CC BY
57
УДК 615.256.4: 611-018.74
ЭНДОТЕЛИО- И КАРДИОПРОТЕКТИВНЫЕ СВОЙСТВА ПРЕПАРАТА ИМПАЗА НА МОДЕЛИ ГИПЕРГОМОЦИСТЕИН-ИНДУЦИРОВАННОЙ ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ
A.С. Белоус1, А.А. Арустамова2 М.В. Покровский1, С.А. Цепелева1
B.И. Якушев1, О.С. Гудырев1 М.В. Корокин1
Моделирование гипергомоцистеин-индуцированного дефицита оксида азота с помощью внутрижелудочного введения метионина в дозе 3 г/кг в течение 7 дней у крыс приводило к развитию эндотелиальной дисфункции. В условиях этой модели были выявлены выраженные эндотелиопротективные и кардиопротективные свойства препарата импаза.
1 Курский государственный медицинский университет
2 белгородский государственный национальный исследовательский университет
Ключевые слова: импаза, эндотелий, оксид азота, метионин.
e-mail: [email protected]
Введение. Рабочей гипотезой механизма действия смеси гомеопатических разведений афинно очищенных поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота ^NOS) с12, сзо, с200 является активация ими по принципу «обратной связи» эндотелиальной NO-синтазы (eNOS) [2]. Фирма ООО НПФ «Материа Медика Холдинг» позиционирует препарат «Импаза» как средство коррекции эрек-тильной дисфункции. В то же время, мы предполагаем, что гомеопатически потенцированные антитела к eNOS могу быть эффективны при всех патологических состояниях сердечно-сосудистой системы, сопровождающихся эндотелиальной дисфункцией.
Целью настоящего исследования явилось изучение эндотелио- и кардиопротек-тивных эффектов препарата импаза на модели гипергомоцистеин-индуцированного дефицита оксида азота.
Методика исследования. Для моделирования гипергомоцистеин-индуцированной эндотелиальной дисфункции готовили раствор для внутрижелудочного введения метионина ex tempore с помощью солюбилизатора ТВИН-80 и 1% крахмального раствора, раствор с метионином (ООО «Полисинтез», г. Белгород) вводили ежедневно, 1 раз в сутки, внутрижелудочно, в дозе 3 г/кг в течение 7 дней. В качестве сравнения так же была введена дополнительная группа с введением 10% раствора ТВИН 80 в дозе 1 мл/кг ежедневно, 1 раз в сутки, в течение 7 дней, внутрижелудочно.
Фармакологическую коррекцию дефицита оксида азота осуществляли добавлением животным в поилки сверхмалых доз афинно очищенных антител к эндотелиаль-ной NO-синтазе (импаза Материа-Медика, Россия) - из расчёта 1 таблетка на 100 мл воды со свободным доступом к питью, с учётом выпитой жидкости (20±3 мл в среднем на одно животное) [1]. Группа с моделью дефицита оксида азота являлась контрольной. В исследовании использовалась такая же группа интактных животных.
На 8-й день эксперимента под наркозом (этаминал-натрия 50 мг/кг) на первом этапе исследования вводили катетер в левую сонную артерию и регистрировали систолическое и диастолическое артериальное давление (АД), частоту сердечных сокращений. На втором этапе исследования вводили иглу в полость левого желудочка через верхушку сердца для регистрации максимальной скорости сокращения (+dp/dt) и расслабления (-dp/dt). Измерения производились и обрабатывались посредством TSD104A и аппаратно-программного комплекса MP100 производства Biopac System, Inc., США.
Для изучения реактивности сосудистого русла при моделировании дефицита оксида азота регистрировали артериальное давление при эндотелийнезависимой и эн-
дотелийзависимой вазодилатации. Эндотелийнезависимая вазодилатация осуществлялась посредством болюсного введения нитропруссида (НП) натрия (30 мкг/кг) в правую бедренную артерию [2], эндотелийзависимая - введением ацетилхолина (АХ) (40 мкг/кг) [7]. Далее высчитывали коэффициент эндотелиальной дисфункции (КЭД) по формуле: КЭД = ЗАД НП/ЗАД АХ, где ЗАД НП - площадь треугольника над кривой восстановления АД, причём точками меньшего катета являются точка максимального падения АД и точка выхода уровня АД на плато при проведении функциональной пробы с введением нитропруссида, ЗАД АХ - площадь треугольника над кривой восстановления АД при проведении пробы с ацетилхолином, причём за меньший из катетов принимают разность между точкой окончания брадикардитического кардиального компонента и точкой восстановления АД. Этот показатель отражает изменение реактивности сосудистого русла при моделировании дефицита оксида азота и позволяет оценить степень коррекции эндотелиальной дисфункции [5, 6]. Для оценки функциональных возможностей миокарда у животных проводили нагрузочные пробы: проба на адренореактивность (внутривенное введение адреналина гидрохлорида 1x105 моль/л, в дозе 0,1 мл/100 г) [4], нагрузка сопротивлением (пережатие восходящей аорты на 30 с).
Достоверность изменений абсолютных параметров определяли разностным методом вариационной статистики с нахождением средних значений сдвигов (М), средней арифметической (±m) и вероятности возможной ошибки (р) по таблицам Стью-дента. Различия оценивали как достоверные при p<0,05. Статистические расчёты проводились с использованием программы Microsoft Excel 7.0.
Результаты исследования. Обнаружено, что ежедневное введение метиони-на по обозначенной схеме не вызывает достоверных изменений артериального давления. В группе животных, получавших импазу, не выявлено снижения показателей исходных значений АД (табл. 1).
Обработка полученных экспериментальных данных при проведении функциональных проб позволила установить, что внутрижелудочное введение 10% раствора ТВИН-80 в дозе 1 мл/кг не вызывает повышения КЭД. Внутрижелудочное введение метионина в дозе 3 г/кг в течение 7 дней вызывает повышение КЭД до 3,3±0,3, в то время как у интактных крыс он составил - 1,1±0,1 (табл. 1).
В группе животных, где на фоне введения метионина в дозе 3 г/кг, в течение 7 дней вводился препарат импаза, КЭД составил - 1,4±0,1, что достоверно ниже, чем в группе с моделированием патологии.
Таблица 1
Показатели артериального давления и коэффициента эндотелиальной дисфункции при моделировании и коррекции гипергомоцистеин-индуцированного дефицита оксида азота
Группы животных САД, мм рт.ст. ДАД, мм рт.ст. КЭД, у.е.
Интактные 137,7 ±3,7 101,9 ± 4,3 1,1 ± 0,1
10 % ТВИН 80 1мл/кг 129,2 ±4,3 82,4 ± 5,9и 0,9±0,2к
Метионин 3 г/кг 1 раз/сутки в течение 7 дней (контроль) 118,9±10,1и 76,6±7,2и 3,3±0,3*
Метионин 3 г/кг 1 раз/сутки в течение 7 дней+импаза 1б0,8±5,1ик 111,5±4,5ик 1,4±0,1к
Примечание: САД - систолическое артериальное давление, ДАД - диастолическое артериальное давление, ЧСС - частота сердечных сокращений, и - достоверное различие с группой интактных животных (р<0,05); к - достоверное различие с контрольной группой (р<0,05).
Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать коррекцию гипергомоцистеин-индуцированной эндотелиальной дисфункции на фоне введения метионина в дозе 3 г/кг в течение 7 дней препаратом импаза, снижая КЭД до уровня такового у интактных животных.
При проведении пробы на адренореактивность в контрольной группе животных систолическое левожелудочковое давление оказалось значительно выше (238,1±8,2 мм рт. ст.), чем в группе интактных животных (199,2±8,3 мм рт. ст.). Внутрижелудочное введение 10% раствора ТВИН-80 в дозе 1 мл/кг не вызывало повышения левожелудоч-кового давления (ЛЖД) при проведении пробы на адренореактивность (189,7±9,1 мм рт. ст.). Препарат импаза при проведении данной пробы снижал систолическое лево-желудочковое давление до 208,3±12,4 мм рт. ст. (табл. 2).
Таблица 2
Влияние препарата импаза на функциональные возможности миокарда при проведении нагрузочных проб на фоне моделирования гипергомоцистеин-индуцированной эндотелиальной дисфункции (М±т, п=1о)
Группа животных Адренореактивность (мм рт.ст.) Исчерпание миокардиального резерва(%)
Интактные 199,2±8,3 83.6 %
10 % ТВИН 80 1мл/кг 189,7±9,1к 85,4%к
Метионин 3 г/кг 1 раза/сутки в течение 7 дней. Контроль - 2 238,1±8,2и 69,8%и
Метионин 3 г/кг 1 раза/сутки в течение 7 дней+импаза 208,3±12,4к 85,8%к
Примечание: и - достоверное различие с группой интактных животных (р<0,05); к - достоверное различие с контрольной группой (р<0,05).
В пробе на нагрузку сопротивлением рассчитывался показатель исчерпания миокардиального резерва, равный отношению прироста систолического левожелудоч-кового давления на 5 с пережатия аорты к приросту систолического левожелудочково-го давления на 25 с, выраженный в процентах.
В группе интактных животных этот показатель составил 83,6%, в контрольной группе 69,8%, в группе с введение 10% раствора ТВИН-80 85,4%. У животных, получавших препарат импаза, данный показатель достоверно отличался от контрольной группы (85,8%).
Таким образом, результаты исследования функционального состояния миокарда при проведении нагрузочных проб выявили отчетливое кардиопротективное действие импазы, проявляющееся в снижении адренореактивности, предотвращении падения систолического левожелудочкового давления при проведении пробы на нагрузку сопротивлением по сравнению с контрольными животными.
Результаты проведенного исследования позволяют рекомендовать данный препарат к широкому клиническому изучению.
Литература
1. Белоус, А. С. Новый взгляд на коррекцию эндотелиальной дисфункции / А.С. Белоус, М.В. Покровский, В.И. Кочкаров и др. // Russian Journal of Immunology (Official Journal of Russian Society of Immunology): материалы Рос. науч.-практ. конф. «Современные технологии в иммунологии: иммунодиагностика и иммунотерапия». - Курск, 2006. - С. 59-63.
2. Галаган, М. Е. Гипотензивное действие оксида азота, продуцируемого из экзо- и эндогенных источников / М.Е. Галаган, А.В.Широколова, А.Ф. Ванин // Вопр. мед. химии. -1991. - Т. 37, № 1. - С. 67-70.
3. Затейщикова, А. А. Эндотелиальная регуляция сосудистого тонуса: методы исследования и клиническое значение / А.А.Затейщикова, Д.А. Затейщиков // Кардиология. -1998. - Т. 38, № 9. - С. 68-80.
4. Зодионченко, В. С. Дисфункция эндотелия и артериальная гипертония: терапевтические возможности / В.С. Зодионченко, Т.В.Адашева, А.П. Сандомирская // Рус. мед. журн. - 2002. - №1. - С. 11-15.
5. Покровский, М. В. Методические подходы для количественной оценки развития эндотелиальной дисфункции при L-NAME-индуцированной модели дефицита оксида азота в эксперименте / М.В.Покровский, В.И. Кочкаров, Т.Г.Покровская и др. // Кубанский научно-медицинский вестник. - 2006. - №10. - С.72-77.
6. Покровский, М. В. Способ оценки эндотелиальной дисфункции Пат. 2301015 Российская Федерация, МПК7 А61В 5/02. / заявители и патентообладатели Покровский М.В., Покровская Т.Г., Кочкаров В.И. - № 2005113243/14; заявл. 04.05.2005; опубл. 20.06.07, Бюл. № 17. - 7 с.: ил.
7. Laursen, J. B. Role of superoxide in angiotensin II-induced but not catecholamine-induced hypertension/ J. B. Laursen, S. Rajagopalan, Z.Galis / / Circulation. - 1997. -Vol. 95. - P. 588-593.
ENDOTHELIO- AND CARDIOPROTECTIVE PROPERTIES OF A PREPARATION IMPAZA ON HYPERHOMOCYSTEINE-INDUCED MODEL OF ENDOTHELIAL DYSFUNCTION
A.S. Belous 1 A.A. Arustamova 2 M.V. Pokrovsky1 S.A. Cepeleva1 V.I. Yakushev1 O.S. Gudyrev1 M.V. Korokin1
1 Kursk State Medical University
2 Belgorod National Research University e-mail: [email protected]
Modeling a hyperhomocysteine-induced deficiency of nitrogen oxide II by means of intragastric introduction of methionine in a dose of 3 g/kg within 7 days at rats led to development of endothelial dysfunction. In the conditions of this model have been revealed expressed endothelioprotective and cardioprotective properties of a preparation impaza.
Key words: impaza, endothelium, nitrogen oxide II, me-thionine.
