CC BY
29ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ф
Новости клинической цитологии России Russian News of Clinical Cytology
2020, т.24, №2, с. 5-7 2020, vol.24, no 2, pp. 5-7
https://doi.org/10.24412/1562-4943-2020-2-0001
ЭПИТЕЛИАЛЬНЫЕ ОПУХОЛИ ВИЛОЧКОВОЙ ЖЕЛЕЗЫ: ИММУНОЦИТОХИМИЧЕСКИЕ КРИТЕРИИ
Г.Р. Бутенко
ФГБУ«Центральная клиническая больница с поликлиникой» Управления делами Президента Российской Федерации, Москва, Россия
Резюме. Иммуноцитохимические исследования широко применяются в цитологической диагностике опухолей разных локализаций. Возможности иммуно-цитохимического метода в уточнении диагноза эпителиальных опухолей вилочковой железы не изучены. В работах зарубежных цитопатологов некоторые имму-нофенотипические характеристики тимом представлены, в основном, на гистологических или Се11-Ь1оск препаратах.
Цель исследования - провести иммуноцитохимические исследования эпителиальных опухолей вилочковой железы, определить оптимальный набор антител для иммуноцитохимической диагностики тимом.
Материал и методы. Выполнены иммуноцитохимические исследования 22 новообразований переднего средостения. Из них: тимомы - 18, плоскоклеточный рак вилочковой железы - 2, НЭО вилочковой железы - 2.
Результаты исследования и заключение. Проведено изучение иммуноцитохимических признаков тимом А, АВ, В1, В2, В3, плоскоклеточной карциномы вилочковой железы, нейроэндокринных опухолей. Предложен оптимальный набор антител для иммуно-цитохимической диагностики тимом. Использование иммуноцитохимического метода расширяет возможности цитологической диагностики эпителиальных опухолей вилочковой железы.
Ключевые слова: иммуноцитохимическое исследование, тимома, нейроэндокринные опухоли, плоскоклеточный рак тимуса.
Информация об авторе:
Бутенко Г.Р. - врач клинической лабораторной диагностики лаборатории онкоцитологии центра патоморфо-логии и молекулярно-генетической диагностики ФГБУ «Центральная клиническая больница с поликлиникой» Управленияделами Президента Российской Федерации https://orcid.org/0000-0002-0095-4248
Автор ответственный за переписку: Бутенко Г.Р. - e-mail: grbutenko@gmail.com
Как цитировать:
Бутенко Г.Р. Эпителиальные опухоли вилочковой железы: иммуноцитохимические критерии. Новости клинической цитологии России. 2020; 24(2): 5-7 https://doi.org/10.24412/1562-4943-2020-2-0001
Цитологическая диагностика опухолей вилочковой железы довольно трудна. Тимомы характеризуются выраженной вариабельностью морфологического строения, многокомпонентным клеточным составом [1].
Иммуноцитохимические (ИЦХ) исследования широко применяются для уточнения диагноза опухолей разных локализаций [2,3]. Возможности ИЦХ метода в диагностике новообразований ви-лочковой железы не изучены. В работах зарубежных цитопатологов некоторые иммунофеноти-пические характеристики тимом представлены, в основном, на гистологических или Cell-block препаратах [4,5].
Цель исследования - провести ИЦХ исследования эпителиальных опухолей вилочковой железы, определить оптимальный набор антител для иммуноцитохимической диагностики тимом.
Материал и методы. Выполнены ИЦХ исследования 22 новообразований вилочковой железы. Из них: тимомы - 18, плоскоклеточный рак вилочковой железы - 2, НЭО тимуса - 2. ИЦХ исследования проводили на дооперационном или ин-траоперационном материале, приготовленном стандартным методом или методом жидкостной цитологии. Выбор антител в каждом случае проводили с учетом данных литературы [1, 4-9] и имму-ногистохимических исследований.
В работе использованы антитела Cell Marque: CD1a (EP3622, 1:25-1:100), CD3 (MRQ-39, 1:1001:500), CD5 (4С7, 1:10-1:50), CD8 (SP16, 1:100-1:500), TdT (EP266, 1:50-1:200), CD20 (L26, 1:100-1:500), CD117 (YR145, 1:100-1:500), СК5/6 (D5&16B4, 1:50-1:200), CK7 (0V-TL12/30, 1:100-1:500), CK19 (A53-B/A2.26, 1:100-1:500), Cytokeratin cocktail AE1&AE3 (AE1/AE3, 1:25-1:50), Synaptophysin
Таблица 1
Результаты ИЦХ исследования эпителиальных опухолей тимуса
Тип опухоли Эпителиальные клетки Лимфоциты
Тимома тип А CD20+, CK19+, АЕ1/АЕ3+, р63+ CD3+, TdT-/+
Тимома тип АВ CD20+, CK19+, АЕ1/АЕ3+, р63+ CD3+, TdT+
Тимома тип В1 CK19+, АЕ1/АЕ3+, р63+ CD3+, TdT+
Тимома тип В2 CK19+, АЕ1/АЕ3+, р63+ CD3+, TdT+
Тимома тип В3 CK19+, АЕ1/АЕ3+, р63+, CD5-, CD117- CD3+, TdT+
Плоскоклеточный рак CK19+, АЕ1/АЕ3+, р63+, CD5+, CD117+ CD3+, TdT-
НЭО Synaptophysin +, Chromogranin А +
(MRQ-40, 1:100-1:500), Chromogranin А (LK2H10, 1:100-1:500); Dako: CD4 (4В12, готовый), CD8 (С8/144В, готовый), p63 (DAK-p63, 1:50); Spring: CD99 (M4194, 1:200).
Для диагностики эпителиальных клеток тимом и карцином тимуса использовали антитела к цито-кератинам 19, 5/6, 7, АЕ1/АЕ3 (коктейль из антител широкого спектра действия: антитело AE1 реагирует с кислыми кератинами I типа 10, 14, 15, 16, 19; AE3 реагирует с основными кератинами II типа 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8), белку p63, CD20 (экспрессия в веретенообразных эпителиальных клетках тимом А и АВ), CD5 и CD117 (экспрессия в клетках карциномы тимуса). Для исследования лимфоцитов и степени их дифференцировки использовали антитела к CD3, CD4, CD5, CD8, CD99, CD1a, TdT, CD20. Для определения нейроэндокринной диф-ференцировки использовали общие нейроэндо-кринные маркеры Chromogranin А, Synaptophysin. ИЦХ исследования проводили с использованием иммуногистостейнера BenchMark ULTRA (Ventana Medical Systems). Применяли стандартный протокол проведения ИЦХ реакций.
Результаты
Тимома тип А состоит преимущественно из веретенообразных эпителиальных клеток, располагающиеся в плотных скоплениях и небольшого количества лимфоцитов. При ИЦХ исследовании в опухолевых клетках определялась экспрессия цитокератинов АЕ1/АЕ3, СК19, p63. В веретенообразных эпителиальных клетках наблюдалась экспрессия маркера CD20. По данным литературы, экспрессия CD20 в эпителиальных клетках - частый и полезный признак для морфологической верификации тимом типов А и АВ [1, 6].
В тимоме тип АВ хорошо выражены два компонента: опухолевые веретенообразные клетки и большое количество лимфоцитов. Как и в тимо-ме А, веретенообразные эпителиальные клетки экспрессировали CD20 (вклейка 1, рис. 1а), ци-токератины АЕ1/АЕ3 (вклейка 1, рис. 1в), СК19 (вклейка 2, рис. 1д). В лимфоцитарном компоненте тимомы АВ определялась экспрессия CD3 (вклейка 2, рис. 2а), CD5, а также маркеров незрелой дифференцировки - TdT (вклейка 2, рис. 2в), CD^, CD99. При иммуно-цито-гистологических
сопоставлениях отмечено соответствие реакций в цитологических и гистологических (вклейка 1-3, рис. 1б, г, е, 2б, г) препаратах.
Материал аспирационной пункции тимомы тип В1 представлен, как правило, лимфоцитами разной степени зрелости. Единичные эпителиальные клетки трудно обнаружить в обильном лимфоцитарном компоненте. Визуализировать их удается с помощью иммуноморфологического исследования. При ИЦХ и ИГХ исследованиях тимомы В1 отмечались немногочисленные эпителиальные клетки, экспрессирующие CK19 (вклейка 3, рис. 3а, б), p63. В лимфоцитах определялся им-мунофенотип лимфоцитов тимуса - экспрессия CD3, CD4, CD8, CD1a (вклейка 4, рис. 4а), CD99, TdT. Присутствовали только единичные CD20+ В-лимфоциты (вклейка 4, рис. 4б).
При ИЦХ исследовании тимомы тип В2 выявлялось значительно больше кератинпозитивных клеток, чем при тимоме тип В1. Эпителиальные клетки экспрессировали АЕ1/АЕ3, СК19 (вклейка 4, рис. 5), р63. В лимфоцитах отмечалась экспрессия CD3, CD99, TdT.
В тимоме тип В3 опухолевые клетки, преобладающие в препаратах, экспрессировали CK 19 (вклейка 4, рис. 6), CK5/6. Реакция с CD117 и CD5 в эпителиальных клетках была негативная.
В плоскоклеточной карциноме вилочковой железы, как и в тимомах, наблюдалась экспрессия CK19, АЕ1/АЕ3, CK5/6, р63. Однако, в опухолевых клетках плоскоклеточного рака выявлена экспрессия маркеров CD5 (вклейка 5, рис. 7а) и CD117 (вклейка 5, рис. 7б), которые были негативны в тимоме В3. По данным литературы экспрессия CD5 и CD117 наблюдается в 80-100% случаев плоскоклеточного рака тимуса и не характерна для тимом [1, 7, 8, 9].
В нейроэндокринных опухолях определялась экспрессия общих нейроэндокринных маркеров -синаптофизина (вклейка 5, рис. 8а), хромограни-на А (вклейка 5, рис. 8б).
Результаты ИЦХ исследования эпителиальных опухолей вилочковой железы представлены в таблице 1.
Заключение
При цитологической диагностике тимом рекомендуется ИЦХ исследование для верификации
эпителиального и лимфоцитарного компонентов с использованием следующих антител:
• CD20, CK19, АЕ1/АЕ3 - для диагностики эпителиального компонента тимом типов А и АВ;
• CK19, АЕ1/АЕ3, р63, CD5, CD117 - для диагностики эпителиального компонента тимом типов В;
• CD3, TdT, CD20 - для исследования лимфоцитарного компонента всех типов тимом.
Автор заявляет об отсутствии конфликта интересов.
Литература/References
1. Eds W. D. Travis, E. Brambilla, A. P. Burke, A. Marx, A. G. Nicholson - Lyon. WHO classification of tumours of the lung, pleura, thymus and heart.: Agency for Research on Cancer, 2015.
2. Н.Н. Волченко, М.В. Савостикова. Атлас цитологической и иммуноцитохимической диагностики опухолей М.: «Репроцентр М», 2010. [N.N. Volchenko, M.V. Savostikova. Atlas of cytological and immunocytochemical diagnostics of tumors M .: "Reprocenter M", 2010. (In Russ.).]
3. О.Г. Григорук, Л.М. Дорошенко, А.Ф. Лазарев. Злокачественная мезотелиома плевры: возможности использования иммуноцитохимических методик. Сибирский онкологический журнал. 2008;1:51-4. [O.G. Grigoruk, L.M. Doroshenko,
A.F. Lazarev. Malignant pleural mesothelioma: the possibility of using immunocytochemical techniques. Siberian Journal of Oncology. 2008; 1: 51-4. (In Russ.).]
4. B. A. Alexiev, C. B. Drachenberg, A.P. Burke. Thymomas: a cytological and immunohistochemical study, with emphasis on lymphoid and neuro endocrine markers. Diagn Pathol. 2007; 2:13 https://doi. org/10.1186/1746-1596-2-13
5. S. Z. Ali, G. C. H. Yang. Lung and mediastinum cytohistology. New York: Cambridge University Press. 2012.
6. J. Du, X. J. Zhou, H. L. Yin et al. Expression of CD20 in thymomas and its clinical implication. Chinese J. Pathol. 2010; 39(9):611-614. https://doi. org/10.3760/cma.j.issn.0529-5807.2010.09.008
7. X.-Y. Su, W.-Y. Wang, J.-N. Li Immunohistochemical differentiation between type B3 thymomas and thymic squamous cell carcinomas. Int. J. Clin. Exp. Pathol. 2015;8(5):5354-5362.
8. Weksler B., Dhupar R., Parikh V. Thymic carcinoma: a multivariate analysis of factors predictive of survival in 290 patients. Ann. Thorac. Surg. 2013;95:299-303. https://doi.org/10.1016/;. athoracsur.2012.09.006.
9. N. Song, G. Chen, P. Zhang et al. Diagnostic and clinical significance of KIT(CD117) expression in thymic epithelial tumors in China. APJCP. 2012;13(6):2745-2748. https://doi.org/10.1378/ chest.128.1.140
THYMIC EPITHELIAL TUMORS: IMMUNOCYTOCHEMICAL CRITERIA
G.R. Butenko
Central Clinical Hospital with Polyclinic, Presidential Administration of the Russian Federation, Moscow, Russia
ABSTRACT
Immunocytochemical studies are widely used in the cytological diagnosis of tumors of different locations. The possibilities of the immunocytochemical method in clarifying the diagnosis of thymic epithelial tumors have not been studied. In the publications of foreign cytopathologists, some immunopheno-typic characteristics of thymomas are presented mainly on histological or Cell-bloc specimens.
Objective - to conduct immunocytochemical studies of thymic epithelial tumors, to determine the optimal set of antibodies for immunocytochemical diagnostics of thymomas.
Material and methods. The investigator conducted immunocytochemical studies of 22 anterior mediastinal neoplasms including thymomas (n=18), thymic squamous cell carcinoma (n=2), thymic neuroendocrine tumors (n=2).
Results and conclusion. The immunocytochemical features of thymomas A, AB, B1, B2, B3, thymic squamous cell carcinoma, neuroendocrine tumors were studied. An optimal antibody kit has been proposed for the immunocytochemi-
cal diagnosis of thymomas. The use of immunocytochemical method expands the possibilities of cytological diagnostics of thymic epithelial tumors.
Key words: immunocytochemical study, thymoma, neuroendocrine tumors, thymic squamous cell carcinoma.
Information about the authors:
Butenko G.R. - https://orcid.org/0000-0002-0095-4248 Corresponding author:
Butenko G.R. - e-mail: grbutenko@gmail.com
To Cite This Article: Butenko G.R Thymic epithelial tumors: immunocytochemical criteria. Russian News of Clinical Cytology. 2020;24(2):5-7. https://doi.org/10.24412/1562-4943-2020-2-0001
The author declares no conflict of interest.
Illustrations for the article «THYMIC EPITHELIAL TUMORS: IMMUNOCYTOCHEMICAL CRITERIA» Butenko G.R., page 5
a/a б/b
Рис. 1. Тимома тип АВ. Экспрессия CD20 в эпителиальных клетках в цитологическом ( а), в гистологическом(б) препарате, х 200.
Fig. 1. Thymoma type AВ. CD 20 expression in epithelial cells. FNAx200 (a) Histological specimen(b), х 200.
в/с г/d
Рис. 1. Тимома тип АВ. Экспрессия АЕ1/АЕ3 в эпителиальных клетках в цитологическом (в), и гистологическом (г) препарате, х 100.
Fig. 1. Thymoma type AB. АЕ1/АЕ3 expression in epithelial cells. FNA x100 (c) Histological specimen(d), х 100.
Illustrations for the article «THYMIC EPITHELIAL TUMORS: IMMUNOCYTOCHEMICAL CRITERIA» Butenko G.R., page 5
Рис. 1. Тимома тип АВ. Экспрессия СК19 в эпителиальных клетках в цитологическом (д) препарате, в гистологическом (е) препарате, х100.
Fig. 1. Thymoma type АВ. CK19 expression in epithelial cells. FNAx100 (e) Histological specimen(f), х100.
a/a
Рис. 2a. Тимома тип АВ. Эспрессия CD3 в лимфоцитах в цитологическом препарате, х200.
Fig. 2a. Thymoma type AB. CD 3 expression in lymphocytes, FNA х200.
б/b
Рис. 2б. Тимома тип АВ. Эспрессия CD3 в лимфоцитах в гистологическом препарате, х200.
Fig. 2b. Thymoma type AB. CD 3 expression in lymphocytes. Histological specimen, х200.
Illustrations for the article «THYMIC EPITHELIAL TUMORS: IMMUNOCYTOCHEMICAL CRITERIA» Butenko G.R., page 5
в/с
Рис. 2в. Тимома тип АВ. Эспрессия TdT в лимфоцитах в цитологическом препарате, х400.
Fig. 2с. Thymoma type AB. TdT expression in lymphocytes, FNA х400.
г/d
Рис. 2г. Тимома тип АВ. Эспрессия TdT в лимфоцитах в гистологическом препарате, х400.
Fig. 2d. Thymoma type AB. TdT expression in lymphocytes. Histological specimen, х400.
a/a
Рис. 3. Тимома тип В1. Экспрессия CK19 в эпителиальных клетках: а - цитологический препарат, х400; б - гистологический препарат, х100.
Fig. 3. Thymoma type В1. CK19 expression in epithelial cells.
a - FNAx400; b - Histological specimen, х100.
б/b
Illustrations for the article «THYMIC EPITHELIAL TUMORS: IMMUNOCYTOCHEMICAL CRITERIA» Butenko G.R., page 5
Рис. 4а. Тимома тип В1: экспрессия CD1a в лимфоцитах, х200.
Fig. 4а. Thymoma type B1: CD1a expression in lymphocytes, х200.
J л - \L.( 0
*л ... ' . ifc' •. * / ' , ( * г t' *
. ■ О о . 0 • • ' Г i ' л •* * и о о о
«32
' Ш А • ' ' 0 л Г
. ^ . О о ■ ' •. V
ЩУ. о ;; ' J
Рис. 4б. Тимома тип В1: экспрессия CD20 в лимфоцитах, х400.
Fig. 4b. Thymoma type B1: CD20 expression in lymphocytes, х400.
Рис. 5. Тимома тип В2: экспрессия p63 в опухолевых клетках, Рис. 6. Тимома тип В3: экспрессия CK19 в опухолевых клет-х200. ках, х400.
Fig. 6. Thymoma type B3. CK19 expression in tumor cells, х400.
Fig. 5. Thymoma type B2. p63 expression in tumor cells, х200.
Иллюстрации к статье «ЭПИТЕЛИАЛЬНЫЕ ОПУХОЛИ ВИЛОЧКОВОИ ЖЕЛЕЗЫ: ИММУНОЦИТОХИМИЧЕСКИЕ КРИТЕРИИ» Бутенко Г.Р., стр. 5
Illustrations for the article «THYMIC EPITHELIAL TUMORS: IMMUNOCYTOCHEMICAL CRITERIA» Butenko G.R., page 5
* ■ ■ ; ■>"
•4 ■ "
Рис. 7a. Плоскоклеточный рак тимуса: экспрессия CD5 в опухолевых клетках, х400.
Fig. 7a. Squamous cell carcinoma of the thymus. CD5 expression in tumor cells, х400.
Рис. 7б. Плоскоклеточный рак тимуса экспрессия CD117 в опухолевых клетках, х400.
Fig. 7b. Squamous cell carcinoma of the thymus. CD117 expression in tumor cells, х400.
$ : «MMt
геи ' ЛГЗЯЗД * 4 _
i ■ -¿^c'lSBKL*?1 л v - * 1 -CW
? -аУДг *> Ji "'* F * ** _ ^
IMJHi ^л^мС ■■ Л'-'., « t ~ »-Я
Рис. 8a. НЭО: экспрессия синаптофизина, х400. Рис. 8б. НЭО: экспрессия хромогранина А, х400.
Fig. 8a. Neuroendocrine tumor: synaptophysin expression, х400. Fig. 8b. Neuroendocrine tumor: chromogranin A expression,
х400.
