CC BY
26
УДК 611-018.74:615.256.51]: 616-092.8
В. И. КОЧКАРОВ, М. В. ПОКРОВСКИЙ, М. М. КОРНЕЕВ, Т. Г. ПОКРОВСКАЯ, М. П. ГЛАДЧЕНКО, Е. Б. АРТЮШКОВА, В. А. МЕТЕЛЬСКАЯ, Н. Г. ГУМАНОВА, А. В. ФАЙТЕЛЬСОН, В. Т. ДУДКА, Ю. П. КЛЯВС, Т. И. ЗЕЛЕНКОВА, О. С. ГУДЫРЕВ
ЭНД0ТЕЛИ0ПР0ТЕКТИВНЫЕ ЭФФЕКТЫ РЕЗВЕРАТРОЛА И ЕГО КОМБИНАЦИЙ С ЭНАЛАПРИЛОМ И Л0ЗАРТАН0М ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬН0М М0ДЕЛИР0ВАНИИ ДЕФИЦИТА 0КСИДА АЗ0ТА
Кафедра фармакологии Курского государственного медицинского университета, г. Курск, кафедра фармации Белгородского государственного университета, г. Белгород
Введение
Причинно-следственную взаимосвязь между эндотелиальной дисфункцией и развитием сердечно-сосудистых заболеваний (атеросклероза, артериальной гипертензии, легочной гипертензии, сердечной недостаточности, дилатационной кардиомиопатии, гипер-липидемии, сахарного диабета) подтверждают результаты экспериментальных и клинических исследований последних лет [7, 9, 11].
Научные исследования в области изыскания эн-дотелиотропных средств указывают на активизацию нитроксидергической системы природным веществом резвератролом (3, 5, 4'-тригидрокситранс-стильбен), содержащимся в красных сортах виноградных вин.
Особое внимание исследователей привлекла публикация в медицинском журнале «Lancet» о так называемом «Французском парадоксе», данные в которой указывали на тот факт, что во Франции, несмотря на предпочтительное употребление продуктов с высоким содержанием жиров, уровень сердечно-сосудистых заболеваний оставался ниже, чем в других развитых странах, и этот «парадокс» обусловлен регулярным употреблением населением Франции красного вина.
При дальнейшем изучении состава красных сортов вин был обнаружен резвератрол, который вырабатывается в виноградных гроздьях в ответ на экстремальные факторы (низкие температуры, инфекции, УФ-воз-действия).
Фармакологические исследования показали ги-полипидемическую, антиоксидантную, эстрогенную и антиагрегационную активность резвератро-ла [13].
Наряду с вышеперечисленными фармакологическими эффектами литературные данные свидетельствуют также о кардиопротективной и эндотелиот-ропной активности резвератрола в опытах in vitro. Эндотелиотропная активность резвератрола обусловлена активацией фермента эндотелиальной NO-синтазы ^NOS), которая приводит к увеличению
выработки окиси азота, являющегося основным ва-зодилатирующим фактором эндотелия сосудов [13].
В этой связи целью наших исследований явилось изучение эндотелиопротективных свойств резве-ратрола и его комбинаций с ингибитором ангиотен-зинпревращающего фермента (АПФ) - эналаприлом и блокатором ангиотензиновых рецепторов (АТ1) - ло-зартаном при экспериментальном дефиците оксида азота.
Материалы и методы исследований
Опыты выполнены на самцах белых нелинейных крыс массой 200-300 г. Ингибитор NO-синтазы N-нит-ро^-аргинин метиловый эфир (L-NAME, Sigma) вводился внутрибрюшинно один раз в сутки в дозе 25 мг/кг в объеме 1 мл/кг в течение 7 дней (n=10 животных). Животным интактной группы вводился физиологический раствор NaCl в том же объеме (n=10 животных).
Резвератрол производства Greensyn™ (Guangzhou)., Ltd вводили внутрибрюшинно в дозах 0,036 мг/кг, 0,143 мг/кг, 2 мг/кг один раз в сутки (n=10 животных).
Эналаприл и лозартан производства ОАО «Фарм-стандарт-Лексредства» вводились внутрижелудочно в дозе 0,5 мг/кг и 6 мг/кг в сутки соответственно (n=10 животных).
Исследование показателей гемодинамики в группах животных проводили под наркозом (этаминал натрия 50 мг/кг) посредством введения в сонную артерию катетера, регистрировали систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) с помощью датчика P23ID «Gould», США, АЦП L-154 и компьютерной программы «Bioshell».
Для оценки степени развития эндотелиальной дисфункции у экспериментальных животных и ее коррекции исследуемыми препаратами нами произведен расчет коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД) [6].
Исследование сократимости миокарда после моделирования патологии проводили у наркотизированных крыс, находящихся на управляемом дыхании,
Влияние резвератрола и его комбинаций с эналаприлом, лозартаном на показатели артериального давления и эндотелиальной дисфункции при Ь-МДМБ-индуцированном дефиците оксида азота (М±т, п=10)
Группы животных Систолическое артериальное давление, мм рт. ст. Диастолическое артериальное давление, мм рт. ст. Коэффициент эндотелиальной дисфункции, у. е.
Интактные 137,7 ±3,7** 101,9 ± 4,3** 1,1±0,1
Ь^АМЕ (25 мг/кг) 190,3 ± 6,7* 145,0 ± 3,9* 5,4±0,6*
Ь^АМЕ + резвератрол (0,036 мг/кг) 174,1 ± 7,1 135,1 ± 4,6 3,3±0,5*
Ь^АМЕ + резвератрол (0,143 мг/кг) 183,0 ± 3,2 142,2 ± 2,1 2,1 ±0,3*
Ь^АМЕ + резвератрол (2 мг/кг) 183,8 ± 15,0* 140,0 ± 8,3* 1,2±0,1**
Ь^АМЕ +эналаприл (0,5 мг/кг) 183,9 ± 11,4* 138,9 ± 7,0* 3,2±0,1**
Ь^АМЕ +эналаприл+ резвератрол 175,9 ± 13,2* 132,6 ± 10,6* 1,5±0,1**
Ь^АМЕ +лозартан (6 мг/кг) 192,2 ± 10,5* 138,2 ± 2,4* 2,5±0,3**
Ь^АМЕ +лозартан+резвератрол 144,1 ± 4,9** 117,2±3,4** 1,8±0,2**
Примечание: * - р<0,05 в сравнении с интактными;
- р<0,05 в сравнении с группой ЬЫАМЕ.
посредством зондирования левого желудочка и регистрацией на аппаратно-программном комплексе «ВювИеИ».
Для оценки функциональных возможностей миокарда у животных проводили нагрузочные пробы на адренореактивность (внутривенное одномоментное введение раствора адреналина гидрохлорида 110-5моль/л, из расчета 0,1 мл на 100 г) и нагрузку сопротивлением (пережатие восходящей аорты на 30 сек. [3].
В качестве биохимических маркеров эндотелиальной дисфункции нами определялись уровень еЫОБ в аорте крыс и уровень суммарного нитрита в сыворотке крови крыс [5].
Для морфологического подтверждения развития моделируемых патологических процессов и в комплексной оценке эффективности препаратов проведено гистологическое исследование сердца с определением диаметра кардиомиоцитов по методике Г. Г. Автандилова [1].
Результаты исследований
Мы рассчитывали КЭД у каждого животного интакт-ной группы и крыс после моделирования блокады N0-синтазы и получили достоверную разницу КЭД соответственно в 5 раз, соответственно 1,1 у интактных и 5,4 у животных, получавших Ь^АМЕ (таблица).
В базовых экспериментах для оценки влияния фармакологических агентов на эндотелий сосудистого русла в качестве простого и информативного показателя нами использован КЭД (таблица).
При введении резвератрола в дозах 0,036 мг/кг, 0,143 мг/кг, 2 мг/кг в сутки на фоне развития N0-де-фицита КЭД у данных групп животных составил 1,2±0,1, 1,2±0,1, 1,2±0,1 соответственно (таблица).
Обращает на себя внимание, что КЭД в группе животных, получавших резвератрол в дозе 2 мг/кг, был равен практически таковому у группы интактных животных - 1,2±0,1, и в этой связи для дальнейших экспериментов нами была использована данная доза рез-вератрола (таблица).
В дальнейшем нами были проведены сравни-
тельные исследования эндотелиопротективного действия эналаприла (0,5 мг/кг), лозартана (6 мг/кг) при Ь^АМЕ-индуцированном дефиците оксида азота, а также их комбинаций с резвератролом (2 мг/кг). Данные показали, что резвератрол обладает максимальной эндотелиопротективной активностью при развитии дефицита оксида азота, что выражалось в снижении коэффициента эндотелиальной дисфункции до уровня интактных животных, но вместе с тем при использовании резвератрола в комбинации с эналаприлом и лозартаном обнаружено положительное фармакодинамическое взаимодействие (таблица).
Для оценки функциональных возможностей миокарда проводили нагрузочные пробы.
Проба на адренореактивность у животных с Ь-NAME-индуцированным дефицитом оксида азота на фоне применения резвератрола и его комбинаций с эналаприлом и лозартаном обнаружила достоверное снижение максимальных цифр левожелудочкового давления. У интактных животных - 199,2±8,3, у животных с Ь^АМЕ-индуцированным дефицитом оксида азота - 247,3±4,8, у резвератрола (2 мг/кг) -211,9± 12,3, эналаприл (0,5 мг/кг) - 216,2± 11,7, ло-зартан (6 мг/кг) - 242,7±4,7, эналаприл (0,5 мг/кг) + резвератрол (2 мг/кг) - 210,9± 12,3, лозартан (6 мг/кг) + резвератрол (2 мг/кг) - 208,4±10,4.
При проведении пробы на нагрузку сопротивлением сочетанное использование резвератрола с лозар-таном и эналаприлом оказались предпочтительнее монотерапии. Значение ЛЖД к 25-й секунде пережатия восходящей аорты в группе с моделированием Ь-NAME-индуцированного дефицита N0 составило 66,0%±2,3% по отношению к 5-й секунде, тогда как у интактных животных - 83,6±2,1%, при монотерапии резвератролом - 74,4±3,1%, а в группах Ь^АМЕ + резвератрол + эналаприл - 89,1±4,3% и Ь^АМЕ + резвератрол + лозартан - 81,7±6,2%.
Результаты проведенных нагрузочных проб указывают на сохранение значительного инотропного резерва у животных, леченных комбинацией резвератрола с эна-лаприлом и лозартаном. Наилучшей эффективностью
обладали сочетания резвератрола с эналаприлом и лозартаном.
Исследование биохимических маркеров в сериях экспериментальных животных подтвердили эндотелий-протективную активность резвератрола.
Так, суммарная концентрация нитрита у животных с экспериментальным дефицитом оксида азота была почти в два раза ниже по сравнению с группой интактных животных и составила 61±8,5 и 114±10,5 мкМ соответственно. При монотерапии резвератролом - 107±9,1, а в группах Ь^АМЕ + резвератрол + эналаприл - 97±6,1 мкМ и Ь^АМЕ + резвератрол + лозартан - 88±5,2 мкМ.
При этом уровень еN0S во всех исследуемых группах достоверно не отличался, что свидетельствует о том, что при моделировании Ь^АМЕ-индуцированной эндотелиальной дисфункции угнетается только активность фермента еN0S, количество его остается неизменным.
При морфологическом исследования обнаружили кардиопротективные эффекты исследуемых препаратов. В сердце контрольной группы (Ь^АМЕ-индуци-рованный дефицит N0) обнаружена гипертрофия кар-диомиоцитов левого желудочка до 18,4±0,9 (в норме 9,1±0,1 мкМ). Резвератрол в комбинациях с эналап-рилом и лозартаном максимально предотвращал увеличение поперечного диаметра кардиомиоцитов. В сериях экспериментов, где применялись препараты в виде монотерапии, также проявлялось кардиопротек-тивное действие, однако в меньшей степени.
0бсуждение
Результаты проведенных экспериментальных исследований подтвердили существующие данные о связи патогенеза сердечно-сосудистых заболеваний с нарушением баланса эндотелиальных субстанций. Основное значение в развитии эндотелиальной дисфункции (ЭД) имеют свободнорадикальное окисление, активация ренин-ангиотензиновой системы (РААС), продукция мощных вазоконстрикторов (эндопероксидов, эндотелинов), а также цитокинов, которые подавляют продукцию N0 [2, 4, 8, 10, 12].
Так, в ходе проведенных нами исследований в эксперименте с помощью комплекса физиологических, биохимических и морфологических методов были получены результаты, указывающие на отчетливое эндотелиопротективное и кардиопротектив-ное действие резвератрола как при использовании в виде монотерапии, так и при использовании в комбинации с ингибитором АПФ эналаприлом и блока-тором АТ1 рецепторов лозартаном.
Результаты исследования эндотелио- и кардио-протективных эффектов комбинаций резвератрола с эналаприлом, а также с лозартаном калия на модели Ь^АМЕ-индуцированного дефицита N0 рассматриваются как оправданные и позволяют за счет патогенетически обоснованного воздействия на нит-роергическую и ренин-ангиотензиновую системы рекомендовать данные комбинации к широкому клиническому изучению.
Поступила 11.10.2006 ЛИТЕРАТУРА
1. Автандилов Г. Г. Основы патолого-анатомической практики. М.: РМАПО, 1994. 512 с.
2. Гомеостаз и инфекционный процесс: Тез. докл. III Об-щерос. конф. с международ. участием (г. Сочи, 14-16 мая 2002 г.). М.: Акад. естествознания, 2002. 103 с.
3. Гурбанов К. К. Сравнительная оценка антиишемическо-го действия верапамила на разных моделях ишемии миокарда / К. К. Гурбанов, Г. В. Ковалев, А. А. Паперно // Фармакология и токсикология. 1991. Т. 54, № 4. С. 21-23.
4. Марков X. М. Оксидантный стресс и дисфункция эндотелия // Патол. физиология и эксперим. терапия. 2005. № 4. С. 5-9.
5. Метельская В. А. Возможности лабораторной оценки NO-продуцирующей функции эндотелия // Клинич. и лаб. диагностика. 2004. № 9. С. 86.
6. Покровский М. В., Качкаров В. И., Покровская Т. Г. и др. Методические подходы для количественной оценки развития эндотелиальной дисфункции при L-NAME-индуцированной модели дефицита оксида азота в эксперименте // Кубанский научный медицинский вестник. Краснодар, 2006. Т. 12.
7. Петрищев Н. Н., Власов Т. Д. Функциональное состояние эндотелия при ишемии-реперфузии (обзор литературы) // Рос. физиол. журн. им. И. М. Сеченова. 2000. № 2. С. 148-163.
8. Яковлев В. М., Новиков А. И., Кондратьев А. И., Новиков Ю. А. Роль регуляторной и гемостазиологической функции эндотелия в формировании сифилитических васкулитов // Материалы V Всерос. конф. «Тромбозы, геморрагии, ДВС-синдром. Проблемы лечения». M., 2000. С. 180-181.
9. Соболева Г. Н., Иванова О. В., Карпов Ю. А. Состояние эндотелия при артериальной гипертонии и других факторах риска атеросклероза (обзор литературы-2) // Тер. архив. 1999. № 7. С. 80-83.
10. Angiotensin II-mediated endothelial dysfunction: role of poly (ADP-ribose) polymerase activation / C. Szabo, P. Pacher, Z. Zsengeller et al. // Mol. Med. 2004. V. 10 (1-6). P. 28-35.
11. Basse R. anil l-laning I. Endothelial dysfunction in atherosclerosis // 1. Vase. Res, 1996. Vol. 33. P. 181-194.
12. Bautista L. E. Inflammation, endothelial dysfunction, and the risk of high blood pressure: epidemiologic and biological evidence // J. Hum. Hypertens. 2003. V. 17 (4). P. 223-230.
13. Leikert J. F., Rathel T. R., Wohlfart P., Cheynier V. et all. Red Wine Polyphenols Enhance Endothelial Nitric Oxide Synthase Expression and Subsequent Nitric Oxide Release From Endothelial Cells Circulation, September 24, 2002. Vol. 106 (13). P. 1614-1617.
V. I. KOCHKAROV, M. V. POKROVSKII, M. M. KORNEYEV, T. G. POKROVSKAYA, M. P. GLADCHENKO, E. B. ARTJUSHKOVA, V. A. METELSKAJA, N. G. GUMANOVA, A. V. FAITELSON, V. T. DUDKA, J. P. KLJAVS, T. I. ZELENKOVA, O. S. GUDYREV
ENDOTHELIOPROTECTIVE EFFECTS OF RESVERATROL AND ITS COMBINATIONS WITH ENALAPRIL AND LOZARTAN AT EXPERIMENTAL MODELLING OF NITROGEN OXIDE DEFICIENCY
Experimental researches endothelioprotective and cardioprotective effects of resveratrol and its combinations to enalapril and losartan are lead at the L-NAME-induced deficiency of nitrogen oxyde.
Results specifying on distinct endothelioprotec-tive and cardioprotective action of resveratrol are received by means of a complex of physiological, biochemical and morphological methods, at use as a kind of monotherapy as well in a combination with ATE-inhibitor enalapril and AT1-blocker losartan, that allows to recommend these combinations to wide clinical studying.
