CC BY
30
Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»
Инфекция и иммунитет
РАЗРАБОТКА И ОЦЕНКА ПРОТОКОЛА ИДЕНТИФИКАЦИИ BRUCELLA SPP. МЕТОДОМ ПЦР
Г.Д. Абишева1, Е.С. Шевцова1, А.Д. Каиржанова1, Т.Б. Карибаев2, И.И. Сытник2, С.Б. Тюлегенов2, А.Б. Шевцов1, К.К. Муканов1
1РГПНациональный центр биотехнологии, Астана, Казахстан 2 РГП Национальный референтный центр по ветеринарии, Астана, Казахстан
Бруцеллез — инфекционная болезнь, поражающая животных всех видов, а также человека, и представляющая собой серьезную проблему для здравоохранения и животноводства. Ранняя диагностика играет ключевую роль в борьбе с бруцеллезом. Наряду с серологическими методами, в практике используются методы прямого обнаружения возбудителя бактериологическими методами и методом ПЦР. В данной работе представлены результаты исследований по разработке ПЦР протокола идентификации бруцелл и его апробации.
В работе были использованы праймеры: Omp2a-AB-F 5'-ttcgatcgctggtgytgttg-3' и Omp2a-AB-R 5'-gtcttg-ccccagtcgtcat-3'. Оптимизацию проводили в градиенте температуры при концентрации магния от 1,5 до 3,5 mM с использованием ДНК штаммов B. abortus 19 и генетического близкого вида O. thiophenivorans.
В результате оптимальный состав реакционной смеси включал праймеры 0,35 цМ каждого, 1 Ед Taq DNA Polymerase (Fermentas); 0,2 mM каждого дНТФ; 1-х ПЦР буфер (Fermentas, 10 mM Tris-HCl (pH 8,8 при 25°C), 50 mM KCl, 0,08% (объем/объем) Nonidet Р40), MgCl2 2,5 mM. Оптимальная температура отжига праймеров — 62°C.
Оценка чувствительности протокола была проведена на ряде двукратных разведений ДНК B. abortus 19, взятых в концентрациях от 50 до 9,5 нг в реакции. Предел обнаружения составил 76 фг, или около 21 геномных копий ДНК. Проверка специфичности была проведена на образцах ДНК 64 бактериальных патогенов: B. abortus (10 штаммов), B. melitensis (10 штаммов), B. suis (5 штаммов), B. ovis (5 штаммов), B. canis (1 штамм), L. monocytogenes (5 штаммов), Clostridium spp. (5 штаммов), Enterobacteriaceae (17 штаммов), Mycobacterium spp. (6 штаммов). Специфический ПЦР продукт был выявлен только в 30 образцах ДНК Brucella spp. в остальных ДНК, включая 1 образец ДНК B. ovis ПЦР продукты отсутствовали. В результате анализа нуклеотидной последовательности 16S rRNA гена данный штамм был идентифицирован как B. bronchi-septica. Таким образом, разработанный протокол идентификации Brucella spp. методом ПЦР является высокоспецифичным тестом для применения в диагностических лабораториях.
МОНИТОРИНГ ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ У МАКАК ЯВАНСКИХ ПРИ ПАТОЛОГИИ БЕРЕМЕННОСТИ И РОДОВ
А.А. Агумава, О.А. Шамсутдинова, М.Г. Чикобава
ФГБУ НИИ медицинской приматологии РАМН, г. Сочи
В последние годы появляется все больше данных о связи цитомегаловирусной инфекции (ЦМВИ) с осложнениями беременности и родов (аборты, патологические роды, мертворождения). Частота распространения ЦМВИ среди особей репродуктивного возраста и беременных самок неуклонно растет. Установлена возможность трансплацентарной и перинатальной передачи ЦМВИ детенышам от инфи-
цированных матерей во время беременности и родов за счет аспирации цервикального и вагинального содержимого.
Цель работы — определение роли ЦМВИ в патологии беременности и родов у макак яванских. Объектом исследования являлись 12 погибших самок макаки яванской репродуктивного возраста, имевших в анамнезе самопроизвольные выкидыши, интранатальную гибель плода и неонатальную смерть новорожденных. Группу сравнения составили 14 самок, не имевших в анамнезе осложнений беременности и родов. Материалом для исследования служили соскобы, взятые из цервикального отдела и полости матки погибших самок. Определение ин-фицированности обезьян ЦМВ проводили методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Для подготовки и постановки ПЦР использовали коммерческие наборы «ДНК-сорб» и «АмплиСенс CMV-FL» соответственно, производства ЦНИИ эпидемиологии (Москва).
Результаты проведенного исследования показали, что ЦМВИ была выявлена у 9 (75%) самок с патологией беременности и родов и у 4 (28,6%) самок группы сравнения. Так, ДНК ЦМВ обнаружена у 100% самок с самопроизвольными выкидышами, у 71% самок с интранатальной смертью плода и у 66% самок с неонатальной гибелью новорожденного в анамнезе. Таким образом, приведенные данные свидетельствуют о более высокой частоте обнаружения ЦМВИ (р < 0,001) у самок, имеювших в анамнезе различные виды патологии беременности и родов, по сравнению с особями, не имевшими осложнений. В результате нашего исследования мы пришли к заключению, что ЦМВИ влияет на репродуктивную функцию, исход беременности и родов у самок макаки яванской. Наши данные подтверждаются основными закономерностями развития ЦМВИ у людей.
ЭТИОЛОГИЧЕСКАЯ СТРУКТУРА ИАНТИБИОТИКОРЕЗИСТЕНТНОСТЬАКТУАЛЬНЫХ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ У ОНКОЛОГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ
А.В. Алабушева1, О.Е. Хохлова12, Т.А. Пируева1, О.И. Иванова1, М.В. Данжаев1
1ГБОУ ВПО Красноярский государственный медицинский университет им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого 2 Российско-японский центр микробиологии, эпидемиологии и инфекционных заболеваний, г. Красноярск
Цель: изучить микробный пейзаж гнойно-воспалительных осложнений у онкологических больных и чувствительность к антибиотикам основных возбудителей.
Материалы и методы. В период с июня 2012 г. по ноябрь 2013 г. обследовано 100 пациентов, находившихся на послеоперационном лечении в ОРИТ КККОД им. А.И. Крыжановского. По поводу злокачественных новообразований желудочно-кишечного тракта (рак желудка, пищевода, поджелудочной железы, ободочной и прямой кишки) прооперировано 83 пациента, по поводу рака легких — 17. Исследуемый материал — бронхоальвеолярное содержимое, раневое отделяемое. Выделение и идентификацию возбудителей проводили в соответствии со стандартными методиками. Продукцию бета-лактамаз расширенного спектра (БЛРС) у энтеробактерий определяли методом «двойных дисков» на среде
2014, Т. 4, № 1
Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»
Muller—Hinton с использованием дисков с антибиотиками (OXOID). Для определения MRSA использовали метод скрининга с оксациллином, ПЦР (mecA, nuc). Типирование штаммов MRSA проводили с помощью ПЦР (agr), М-ПЦР (SCCmec-типирование).
Результаты. У больных с опухолями ЖКТ при посеве промывных вод бронхов рост получен в 85,7% случаев, из гнойных очагов брюшной полости — в 95%. У больных с раком легких микроорганизмы в промывных водах бронхов выявлены в 87,5%. В промывных водах бронхов и раневом отделяемом преобладали неферментирующие грамотрицатель-ные бактерии — 41,2 и 44,4% соответственно. На долю энтеробактерий приходится соответственно 19,6 и 38,9%, при этом продуценты БЛРС в промывных водах бронхов составили 60%, а в раневом отделяемом — 56,3%. Микроорганизмы рода Staphylococcus составили 32,3 и 5,6% соответственно. Удельный вес метициллинрезистентных стафилококков — 47,2%, при этом доля MRSA — 23,5% от всех выделенных стафилококков. Все изученные изоляты MRSA не продуцировали лейкоцидин Пантон—Валентайна и относятся к двум клонам, в том числе 75% изолятов представлены вариантом SCCmecIIIA, 25% — вариантом SCCmecIV.
Вывод. Полученные данные о структуре возбудителей гнойно-воспалительных осложнений у онкологических больных и их антибиотикорези-стентности необходимо учитывать при проведении эмпирической антимикробной химиотерапии.
ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ТЕЧЕНИЯ ПАПИЛЛОМАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ
К.А. Алехина, О.С. Абрамовских, А.Ю. Савочкина
ГБОУ ВПО Южно-Уральский государственный медицинский университет МЗ РФ, г. Челябинск
Вероятность развития заболевания, обусловленного вирусом папилломы человека высокого риска (ВПЧ ВР), в значительной степени определяется состоянием иммунной реактивности организма, что и обозначило цель исследования.
Материалы и методы. Проведено иммунологическое обследование 40 женщин с хроническим цер-вицитом и 40 женщин с цервикальной интраэпите-лиальной неоплазией I степени (CIN I), у которых предварительно методом ПЦР был обнаружен ВПЧ ВР. Контрольную группу составили 40 женщин без клинико-морфологических изменений на шейке матки и другой гинекологической патологии с наличием ВПЧ ВР. Исследуемые группы были сопоставимы по возрасту. Иммунологическое обследование включало определение показателей функциональной активности нейтрофилов, уровней иммуноглобулинов, цитокинов в периферической крови и цер-викальной слизи.
Результаты исследования. У пациенток с хроническим цервицитом и CIN I, ассоциированными с папилломавирусной инфекцией (ПВИ), установлены однонаправленные изменения факторов местного иммунитета, которые выражались в повышении активности лизосомальных ферментов нейтрофи-лов и уровня IFNy в цервикальной слизи.
Для больных с хроническим цервицитом, ассоциированным с ПВИ, по сравнению с женщинами без патологии шейки матки характерно повышение активности фагоцитоза нейтрофилов и уровня IL-1P
в цервикальной слизи, повышение активности фагоцитоза нейтрофилов, снижение показателей спонтанного НСТ-теста нейтрофилов и концентрации IgG в периферической крови. У больных с CIN I, ассоциированной с ПВИ, относительно пациенток с хроническим цервицитом установлено снижение активности фагоцитоза нейтрофилов, уровней IL-2 и IL-8, повышение концентрации sIgA в цервикальной слизи, повышение активности спонтанного НСТ-теста нейтрофилов при увеличении их количества, рост концентрации IgG, падение уровней IL-1ß, IL-2, IL-4, IL-8, IL-10, TNFa в периферической крови.
Таким образом, при патологии шейки матки, ассоциированной с ПВИ, независимо от характера поражения цервикального эпителия, наблюдаются изменения иммунологических показателей церви-кальной слизи и периферической крови, которые имеют как однонаправленный характер, так и отличительные особенности в каждой группе больных, связанные с прогрессией заболевания.
СИСТЕМА ГЛУТАТИОНА В ЭРИТРОЦИТАХ БОЛЬНЫХ ЭХИНОКОККОЗОМ
Е.В. Алымова
Сибирский федеральный университет, г. Красноярск
Эхинококкоз печени является одним из наиболее распространенных и тяжелых паразитарных заболеваний, лечение которого остается весьма актуальной проблемой. Эхинококкоз вызывает глубокие изменения этого жизненно важного органа, приводящие к местным и общим осложнениям. Известно, что при данной патологии может развиваться окислительный стресс, который обусловлен избыточной продукцией активных форм кислорода (АФК), источником которых могут являться активированные макрофаги, моноциты, нейтрофилы, эозинофилы и другие клетки в ходе так называемого «респираторного взрыва». Ключевая роль в защите организма от оксидативно-го стресса отводится системе глутатиона, основными компонентами которой являются восстановленный глутатион (GSH) и ферменты его метаболизма — глу-татионпероксидаза (GPO) и глутатион^-трансфераза (GST), устраняющие продукты перекисного окисления липидов (ПОЛ) и эндоксенобиотики. Исследование системы глутатиона проведено в эритроцитах контрольной группы (26 человек) и у больных хроническим эхинококкозом, принимавших немозол фирмы «Ipca», Индия (12 человек).
При эхинококкозе нами выявлено повышение содержания MDA в 3,7 раза (6,30 мкмоль/гНЬ p < 0,001), которое может быть косвенным подтверждением увеличения уровня активных формы кислорода, запускающих не только процессы ПОЛ, но и оксидативной модификации других биомолекул. В эритроцитах больных эхинококкозом при лечении немозолом отмечается снижение активности глутатион^-трансферазы — на 34% (1,55 ммоль/мин/ гНЬ) по сравнению с аналогичным показателем контрольной группы 2,34 ммоль/мин/гНЬ (p < 0,005), достоверных изменений в активности GPO не было обнаружено. Содержание восстановленного глутатиона снижено на 24% — 1,77 мкмоль/гНЬ (p < 0,005).
Глутатион — важнейший внутриклеточный тио-ловый антиоксидант, от уровня которого зависит работа глутатионзависимых ферментов, GST и GPO. Кроме того, GSH участвует в непосредственной де-
