CC BY
15ЭМБРИОТОКСИЧЕСКАЯ И ТЕРАТОГЕННАЯ АКТИВНОСТЬ ПРЕПАРАТОВ ПРОИЗВОДНЫХ
ХИТОЗАНА
Байкулов А. К.
Бегматова Д. А.
Саидахмедова Д. А.
Рустамова Г. А.
Бегматова Д. А.
Хамдамов Д. Ш.
Ибадуллаев Ш. О.
Худояров А. С.
Жовконова И. С.
Комилов Ж. К.
Неъматова А. У.
Юлдашев У. К.
Самаркандский медицинский институт
Проблема создания отечественных высокоэффективных лекарственных средств весьма актуальна на сегодняшний день. Одними из сырьевых основ создания лекарственных препаратов является хитозан (ХЗ), полученный из Bombix morí [9]. Модификация его позволила создать различные препараты, обладающие язва-заживляющим и регенераторным действием (ХЗ+фурацилин) [1,2,5], гипокоагулянтным и гиполипидемическим действием (сульфопарин) [6,7]. Эти лекарственные препараты разработаны в Институте химии и физики полимеров АН РУз [9]. Однако для внедрения их необходимо проведение доклинических токсикологических исследований. При доклинической оценке безвредности новых лекарственных препаратов необходимо решение вопроса их влияния на эмбриогенез лабораторных животных [8,10].
Цель исследования: исследование эмбриотоксической и тератогенной активности препаратов, синтезированных на основе хитозана.
Материал и методы исследования
Опыты были проведены на белых беспородных крысах - самках массой 180-200 г, которые были разделены на 3 группы: две опытных и одна контрольная. На стадии цикла соответствующего позднему проэструсу или раннему эструсу самок крыс подсаживали к самцам в соответствии 2:1 или 3:1 в конце рабочего дня, а утром на следующий день исследовали влагалищный мазок под малым увеличением микроскопа. Если влагалищный мазок содержал сперматозоиды, то день обнаружения считали первым днем беременности. Беременных самок разделяли на 5 групп по 20 животных в каждой: 1-я группа была контрольной и получала е/д в/ж дистиллированную воду в объеме изучаемого препарата. Крысам 2-й и 3-й групп вводили ежедневно с 1-го по 19-е дни беременности препарат сульфопарин в дозах 100 и 25,0 мг/кг, крысам 4-й и 5-й групп - ХЗ+фурацилин в дозах 100 и 10 мг/кг. Испытуемые препараты начинали вводить в сроки с 1 -го по 6-й день: с 6-го по 16-й и с 16-го по 19-й дни беременности. За беременными самками вели ежедневное наблюдение: за их общим состоянием, поведением, опрятностью и проводили еженедельные взвешивания животных. На 20-й день беременности самок умерщвляли путем дислокации шейных позвонков и вскрывали. В качестве показателей эмбриотоксического действия определяли пред- и пост-имплантационную смертность, морфологические (анатомические) пороки развития, общую задержку развития плодов в сравнении с контролем. Предимплантационную смертность определяли по разности между количеством желтых тел в яичниках и количеством мест имплантаций в матке. Постимплантационную смертность по разнице между количеством имплантации и числом живых плодов. Эмбриотоксический эффект оценивали в каждой группе, определяли массу и кранио-каудальный размер плодов. Выявляли среди них структурные аномалии, затем для изучения внутренних органов одну половину плода из контрольных и опытных групп помещали в жидкость Боуэна на 1 -2 недели с целью изучения аномалий развития внутренних органов по методу сагитальных срезов. Другую половину плодов
фиксировали в 96% этаноле для изучения состояния скелета по методу Доусона в модификации А.П. Дыбана с соавт. [4]. Ввиду того, что отклонения в развитии плодов могут проявляться в более поздний период, часть беременных самок из каждой группы отсаживали в отдельные клетки для естественных родов с последующим наблюдением за развитием потомства в постнатальном периоде (поколение исследовали в течение 1-го месяца) [3,4,8,10]. Статистическую обработку полученных результатов проводили методом вариационной статистики.
Результаты исследования. Ежедневный осмотр самок после в/ж введения препаратов не выявил существенной разницы в их общем состоянии, опрятности и не выявил достоверных отличий в прибавлении массы тела по сравнению с контрольной группой беременных самок крыс. Анализ полученных результатов позволяет сделать вывод о том, что плодовитость самок в опытных группах примерно равноценна по сравнению с контролем. Статистической разницы в выживаемости и гибели плодов до имплантации и после имплантации в изученной группе животных не обнаружено. Макроскопическое исследование плодов опытных крыс не выявили каких-либо различий в их внешнем виде, массе тела и кранио-каудальнм размере по сравнению с плодами контрольной группы крыс.
При исследовании внутренних органов плодов опытных групп крыс по методу Вильсона и костной системы по методу Даусона не выявлено каких-либо отличий в окостенении трубчатой кости конечностей при введении препаратов сульфопарин и «ХЗ+фурациллином» в сроки 8-19 ней беременности. По другим показателям число ребер, центров окостенения в методорзальных и метокарпальных костях скелета плодов контрольных и опытных крыс не различались.
Таблица 1. Результаты макроскопических исследований эмбрионов крыс, получавших сульфопарин или ХЗ+фурацилин
Показатели Группы животных
Контроль Сульфопарин ХЗ+фурацилин
100 мг/кг 25 мг/кг 100 мг/кг 10 мг/кг
Количество исследованных эмбрионов 72 72 72 72 72
Кровоизлияние, %
Подкожные Нет Нет Нет Нет Нет
Лицевой череп 2 2 2 3 2
В грудную полость 0 1 0 1 0
В брюшную полость 3 3 2 3 2
Аномалии развития головного мозга, %
Кровоизлияние Нет Нет Нет Нет Нет
Расширение желудочков мозга Нет Нет Нет Нет Нет
Кровоизлияния в спинной мозг Нет Нет Нет Нет Нет
Таким образом, при в/ж введении сульфопарин в дозах 100 и 25 мг/кг и ХЗ+фурацилин в дозах 100 и 10 мг/кг не обладают эмбриотоксическими и тератогенными свойствами.
Исследование влияние сульфопарина и ХЗ+фурацилина на репродуктивную функцию крыс проведено на 60 самцах и 120 самках белых беспородных крыс массой 160-180 г. Сульфопарин и ХЗ+фурацилин вводили в/ж в дозе 100 мг/кг массы тела самцам в течение 60 дней, самкам - 15 дней. Затем животных спаривали с интактными самцами. Контрольным животным вводили физиологический раствор тем же путем и в том же объеме. Самок подсаживали к самцам в стадии проэструса в соотношении 2:1 сроком на 2 эстральных цикла. Оплодотворение регистрировали с помощью вагинальных мазков. Половину отсаженных самок умерщвляли на 18 день беременности и на основании количества желтых тел в яичниках, мест имплантаций в матке и количества живых и погибших плодов определяли уровень
предимплантационной смертности зародышей. Для оценки плодовитости вычисляли индекс плодовитости и индекс смертности.
Таблица 2. Результаты макроскопических исследований эмбрионов крыс, получавших сульфопарин или ХЗ+фурацилин
Показатели Группы животных
Контроль Сульфопарин ХЗ+фурацилин
100 мг/кг 25,0 мг/кг 100 мг/кг 10 мг/кг
Количество плодов исслед.по Даусону 50 50 50 50 50
Число центров оссификации грудины 4,17±0,43 3,83±0,43 Р>0,05 4,18±0,29 Р>0,05 4,01±0,32 Р>0,05 4,20±0,28 Р>0,05
Метакарпальных костей
Справа 2,72±0,06 2,72±0,06 Р>0,05 2,67±0,07 Р>0,05 2,64±0,09 Р>0,05 2,74±0,12 Р>0,05
Слева 2,60±0,08 2,62±0,07 Р>0,05 2,77±0,04 Р>0,05 2,65±0,10 Р>0,05 2,64±0,09 Р>0,05
Число ребер
Справа 13,0 13,0 13,0 13,0 13,0
Слева 13,0 13,0 13,0 13,0 13,0
Другую половину самок отсаживали до естественных родов и вели наблюдение за физическим развитием потомства в раннем постнатальном периоде жизни. Опыты показали, что введение сульфопарин и ХЗ+фурацилин не влияло на сроки родов. Так, у крыс, получавших препараты и у контрольных, этот срок составил 20-21 день. Во время введения препаратов состояние и поведение крыс не отличалось от контрольной группы. Масса тела беременных крыс, получавших препараты, увеличилась в среднем на 46,6% по отношению к исходному. Такое же увеличение массы тела беременных крыс наблюдали и в контроле. Репродуктивная функция белых крыс при в/ж введении сульфопарин и ХЗ+фурацилин в дозе 100 мг/кг не отличалась от контрольных показателей. Полученные данные физического развития крыс раннем постнатальном периоде жизни приведены в таблице 4. Репродуктивная функция белых крыс (количество потомства, сроки отлипания ушной раковины, прерывания резцов, открытие глаз, опускание семенников, открытие влагалища) при внутрижелудочном введении сульфопарина и ХЗ+фурацилин в дозе 100 мг/кг не отличалась от контрольных показателей.
Выводы: На экспериментальной модели на белых крысах установлено, что сульфопарин и ХЗ+фурацилин не оказывают отрицательного эмбриотоксического и тератогенного эффекта. На экспериментальной модели на белых крысах установлено, что сульфопарин и ХЗ+фурацилин не влияет на репродуктивную функцию экспериментальных животных.
ЛИТЕРАТУРА
1. Байкулов А.К. Влияние хитозана на синтез ДНК и РНК при ожогах //Врач, Аспирант.- 2012.- №4(53).- С.26-39.
2. Байкулов А.К., Кадирова Д.А., Иноятова Ф.Х., Милушева Р.Ю., Рашидова С.Ш. Влияние хитозана на межнуклеосомную деградацию ДНК модельных клеток кожи животных //Журнал теоретической и клинической медицины.- 2012.- №4.- С.7-9.
3. Гуськова Т.А.Токсикология лекарственных веществ. Москва, 2008. - С. 27-30.
4. Дыбан А.П. и др. Методические указания по изучению эмбриотоксического действия фармакологических веществ и влияние их на репродуктивную функцию.- М. - 1986.- с 62.
5. Иноятова Ф.Х., Байкулов А.К. Динамика заживления ран у крыс на модели термического ожога с коррекцией производными хитозана //Проблемы биологии и медицины. -2011.- №3.- С.72-73.
6. Иноятова Ф.Х., Кутликова Г.М., Милушева Р.Ю. и др. Некоторые механизмы гипохолестеринемического действия сульфапорина //Вестник ТМА.- 2011.- №3.- С.19-22.
7. Иноятова Ф.Х., Рашидова С.Ш., Кутликова Г.М. Коррекции сульфапорином эндотелиальной дисфункции у кроликов с гиперхолестеринемией //Intern. J. Of applied and fundamental research.- 2013.- №1.- С.36-40.
8. Методические указания по изучению эмбриотоксического и тератогенного действия химических веществ. Ленинград. ГНТИАФ.- 1990.- 10с.
9. Рашидова С.Ш., Милушева Р.Ю. Хитин и хитозан. Bombyx mori. Синтез, свойства и применение. - Ташкент .- 2009.- С. 193-242.
10. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, методы фармакологического доклинического исследования (под редакцией Р.У. Хабриева).- Москва.- 2005. С. 699-709.
