CC BY
26
DOI: 10.23868/201707019
ЭРИТРОПОЭТИН-ОПОСРЕДОВАННАЯ АКТИВАЦИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ СВОЙСТВ МОНОНУКЛЕАРОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У БОЛЬНЫХ С ХРОНИЧЕСКОЙ СЕРДЕЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТЬЮ
О.В. Повещенко 12, Н.А. Бондаренко 12, И.И. Ким 12, А.П. Лыков 12, М.А. Суровцева 12, Е.А. Покушалов 2, А.Б. Романов 2, А.Ф. Повещенко 12, В.И. Коненков 12, А.М. Караськов 2
1 Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной лимфологии, Новосибирск, Россия
2 Новосибирский научно-исследовательский институт патологии кровообращения им. Е.Н. Мешалкина МЗ РФ, Новосибирск, Россия
Erythropoietin-mediated activation of functional properties of peripheral blood mononuclear cells in patients with chronic heart failure
O.V. Poveshchenko 12, NA. Bondarenko 12,1.I. Kim 12, A.P. Lykov12, M.A. Surovtseva 12, EA. Pokushalov 2, A.B. Romanov 2, A.F. Poveshchenko 12, V.I. Konenkov12, A.M. Karaskov 2
1 Scientific Institute of Clinical and Experimental Lymphology, Novosibirsk, Russia
2 Novosibirsk Scientific Institute of Circulating Pathology, Novosibirsk, Russia
Терапия различными видами стволовых и прогенитор-ных клеток заболеваний сердечно-сосудистой системы, таких как инфаркт миокарда, является перспективным методом для стимуляции репарации ишемизированной ткани. Один из основных механизмов действия вводимых клеток является паракринный. Цель работы — оценить влияние эритропоэтина на функциональную активность мононукле-арных клеток (МНК) больных хронической сердечной недостаточностью до и после обогащения периферической крови стволовыми и прогениторными клетками, мобили-зированными гранулоцитарным колониестимулирующим фактором (Г-КСФ).
Исследование проведено с участием 48 пациентов с ишемической болезнью сердца. МНК из сепарированной крови выделяли на градиенте плотности фиколла/веро-графина. Фенотип эндотелиальных прогениторных клеток исследовали с использованием моноклональных антител к Сй34, Сй133, УЕ9РРг, Сй31. Изменение пролифератив-ного потенциала МНК в ответ на эритропоэтин определяли в МТТ-тесте. Уровень продукции цитокинов изучали в кондиционированных средах с помощью твердофазного имму-ноферментного анализа. Эффективность интрамиокарди-ального введения мобилизованных МНК оценивали через 6 и 12 мес. по изменению функционального класса сердечной недостаточности по ЫУНД, объему фракции выброса левого желудочка сердца и изменению перфузии миокарда. Показано, что обогащение периферической крови путем мобилизации стволовых и прогениторных клеток у больных с хронической сердечной недостаточностью приводило к активации пролиферативного потенциала МНК и увеличению продукции эритропоэтина, обладающего проангиоген-ной активностью. Обогащенные МНК при культивировании их с эритропоэтином увеличивали уровни продукции ТЫР-а, 11-10, 11-18, 11-8, Г-КСФ и УЕОР по сравнению с базальным уровнем продукции. Количество циркулирующих эндотели-альных прогениторных клеток с фенотипом Сй34-/^Е9РР2+ коррелировало с уровнем продукции эритропоэтина. Секреторный уровень эритропоэтина находился в прямой связи с перфузией миокарда, фракцией выброса левого желудочка и с классом сердечной недостаточности через 6 и 12 мес. наблюдения. Полученные данные свидетельствуют о том, что эритропоэтин улучшает функциональные свойства МНК больных с хронической сердечной недостаточностью после мобилизации стволовых и прогениторных клеток с помощью Г-КСФ.
Ключевые слова: эритропоэтин, стволовые и проге-ниторные клетки, хроническая сердечная недостаточность, гранулоцитарный колоние-стимулирующий фактор.
Stem cell therapy of diseases of the cardiovascular system, such as myocardial infarction is a prospective method for the stimulation of ischemic tissue repair. The main mechanisms of stem and progenitor cells action is a paracrine. The purpose of the study was to assess the effects of erythropoietin on the functional activity of mononuclear cells (MNCs) in patients with chronic heart failure before and after enrichment of peripheral blood with stem and progenitor cells mobilized by granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF). 48 patients with coronary heart disease participated in the study.
MNCs from the separated blood were isolated by density gradient on Ficoll/verografin. The phenotype of endothelial progenitor cells was investigated using monoclonal antibodies to CD34, CD133, VEGFR2, CD31. The Change of MNCs proliferative potential in response to erythropoietin was evaluated by MTT-test. The cytokine production in conditioned media was studied using ELISA. The effectiveness of mobilized MNC intramyocardial administration was assessed at 6 and 12 months by detection of a change in functional class according to NYHA heart failure, volume ejection fraction of the left ventricle of the heart and a change in myocardial perfusion. We showed that the enrichment of peripheral blood by mobilization of stem and progenitor cells in patients with chronic heart failure led to activation of proliferative potential of MNCs and increased erythropoietin production, a cytokine with pro-angiogenic activity. MNC enriched with stem and progenitor cells being culturing with erythropoietin increased the levels of TNF-a, IL-10, IL-18, IL-8, G-CSF and VEGF, as compared with the basal level of production. Circulating endothelial progenitor cells with the phenotype CD34- /VEGFR2+ have a correlation with the level of erythropoietin production. Secretory erythropoietin level directly correlated with myocardial perfusion, left ventricular ejection fraction and heart failure class at 6 and 12 months follow-up. The findings suggest that erythropoi-etin improves functional properties of the MNC of patients with heart failure after mobilization with G-CSF.
Keywords: erythropoietin, stem and progenitor cells, chronic heart failure, granulocyte colony-stimulating factor.
e-mail: poveschenkoov@yandex.ru
Введение
Различные виды стволовых и прогениторных клеток используют для стимуляции репаративных процессов в зоне ишемии миокарда при инфаркте, поскольку результаты пилотных исследований выявили увеличение сократительной функции миокарда и уменьшение зоны рубца при их применении [1]. Источником гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) может служить периферическая кровь после их мобилизации из костного мозга гранулоцитарным-ко-лониестимулирующим фактором (Г-КСФ) [2]. Более того, в ходе мобилизации ГСК инъекциями Г-КСФ в периферической крови было отмечено увеличение количества эндотелиальных прогениторных клеток, а интрамиокардиальное введение обогащенной ГСК фракции мононуклеаров периферической крови (МНК) стимулировало сократительную функцию и улучшало перфузию ишемизированного миокарда у больных с хронической сердечной недостаточностью [3]. Для стволовых клеток в общем смысле характерной является способность к дифференциров-ке в специализированные клетки тканей организма, а также продукция цитокинов и факторов роста, обладающих в том числе ангиогенным действием [4]. Продуцируемые стволовыми клетками биологически активные вещества способствуют пролиферации, миграции, дифференцировке и поддержанию жизнеспособности трансплантированных клеток [4—6].
Эритропоэтин является не только стимулятором гемопоэза, но и оказывает проангиогенное действие, схожее с УБОР и БЭР, а также обладает кардиопро-тективным эффектом [7—10]. Показано, что эндо-телиальные клетки экспрессируют рецептор к эри-тропоэтину, а взаимодействие его с эритропоэтином способствует их пролиферации и неоваскуляризации [10]. Кроме того, эритропоэтин активирует пролиферацию, дифференцировку и адгезию клеток-предшественниц эндотелия сосудов, проявляет антиапоп-тотический эффект, однако механизмы действия эритропоэтина изучены не в полной мере.
Цель работы — оценить влияние эритропоэти-на на функциональную активность МНК больных хронической сердечной недостаточностью (ХСН) до и после обогащения периферической крови путем мобилизации стволовых клеток Г-КСФ, а также определить эффективность обогащенных МНК в лечении пациентов с ХСН.
Материал и методы
Исследование проведено с участием 48 пациентов с ишемической болезнью сердца, Ш-1У функциональным классом ХСН (1\1УНА), после получения информированного согласия, согласно протоколам, одобренным Этическими комитетами и утвержденных учеными советами обоих учреждений-соисполнителей (протокол №5 от 02.06.2008 г. — Институт клинической и экспериментальной лимфологии; протокол № 26 от 24.02.2009 г. - Институт патологии кровообращения им. акад. Е.Н Мешалкина). Средний возраст пациентов составил 57,0±7,6 лет (89% мужчины), длительность заболевания ишемической болезнью сердца -7,94±5,86 лет, количество перенесенных инфарктов миокарда — 1,59±0,77.
Сначала от каждого пациента забирали образцы крови для выделения необогащенных МНК. Затем
выполняли мобилизацию стволовых и прогениторных клеток в периферическую кровь путем введения пациентам рекомбинантного человеческого Г-КСФ (Grasalva, Израиль) подкожно в дозе 3,3—5,0 мкг/ кг веса в сутки в течение 5 сут. Для сбора МНК, обогащенных стволовыми и прогениторными клетками, на 6 сут. проводили процедуру аппаратного ци-тофереза на сепараторе клеток крови (Haemonetics MCS+, США; программа PBSC — получение периферических стволовых клеток). МНК из венозной несепарированной крови больных ХСН до мобилизации и из сепарированной крови больных ХСН после мобилизации выделяли на градиенте плотности фиколла/верографина (р = 1,078 г/л) (Биолот, Россия) и дважды отмывали в забуференном физиологическом растворе. Далее подсчитывали количество жизнеспособных клеток в камере Горяева с витальным красителем трипановым синим и определяли фенотип эндотелиальных прогениторных клеток с помощью проточного цитометра FACSCantoII (Becton Dickinson, США) в программе FACSDiva (Becton Dickinson, США), с использованием моно-клональных антител CD34, CD133, VEGFR2, CD31, меченных FITC и PE (Becton Dickinson, США), согласно инструкции фирмы-производителя.
Для оценки пролиферативного потенциала МНК и влияния эритропоэтина на их функциональную активность клетки вносили в лунки 96-луночных планшетов в количестве 2х105 кл/лунка и культивировали в среде RPMI-1640, дополненной 0,3 мг/мл L-глютамина с 10% FCS, (БиолоТ, Россия) в Ш2-инкубаторе при 37°С в течение 72 ч. в присутствии эритропоэтина (33 Ед/мл; Рекормон, США) и без него (контроль). Уровень пролиферативной активности МНК определяли в МТТ-тесте в триплетах по включению клетками 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенил-2Н-тетразолиум бромида (Sigma, США) и преобразованию его в формазан митохон-дриальными дегидрогеназами. Оптическую плотность растворов формазана измеряли на спектрофотометре (STAT FAX 2100, США) при длине волны 540 нм и выражали в условных единицах оптической плотности (ед. опт. пл.).
Уровень продукции цитокинов измеряли в кондиционированных средах от 72 ч. культур МНК, которые хранили при -20°С до тестирования. Содержание в кондиционированной среде TNF-a, IL-8, IL-10, IL-18, VEGF, эритропоэтина и Г-КСФ определяли с помощью твердофазного иммуноферментного анализа с использованием специальных наборов реагентов (Вектор-Бест, Россия), согласно инструкции фирмы-производителя.
Процедуру введения мобилизованных МНК периферической крови, оценку клинической эффективности проводили на базе Института патологии кровообращения им. акад. Е.Н. Мешалкина. Пациентам интрамиокардиально под контролем навигационной системы NOGA XP вводили МНК, выделенные на градиенте плотности фиколла/верографина из сепарированной крови, в количестве 3х108 клеток в 10 точек по 0,2 мл в каждую точку. Эффективность интрамиокардиального введения мобилизованных Г-КСФ МНК периферической крови оценивали через 6 и 12 мес. по изменению функционального класса сердечной недостаточности по NYHA, объему фракции выброса левого желудочка сердца (ФВЛЖ) с помощью ЭХО КГ и изменению перфузии миокарда по данным ЭКГ-синхронизированной томосцинтиграфии
(SPECT) с технецием (Tc-99m) в покое и при нагрузке, индуцированной введением аденозина.
Статистическую обработку результатов проводили с использованием программы Statistics 10,0 for Windows (StatSoft, США). Полученные данные проверяли на нормальность распределения согласно критерию Колмогорова-Смирнова. Меры центральной тенденции и рассеяния описаны медианой (Me), нижним (25% — LQ) и верхним (75% — HQ) квартилями. Достоверность различий оценивали по непараметрическому U-критерию Манна — Уитни. Наличие взаимосвязей между явлениями устанавливали с помощью коэффициента ранговой корреляции Спирмена (R). Различия считали достоверными при p<0,05.
Результаты
После выделения МНК был определен их про-лиферативный потенциал; зависимость пролифе-ративного потенциала от количества CD34+-клеток; уровень продукции эритропоэтина до и после процедуры мобилизации Г-КСФ и влияние эритропоэтина на продукцию цитокинов.
МНК, обогащенные стволовыми и прогениторны-ми клетками, имели статистически значимо более высокий исходный уровень пролиферативной активности (Me = 0,49; LQ = 0,42; UQ = 0,55 ед. опт. пл., рис. 1А), по сравнению с аналогичным показателем у МНК до процедуры мобилизации (Me = 0,37; LQ = 0,34; UQ = 0,43 ед. опт. пл.). Стимуляция эри-тропоэтином повышала уровень пролиферации обогащенных МНК (Me = 0,66; LQ = 0,57; UQ = 0,67 ед.
А
опт. пл.), однако не влияла на уровень пролиферации МНК, выделенных из крови больных ХСН до процедуры мобилизации стволовых и прогениторных клеток (Ме = 0,41; 1_Ш = 0,37; 11Ш = 0,51 ед. опт. пл.).
Установлено, что пролиферативный потенциал обогащенных МНК зависел от количества Сй34+-клеток. Если количество Сй34+-клеток во фракции МНК было больше 0,4%, базальная интенсивность пролиферации МНК статистически значимо возрастала на 60%, а после прекондиционирования с эритропоэтином — на 64% по сравнению с уровнем пролиферации МНК, содержащих менее 0,4% Сй34+-клеток (рис. 1Б).
При определении уровня эритропоэтина в кондиционированных средах МНК был обнаружен его резкий рост после мобилизации стволовых и проге-ниторных клеток Г-КСФ (р = 0,008) (табл. 1).
Таким образом, обогащение периферической крови мобилизированными стволовыми и прогениторны-ми клетками у больных с ХСН приводило к увеличению общей пролиферативной активности МНК и росту продукции эритропоэтина.
На следующем этапе работы было изучено влияние прекондиционирования МНК эритропоэтином на цитокин-продуцирующую активность клеток, выделенных из крови больных ХСН, до и после процедуры мобилизации стволовых и прогениторных клеток введением Г-КСФ.
Прекондиционирование МНК эритропоэтином до проведения процедуры мобилизации приводило к увеличению продукции !1_-10, !1_-18 и !1_-8 (табл. 2).
Б
Рис. 1. Пролиферативная активность МНК пациентов с ХСН до и после проведения процедуры мобилизации Г-КСФ: А — влияние эритропоэтина на пролиферацию МНК; Б — пролиферация МНК в зависимости от количества Сй34+-клеток
Примечания: Спонт — спонтанный уровень пролиферации; ЭПО — уровень пролиферации в ответ на добавление эритропоэтина; * — различия при сравнении с показателями до введения Г-КСФ статистически значимы при <0,04; # - при р<0,05
Таблица 1. Концентрация эритропоэтина в кондиционированных средах МНК до и после процедуры мобилизации у пациентов с ХСН (п = 20). Данные представлены как Медиана, нижний-верхний квартили
До мобилизации После мобилизации
Концентрация (МЕ/мл) Концентрация (МЕ/мл)
Эритропоэтин 27,2 (17,8-101) 102,2 (36-306)
Таблица 2. Уровни продукции цитокинов и факторов роста МНК до и после мобилизации стволовых и прогениторных клеток, прекондиционированных эритропоэтином, у больных ХСН (п = 35)
До мобилизации После мобилизации
Цитокины, пг/мл уровень спонтанной секреции уровень секреции, стимулированной уровень спонтанной секреции уровень секреции, стимулированной
эритропоэтином эритропоэтином
ТЫБ-а 102,3 (100-175) 100,2(99-101) 33,0(23-85) 990,3* (792-1298)
11_-10 67,7 (57-101) 294,5*(189-300) 72,1(22-102) 895,4* (790-1190)
11.-18 33,0(18-102) 399,4*(212-415) 103,2(67-135) 190,5* (104-228)
11.-8 732,9(103-965) 3840,7* (2890-4160) 735,7(103-822) 1578,8* (348-3100)
О-ОББ 13,1(10-101) 8,5(7-10) 11,0(10-30) 865,5* (586-3660)
256,2(102-450) 253,4(219-270) 298,1(113-340) 327,0* (278-492)
* — различия при сравнении с уровнем спонтанной секреции статистически значимы при р<0,05 Ш-критерий Манна — Уитни).
В то же время обогащенные МНК при кондиционировании с эритропоэтином увеличивали продукцию ТЫР-а, 11.-10, 11.-18, 11.-8, Г-КСФ и УЕЭР, по сравнению с базальным уровнем.
Следовательно, прекондиционирование МНК эри-тропоэтином способствовало увеличению продукции цитокинов и факторов роста, вовлеченных в регуляцию ангиогенеза.
Кроме того, после прекондиционирования МНК эритропоэтином были выявлены корреляционные связи между базальной продукцией 11.-18 и 11.-10 (13 = 0,65; р = 0,045). В то же время, исходный уровень продукции МНК 11.-8 находился в обратной взаимосвязи с 11.-18 (Я = -0,76; р = 0,01).
Таким образом, показана способность эритропоэ-тина оказывать регулирующее влияние на продукцию ряда биологически активных веществ МНК, обогащенных стволовыми и прогениторными клетками.
Известно, что функциональная активность эндо-телиальных прогениторных клеток связана с их фенотипом [11]. Ранее нами было показано, что в ходе мобилизации стволовых и прогениторных клеток в периферическое русло введением Г-КСФ у больных с ХСН увеличивалось количество различных популяций эндотелиальных прогениторных клеток, находящихся на различных этапах дифференцировки [12].
Корреляционный анализ между фенотипом эндотелиальных прогениторных клеток и уровнями про-
дукции цитокинов и факторов роста выявил наличие сопряженности между секрецией МНК эритропоэти-на и количеством в общем пуле МНК клеток с фенотипом Сй34-/УЕЗРЯг + (Я = 0,86; р = 0,005). Кроме того, имелась прямая корреляция между уровнем продукции ТЫР-а и количеством Сй34-/Сй133 + клеток (Я = 0,73; р = 0,02); 11.-18 и количеством СР34+/ УЕЗРЯ^-клеток и Сй34+/УЕЗРПг+-клеток (Я = 0,70; р = 0,03 и Я = 0,82; р = 0,01 соответственно). Уровень продукции МНК УЕЭР имел прямую корреляционную связь с количеством Сй34+/Сй31+-кпеток (Я = 0,90; р = 0,03), а 11.-10 — с количеством клеток с фенотипом Сй34-/Сй31 + в общем пуле МНК у больных с ХСН (Я = 0,95; р = 0,03).
Выявленные корреляционные связи позволяют предположить, что циркулирующие эндотелиальные прогениторные клетки с фенотипом Сй34—/УЕ0РЯ2+ вносят вклад в продукцию эритропоэтина у больных с ХСН.
На последнем этапе исследования был проведен анализ корреляции между уровнями продукции ци-токинов и факторов роста МНК больных ХСН, обогащенных стволовыми и прогениторными клетками, с параметрами функциональной активности миокарда у больных в отдаленный период после интрами-окардиального введения этих клеток. Было обнаружено наличие взаимосвязей уровня продукции МНК эритропоэтина с классом сердечной недостаточности, перфузией миокарда и ФВЛЖ (табл. 3).
Таблица 3. Корреляция уровня продукции эритропоэтина МНК, обогащенных стволовыми и прогениторными клетками, с функциональными показателями миокарда в отдаленный период после интрамиокардиального введения клеток больным ХСН (п = 20)
Исследуемые параметры
уровень эритропоэтина
Класс СН (ЫУНА) через 6 мес. Я = 0,05 р = 0,9
через 12 мес. Я = 0,47 р = 0,046
Перфузия в покое через 6 мес. Я = 0,59 р = 0,049
через 12 мес. Я = 0,19 р = 0,12
Перфузия при нагрузке через 6 мес. Я = 0,28 р = 0,49
через 12 мес. Я = 0,67 р = 0,03
ФВЛЖ через 6 мес. Я = 0,75 р = 0,03
через 12 мес. Я = 0,45 р = 0,25
Была выявлена положительная прямо пропорциональная связь между уровнем продукции эритропо-этина и улучшением класса сердечной недостаточности через 12 мес. и возрастанием ФВЛЖ через 6 мес. после интрамиокардиального введения МНК. Уровень продукции эритропоэтина был связан с показателями перфузии миокарда, причем наблюдались корреляционные связи между уровнем продукции цитокина и улучшением перфузии в покое через 6 мес., а также увеличением перфузии при нагрузке аденозином через 12 мес. наблюдения.
На основании полученных результатов можно предположить, что вводимые интрамиокардиально МНК, обогащенные стволовыми и прогениторными клетками, оказывали положительное влияние на функцию ишемизированного миокарда у больных с ХСН.
Обсуждение
В настоящее время считается, что основным механизмом действия трансплантированных стволовых и прогениторных клеток является паракринный. Биологически активные молекулы (цитокины и факторы роста) продуцируются клетками как конститутивно, так и при активации внешними стимулами и являются регуляторами межклеточных взаимодействий, определяют выживаемость, рост, дифференцировку и функциональную активность клеток [6].
Известно, что эритропоэтин способен не только стимулировать клетки эритропоэза, но и обладает цитопротективным действием на другие виды клеток, экспрессирующих его рецептор [13, 14]. Так эритропоэтин способствует эндотелиальной диф-ференцировке клеток, повышает экспрессию факторов дифференцировки стволовых клеток, увеличивает секрецию ими проангиогенных цитокинов [15, 16], подавляет апоптоз и повышает выживаемость [17].
Показано, что дополнительное введение эри-тропоэтина при трансплантации мобилизованных Г-КСФ клеток крови уменьшало сердечную недостаточность при инфаркте миокарда [18, 19], а совместное введение эндотелиальных прогениторных клеток с эритропоэтином в экспериментальной модели церебральной ишемии активировало процессы не только ангиогенеза, но и нейрогенеза [20]. Также кратковременное культивирование эндотелиальных колониеобразующих клеток с эритропоэтином значительно стимулировало их пролиферацию, миграцию, образование первичной тубулярной сосудистой сети и приводило к увеличению плотности капилля-
ЛИТЕРАТУРА:
1. Zamilpa R., Navarro M.M., Flores I. et al. Stem cell mechanisms during left ventricular remodeling post-myocardial infarction: Repair and regeneration. World J. Cardiol. 2014; 6(7): 610-20.
2. Hosing C. Hematopoietic stem cell mobilization with G-CSF. Methods Mol. Biol. 2012; 904: 37-47.
3. Clifford D.M., Fisher S.A., Brunskill S.J. et al. Long-term effects of autologous bone marrow stem cell treatment in acute myocardial infarction: factors that may influence outcomes. Plos One 2012; 7: e37373.
4. Lai W.H., Ho J.C.Y., Chan Y.C. et al. Attenuation of hind-limb ischemia in mice with endothelial-like cells derived from different sources of human stem cells. Plos One 2013; 8(3): e57876.
5. Gnecchi M., Zhang Z., Ni A. et al. Paracrine mechanisms in adult stem cell signaling and therapy. Circ. Res. 2008; 103(11): 1204-19.
6. Crisostomo P.R., Markel T.A., Wang Y. et al. Surgically relevant aspects of stem cell paracrine effects. Surgery 2008; 143: 577-81.
ров при экспериментальной ишемии нижних конечностей [21].
Таким образом, эритропоэтин может не только стимулировать продукцию Г-КСФ, а значит увеличивать мобилизацию стволовых и прогениторных клеток из костного мозга в кровоток, но и способствовать стимуляции ангиогенеза и модулировать функциональную активность трансплантированных клеток.
В нашем исследовании обнаружено, что эритропоэтин стимулировал функциональный статус МНК, выделенных из крови после мобилизации Г-КСФ у пациентов с ХСН: увеличивались пролифератив-ная активность МНК и уровень продукции цитокинов и факторов роста с ангиогенным действием. Установлено, что уровень секреции эритропоэтина имел корреляционную связь с численностью популяции эндотелиальных прогениторных клеток с фенотипом Сй34-/УЕВРП2+, популяции эндотелиальных клеток. В то же время, активированная продукция ТЫР-а, !1_-18, УЕЭР, и !1_-10 была взаимосвязана с другими популяциями клеток эндотелиальной линии разной степени дифференцировки. Очевидно, что продуцируемые мобилизованными клетками цитокины влияют друг на друга, образуют «цитокиновую сеть», а в их продукции принимают участие различные популяции эндотелиальных клеток [5]. Спектры биологической активности цитокинов в значительной степени перекрываются, стимулируя процессы репарации более чем одним цитокином. Следовательно, можно предположить, что паракринные и аутокрин-ные взаимодействия могут иметь место в тканях при введении обогащенных стволовыми и прогениторны-ми клетками МНК.
В настоящем исследовании показана прямая корреляция между секреторным уровнем эритро-поэтина трансплантированных клеток и перфузией миокарда, а также классом сердечной недостаточности через 6 и 12 мес. наблюдения у пациентов с ХСН, что может свидетельствовать о вкладе эри-тропоэтина и эндотелиальных клеток в процессы репарации миокарда.
Таким образом, эритропоэтин может являться пусковым фактором в регенерации поврежденного миокарда как прямо, так и опосредованно путем индукции синтеза клетками других цитокинов, в том числе с ангиогенным действием.
Благодарности
Работа выполнена при финансовой поддержке гранта РНФ № 16-15-00057.
7. Pagonopoulou O., Efthimiadou A., Lambropoulou M. et al. Erythropoietin and growth factors exhibit differential angiogenic potential in mouse heart. In Vivo 2008; 22: 587-91.
8. Takahashi T., Tang T., Lai N.C. et al. Increased cardiac adenylyl cyclase expression is associated with increased survival after myocardial infarction. Circulation 2006; 114: 388-96.
9. Calvillo L., Latini R., Kajstura J. et al. Recombinant human erythropoietin protects the myocardium from ischemia-reperfusion injury and promotes beneficial remodeling. PNAS USA 2003; 100(8): 4802-6.
10. Depping R., Kawakami K., Ocker H. et al. Expression of the erythropoietin receptor in human heart. J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 2005; 130(3): 877-8.
11. Goon P.K., Lip G.Y., Boos C.J. et al. Circulating endothelial cells, endothelial progenitor cells, and endothelial microparticles in cancer. Neoplasia 2006; 8: 79-88.
12. Коненков В.И., Повещенко О.В., Ким И.И. и др. Влияние G-CSF на проангиогенные свойства мобилизированных клеток пери-
ферической крови у больных с хронической сердечной недостаточностью. Гены и клетки 2011; YI(3): 71-5.
13. Захаров Ю.М. Цитопротекторные функции эритропоэтина. Клиническая нефрология 2009; 1: 16-21.
14. Kang Y.J., Digicaylioglu M., Russo R. et al. Erythropoietin plus insulin-like growth factor-I protects against neuronal damage in a murine model of human immunodeficiency virus-associated neurocognitive disorders. Ann. Neurol. 2010; 68(3): 342-52.
15. Liu N.M., Tian J., Wang W.W. et al. Effect of erythropoietin on mesenchymal stem cell differentiation and secretion in vitro in an acute kidney injury microenvironment. Genet. Mol. Res. 2013; 12(4): 6477-87.
16. Wang P.R. Mouse adult renal progenitor cells in combination with erythropoietin or suramin — a potential new strategy for the treatment of acute kidney injury. Stem Cell Res. Ther. 2013; 4(4): 89.
17. Ercan E., Bagla A.G., Aksoy A. et al. In vitro protection of adipose tissue-derived mesenchymal stem cells by erythropoietin. Acta Histochem. 2014; 116(1): 117-25.
18. Santoso T., Irawan C., Alwi I. et al. Safety and feasibility of combined granulocyte colony stimulating factor and erythropoetin based-stem cell therapy using intracoronary infusion of peripheral blood stem cells in patients with recent anterior myocardial infarction: one-year follow-up of a phase 1 study. Acta Med. Indones. 2011; 43(2): 112-21.
19. Tousoulis D., Vogiatzi G., Briasoulis A. et al. Effects of intramuscular administration of hematopoietic progenitor and co-administration oferythropoietin on blood perfusion, angiogenic factors and vascularization in a murine model of limb ischemia. Int. J. Cardiol. 2013; 169(3): 229-31.
20. Pellegrini L., Bennis Y., Guillet B. et al. Therapeutic benefit of a combined strategy using erythropoietin and endothelial progenitor cells after transient focal cerebral ischemia in rats. Neurol. Res. 2013; 35(9): 937-47.
21. Bennis Y., Sarlon-Bartoli G., Guillet B. et al. Priming of late endothelial progenitor cells with erythropoietin before transplantation requires the CD131 receptor subunit and enhances their angiogenic potential. J. Thromb. Haemost. 2012; 10(9): 1914-28.
Поступила: 29.02.2016
