CC BY
63
Хамуди Ильяс. ЭПИДЕМИОЛОГИЯ И ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА УРОГЕНИТАЛЬНОГО МИКОПЛАЗМОЗА...
УДК 616.6+618.1:616.99] - 036.2-079-055.2
Эпидемиология и лабораторная диагностика урогенитального микоплазмоза у женщин репродуктивного возраста
Хамуди Ильяс
Донецкий национальный медицинский университет им. М. Горького
217 женщин репродуктивного возраста обследованы на урогенитальные заболевания методом ПЦР Моноинфекция уреаплазмами установлена у 38 (17,5 %) женщин, моноинфекция микоплазмами - у 23 (10,6 %). Микробиологический метод позволяет определить степень обсемененности микроорганизмом исследуемого материала, а также чувствительность выделенных штаммов микроорганизмов к антибактериальным препаратам. Ключевые слова: урогенитальный микоплазмоз, эпидемиология, лабораторная диагностика
По данным ВОЗ, урогенитальный микоплазмоз является одним из распространенных заболеваний среди инфекций, передаваемых половым путем. Активный рост заболеваемости отмечается среди женщин репродуктивного возраста, что обусловливает высокую актуальность данной проблемы. Эта патология несет угрозу как репродуктивному здоровью матери, так и здоровью будущего ребенка, чем и объясняется повышенный интерес исследователей к изучению воспалительных заболеваний мочеполовых органов, ассоциированных с генитальными микоплазмами [2, 6, 7, 13, 14].
Микоплазмы и уреаплазмы - это факультативные мембранные паразиты, самые мелкие самореплицирующиеся прокариоты, лишенные ригидной клеточной стенки, ограниченные лишь одной трехслойной липопротеиновой мембраной. В настоящее время они идентифицируются как бактерии и относятся к классу Mollicutes, который объединяет:
- микоплазмы;
- ахолеплазмы;
- спироплазмы;
- уреаплазмы;
- анаэроплазмы.
Представители этого класса широко распространены в природе, они обнаружены у человека и других млекопитающих, птиц, рыб, моллюсков, насекомых, растений.
В класс Mollicutes входят 3 порядка и 4 семейства. Микоплазмы относятся к порядку Mycoplasmatales, который подразделяется на два семейства:
- семейство Spiroplasmataceae;
- семейство Mycoplasmataceae, включающее два рода:
1) род Ureaplasma (2 вида,16 серотипов);
2) род Mycoplasma (до 80 видов), -
среди которых M. genitalium - абсолютный патоген, а U. urealiticum и M. hominis относятся к условно-патогенным микроорганизмам и могут входить в состав нормального биоценоза, обнаруживаясь у клинически здоровых лиц [3, 4, 10, 11, 14].
На современном этапе имеется множество данных, свидетельствующих о возможном участии микоплазм в развитии заболеваний мочеполовых органов:
-эндоцервицитов;
- эндометритов;
- сальпингитов;
- послеабортной и послеродовой лихорадки;
- неблагоприятных исходов беременности (преждевременных родов, самопроизвольных выкидышей, мертворождений).
Выявляясь у лиц репродуктивного возраста, они могут оказывать влияние на фертильность, а за счет большой распространенности изменять демографические показатели [6].
Данные об инфицированности в популяции этими микроорганизмов весьма противоречивы и колеблются от 6,0 % до 80 % [1, 2, 7]. Согласно данным В. Н. Прилепской и соавт. [8], у пациенток репродуктивного возраста частота встречаемости уреаплазм составляет 22,3 %; при этом в качестве моноинфекции уреаплазмоз отмечен в 37,5 % случаев, при смешанном инфицировании — в 62,5 %.
Лабораторные методы исследований играют решающую роль в диагностике микоплазмен-ной инфекции вследствие:
- отсутствия четких клинических проявлений;
- широкого распространения бессимптомного носительства;
- частого сочетания микоплазм с другими инфекционными агентами.
Наибольшую диагностическую ценность имеют прямые методы выявления микроорга-
1-4 2013
Дерматовенерология. Косметология. Сексопатология
низмов, их антигенов и генетического материала, являющихся специфическими микробными маркерами. Прямые методы диагностики мико-плазменной инфекции включают в себя [4, 6, 11]:
- иммуноморфологический метод - обнаружение в клиническом материале антигенов микоплазм с помощью антител, меченных флюорохромом;
- молекулярно-биологические методы, в том числе полимеразно-цепная реакция (ПЦР) - методы идентификации генетического материала микроорганизмов, основанные на обнаружении специфических для микроба последовательностей ДНК;
- микробиологический метод - наиболее объективный метод в диагностике инфекций, поскольку обладает высокой чувствительностью и специфичностью («золотой стандарт»); основан на выделении чистой культуры возбудителя из клинического материала и последующей идентификации на основе изучения морфологических, культуральных, биохимических и других свойств.
Культивирование микоплазм, чрезвычайно требовательных к составу питательных сред, связано с рядом трудностей, в числе которых [6]:
- отсутствие сред определенного состава, сложность состава сред;
- необходимость максимального соответствия состава питательным потребностям.
В классическом исполнении микробиологическое исследование — трудоемкий процесс, проводящийся в несколько этапов (включая большую подготовительную работу), требующий большого количества дифференциально-диагностических сред, реактивов, стерильной посуды, а также затрат труда. Результат при этом удается получить не ранее, чем через трое суток.
В настоящее время отмечается тенденция перехода от классических, многоступенчатых исследований к современным, унифицированным технологиям анализа. При этом большее значение придается оптимизации и стандартизации, надежности, а также упрощению и автоматизации метода. Весьма перспективным является использование микротест-систем, избавляющих практических микробиологов от трудоемких работ и позволяющих получить стандартные, воспроизводимые результаты [2].
Цель исследования — установить частоту выявления условно-патогенных микоплазм у женщин репродуктивного возраста путем использования молекулярно-биологического и микробиологического методов их идентификации.
Материал и методы исследования. Под
наблюдением находилось 217 женщин репродуктивного возраста, у которых методом ПЦР идентифицированы микоплазмы. Из группы наблюдения исключали пациентов с положительными тестами на ВИЧ-инфекцию.
ПЦР-диагностика осуществлялась с помо-
щью наборов реагентов производства:
-ФГУ«Центральныйнаучно-исследовательский институт эпидемиологии» - «АмплиСенс-100-Ä»;
- научно-производственной фирмы «Литех» -«Полимик Мк», «Полимик-Ур».
Для микробиологического исследования использовалась тест-система «Mycoplasma Duo» производства фирмы «Bio RAD». Тест-система «Mycoplasma Duo» выпускается французской фирмой «Санофи диагностик Пастер» и предназначена для выявления двух наиболее распространенных урогенитальных микоплазм: U. urealiticum и M. hominis. Она представляет собой микрометод, который, помимо одновременного выявления двух микроорганизмов, позволяет определять и их количественное содержание. Идентификация и титрование урогенитальных микоплазм основывается на специфических метаболических особенностях каждого микроорганизма.
Метод ПЦР имеет наибольшее распространение, относится к методам ДНК-диагностики и основывается на распознавании последовательности нуклеотидов в генах искомых микроорганизмов или вирусов. По многочисленным данным, полученным из различных лабораторий, чувствительность и специфичность метода ПЦР приближается к теоретически возможным и составляет 96 % и 98 % соответственно [5, 9]. Однако, U. urealiticum и M. hominis являются условно-патогенными микроорганизмами, и необходимо их количественное определения, особенно при отсутствии клинических проявлений болезни. Именно это обстоятельство позволило обосновать применение тест-систем «Mycoplasma Duo», которые также дают возможность определить чувствительность мико-плазм к различным антибиотикам.
Результаты и обсуждение. При комплексном клинико-лабораторном обследовании 217 женщин репродуктивного возраста установлена:
- моноинфекция уреаплазмами - у 38 (17,5 %) женщин;
- моноинфекция микоплазмами - у 23 (10,6 %) женщин;
- сочетанная инфекция - у 156 (71,9 %) женщин, среди которых:
1) хламидийно-уреаплазменная инфекция отмечалась у 18 (8,3 %) женщин;
2) хламидийно-уреаплазменно-микоплаз-менная - у 15 (6,9 %);
3) уреаплазменно-гонорейная - у одной (0,5 %);
4) уреаплазменно-трихомонадная - у трёх (1,4 %);
5) уреаплазменно-микоплазменно-трихо-монадная - у одной (0,5 %);
6) уреаплазменно-микоплазменно-канди-дозная - у 31 (14,3 %);
7) уреаплазменно-кандидозная - у 53
Дерматовенерология. Косметология. Сексопатология 1-4 2013
Хамуди Ильяс. ЭПИДЕМИОЛОГИЯ И ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА УРОГЕНИТАЛЬНОГО МИКОПЛАЗМОЗА.
(24,4 %);
8) уреаплазменная инфекция и «ключевые клетки» - у 47 (21.6 %);
9) уреаплазменная инфекция - кандидоз -
«ключевые клетки» - у 22 (10,1 %) женщин.
У 41 (18,9 %) женщин наблюдалось сочетание трех инфекций, у пяти (2,3 %) - четырех-пяти. Наиболее часто сочетались:
- уреаплазма - бактериальный вагиноз;
- кандидоз - уреаплазма.
При исследовании микрофлоры уретры, влагалища и цервикального канала у 178 (82,0 %) больных до назначения антибактериальной терапии была обнаружена обильная смешанная грамвариабельная коккобацилярная флора:
- стафилококки;
- стрептококки;
- кишечные палочки;
- «ключевые клетки»;
- мобилункус;
- лептотрикс;
- мицелий грибов кандида.
Указанные микроорганизмы, как правило, встречались в сочетании.
Далее под нашим наблюдением находились пациентки с моноинфекциями U. urealiticum (38 женщин) и M. hominis (23 женщины), которым проводилось исследование при помощи тест-систем «Mycoplasma Duo». При исследовании установлено, что низкие титры 102-103 КОЕ/мл выявлены у 9 (23,7 %) обследованных при идентификации U. urealiticum и у пяти (21,7 %) - при идентификацииM. hominis. Присутствие уроге-нитальных микоплазм в таких титрах расценивается как носительство и рассматривается как нормальная микрофлора.
У всех остальных, а именно у 29 (78,3 %) пациенток с U. urealiticum и у 18 (76,3 %) - с M. hominis выявлены высокие титры микроорганизмов. При высоких (104-105-106 КОЕ/мл и более) речь идет о появлении патогенных свойств, т. е. количественная оценка микоплазм важна при установлении диагноза и определении дальнейшей тактики ведения пациенток. Степень обсемененности коррелировала со степенью выраженности симптомов и нарушений сопутствующей микрофлоры.
В результате проведенных исследований клинических изолятов Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum на чувствительность к антибиотикам нами установлено, что:
- чувствительны к антибиотикам тетраци-клинового ряда (тетрациклин, миноциклин, доксициклин) 93 % выделенных штаммов ми-коплазм и уреаплазм при 87 % устойчивости к эритромицину;
- чувствительность к джозамицину мико-плазм и уреаплазм отмечена в 78 % случаев,
1-4 2013 Дерматовенерология. Косметология. Сексопатология
умеренная устойчивость - в 22,0 %;
- умеренная чувствительность к офлоксаци-ну у исследуемых штаммов отмечалась в 76,0 % случаев при устойчивости к данному препарату в 17,0 % случаев;
- чувствительна к клиндомицину Ureaplasma urealyticum была отмечена в 52,0 % случаев.
Таким образом, полученные данные свидетельствует о том, что для диагностики урогени-тальных микоплазм необходимо использование как ПЦР, так и тест-систему «Mycoplasma Duo». Каждый из данных методов имеет ряд преимуществ. Методика ПЦР позволяет достаточно быстро получить результаты анализов; при этом данным методом определяют ДНК возбудите -лей нескольких инфекционных заболеваний в одной реакции. Учитывая современные сведения о том, что и U. Urealiticum, и M. hominis относятся к условно патогенным микроорганизмам и могут входить в состав нормального биоценоза, обнаруживаясь у клинически здоровых лиц, необходимо количественное определение данных микроорганизмов, что возможно при использовании бактериологического метода.
При одинаковой чувствительности и специфичности молекулярно-биологических и микробиологического методов [7], последний имеет несомненные преимущества, т. к. является наиболее информативным методом, позволяющим определить степень обсемененности микроорганизмом исследуемого материала, а также чувствительность выделенных штаммов микроба к антибактериальным препаратам [9]. Кроме того, микробиологический метод является методом выбора для оценки эффективности проведенного лечения.
Выводы. Несмотря на внедрение высокочувствительных генодиагностических технологий, остается открытым вопрос о патогенности ми-коплазм, поскольку отсутствует чёткая корреляция между их титром и выраженностью патологии урогенитального тракта. При диагностике микоуреаплазмоза не следует опираться исключительно на результаты ПЦР-исследования. В данном случае предпочтительным сочетанием методов являются ПЦР и микробиологический (посев в селективную среду и в среду с антибиотиками).
Микробиологический метод позволяет провести детекцию микоплазм в количествах, достаточных для развития патологии, а также назначить лечение с учетом антибиотикорези-стентности данного клинического изолята. В свою очередь, метод ПЦР позволяет определять наличие незначительного количества ми-коплазм, которые в дальнейшем, на фоне подавленного иммунитета, могут вызывать те или иные клинические проявления инфекции.
ЛИТЕРАТУРА
1. Гомберг М. А. Ведение больных с микоплаз-менной инфекцией / М. А. Гомберг // Гинекология. - 2009. - T. 11, № 4. - С. 48-51.
2. Дюдюн А. Д. Комплексно-диференцшована тера-
пш i диспансеризащя хворих з рецидивами уро-гештальних шфекцш (хламщюз, трихомонiаз, уреаплазмоз, кандидоз, бактерiальний вагшоз) : автореф. дис. ... д-ра мед. наук: 14.01.20 / Дюдюн Анатолш Дмитрович; Нацiональний медичний ун-т iм. О. О. Богомольця. - К., 2003. - 34 с.
3. Мавров И. И. Половые болезни: учеб. пособие / И. И. Мавров. - М., 2002. - 735 с.
4. Молочков В. А. Инфекции, передаваемые половым путем / В. А. Молочков, О. Л. Иванов, В. В. Чеботарева. - М.: Медицина, 2006. - 632 с.
5. Кубанова A. А., Рахматулина М. Р. Урогени-тальные инфекционные заболевания, вызванные генитальными микоплазмами. Клинические рекомендации // Вестн. дерматологии и венерологии. - 2009. - № 3. - С. 78-82.
6. Кузнеченкова Т. В. Урогенитальная микоплаз-
менная инфекция: особенности эпидемиологии, клиники и секреторного иммунитета у женщин различных социальных групп: дис. ... канд. мед. наук: 14.01.10 / Кузнеченкова Татьяна Владимировна; ФГУ «Уральский научно-исследовательский институт дерматовенерологии и иммунопатологии». - Екатеринбург, 2011. - 150 с.
7. Немченко О. И. Урогенитальный микоплазмоз (об-
зор литературы) / О. И. Немченко, Е. В. Уварова // Consilium Medicum. - 2007. - № 1. - С. 45-51.
8. Прилепская В. Н. К вопросу о роли микоплазм
в генитальной патологии / В. Н. Прилепская,
В. И. Кисина, Е. В. Соколовский // Гинекология. -2007. -Т. 9, №1. - С. 31-38.
9. Прохоренков В. И. Уреаплазменная инфекция:
современное состояние чувствительности и резистентности к антибиотикам / В. И. Прохоренков, М. В. Шапран // Вестн. дерматологии и венерологии. - 2006. - № 2. - С. 59-61.
10. Раковская И. В. Персистенция Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum в организме инфицированных животных / И. В. Раковская, Л. Г. Горина, О. И. Бархатова и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. -2009. - № 4. - С. 81-85.
11. Рахматулина М. Р. Современные представления о микробиоценозе вагинального биотопа и его нарушениях у женщин репродуктивного возраста / М. Р. Рахматулина, А. Ю. Шаталова // Вестн. дерматологии и венерологии. - 2009. - № 3. - С.38-42.
12. BayraktarM. R. Prevalence and antibiotic susceptibility of Mycoplasma hominis and Ureaplasma urealyticum in pregnant women / M. R. Bayraktar, I. H. Ozerol, N. Gucluer, O. Celik // Int. J. Infect. Dis. - 2010. - Vol. 14, No 2. - P. 90-95.
13. Berger A. Intrauterine infection with Ureaplasma species is associated with adverse neuromotor outcome at 1 and 2 years adjusted age in preterm infants / A. Berger, A. Witt // J.of perinatal. medicine. - 2008. - Vol. 37, No 1. - P.72-78.
14. Bjartling C. The association between Mycoplasma genitalium and pelvic inflammatory disease after termination of pregnancy / C. Bjartling, S. Osser, K. Persson // BJOG. - 2010. -Vol.117, No 3. - P. 361-364.
ЕП1ДЕМ1ОЛОГ1Я I ЛАБОРАТОРНА Д1А-ГНОСТИКА УРОГЕН1ТАЛЬНОГО М1КОПЛАЗ-МОЗУ У Ж1НОК РЕПРОДУКТИВНОГО В1КУ Хамуд 1льяс
Донецький наи^ональний медичний ун1верситет ¡м. М. Горького
217 жЫок репродуктивного вку обстежено на наяв-нють урогештальних захворювань методом ПЛР Мо-ноЫфек^ю уреаплазмами встановлено у 38 (17,5 %) жшок, моноЫфек^ю мкоплазмами - у 23 (10,6 %). Mi-кробюлопчний метод дозволяе визначити ступшь об-амешння мiкроорганiзмом дослщжуваного матерiалy а також чутливють видтених штамiв мiкроорганiзмiв до антибаю^альних препара^в .
Ключовi слова: урогештальний мкоплазмоз , епще-мюлопя, лабораторна дiагностика
EPIDEMIOLOGY AND LABORATORY DIAGNOSTICS OF THE UROGENITAL MYCOPLASMOSIS FOR REPRODUCTIVE AGE WOMEN Hamoudi Elyes
Donetsk National Medical University of Maxim Gorky
217 reproductive age women have been examined for urogenital diseases using the polymerase-chain reaction. The Ureaplasma monoinfection has been determined in 38 (17.5 %) women, mycoplasmas monoinfection - in 23 (10.6 %). The microbiological method permits to determine the degree of contaminating the test material by the microorganism as well as the sensitivity of the isolated microbe strains to antibacterial drugs.
Keywords: urogenital mycoplasmosis, epidemiology, laboratory diagnostics
Хамуди Ильяс - аспирант кафедры дерматовенерологии Донецкого национального медицинского университета им. М. Горького. Тел. +38(063)2481404.
Дерматовенерология. Косметология. Сексопатология 1-4 2013
