CC BY
42
ВЕСТНИК НОВЫХ МЕДИЦИНСКИХ ТЕХНОЛОГИЙ - 2008 - Т. ХУ, № 3 - С.221
УДК: 616-005.1:547.262+577.125.531+615.356
ЭРИТРОЦИТЗАВИСИМЫЕ ИММУНОМЕТАБОЛИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ ЭТАНОЛА, ПОЛИНЕНАСЫЩЕННЫХ ФОСФОЛИПИДОВ И ЖИРОРАСТВОРИМЫХ ВИТАМИНОВ В НОРМЕ И ПОСЛЕ ОСТРОЙ КРОВОПОТЕРИ
И.Л.БРОВКИНА, С.А.ЛОСЕНОК, Л.Г.ПРОКОПЕНКО
Введение этанола индуцирует возникновение структурных перестроек билипидного слоя биологических мембран различных клеток. Следствием этих перестроек является повышение текучести мембран, изменение активности их ионных насосов, нарушение конформации гли-копротеидных структур мембранных рецепторов [14]. Отмечается достаточно строгое соответствие между выраженностью мембранотропных эффектов этанола в отношении иммуноцитов, гепатоцитов и эритроцитов [7]. Мембранотропный эффект этанола в отношении эритроцитов in vitro проявляется в концентрациях, которые создаются при поступлении в организм относительно небольших доз этого соединения. Иммуномодулирующие эффекты полиненасыщенных фосфолипидов и жирорастворимых витаминов опосредуются эритроцитами.
Цель работы - изучение влияния малых доз этанола на иммуномодулирующее действие этих соединений.
Методы исследования. Опыты проведены на крысах Вистар массой 180-210 г. Под наркозом одномоментно из бедренной вены извлекали кровь в объеме 1% массы тела. Препараты вводили однократно: этанол внутрижелудочно (в дозе 1 мг/кг), эссенциале внутривенно (5 мг/кг), а ретинола ацетат, токоферола ацетат и менадион внутримышечно (в дозах соответственно 5, 10 и 1 мг/кг). Животных иммунизировали внутрибрю-шинно эритроцитами барана (ЭБ) (108 клеток/100 г массы тела) через 5 суток определяли выраженность гуморального иммунного ответа (ГИО) по количеству антителообразующтх клеток (АОК) в селезенке [6] и гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) по разнице массы регионарного и контралатерального лимфатических узлов (РМЛ) [12]. Определяли активность НАДФН-оксидазы нейтрофилов [10], М§2+-АТФ-азы эритроцитов [11] фруктозо-2,6 дифосфатазы (ФДФ2) лимфоцитов [4] и малонового диальдегида (МДА) тромбоцитов [8]. В эритроцитах и гепатоцитах определяли активность супероксиддисмутазы (СОД) и каталазы [9], содержание ацилгидроперекисей (АГП) [1], диеновых коньюгатов (ДК) и малонового диальдегида. Эритроциты выделяли по В.Веи^ег [13]. Для включения этанола в строму эритроцитов применяли метод гипоосмотического гемолиза [2,3]. Уровень препарата в инкубационной среде равен 0,5:1,5 мг/мл. Результаты опытов статистически обрабатывали [5].
Результаты. Установлено, что введение эссенциале или менадиона не оказывало влияния на развитие иммунного ответа, индуцированного ЭБ. Введение этанола с указанными выше препаратами приводило к значительно более выраженному усилению иммунного ответа, чем при введении только этанола (табл. 1).
Таблица 1
Влияние сочетанного действия этанола, эссенциале и жирорастворимых витаминов на развитие иммунного ответа, индуцированного ЭБ
Условия опыта АОК, тыс./орган РМЛ, мг
Контроль (без введения этанола и препаратов) 23, 6±2,8 4,9±0,4
Введение этанола 38,4±4,2*‘ 6,1±0,5*‘
Введение эссенциале 22,6±2,4*2 4,6±0,4*2
Введение менадиона 25,7±3,0*2 5,2±0,4*2
Введение ретинола ацетата 21,3±2,4 4,7±0,3*2
Введение токоферола ацетата 26,1±2,7*2 5,3±0,4*2
Введение этанола и эссенциале 57,8±5,9 8,4±0,7*1-6
Введение этанола и менадиона 92,1±8,7 9,2±0,8
Введение этанола и ретинола ацетата 71,1±7,6*2 7,1±0,6*1-8
Введение этанола и токоферола ацетата 76,3±1,2*2 7,4±0,5*1-8
Инъекции ретинола ацетата и токоферола ацетата не влияли на развитие иммунного ответа, индуцированного ЭБ. Введение этанола с ретинола ацетатом и токоферола ацетатом обусловливало развитие значительно более выраженного иммунного ответа, чем при поступлении в организм только этанола (табл. 1). Однократное поступление в организм этанола, а также введение эссенциале, менадиона, ретинола ацетата или токоферола ацетата не приводило к появлению в крови животных эритроцитов, обладающих иммуномодулирующими свойствами. Поступление этанола, сочетающееся с введением эссенциале, менадиона или ретинола ацетата индуцировало появление иммуностимулирующих свойств у эритроцитов. Введение этанола и токоферола ацетата не сопровождалось возникновением иммуномодулирующих свойств у эритроцитов (табл. 2).
Результаты экспериментов позволяют считать, что этанол или метаболиты, накапливающиеся в крови после введения этанола, не индуцируя появление иммуномодулирующих свойств у эритроцитов, повышают чувствительность эритроцитов к действию фосфолипидов, витаминов К и А. В связи с изложенным интересно было изучить влияние эритроцитов интактных крыс, экстракорпорально обработанных этанолом, на развитие иммунного ответа, индуцированного ЭБ у животных, получавших инъекции препаратов фосфолипидов и жирорастворимых витаминов. Обработка эритроцитов раствором этанола различных концентраций показала, что при инкубации с 0,5% раствором этанола эритроциты не приобретали иммуномодулирующих свойств. Обработка 1 и 5% этанолом дозозависимо индуцировало появление иммуностимулирующих свойств.
Инъекции крысам эритроцитов экстракорпорально обработанных этанолом (ЭЭОЭ), или одного из вышеуказанных лекарственных препара-
тов не влияли на иммунный ответ, индуцированного ЭБ. Введение ЭЭОЭ животным, получавшим эссенциале, менадион или ретинола ацетат, стимулировало развитие иммунного ответа. Введение ЭЭОЭ крысам, получавшим токоферол ацетат, не усиливало их реакции на ЭБ (табл. 3).
Таблица 2
Влияние эритроцитов крыс, получавших этанол, эссенциале и жирорастворимые витамины на развитие иммунного ответа, индуцированного у аллогенных животных, иммунизацией ЭБ
Условия опыта т и1 .с/ А о рг , РМЛ, мг
Контроль (без введения эритроцитов) 22, 6±2,8 4,5±0,4
Введение эритроцитов интактных крыс 24,1 ±3,1 4,8±0,4
Введение эритроцитов крыс, этанол 21,3±2,6 4,6±0,4
Введение эритроцитов крыс, эссенциале 24,2±2,7 4,7±0,5
Введение эритроцитов крыс, менадион 25,1±3,4 4,8±0,5
Введение эритроцитов крыс, ретинола ацетат 23,7±2,6*2 4,7±0,4
Введение эритроцитов крыс, токоферола ацетат 25,6±3,7 4,9±0,5
Введение эритроцитов крыс, этанол и эссенциале 36,4±3,5'1-' 6,4±0,5'1-7
Введение эритроцитов крыс, этанол и менадион 58,7±6,1'1-8 8,9±0,8'1-8
Введение эритроцитов крыс, этанол и ретинола ацетат 37,7±4,4*1-7,9 5,9±0,6*1-7,9
Введение эритроцитов крыс, этанол и токоферола ацетат 25±3,4*8-10 48±0,4*8-10
Результаты этих экспериментов свидетельствуют о возможности усиления иммуномодулирующего эффекта эссенциале, менадиона и ретинола ацетата путем введения животным ЭЭОЭ.
Таблица 3.
Влияние эритроцитов экстракорпорально обработанных этанолом (ЭЭОЭ) на развитие иммунного ответа у животных, получавших инъекции фосфолипидов или витаминов
Условия опыта АОК РМЛ
Контроль (без введения эритроцитов и фармпрепаратов) 27,2±3,0 5,4±0,5
Введение ЭЭОЭ 29,8±3,2 5,1±0,6
Введение эссенциале 28,3±3,0 5,2±0,5
Введение менадиона 26,2±2,7 5,5±0,5
Введение ретинола ацетата 29,6±3,4 5,7±0,6
Введение токоферола ацетата 31,4±3,7 6,1±0,6
Введение эссенциале и ЭЭОЭ 45,6±5,2*1-6 7,4±0,7*1-6
Введение менадиона и ЭЭОЭ 84,2±8,3*1-7 9,2±0,8*1-7
Введение ретинола ацетата и ЭЭОЭ 48,2±5,6*6-8 7,6±0,7*1-0'8
Введение токоферола ацетата и ЭЭОЭ 28,5±3,4*7-9 5,6±0,6*7-9
Принимая во внимание наиболее высокую иммуномодулирующую эффективность сочетаний менадиона с этанолом и менадиона с ЭЭОЭ в норме, было изучено влияние этих сочетаний при кровопотере. Оказалось, что введение после кровопотери этанола с менадионом усиливало (но не нормализовало) развитие ГИО и ГЗТ. Вместе с тем инъекции менадиона с ЭЭОЭ нормализовало развитие обеих форм иммунного ответа (рис. 1). Таким образом, инъекции ЭЭОЭ потенцируют иммуномодулирующее действие менадиона в большей степени, чем введение свободного этанола.
А
Е
Рис. 1. Влияние менадиона, этанола и ЭЭОЭ на развитие иммунного ответа при крово-потере. По оси абсцисс: 1 - контроль; 2 - кровопотеря; 3 - кровопотеря, введение менадиона и этанола; 4 - кровопотеря, введение менадиона и ЭЭОЭ.По оси ординат:
А - АОК, тыс./селезенка; Б - РМЛ, мг
Состояние иммунологической реактивности в условиях стресса и патологии в значительной степени определяется функциональной активностью клеток крови - лимфоцитов, нейтрофилов и эритроцитов, активирующих иммунные процессы, а также тромбоцитов, вызывающих иммуно-супрессирующий эффект. Метаболическим маркером пролиферативной активности лимфоцитов является содержание в них одного из наиболее мощных активаторов гликолиза - фруктозо-2,6-дифосфата, защитная функция нейтрофилов в значительной степени определяется активностью НАДФН - оксидазы, иммуностимулирующие свойства тяжелых эритроцитов коррелируют с активностью М£2+-АТФ-азы их мембраны, а супресси-рующие свойства тромбоцитов с содержанием в них МДА.
ВЕСТНИК НОВЫХ МЕДИЦИНСКИХ ТЕХНОЛОГИЙ - 2008 - Т. ХУ, № 3 - С.222
После кровопотери содержание ФДФ2 в лимфоцитах, активность НАДФН - оксидазы в нейтрофилах и М§2-АТФ-азы мембраны эритроцитов значительно снижались, а содержание МДА в тромбоцитах увеличивалось. Введение после кровопотери менадиона с этанолом уменьшало выраженность изменения этих параметров, а инъекции менадиона с ЭЭОЭ нормализовало их величины (табл. 4).
Таблица 4.
Влияние менадиона, этанола и ЭЭОЭ на метаболические маркеры функциональной активности клеток крови.
Условия опыта НАДФН оксидаза нейтрофилов ФДФ2 лимфоци- тов Mg2+ АТФ-азы мембраны эритроци- тов МДА тромбоци- тов
Контроль 1,34±0,25 0,95±0,18 0,66±0,08 0,61±0,06
Кровопотеря 0,54±0,09'1 0,45±0,08'1 0,33±0,041 0,9±0,14 1
Кровопотеря, введение менадиона и этанола 0,95±0,15*1-2 0,68±0,11*12 0,47±0,06*1-2 0,78±0,12*1-2
Кровопотеря, введение менадиона и ЭЭОЭ 11,29±0,17*2-3 0,97±0,16*2-3 0,71±0,08*2,3 0,66±0,07*2,3
Иммунологическая реактивность организма в значительной степени определяется метаболическим состоянием гепатоцитов и эритроцитов. Функциональная взаимозвязь гепатоцитов, эритроцитов и иммуноцитов наиболее отчетливо выявляется при стрессе и в условиях патологии, характеризующихся усилением свободно-радикальных реакций, процессов перекисного окисления липидов и гипоксией. Изучено влияние менадиона, этанола и ЭЭОЭ на метаболические параметры гепатоцитов и эритроцитов после кровопотери. Установлено, что раздельное введение менадиона, этанола или ЭЭОЭ не влияло на показатели антиоксидантного потенциала и интенсивности ПОЛ гепатоцитов и эритроцитов. Совместное введение менадиона с этанолом уменьшало выраженность, вызванных кровопотерей снижения активности СОД и каталазы, повышения содержания ДК, АГП и МДА в гепатоцитах и эритроцитах. Инъекции менадиона с ЭЭОЭ нормализовали показатели антиоксидантной защиты и интенсивности ПОЛ гепатоцитов и эритроцитов (табл. 5).
Таблица 5
Влияние менадиона, этанола и ЭЭОЭ на метаболические параметры гепатоцитов и эритроцитов
Контроль Кровопотеря Кровопотеря, введение менадион+этанол Кровопотеря, введение менади- он+ЭЭОЭ
Гепатоциты
СОД 4,5±0,3 2,9±0,2'1 3,4±0,03'112 4,2±0,3'2’3
Каталаза 21,3±1,4 16,4±1,1'1 18,7±1,2 12 19,8±1,5 23
ДК 50,4±2,2 67,0±3,6'1 58,4±3,1'1’2 51,7±3,0"2’3
МДА 24,8±1,6 32,8±1,9*1 28,5±1,7"'1'2 26,0±1,6"2’3
Эритроциты
СОД 59,4±2,8 38,1±1,6'1 46,2±1,9 12 56,3±2,4'43
Каталаза 11.3±0,6 7,4±0,3'1 9,2±0,4'1,2 10,8±0,6 23
АГП 1,5±0,2 0,6±0,1'1 1,1±0,212 1,6±0,3'23
МДА 44,2±3,5 36,4±2,8 '1 39,9±2,7'1,2 42,8±3,2'2,3
При состояниях, характеризующихся нарушением энергетического гомеостаза, угнетение иммунологической реактивности сочетается с нарушением функциональной активности гепатоцитов, нейтрофилов, эритроцитов и тромбоцитов. В основе этого лежит усиление генерации активных метаболитов кислорода, индуцирующих перекисное окисление липидов, нарушение структуры двойного фосфолипидного слоя клеточных мембран и их функций. Этанол и менадион, фиксированные эритроцитами, эффективнее чем свободные препараты, коррегировали иммуномета-болические сдвиги. По-видимому, это обусловлено сочетанием конформа-ционных перестроек препаратов и мембранных структур эритроцитов, приводящим к активации большего (чем при введении свободных препаратов) числа иммунорегуляторных клеток. Обращает на себя внимание тот факт, что фосфолипиды эссенциале и ретинола ацетат при экстракорпоральной обработке индуцировали появление лишь слабо выраженных иммуномодулирующих свойств у эритроцитов, а этанол с токоферола ацетатом вообще не вызывали подобного эффекта. Вероятно, это обусловлено тем, что фосфолипиды ретинола ацетата и токоферола ацетата вызывали преимущественно антиоксидантные эффекты, а менадион наряду с антиоксидантной обладает еще и энергизирующей активностью.
Литература
1. Бенисевич В.И., Идельсон Л.И. // Вопр. мед. химии.- 1973.- Т. 19, № 6.- С. 596-599.
2. Генинг Т.П. и др. // Антибиот. и химиотер.- 1998.- № 11.- С. 867.
3. Жумадилов Ж.Ш., Макаренкова Р.В. // Антибиотики и химиотерапия.- 1990.- Т.35, №11.- С. 54-56.
4. Коровкин Б.Ф. и др. // Вопр. мед. химии.- 1999.- Т. 45, Вып. 3.-С. 232-237.
5. Лакин Г. Ф. Биометрия.- М.: Высшая школа; 1980.- 293 с.
6. Мальберг К., Зигль Э. Иммунологические методы: Пер. с нем. / Под ред. Г. Фримеля.- М.: Медицина, 1987.- С. 57-72.
7. Мельников О.Ф., и др. // Врач. дело.- 1989.- С.85-87.
8. Негреску Е.В. и др. // Вопр. мед. химии.- 1992.- Т. 38, Вып. 1.-
С. 36-39.
9. Подильчак А.М. // Клин. энзимол.- Киев: Здоров'я, 1967.- 292 с.
10. Рыбников В.Н., Бровкина И.Л. // Курский науч.-практич. вестник «Человек и его здоровье».- 2002.- №4.- С. 93-97.
11. Рыжкова Г. Ф., Вишняков С.Н. // Методическое пособие по выделению, очистке и определению активности транспортных АТФ-аз в органах и тканях животных.- Воронеж.- 2005.- 31 с.
12. Стальная Н.Д. Соврем. методы в биохимии / Под. ред. В.Н. Оре-ховича.- М., 1977.- С. 63-64.
13. Beutler B. et al. // Cachection tumor.- 1985.- Vol.135.- Р. 3972.
14. Duriez P, Fruchart J. // Ann. Med. Nancy et EST.- 1990.- Vol.29, №6.- P. 365-369.
УДК 616.34-089.001.5
ОПЫТ ПРИМЕНЕНИЯ МИКРОХИРУРГИЧЕСКОЙ ТЕХНОЛОГИИ ДЛЯ ФОРМИРОВАНИЯ ТОЛСТО-ТОЛСТОКИШЕЧНЫХ АНАСТОМОЗОВ
Д.Ю. КОНОВАЛОВ
Резекция ободочной кишки - один из распространённых методов лечения, применяемых при заболеваниях ободочной кишки, после которого, как правило, возникает необходимость восстановления непрерывности кишечника. До настоящего времени нельзя считать решенной проблему профилактики таких осложнений восстановительных этапов операций, как несостоятельность кишечных швов и анастомозов с развитием гнойных внутрибрюшных осложнений, достигающих от 6,5% до 30,7% [1,5]. Для профилактики таких осложнений разработаны способы оперативного лечения, связанные с расчленением его на несколько этапов (операции Цейдлера - Шлоффера, Гартмана), с наложением разгрузочных проксимальных свищей, что значительно удлиняет сроки лечения и не гарантирует отсутствия несостоятельности швов анастомозов, добавляя риск развития осложнений со стороны создаваемых стом [3]. При благоприятном непосредственном результате резекций ободочной кишки с восстановлением её непрерывности, в отдалённые сроки возможно развитие стенозиро-вания анастомозов до 14,2 % случаев [7]. В немногочисленных работах показана эффективность применения прецизионной и элементов микрохирургической оперативной техники при формировании толстотолстокишечных анастомозов [2,4]. В проведённых собственных анатомических и экспериментально-морфологических исследованиях установлена целесообразность и эффективность применения микрохирургических оперативных приёмов при формировании толсто-толстокишечных анастомозов. К изученным микроанатомическим особенностям стенки ободочной кишки необходимо отнести малую толщину и значительную изменчивость толщины её стенки и слоёв, вариабельность микротопографии стенки в меж-ленточных участках и области мышечных лент, как индивидуальную, так и в разных отделах на протяжении кишки. При формировании ран и анастомозов ободочной кишки обеспечило их заживление не позднее 4-5 суток по типу первичного с сохранением футлярного строения стенки кишки. Заживление протекало без развития рубцовой соединительной ткани и стенозирования анастомозов в отдалённые сроки до 17 месяцев. В экспериментах по формированию толстотолстокишечных анастомозов на нефиксированных трупах людей установлено, что для уверенного и точного выполнения микрохирургических приёмов с учётом морфологических особенностей стенки ободочной кишки необходимы оптическое увеличение 6-10 крат, атравматический монофиламентный шовный материал условных номеров 6/0-7/0 и микрохирургический инструментарий.
Таблица 1
Основные оперативные приёмы в сравниваемых группах
оГ "ТС"
Восстановительные и восстановительнореконструктивные 13(4)* 7(3)
Детрансверзостомия и асцендотрансверзостомия 1
Детрансверзостомия и трансверзотрансверзостомия 2 2(1)
Детрансверзостомия и трансверзосигмостомия 4(3) 1
Дедесцендостомия и десцендосигмостомия 1
Десигмостомия и сигмосигмостомия 5(1) 4(2)
Радикальные 20 20
Резекция поперечной ободочной кишки и трансверзотрансверзостомия 1 2
Резекция поперечной ободочной кишки и а сцендотрансверзостомия 1
Гемиколэктомия слева и трансверзосигмостомия 8 8
Резекция сигмовидной кишки и сигмосигмостомия 8 8
Резекция сигмовидной кишки и сигморектостомия 2 2
Паллиативные 2 1
Резекция сигмовидной кишки и сигмосигмостомия 2
Сигмосигмостомия (обходной анастомоз) 1
Всего 35(4) 28(3)
*в скобках в т.ч. не онкологическая патология
Эти данные позволили разработать и апробировать в клинике способ оперативного лечения заболеваний ободочной кишки (патент Яи 2248758). Микрохирургические оперативные приёмы и способ оперативного лечения заболеваний ободочной кишки вошли в зарегистрированную медицинскую технологию «Оперативное лечение заболеваний ободочной кишки и илеоцекальной области с применением микрохирургической
