидуальную динамику значений показателей руд и р, можно отметить, что результативность учебной деятельности у данных субъектов, как и в группе «МД/НУ», либо поддерживается на постоянном уровне, либо увеличивается к экзаменационному испытанию и сопровождается, в первом случае - постоянным снижением значений р уд за счет уменьшения «вклада» кардио-респираторных функций в реализации МД (табл. 3), а во втором - обеспечивается постоянным уровнем «физиологической цены» (табл. 3).
Выводы. Учитывая выше описанные данные, можно сделать следующие выводы:
1. При однократных измерениях, как и долгосрочном наблюдении, величина мотивации достижения всегда коррелирует положительно с выраженностью своего внутреннего нейродина-мического компонента «надежда на успех» и отрицательно -компонента «боязнь неудачи».
2. Для лиц с высоким уровнем мотивации достижения характерна триада личностных диспозиций - низкая тревожность, интроверсия, низкий нейротизм, тип поведения АБ; для лиц с низким уровнем мотивации достижения - высокая тревожность, экстраверсия, высокий нейротизм, тип поведения А.
3. В фоновый период среди выделенных групп испытуемых не обнаружено прямой и жесткой корреляции между выраженностью их мотивации достижения и типом вегетативной регуляции (симпатотонический, ваготонический, нормотонический); в ходе длительных наблюдений (в течение учебного года) лица со стабильно высоким или низким уровнем выраженности мотивации достижения проявили сохранность исходного типа вегетативной регуляции кардио-респираторных функций (абсолютные и интегральные показатели).
4. Среди многочисленных абсолютных и интегральных показателей кардио-респираторных функций у испытуемых в фоновой период были выявлены корреляционные связи лишь между выраженностью мотивации достижения и показателями средне-гемодинамического давления, частоты дыхательных движений и индекса неравномерности дыхания.
5. В ходе длительных наблюдений (этапы ^П) у одних и тех же испытуемых выделенных групп наблюдалось выраженное, персонифицированное и внешне хаотичное разнообразие изменений абсолютных показателей гемодинамики и дыхания; динамика интегральных показателей обнаруживала устойчиво проявляющиеся (инвариантные) черты интеграции или дезинтеграции системных кардио-респираторных отношений.
6. Величина личностной диспозиции мотивации достижения в выделенных группах студентов не коррелировала достоверно (положительно) с результативностью их обучения (оценка знаний преподавателем); в эмоционально-напряженные периоды (коллоквиумы, зачетное и экзаменационное испытания) испытуемые характеризовались поддержанием постоянного уровня своей результативности учебной деятельности или постепенным повышением его к экзаменационному испытанию.
Литература
1. Анохин, П.К. Биология и нейрофизиология условного рефлекса / П.К. Анохин.- М.: Медицина, 1968.- 547 с.
2. Боровиков, В. 8ТАТКТЮА: искусство анализа данных на компьютере. Для профессионалов / В. Боровиков.- СПб: Питер, 2001.- 656 с.
3. Глазачев, О.С. Кардио-респираторные взаимоотношения в организме человека при ритмических тепловых воздействиях / О.С. Глазачев, Е.Н. Дудник, С.Я. Классина // Вестник новых медицинских технологий, 2002.- Т.К.- N.1.- С. 44-49.
4. Дмитриева, Н.В. Индивидуальное здоровье и полипараметрическая диагностика функциональных состояний организма / Н.В. Дмитриева, О.С. Глазачев.- М.: Горизонт, 2000.- 214 с.
5. Ильин, Е.П. Мотивация и мотивы / Е.П. Ильин.- СПб: Питер, 2008.- 512 с.
6. Лебедева, Н.А. Кардио-респираторные функции и динамика мотивационно-эмоционального напряжения у студентов при обучении: автореф. дис.канд. биол. наук. НИИНФ им. П.К. Анохина РАМН/ / Н. А. Лебедева.- М., 2004.- 24 с.
7. Магомед-Эминов, М.Ш. Мотивация достижения: структура и механизмы: автореф. дис.канд. психол. Наук / М.Ш. Ма-гомед-Эминов.- М., 1987.- 22 с.
8. Макклеланд, Д. Мотивация человека / Д. Макклеланд.-СПб: Питер, 2007.- 667 с.
9. Маслоу, А. Мотивация и личность / А. Маслоу.- СПб: Питер, 2010.- 352 с.
10. Реан, А.А. Психология и психодиагностика личности. Теория, методы исследования, практикум / А.А. Реан.- СПб.: Прайм-ЕВРОЗНАК, 2006.- С. 231-233.
11. Судаков, К.В. Доминирующая мотивация / К.В. Судаков. М.: РАМН, 2004.- 236 с.
12. Судаков, К.В. Теория функциональных систем / К.В. Судаков.- М.: Мед. музей, 1996.- 95 с.
13. Физиологические механизмы учебной деятельности студентов. Учебное пособие для системы послевузовского профессионального образования / Кол. авт.; под ред. Судакова К.В.-М.: Издательский дом «Русский врач», 2007.- С. 27-108.
14. Хекхаузен, Х. Мотивация и деятельность / Х. Хекхау-зен.- СПб.: Питер; М.: Смысл, 2003.- 860 с.
COMPARATIVE ANALYSIS OF CARDIO-RESPIRATORY CORRELATES OF ACHIEVEMENT MOTIVATION AMONG THE STUDENTS IN THE COURSE OF EDUCATIONAL PROCESS
A.P. NOVIKOVA, A.V. KOTOV
Velikiy Novgorod State University after Yaroslav the Wise, Institute of Medical Education Moscow Research Institute of Normal Physiology after P.K. Anokhin, Russian Academy of Medical Sciences
The article highlights a test concerning the studying temporal dynamics of personal level determinants of purpose - achievement motivation and accompanying cardio-respiratory accompaniment of its implementation in the emotionally intense periods of learning activities. It has been demonstrated that both high and low stable levels of AM (achievement motivation) have a number of common features of vegetal accompaniment; they are provided with different versions of intersystem relations of cardiovascular and respiratory functions and do not correlate (favourably) with the level of success (efficiency) of educational efforts.
Key words: achievement motivation, hope of success, fear of failure, psychophysiological construct, cardio-respiratory correlates, efficiency of target-oriented activity.
УДК 576.65.08
ФАКТОРЫ ПЕРСИСТЕНЦИИ ПРОСТЕЙШИХ ФЕКАЛЬНОЙ ФЛОРЫ ПРИ ДИСБИОЗЕ КИШЕЧНИКА
Н.В. БУГЕРО*, И.С. НЕМОВА Н.И. ПОТАТУРКИНА-НЕСТЕРОВА**
Определяли персистентные свойства у 95 штаммов простейших Blastocystis hominis фекальной флоры, выделенных при дисбиозе кишечника от 137 пациентов с патологией желудочно-кишечного тракта. Обнаружено, что распространенность признака убывает в ряду антилактоферриновой (АЛфА) - антилизоцимной (АЛА) активностей. Значения изучаемых признаков коррелировали с показателями патогенности простейших бластоцист. Высокие по сравнению с фоновым уровнем значения АЛфА и АЛА у простейших бла-стоцист могут служить подтверждением их роли в развитии дисбио-за кишечника.
Ключевые слова: простейшие, Blastocystis hominis, персистенция, антилактоферриновая активность, антилизоцимная активность, гастроэнтерологические больные.
Среди микроорганизмов, вызывающих патологию человека, стали чаще выявляться различные виды условно-патогенных, а также мало изученных возбудителей. В связи с этим особую актуальность приобретает широко распространенная протозойная
* Государственная полярная академия, г. Санкт-Петербург, [email protected] Ульяновский государственный университет, г. Ульяновск, №тоуа
[email protected], [email protected].
инвазия - бластоцистоз, обусловленная паразитированием в толстой кишке простейших Blastocystis hominis [6,7]. Находясь в кишечнике, бластоцисты участвуют в формировании микробиоценоза данного биотопа. Нарушая баланс микроорганизмов, эти возбудители способствуют созданию благоприятных условий для развития патологических процессов [4]. В последние годы установлена этиологическая роль этих простейших в развитии дис-биоза кишечника при хронических заболеваниях желудочно-кишечного тракта [1]. При этом способность к заселению той или иной экологической ниши зависит от наличия у бактерий определенных свойств. Среди биологических свойств бластоцист практически не изучены факторы бактериальной персистенции, позволяющие микроорганизму длительное время сохранять жизнеспособность в организме человека.
Цель исследования — изучение у простейших бластоцист при дисбиозе кишечника секретируемых факторов, инактиви-рующих защитные механизмы хозяина - антилактоферриновой (АЛфА) и антилизоцимной (АЛА) активностей.
Материалы и методы исследования. В работе использованы 95 штаммов простейших Blastocystis hominis, выделенных от больных с патологией желудочно-кишечного тракта, находившихся на стационарном лечение. У всех пациентов имелись клинико-лабораторные признаки дисбиоза. Группу сравнения составили 80 практически здоровых лиц.
Состояние микробиоценоза кишечника оценивали методом серийных разведений с последующим высевом на соответствующие питательные среды [6]. Идентификацию штаммов проводили с помощью коммерческих тест-систем фирмы «Lachema» (Чехия). Видовую принадлежность устанавливали с использованием компьютерной программы «Second 2.11». АЛфА и АЛА активности определяли по методу О.В. Бухарина с соавт. [1,2,6].
Степень выраженности патогенности бластоцист определяли путем приготовления взвеси этих простейших в физиологическом растворе из расчета 106 клеток в 1мл, затем производили ряд последовательных десятикратных разведений с последующим введением внутрибрюшинно беспородным белым мышам 0,5 мл взвеси культуры простейших. Через сутки отмечали число погибших от каждого изолята бластоцист животных и производили расчет LD50, вызывавшей гибель 50% животных. Обработку данных производили при помощи пакета прикладных программ для Microsoft Excel 2006 [5].
Результаты и методы исследования. Проведенные исследования показали, что из 137 обследуемых лиц бластоцисты были выявлены у 95 (69,34%) пациентов. При изучении возрастной структуры обследуемых установлено, что более 50% инвазиро-ванных были лица старше 50 лет, 30,5% больные в возрасте 3545 лет, 15% лица 25-35 лет, 4,5% дети 7-14 лет. В группе контроля бластоцисты встречались в 5% случаях.
Все обследуемые лица имели заболевания желудочно-кишечного тракта (ЖКТ). Уровень инвазированности бластоци-стами у обследуемых с различными заболеваниями был неодинаков. Наибольшее количество простейших обнаружены в фекалиях больных язвенной болезнью (табл. 1).
Таблица 1
Уровень инвазированности бластоцистами при заболеваниях желудочно-кишечного тракта
№ п/п Заболевания Общее количество обследованных Количество лиц инвазированных бластоцистами
Абс. % Абс. %
1. Язвенная болезнь 58 42,33, р<0,001 52 54,73, р<0,001
2. Язвенная болезнь желудка 32 23,36, р<0,01 23 24,21, р<0,001
3. Язвенная болезнь 12 перстной кишки 26 18,97, р<0,001 29 30,53, р<0,05
4. Хронический гастрит 29 21,17, р<0,01 14 14,74, р<0,001
5. Хронический холецистит 19 13,87, р<0,001 11 11,58, р<0,01
6. Синдром раздраженного кишечника 6 4,40, р<0,001 4 4,21, р<0,001
7. Неспецифический Язвенный колит 7 5,10, р<0,02 6 5,21, р<0,01
8. Желчно-каменная болезнь 14 10,22, р<0,01 5 5,3, р<0,01
9. Синдром оперированного желудка 4 3,0, р<0,01 3 3,16, р<0,01
Всего 137 95
При изучении микрофлоры толстой кишки у обследуемых лиц обнаружено изменение ее состава. Доминирующее положение в биоценозе кишечника лиц, инвазированных бластоцистами,
занимали анаэробные микроорганизмы, качественный и количественный состав которых был разнообразен (табл. 2).
Таблица 2
Качественный и количественный состав биоценоза кишечника обследованных
Группа микроорганизмов Инвазированные бластоцистами Здоровые
абс. % КОЕ/г абс. % КОЕ/г
Lactobacillus 68 71,57, р<0,01 7,0±0,2 76 95,02, р<0,001 8,7±0,2
Bifidobacterium 72 75,78, р<0,01 6,4±0,1 78 97,51, р<0,01 8,8±0,2
Escherichia 81 85,26, р<0,01 6,8±0,4 80 100,0, р<0,01 7,4±0,1
Bacteroides 87 91,57, р<0,01 8,5±0,1 80 100,0, р<0,01 9,8±0,3
Enterococcus 45 47,36, р<0,01 7,6±0,2 19 23,75, р<0,01 4,7±0,4
Proteus 34 36,78, р<0,02 6,0±0,7 14 14,73, р<0,05 3,8±0,2
Klebsiella 32 33,68, р<0,01 6,8±0,2 11 13,75, р<0,01 4,2±0,4
Enterobacter 23 24,21, р<0,02 3,9±0,4 10 12,52, р<0,01 3,7±0,1
Staphylococcus 63 66,31, р<0,02 6,2±0,3 18 22,50, р<0,02 4,3±0,2
Candida 47 49,47, р<0,001 6,4±0,2 14 17,50, р<0,001 3,7±0,1
Clostridium 19 20,01, р<0,001 6,1±0,6 12 15,00, р<0,001 6,7±0,8
Всего 95 80
Р <0,05 <0,05
Дальнейшая интерпретация полученных результатов показала, что присутствие в микрофлоре кишечника простейших B.hominis в подавляющем большинстве наблюдений сопровождается нарушением микробиоценоза кишечника, что характеризуется уменьшением представителей нормальной флоры (бифидо-бактерий, лактобактерий, бактероидов) и увеличением условно-патогенных микроорганизмов (энтерококков, клебсиелл, стафилококков). Согласно классификации дисбиозов кишечника, предложенной Куваевой И.Б. и Ладодо К.С., дисбактериоз I степени (Д I) выявлен у 45 (47,3%, р<0,05) лиц, инвазированных бластоцистами, Д II - у 29 человек (30,5%, р<0,05), в 17 случаях (18,0%, р<0,02) был диагностирован дисбактериоз III степени. Нарушения микроэкологии IV степени тяжести, характеризующейся полной разбалансированностью в составе микрофлоры, были установлены у 4 (4,2%, р<0,05) инвазированных бластоцистами.
Следующим этапом работы было изучение персистентных свойств бластоцист. Все изучаемые штаммы простейших разделили на 4 группы в зависимости от степени выраженности дисбиоти-ческих нарушений у обследуемых лиц. Первую группу составили штаммы микроорганизмов, выделенные у лиц с дисбиозом I степени, вторую и третью группы - с дисбактериозом II и III степени соответственно, четвертую - с дисбиотическими нарушениями IV степени тяжести. Проведенные исследования показали, что перси-стентные свойства достаточно широко представлены у простейших Blastocystis hominis при дисбиозе кишечника (рис.1).
□ Отсутствие данного признака у бластоцист
□ Бластоцисты, обладающие АЛА
□ Отсутствие АЛА бластоцист
Рис.1 Распространение АЛфА простейших Blastocystis hominis и АЛА
Самой распространенной оказалась антилактоферриновая активность, которой обладало подавляющее большинство штаммов бластоцист. Установлено, что из 95 изучаемых штаммов бластоцист 67 (70,50%, р<0,05) обладают данным признаком. Наиболее часто признак регистрировали у штаммов бластоцист, выделенных у людей c дисбиотическими изменениями II и III степени. Из 45 штаммов бластоцист составляющих первую группу АЛфА наблюдалась у 35 (52,21%). Значения АЛфА бластоцист в этой группе варьировали в пределах от (62-68±10,7 нг/мл). У простейших образующих вторую группу этот признак регистрировался у всех изучаемых штаммов и имел высокие значения от 256-289±19,2 нг/мл. При дисбактериозе кишечнка III степени тяжести из 17 штаммов простейших 13 обладали антилактофер-риновой активностью. Значения данного признака было практически таким же как и при дисбиозе II степени и варьировало от 258-295±11,2 нг/мл. У штаммов бластоцист 4 группы, выделенных от людей с дисбактериозом IV степени тяжести признак регистрировался у 3 штаммов из 4 и имел максимальные значения АЛфА (300±9,2 нг/мл).
Антилизоцимный признак регистрировался менее часто у изучаемых штаммов простейших. Из 95 изученных штаммов бластоцист 43 штамма (45%, р<0,03) обладали АЛА. Для анализа персистентных характеристик бластоцист были выделены 3 группы простейших: первая, включала штаммы с низким уровнем АЛА - до 2 мкг/мл включительно, вторая со средним уровнем -3-4 мкг/мл и третья с высоким уровнем - 5 мкг/мл и более. Доля штаммов с низкими показателями АЛА составила 65,20%, р<0,05 (28 штамма), со средним уровнем - 23,20%, р<0,02 (10 штаммов), и 11,60%, р<0,05 (5 штаммов) с высоким уровнем АЛА. В зависимости от степени тяжести дисбиотических нарушений уровень АЛА варьировал. При дисбактериозе кишечника I и II степени регистрировались штаммы бластоцист с низкими и средними значениями изучаемого признака. При дисбиотических нарушениях III и IV степени наболюдались средние и высокие значения антилизоцимного признака. В совокупности все представленные данные указывают на то, что простейшие Blastocystis hominis обладают значительной активностью факторов персистенции, которые способствуют им вытеснять нормальных симбионтов микрофлоры кишечника человека и колонизировать слизистые оболочки изучаемого биотопа, создавая особый паразитоценоз.
Известны многочисленные сообщения, свидетельствующие о значении бластоцист в патологии человека. Для аргументации их этиологической значимости провели изучение патогенных свойств простейших Blastocystis hominis, выделенных у гастроэнтерологических больных
Проведенные исследования показали, что из 95 клинических изолятов бластоцист, только 67,36%, р<0,05 (64 штамма) вызывали гибель мышей, причем показатель LD50 в lg этих культур варьировал от 3,6±0,2 до 5,8±0,2.
Полученные данные позволили в зависимости от величины этого показателя все патогенные штаммы разделить на 3 группы (табл. 3).
Патогенность изолятов 1 группы слабо выражена, LD 50 /lg культур этой группы (штамма) составил 3,6±0,2 - 4,1±0,7. Наибольшие значения патогенности были отмечены в 3 группе, где их показатель составил 4,9±0,3 - 5,8±0,2. В контрольной группе показатель патогенности бластоцист был значительно ниже и составил lg LD50 2,4±0,5 - 2,7±0,3).
Таблица 3
Величина LD50 клинических изолятов Blastocystis hominis
Группы изолятов ^лине^но изолятов(абс) Kоличество изолятов (%) Величина LD 50 (lg)
1 группа 18 28,13 3,6±0,2 - 4,1±0,7
2 группа 15 23,44 4,1±0,7 - 4,9±0,3
3 группа 31 48,43 4,9±0,3 - 5,8±0,2
Всего 64 100,0
Дальнейшие исследования были направлены на изучение ан-тилактоферриновой и антилизоцимной активностей штаммов простейших бластоцист, имеющих разные показатели патогенности. Поскольку все штаммы бластоцист были разделены в зависимости от значений патогенности на 3 группы, производили определение персистентных характеристик в каждой изучаемой группе.
Определение АЛфА у культур Blastocystis hominis, отличающихся величиной патогенности показал следующее, уровень антилактоферриновой активности бластоцист значительно увеличивался у штаммов с высокими показателями патогенности. Так, у бластоцист с менее выраженными патогенными свойствами (lg LD50 3,6±0,2 - 4,1±0,7) уровень АЛфА бластоцист составил 20-48±9,2 нг/мл. У простейших 2 и 3 группы (lg LD 50 4,1±0,7 -4,9±0,3) и (lg LD50 4,9±0,3 - 5,8±0,2) соответственно выраженность данного признака была значительно выше (р<0,05) и составила 124-172±11,8 нг/мл и 193-232±19,4 нг/мл соответственно. В группе сравнения уровень антилактоферриновой активности имел низкие значения и составил 20-37±11,2 нг/мл.
Анализ изучения антилизоцимной активности штаммов простейших бластоцист имеющих разные значения патогенности показал следующие: у B.hominis с патогенными свойствами (lg LD50 3,6±0,2 - 4,1±0,7) наблюдались штаммы со средним значением изучаемого признака (3-4 мкг/мл). У простейших 2 и 3 группы ((lg LD 50 4,1±0,7 - 4,9±0,3) и (lg LD50 4,9±0,3 - 5,8±0,2) соответственно регистрировались высокие значения антилизо-цимной активности (5 мкг/мл и более). Полученные результаты свидетельствуют о том, что уровни АЛфА и АЛА простейших коррелировали с показателями патогенности бластоцист.
Выводы.
1. Выявлены высокие показатели инвазированности простейшими Blastocystis hominis у пациентов с патологией желудочно-кишечного тракта.
2. Уровень инвазированности бластоцистами у обследуемых с различными заболеваниями ^K^ был неодинаков. Наибольшее количество простейших обнаружены в фекалиях больных язвенной болезнью.
3. Инвазия бластоцистами сопровождается структурной перестройкой в микробиоценозе кишечника обследуемых лиц. Выявленные изменения микроэкологии кишечника проявляются как снижением частоты и плотности колонизации бифидо- и лактобактериями, так и увеличением обсемененности условно-патогенными микроорганизмами.
4. Установлена высокая частота встречаемости персисти-рующих свойств простейших бластоцист. У изучаемых штаммов простейших обнаружена антилактоферриновая и антилизоцимная активности. Выявлено, что распространенность признака убывает в ряду АЛфА -АЛА активностей.
5. Обнаружено, что максимальные значения изучаемых признаков встречаются у штаммов бластоцист выделенных от людей с дисбактериозом III и VI степени. Высокий уровень АЛ-фА и АЛА у простейших бластоцист может служить подтверждением их роли в развитии дисбиоза кишечника.
6. Значения АЛфА и АЛА бластоцист коррелировали с показателями патогенности изучаемых простейших.
Литература
1. Бондаренко, В.М. Дисбактериозы кишечника у взрослых / В.М. Бондаренко, Н.М. Грачева, Т.В. Мацулевич.- М.: KMK, 2003.- 224 с.
2. Бухарин, О.В. Персистенция патогенных бактерий / О.В. ухарин.- М.: Медицина, 1999.
3. Новый метод определения антилактоферриновой активности микроорганизмов / Валышева И.В. [и др.]// Журн. Микро-биол.- 2003.- №4.- С. 64-67.
4. Красноперова, Ю.Ю. Характеристика изменений патогенного потенциала микроорганизмов-симбионтов в протозойно-бактериальных ассоциациях: Дис...докт. биол. Наук / Ю.Ю. ^асноперова.- М., 2009.
5. Лакин, Г. Ф. Биометрия (учебное пособие для биологических специальностей университетов) / Г.Ф. Лакин.- М., Высшая школа, 1990.
6. Чайка, Н.А. Бластоцистоз и СПИД /Н.А.Чайка // Медицинская паразитология.- 1992.- №4.- С. 48-51.
7. Вlastocystis.hominis - intestinal parasit or commensal / Rein-thaler F.F. [et al.] // Wien^ed^ochenschr.- 1988.- V15.- P. 545-552.
FACTORS OF PERSISTENCE OF PROTOZOA OF FECAL FLORA AT INTESTINAL DYSBIOSIS
N.V. BUGERO, I.S. NEMOVA, N.I. POTATURKINA-NESTEROVA
State Polar Academy, St.Petersburg Ulyanovsk State University
Persistent properties were determined in 95 strains of fecal flora protozoa Blastocystis hominis allocated at intestinal dysbiosis of 137
patients with gastrointestinal tract pathology. It is found out that the prevalence of this sign decreases in the series of antilactoferrin (ALfA) - antilysozymic (ALA) activities. The values of studied signs correlated with pathogenic indices of protozoa Blastocystis. High values of ALfA and ALA as compared to background level in protozoa Blastocystis can serve as an evidence of their role in intestinal dysbiosis development.
Key words: protozoa, Blastocystis hominis, persistence, antilactoferrin activity, antilysozymic activity, gastroenterological patients.
УДК 632.938
РОЛЬ АУТОАНТИТЕЛ В РЕГУЛЯЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ УГЛЕВОДНОГО ОБМЕНА И ПОДДЕРЖАНИИ МЕТАБОЛИЗМА ГЛЮКОЗЫ
Г.Т. ЛЮТФАЛИЕВА*
Проведено исследование содержания и функциональной роли циркулирующих антител к инсулину, к клеткам островков Лангер-ганса и к декарбоксилазе глютаминовой кислоты во взаимосвязи с содержанием глюкозы, инсулина, С-пептида и некоторыми иммунологическими показателями в сыворотке крови практически здоровых жителей Европейского Севера.
Ключевые слова: антителообразование, аутоантитела, регуляция метаболических процессов, экологическая иммунология, физиология.
В последние годы имеется прогресс в понимании того, что значимость аутоантителообразования не ограничивается аутосен-сибилизацией, а определяется участием аутоантител в сохранении гомеостаза. Наличие аутоантител у практически здоровых людей свидетельствует о том, что образование их является физиологическим процессом. Естественно при этом возникают вопросы об их значимости. Литературные данные, касающиеся исследований физиологической роли аутоантител, не многочисленны и носят предположительный характер. Возникает закономерный вопрос: если аутоантитела - это регуляторные молекулы, а стойкое повышение либо снижение их содержания в кровотоке чревато патологическими последствиями, каким образом и что именно эти молекулы могут регулировать в нормальных условиях?
Цель исследования - изучить механизмы участия аутоан-тител в регуляции функциональной активности углеводного обмена и их метаболические эффекты у жителей Европейского Севера. Известно, что у здорового человека на Севере, в условиях комбинированного воздействия факторов среды и особенностей функционирования метаболических механизмов, возрастает роль регуляторных процессов [5].
Материалы и методы исследования. Проведено исследование 159 женщин от 30 до 60 лет. Среди них 75 человек проживающих в г. Архангельске и 84 человека - коренные жители поселка Нельмин-Нос НАО. Группы сопоставимы по возрасту и индексу массы тела (ИМТ). Обследуемые являлись клинически здоровыми добровольцами, которые на момент обследования не страдали острыми инфекционными заболеваниями, и у которых не выявлены признаки аутоиммунных и лимфопролиферативных заболеваний, частота ОРЗ составляла не более 1-2 раз в году. Дизайн исследования включал использование анкетного опроса по специально разработанным вопросам. Все обследуемые были поставлены в известность о проводимом исследовании и дали письменное согласие на участие в нем.
Архангельское городское население состояло, главным образом, из этнических русских, родившихся и постоянно проживающих на территории Архангельской области. Добровольцы из НАО - преимущественно ненцы, частично смешанные с коми и русскими, проживающие в п.Нельмин Нос НАО. Осмотр и забор крови у коренных жителей Заполярья проводился в рамках экспедиционных работ, проводимых ИФПА УрО РАН.
Из общей группы обследуемых северян от 30 до 60 лет, сформированы две рандомизированные группы сопоставимые по возрасту: группа 1 - лица с повышенным и пороговыми значениями антител к инсулину (больше 5 Ед/мл, п=54) и группа 2 - лица, у которых содержание аутоантител не превышает 5 Ед/мл (п=105).
Основным методом исследования являлся «конкурентный» иммуноферментный анализ (ИФА) в микропланшетном формате, который проводился на автоматическом иммуноферментном
* Учреждение РАН Институт физиологии природных адаптаций Уро РАН, 163000, г.Архангельск, пр.Ломоносов, 249
анализаторе «Evolis» фирмы «Bio-Rad» (Германия-США). Количественное определение сывороточных иммуноглобулинов А, М, G, E, а также цитокинов ИЛ-1 ß, ИЛ-4, ИЛ-6 проводили с использованием тест систем компании «Вектор-Бест» (Новосибирск), ИЛ-10 - «Biosource» (Europe S.A.), ФНО-а (диагностические наборы «ProCon», ООО «Протеиновый контур», С-Петербург). Определение уровня циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) проводили стандартным методом преципитации с использованием 3,5% и 7,5% ПЭГ-6000 в микромодификации реагентами компании «Panrec sintesis», Испания (Барселона).
Циркулирующие IgG антитела к инсулину (АТ к инсулину) исследовали с помощью иммуноферментного набора для количественного определения антител к человеческому инсулину в сыворотке «Анти-Инсулин» производства фирмы «Orgentec» (Германия). Согласно рекомендациям фирмы-производителя: нормальная концентрация антител - меньше 5 Ед/мл, пороговые значения - 510 Ед/мл, повышенные - больше 10 Ед/мл. Антитела к декарбоксилазе глютаминовой кислоты класса IgG (АТ к ДКГ) в сыворотке крови определяли тест-набором фирмы «Biomedica Gruppe». Референтные значения: отрицательный - <1 Ед/л, пороговые значения ->1-1,05 Ед/л, положительный - >1,05 Ед/л. Антитела к клеткам островков Лангерганса класса IgG (АТ к клеткам о.Лангерганса) в сыворотке крови исследовали с помощью тест-системы фирмы «Biomedica Gruppe». Диапазон значений: отрицательный - <0,95 Ед/мл, положительный - >1,05 Ед/мл.
Количественное содержание инсулина и С-пептида в сыворотке крови определяли реактивами фирмы «DRG» (Германия). Референтные значения инсулина - 2-25 мкМЕ/мл, С-пептида -0,5-3,2 нг/мл.
Натощаковый уровень глюкозы в сыворотке крови определялся ферментативным колориметрическим методом с использованием наборов "Chronolab AG" (Швецария) ( референтные значения 4,2-6,09 ммоль/л).
Количество клеток гемограммы, моноцитограммы, лимфо-цитограммы подсчитывали в мазках крови, окрашенных по методу Романовского-Гимза. Моноцитограмму определяли по методу О.Н. Григоровой [2]. Фагоцитарную активность нейтрофилов определяли с помощью тест-набора химической компании «Реа-комплекс» (г. Чита). Выделение мононуклеаров из периферической крови производили по методу A.Boymn [7]. Для фенотипи-рования лимфоцитов использовали непрямую иммуноперокси-дазную реакцию с применением моноклональных антител (НПЦ «МедБиоСпектр» и ООО «Сорбент» г. Москва).
Статистический анализ результатов исследования проведен с помощью компьютерной программы статистической обработки данных «SPSS for Windows. Версия 13». Для всех имеющихся выборок данных проверена гипотеза нормальности распределения (по критерию Колмогорова-Смирнова). Числовые характеристики представлены в виде: средняя арифметическая ± ошибка средней, стандартного отклонения, в условиях подчинения данных закону нормального распределения. В процессе статистической обработки результатов непараметрического анализа, исследованные количественные показатели представлены как медиана и интерквартиль-ные ранги Ме (L-H), где Ме - медиана, L - нижний квартиль, Н -верхний квартиль, р - достигнутый уровень значимости. Достоверность различий между группами определяли по критерию t Стъю-дента, критерию Фишера и критерию х2, использовались непараметрические тесты - Mann-Whitney Test и Kruskal-Wallis Test при множественном сравнении. Корреляции между показателями определяли с использованием коэффициента ранговой корреляции Спирмена и коэффициента линейной корреляции Пирсона. Проводился однофакторный регрессионный анализ. Критический уровень значимости р при проверке статистических гипотез в данном исследовании принимали равным 0,05.
Результаты и их обсуждение. Проведенные исследования показали, что сывороточное содержание глюкозы у женщин в возрасте 30-60 лет составляет 4,50±0,69 ммоль/л, отмечается большая вариабельность концентрации инсулина (7,37(4,51-12,26) мкЕд/мл), со смещением в сторону более низких значений относительно рекомендуемых нормативов. Установленный средний базальный уровень С-пептида характеризуется как сохраненный, но сниженный вариант секреторного ответа (0,21(0,13-0,91) нг/мл).
Анализ зависимости исследуемых показателей от района проживания выявил смещение уровня гликемии в сторону низких значений (4,26±0,08 ммоль/л против 4,95±0,11ммоль/л; р<0,001) и
