CC BY
21
НАЦИОНАЛЬНЫЕ ПРИОРИТЕТЫ РОССИИ. 2011. № 2 (5). СПЕЦИАЛЬНЫЙ ВЫПУСК
ЭТИОЛОГИЯ КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА В ИРКУТСКОЙ ОБЛАСТИ
И.В.Козлова*, М.М. Верхозина**, Т.В. Демина*, Ю.П. Джиоев, Л.С. Карань***,
С.Е. Ткачев****, Е.К. Дорощенко, О.В. Лисак, В.А. Борисов*, М.К. Туваков*, В.И. Злобин*
НЦ ПЗСРЧ СО РАМН, г. Иркутск,
*ГОУ ВПО «Иркутский государственный медицинский университет», г. Иркутск, **ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Иркутской области», г. Иркутск, ***ФГУН «ЦНИИэпидемиологии» Роспотребнадзора РФ, г. Москва, ****ИнститутХБ и ФМ СО РАН, г. Новосибирск
Клещевой энцефалит (КЭ) в Иркутской области имеет свои региональные особенности, отличаясь по основным клиническим проявлениям как от дальневосточного, так и от западного вариантов заболевания. В структуре заболеваемости преобладают лихорадочные и менингеальные формы инфекции - их удельный вес составляет 74,2 %. Летальность в регионе за период с 1974 по 2009 г. в среднем составила 2,45 % (К.А. Аитов, 2011). Эти отличия обусловлены комплексом разных причин, одной из которых могут быть особенности этиологического агента.
Цель работы - генотипирование штаммов и изо-лятов РНК вируса КЭ, выделенных от больных с различными формами болезни и из биологических объектов, собранных в природных очагах Иркутской области.
Материалы и методы. В работе использовано 100 штаммов вируса КЭ из коллекции Института эпидемиологии и микробиологии НЦ ПЗСРЧ СО РАМН, выделенных с 1963 по 2006 г., изолированных из различных источников и 9 изолятов РНК из крови больных людей.
Генетическое типирование штаммов и изолятов РНК вируса КЭ проводили: 1) в реакции молекулярной гибридизации нуклеиновых кислот (МГНК) с применением генотипспецифических зондов, описание которых приводится в работе Т.В. Деминой и соавт., 2009; 2) путем секвенирования полного генома (2 штамма), гена белка Е или его фрагментов, участка гена белка С, выполненного на базе ФГУН «ЦНИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора, г. Москва, и в Институте ХБ и ФМ СО РАН, г. Новосибирск; 3) методом ОТ-ПЦР в режиме
реального времени с гибридизационно-флюоресцент-ной детекцией с генотипспецифическими зондами (Л.С. Карань, 2006).
Результаты. Изучение штаммов с использованием различных молекулярно-биологических технологий позволило установить, что в природных очагах Иркутской области циркулирует вирус КЭ трех генотипов -дальневосточного, урало-сибирского (сибирского), западного (европейского) при общем доминировании и более широком распространении урало-сибирского генотипа (79,5 % выборки) (табл. 1).
Кроме того, выявлены штаммы 886-84 и 178-79, имеющие своеобразную генетическую структуру, уникальность которой была доказана с помощью полногеномного секвенирования (Л.С. Карань, 2007). Уровень нуклеотидных и аминокислотных замен у этих штаммов приближается к границе разделения генотипов. При расшифровке полной аминокислотной последовательности обнаружено чередование аминокислот, характерных для двух или даже трех генотипов в пределах одного гена.
Результаты генотипирования штаммов, выделенных от больных людей, показали, что в этиологии КЭ в Иркутской области также принимают участие дальневосточный, урало-сибирский и западный генотипы, формируя разнообразие клинической картины этого заболевания (табл. 2).
Штаммы урало-сибирского генотипа (Айна/1448, 215-79, 210-79 и 413-04) вызывали инаппарантную, менингеальную, менингоэнцефалитическую и прогре-диентную формы заболевания. Штамм 1Г-98, выделен-
Таблица 1
Результаты генотипирования штаммов вируса КЭ, циркулирующего в природных очагах Иркутской области
Источник изоляции Количество Генотип
штамма штаммов 1 2 3 178-79 886-84
I. репШсаи 78 3 3 71 1 -
Грызуны 12 5 4 2 - 1
Насекомоядные 1 1 - - - -
Молоко коровы 2 1 - 1 - -
Всего: абс./% 93 10/10,8 7/7,5 74/79,5 1/1,1 1/1,1
Примечание: генотип 1 - дальневосточный; 2 - западный; 3 - урало-сибирский.
МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ДИАГНОСТИКЕ И ТИПИРОВАНИИ ПАТОГЕНОВ
Таблица 2
Генотипирование штаммов и изолятов РНК вируса КЭ, выделенных от больных людей в Иркутской области
Штамм, изолят РНК Источник выделения Форма заболевания Генотип
Айна/1448 Ликвор Хронический КЭ, прогредиентная форма 3
215-79 Секц. материал Острый КЭ, менинго-энцефалитическая форма 3
210-79 Сыворотка крови КЭ, форма неизвестна 3
1Г-98 Сгусток крови КЭ, лихорадочная форма 2
3869-03 Сыворотка крови КЭ, инаппарантная форма 3, 2
413-04 Сыворотка крови КЭ, менингеальная форма, двухволновое течение 3
2517-05 Сгусток крови Хронический КЭ, прогредиентная форма 1
А-09 РНК из крови Хронический КЭ, прогредиентная форма 1
J-09 РНК из крови КЭ, лихорадочная форма
G-09 РНК из крови КЭ, лихорадочная форма; гепатит А 1
Н-09 РНК из крови КЭ, лихорадочная форма, средней тяжести 1
Ки-09 РНК из крови КЭ, лихорадочная форма, средней тяжести 1
L-09 РНК из крови КЭ; клещевой риккетсиоз 1
S-09 РНК из крови КЭ, менингеальная форма, тяжелое течение 1
Ко-09 РНК из крови КЭ; ИКБ, безэритемная форма 1
В-09 РНК из крови КЭ, лихорадочная форма, средней тяжести 3
ный из сгустка крови больного лихорадочной формой КЭ, был отнесен к западному генотипу. Штамм 2517-05, изолированный из сгустка крови больной прогреди-ентной формой КЭ, принадлежал к дальневосточному генотипу.
С помощью ОТ-ПЦР в режиме реального времени был выявлен один микст-штамм (№3869-03), который содержал одновременно вирус КЭ урало-сибирского и западного генотипов. Штамм выделен из сыворотки крови человека с инаппарантной формой КЭ. До гено-типирования, выявившего наличие геномов двух подтипов, штамм прошел пять пассажей в культуре клеток и на белых беспородных мышах, что указывает на стабильность двойной инфекции.
Генотипирование девяти изолятов РНК, выделенных из проб крови больных, находящихся в 2009 г. на лечении в стационаре по поводу инфекционного заболевания, возникшего после укуса клеща, показало, что в семи случаях этиологическим агентом инфекции послужил вирус КЭ дальневосточного генотипа, в двух других - урало-сибирского.
Обсуждение. Одним из наиболее дискуссионных вопросов, обсуждаемых в научной литературе, является вопрос об этиологической связи различных подтипов вируса КЭ с определенными клиническими фор-
мами заболевания и тяжестью течения. Нами установлено, что в региональной инфекционной патологии принимают участие три генотипа вируса КЭ - урало-сибирский, дальневосточный, западный, а также микст-штаммы. Показано, что вирус КЭ урало-сибирского генотипа может вызывать весь спектр клинических проявлений - от инаппарантной формы инфекции до очаговой с летальным исходом. Вирус КЭ дальневосточного генотипа может участвовать в развитии лихорадочной, менингеальной и хронической прогреди-ентной форм инфекции. Об этиологической роли дальневосточного генотипа в развитии хронических форм КЭ свидетельствуют и результаты, полученные Е.Г. Без-руковой и соавт.
Данное исследование подтверждает мнение Г.Н. Леоновой и соавт., В.В. Погодиной и соавт., С.И. Беликова и соавт. о том, что прямой корреляции между субтипом (генотипом) вируса, его вирулентностью и тяжестью КЭ не существует. Для выявления связи между особенностями генома этиологического агента и клиническими особенностями заболевания требуется анализ полногеномных последовательностей штаммов вируса КЭ, обладающих различной вирулентностью для человека. Исследования в этом направлении будут продолжены.
