CC BY
37
Гематол. и трансфузиол., 2012, т. 57, № 3
Фактор роста кроветворного микроокружения, индуцированный облучением
А.Е. Бигильдеев, И.Н. Шипунова, Н.И. Дризе ФГБУ Гематологический научный центр Минздравсоцразвития России, Москва
Введение. Мезенхимные стволовые клетки (МСК) способны к формированию кроветворного микроокружения de novo. При имплантации костномозгового цилиндра под капсулу почки сингенной мыши образуется очаг эктопического кроветворения, в котором кроветворная территория строится заново за счет донорских МСК. Кроветворные клетки в таком очаге принадлежат реципиенту. Размер образованного очага прямо пропорционально зависит от количества МСК, содержащихся в имплантированном фрагменте костного мозга. В предварительно облученных реципиентах образуется очаг большего размера, причем эффект не зависит от давности облучения, но зависит от его дозы. При ретрансплантации таких увеличенных очагов в необлученных реципиентов формируется очаг обычного размера, что говорит о том, что увеличение кроветворной территории происходит не за счет изменения количества МСК, а за счет стимуляции роста их более дифференцированных потомков, не способных к самообновлению. Показано, что фактор роста стромального микроокружения синтезируется в костях облученных животных и секретирует-ся в кровь. Целью данной работы было выявить природу неизвестного ростового фактора стромального микроокружения.
Материалы и методы. С помощью ПЦР в режиме реального времени были исследованы различия в экспрессии 75 генов, дифференциально экспрессирующихся в стромальных клетках, в костях облученных и необлученных животных. Среди 12 генов с повышенным уровнем экспрессии в костях облученных животных выявлено всего два гена, кодирующих секретируемые белки, - IL-1b (повышение уровня экспрессии в 134 раза) и VEGFa (повышение уровня экспрессии в 4 раза). Для подтверждения роли IL-1b в индукции роста стромальных клеток-предшественников его инъецировали подкожно и внутрибрюшинно животным в течение 3 нед после имплантации костно-мозгового цилиндра под капсулу почки в дозах 15, 25,
30, 100, 200 и 400 пкг/мышь. Дозы вводимого фактора были подобраны исходя из концентрации IL-1b в сыворотке крови нормальных и облученных мышей, определенной с помощью ИФА. IL-1b растворяли в фосфатном буфере с 0,1% бычьего сывороточного альбумина. Размер образующегося очага эктопического кроветворения определяли через 6 недель после имплантации по числу содержащихся в нем ядерных клеток. Определяли вес костной раковины в очагах.
Результаты и обсуждение. Размер очага в контрольной группе животных, которым инъецировали растворитель IL-1b, составил 6,5 ± 0,5 х 106 клеток. В тоже время размер очага во всех опытных группах был больше и составил соответственно 7,1 ± 0,8; 7,2 ± 0,8; 7,3 ± 1,3; 10,8 ± 0,5; 10,6; 7,7 ± 1,2 х 106 клеток. Эффект IL-1b зависел от дозы и был наиболее выраженным при введении 100 пкг/мышь. Средняя масса костной раковины в очаге составила 2,8 мг в контрольной группе и 3,4; 3,7; 4,3; 4,8; 3,5 и 2,3 мг соответственно. Результаты подтверждают участие IL-1b в регуляции размера кроветворной территории. Впервые показана способность IL-1b стимулировать образование кроветворной территории in vivo. Вероятно, VEGFa не единственный белок, участвующий в регуляции роста стромального микроокружения. VEGFa, необходимый для роста сосудов, можно рассматривать как еще один потенциальный фактор, влияющий на размер образующейся кроветворной территории. Кроме того, IL-1b может стимулировать экспрессию и других стромальных ростовых факторов.
Заключение. Выяснение механизмов действия IL-1b на клетки стромального микроокружения может способствовать пониманию иерархического устройства отдела мезенхимных стромальных клеток. Более того, IL-1b может оказаться полезным в лечении заболеваний, при которых поражается кроветворное микроокружение, и костных дефектов.
Репертуар генов тяжелой цепи иммуноглобулинов при В-клеточном хроническом лимфолейкозе
Б.В. Бидерман, Е.А. Никитин, А.Б. Судариков ФГБУ Гематологический научный центр Минздравсоцразвития России, Москва
Введение. В-клеточный хронический лимфолейкоз (В-ХЛЛ) - самая часто встречающаяся лимфатическая опухоль у взрослых. Выделяют два варианта В-ХЛЛ, различающихся наличием мутаций в перестроенных генах тяжелой цепи иммуноглобулинов (относительно герминальных генов). В этих группах много важных биологических различий (например, немутированные случаи В-ХЛЛ имеют гораздо более высокий уровень экспрессии белка 2АРи CD, в отличие от мутированных). Таким образом, мутационный статус генов вариабельного региона тяжелой цепи иммуноглобулинов давно известен как важный фактор долгосрочного прогноза при В-ХЛЛ. Более детальное изучение последовательностей генов тяжелой цепи иммуноглобулинов привело к открытию стереотипных антигенных рецепторов - рецепторов, у которых совпадает набор использованных VH-, D- и JH-генов. По данным литературы, в настоящее время в мире определено 113 разновидностей стереотипных рецепторов [Ghia et al, 2005; Murray et al, 2008]. Случаи, несущие стереотипные антигенные рецепторы, составляют около четверти всех случаев В-ХЛЛ. Данный феномен не наблюдается при других лимфатических опухолях.
Материалы и методы. В исследование включены 491 больных В-ХЛЛ в возрасте 21-84 лет, медиана возраста 59 лет, 185 (38%) женщин и 306 (62%) мужчин. Мононукле-ары периферической крови выделяли методом центрифугирования в градиенте Ficoll-Hypaque. ДНК выделяли модифи-
цированным солевым методом. Мутационный статус генов вариабельного региона иммуноглобулинов определяли согласно [Nikitin et al, 2007].
Результаты и обсуждение. У 320 (65%) больных обнаружены немутированные гены иммуноглобулинов, 171 (35%) -мутированные. Использование 7 наиболее часто встречающихся VH-генов (VH1-69, VH4-34, VH3-23, VH3-30, VH1-2, VH4-39, VH3-11) наблюдается более чем в половине (52%) от всех случаев В-ХЛЛ. Мы выделили 64 подгруппы стереотипных рецепторов у 192 (39%) из 491 больного. Из них 20 подгрупп (подтвержденные) - совпадают более чем у 3 больных - у 104 (54%) из 192, 44 подгруппы (потенциальные) -встречаются у 2 больных. Следует отметить, что подавляющее большинство (95%) случаев подтвержденных стереотипных антигенных рецепторов встречается в подгруппе пациентов с немутированными VH-генами. Наиболее распространены следующие стереотипные рецепторы: VH1-69/D3-3/JH6 (n = 24; 5% от всех больных В-ХЛЛ); VH1-69/D3-16/JH3 (n = 8); VH1-69/D2-2/JH6 (n = 8); VH1-69/D3-10/JH6 (n = 6).
Заключение. Сужение репертуара иммуноглобулинов при В-ХЛЛ показывает, что возникновение и развитие данного заболевания не носит простой случайный характер, а показывает роль антигена, по крайней мере, у части больных В-ХЛЛ. Возможно, в будущем терапевтические решения будут базироваться не только на основании мутационного статуса, но также и на индивидуальных характеристиках HCDR3.
4
