CC BY
44
УДК 615.37:616-018.74-008.6
ЭНДОТЕЛИО-ИКАРДИОПРОТЕКТИВНЫЕ СВОЙСТВАСВЕРХМАЛЫХДОЗ ПОЛИКЛОНАЛЬНЫХ КРОЛИЧЬИХАНТИТЕЛ К ENOS НА 28-ДНЕВНОЙ МОДЕЛИ L-NAME-ИНДУЦИРОВАННОЙ эндотелиальной дисфункции
А.С. БЕЛОУС
Курский государственный медицинский университет
e-mail: a.s.belous@mail.ru
Моделирование L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота (внутрибрюшинным введением L-NAME в дозе 12,5 мг/кг в течение 28 дней) у крыс приводило к развитию эндотелиальной дисфункции. В условиях этой модели были выявленывыраженные эндотелиопротективные и
кардиопротективные свойства сверхмалых доз поликлональных кроличьих антител к eNOS.
Ключевые слова: eNOS, эндотелий, оксид азота, L-Name.
Современные исследования доказали, что эндотелиальная дисфункция (ЭД) является обязательным компонентом патогенеза практически всех сердечнососудистых заболеваний, включая атеросклероз, гипертонию, ишемическую болезнь сердца (ИБС), хроническую сердечную недостаточность. ИБС и артериальная гипертензия (АГ) являются одними из основных факторов, повышающих инвалидизацию и смертность за счёт таких осложнений, как инфаркт миокарда, сердечная недостаточность и инсульт [2, 4, 5]. В настоящее время приобретает особый интерес изучение сверхмалых доз (приготовленных по гомеопатической технологии) антител к эндотелиальной NO-синтазе ^NOS), содержащихся в препарате «Импаза» для коррекции эндотелиальной дисфункции.
Целью настоящего исследования явилось изучение эндотелио- и кардиопротективных эффектов сверхмалых доз поликлональных кроличьих антител к eNOS на 28-дневной модели L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота.
Методика исследования. Моделирование дефицита оксида азота осуществляли внутрибрюшинным введением N-нитро-Ь-аргининметилового эфира (L-NAME) в дозе 12,5 мг/кг в течение 28 дней (n=10 животных). Одновременно в течение 28 дней в группе из 10 животных проводили фармакологическую коррекцию дефицита оксида азота введением раствора сверхмалых доз антител к эндотелиальной NO-синтазе, внутрижелудочно из расчёта 9 мл/кг/сут. (ежедневно в дозе 4,5 мл/кг 2 раза в сутки в течение 28 дней через 30 минут после введения L-NAME).
В эксперименте были выделены следующие группы животных: 1) интактные самцы (вводили дистиллированную воду); 2) контрольная группа (моделирование дефицита оксида азота внутрибрюшинным введением L-NAME в дозе 12,5 мг/кг в течение 28 дней); 3)L-NAME + сверхмалые дозы антител к эндотелиальной NO-синтазе.
На 29-й день эксперимента под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг) на первом этапе исследования вводили катетер в левую сонную артерию, и регистрировали систолическое и диастолическое артериальное давление (АД), частоту сердечных сокращений. На втором этапе исследования вводили иглу в полость левого желудочка через верхушку сердца для регистрации максимальной скорости сокращения и расслабления. Измерения производились и обрабатывались посредством датчика TSD104A и аппаратно-программного комплекса MP100 производства Biopac System, Inc., США.
Для изучения реактивности сосудистого русла при моделировании дефицита оксида азота регистрировали артериальное давление при эндотелийнезависимой и эндотелийзависимой вазодилатации. Эндотелийнезависимая вазодилатация осуществлялась посредством болюсного введения нитропруссида (НП) натрия
ЕИШ
(30 мкг/кг) в правую бедренную артерию [l], эндотелийзависимая - введением ацетилхолина (АХ) (40 мкг/кг) [8]. Далее высчитывали коэффициент эндотелиальной дисфункции (КЭД) по формуле: КЭД = SАД НЦ/^АД АХ, где SАД НП - площадь треугольника над кривой восстановления АД, причём точками меньшего катета являются точка максимального падения АД и точка выхода уровня АД на плато при проведении функциональной пробы с введением нитропруссида, SАД АХ - площадь треугольника над кривой восстановления АД при проведении пробы с ацетилхолином, причём за меньший из катетов принимают разность между точкой окончания брадикардитического кардиального компонента и точкой восстановления АД. Этот показатель отражает изменение реактивности сосудистого русла при моделировании дефицита оксида азота и позволяет оценить степень коррекции эндотелиальной дисфункции [6, 7]. Для оценки функциональных возможностей миокарда у животных проводили нагрузочные пробы: пробу на адренореактивность (внутривенное введение адреналина гидрохлорида 1х105 моль/л, в дозе 0,1 мл/100 г) [3], нагрузку сопротивлением (пережатие восходящей аорты на 30 с).
Достоверность изменений абсолютных параметров определяли разностным методом вариационной статистики с нахождением средних значений сдвигов (М), средней арифметической (±m) и вероятности возможной ошибки (р) по таблицам Стьюдента. Различия оценивали как достоверные при p<0,05. Статистические расчёты проводились с использованием программы Microsoft Excel 7.0.
Результаты исследования. В группе с моделированием L-NAME-индуцированной эндотелиальной дисфункции выявлено развитие артериальной гипертензии. В группе животных, получавших сверхмалые дозы поликлональных кроличьих антител к eNOS, не выявлено снижение показателей исходных значений АД (табл. l).
В контрольной группе на фоне введения L-NAME происходило увеличение соотношения эндотелийнезависимой к эндотелийзависимой вазодилатации, при этом КЭД составлял 3,5±0,5, в то время как у интактных крыс он составил - 1,2±0,1. В группе животных, получавших сверхмалые дозы антител к эндотелиальной NO-синтазе, КЭД составил - 1,8±0,2 (табл. 1).
Полученные результаты свидетельствуют о коррекции эндотелиальной дисфункции раствором сверхмалых доз антител к eNOS на модели L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота, при отсутствии существенного влияния на развитие артериальной гипертензии.
Таблица 1
Показатели артериального давления и коэффициента эндотелиальной дисфункции при моделировании и коррекции L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота (M±m, n=lo)
Г руппы животных САД, мм рт.ст. ДАД, мм рт.ст. КЭД
Интактные 139,2 ±5,4 104,2 ± 4,7 1,2 ± 0,1
Получавшие L-NAME (12,5 мг/кг) 28 дней (контроль) 204,8 ± 10* 164,2 ± 5,9* 3,5 ± 0,5и
Получавшие L-NAME + сверхмалые дозы антител к eNOS 201,1±6,7 163,1±6 1,8 ± 0,2к
Примечание: САД - систолическое артериальное давление, ДАД - диастолическое артериальное давление, и - достоверное различие с группой интактных животных (р<0,05); к - достоверное различие с контрольной группой (р<0,05).
При проведении пробы на адренореактивность в контрольной группе животных систолическое левожелудочковое давление оказалось значительно выше
(281,1±6,5 мм рт. ст.) чем в группе интактных животных (199,8±9,9 мм рт. ст.). Введение сверхмалых доз поликлональных кроличьих антител к eNOS снижало систолическое левожелудочковое давление до 239,4±19,2мм рт. ст. (табл. 2).
В пробе на нагрузку сопротивлением рассчитывался показатель исчерпания миокардиального резерва, равный отношению прироста систолического левожелудочкового давления на 5 с пережатия аорты к приросту систолического левожелудочкового давления на 25 с пережатия аорты, выраженный в процентах.
Таблица 2
Влияние сверхмалых доз поликлональных кроличьих антител к eNOS на функциональные возможности миокарда при проведении нагрузочных проб на фоне моделирования L-NAME-индуцированной эндотелиальной дисфункции
(М±т, п=10)
Г руппа животных Адренореактивность (мм рт.ст.) Исчерпание миокардиального резерва(%)
Интактные 199,8±9,9 93,9%
Получавшие L-NAME (12,5 мг/кг) 28 дней. (контроль) 281,1±6,5и 67,5 %и
Получавшие L-NAME + сверхмалые дозы антител к eNOS 239,4±19,2к 105,6 %к
Примечание: и- достоверное различие с группой интактных животных (р<0,05); к-достоверное различие с контрольной группой (р<0,05).
В группе интактных животных этот показатель составил 93,9%, в контрольной группе - 67,5%. У животных, получавших сверхмалые дозы поликлональных
кроличьих антител к eNOS, данный показатель не только достоверно отличался от контрольной группы, но и превосходил значения у интактной группы (105,6 %).
Таким образом, результаты исследования функционального состояния миокарда при проведении нагрузочных проб выявили отчетливое кардиопротективное действие сверхмалых доз поликлональных кроличьих антител к eNOS, выражающееся в снижении адренореактивности, падении ситолического левожелудочкового давления при проведении пробы на нагрузку сопротивлением по сравнению с контрольными животными.
Проведенные исследования обнаружили, что сверхмалые дозы поликлональных кроличьих антител к eNOS обладают эндотелио- и кардиопротективными свойствами.
Результаты проведенного исследования позволяют рекомендовать дальнейшее клиническое изучение сверхмалых доз поликлональных кроличьих антител к eNOS для коррекции эндотелиальной дисфункции Перспективным является изучение данного раствора сверхмалых доз антител в комбинации с классическими антигипертензивными препаратами.
Литература
1. Новый взгляд на коррекцию эндотелиальной дисфункции / А.С. Белоус,
М.В. Покровский, В.И. Кочкаров и др. // Russian Journal of Immunology (Official JournalofRussianSocietyoflmmunology): материалы Рос. науч.-практ. конф. «Современные
технологии в иммунологии: иммунодиагностика и иммунотерапия». - Курск, 2006. - С. 59-63.
2. Галаган, М.Е. Гипотензивное действие оксида азота, продуцируемого из экзо- и эндогенных источников / М.Е. Галаган, А.В. Широколова, А.Ф. Ванин // Вопр. мед. химии. -1991. - Т. 37, № 1. - С. 67-70.
3. Затейщикова, А.А. Эндотелиальная регуляция сосудистого тонуса: методы
исследования и клиническое значение / А.А. Затейщикова, Д.А. Затейщиков // Кардиология. -1998. - Т. 38, № 9. - С. 68-80.
4. Зодионченко, В.С. Дисфункция эндотелия и артериальная гипертония: терапевтические возможности / В.С. Зодионченко, Т.В. Адашева, А.П. Сандомирская // Рус. мед. журн. - 2002. - № 1. - С. 11-15.
5. Минушкина, Л.О. Генетические аспекты регуляции эндотелиальной функции при гипертонии / Л.О. Минушкина, Д.А. Затейщиков, Б.А. Сидоренко // Кардиология. - 2000. -№ 3. - С. 68-76.
НАУЧНЫЕ ВЕДОМОСТИ Серия Медицина. Фармация. 2012. № 4 (123). Выпуск 17/1
6. Методические подходы для количественной оценки развития эндотелиальной дисфункции при L-NAME-индуцированной модели дефицита оксида азота в эксперименте / М.В. Покровский, В.И. Кочкаров, Т.Г. Покровская и др. // Кубанский научно-медицинский вестник. -2006. - № 10. - С.72-77.
7. Пат. 2301015 Российская Федерация, МПК7 А61В 5/02. Способ оценки эндотелиальной дисфункции / Покровский М.В., Покровская Т.Г., Кочкаров В.И. и др.; заявители и патентообладатели Покровский М.В., Покровская Т.Г., Кочкаров В.И. - № 2005113243/14; заявл. 10.1.2006; опубл. 20.06.07, Бюл. № 17. - 7 с.: ил.
8. Laursen, J.B. Role of superoxide in angiotensin Il-induced but not catecholamine-induced hypertension / J.B. Laursen, S. Rajagopalan, Z. Galis // Circulation. - 1997. - Vol. 95. - P. 588-593.
ENDOTHELIALAND CARDIOPROTECTIVE PROPERTIES OF ULTRA-LOW DOSES OF POLYCLONAL RABBIT ANTIBODYTO ENOS IN THE 28-DAY MODEL OF L-NAME-INDUCED ENDOTHELIAL DYSFUNCTION
A.S.BELOUS
Kursk State Medical University e-mail: a.s.belous@mail.ru
Modelling of L-NAME - induced deficiency of nitric oxide (intraperitoneal administration of L-NAME at a dose of 12.5 mg / kg for 28 days) in rats led to the development of endothelial dysfunction. In this model marked cardioprotective and endothelioprotective properties of ultra-low doses of polyclonal rabbit antibody to eNOS.have been identified.
Key words: eNOS, endothelial cells, nitric oxide, L-Name.
