Эквитоксичность отечественного гидроксикарбамида и препарата сравнения гидреа на крысах Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

ЭКВИТОКСИЧНОСТЬ ОТЕЧЕСТВЕННОГО ГИДРОКСИКАРБАМИДА И ПРЕПАРАТА СРАВНЕНИЯ

ГИДРЕА НА КРЫСАХ

О.И. Коняева1, Н.Ю. Кульбачевская1, В.А. Чалей1, Н.П. Ермакова1, И.Б. Меркулова1, Т.В. Абрамова1, И.С. Касаткина2

ФГБУ«НМИЦонкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России; Россия, 115478 Москва, Каширское ш., 24; 2ООО «Экспертно-юридический центр»; Россия, 109052 Москва, ул. Нижегородская, 29—33, стр. 27, офис 316

Контакты: Ольга Ивановна Коняева [email protected]

Введение. Появление качественных и эффективных дженериков позволяет существенно снизить расходы на лекарственное обеспечение населения России. По экспертным оценкам, стоимость курса лечения онкологических больных дженериками отечественного производства может быть на 30—40 % ниже по сравнению с оригинальными препаратами. В России на производстве ООО «Озон» создан отечественный аналог оригинального противоопухолевого препарата гидреа — гидроксикар-бамид.

Цель исследования — сравнительное изучение хронической токсичности препарата гидроксикарбамид (ООО «Озон», Россия) и зарегистрированного препарата сравнения гидреа (Corden Pharma Latina S. p. A., Италия) на крысах. Материалы и методы. Сравнительное исследование токсичности препаратов проводили на 70 неинбредных белых крысах-самцах массой 220—250 г, полученных из аккредитованного питомника лабораторных животных ООО «Кролинфо». Оба препарата параллельно вводили ежедневно перорально 5-кратно в 3 дозах. В качестве растворителя использовали 1 % крахмальный клейстер. Дозы рассчитывали по данным литературы исходя из максимально переносимой дозы. Использовали стандартные методы оценки хронической токсичности препаратов на крысах.

Результаты. Полученные данные по хронической токсичности сравниваемых форм отечественного препарата гидроксикарбамид и зарегистрированного препарата сравнения гидреа существенно не отличаются по показателям количественной и качественной токсичности (летальность, биомаркеры токсичности, морфометрия органов).

Выводы Сравниваемые воспроизведенный и коммерческий препараты практически эквитоксичны при 5-кратном перораль-ном введении крысам.

Ключевые слова: гидроксикарбамид, гидреа, эквитоксичность, крысы

DOI: 10.17650/1726-9784-2019-18-1-80-86

EQUITOXICITY OF DOMESTIC HYDROXYCARBAMIDE AND REFERENCE DRUG HYDREA IN RATS

O.I. Konyaeva1, N. Yu. Kulbachevskaya1, V. A. Chaley1, N. P. Ermakova1,1. B. Merkulova1, T. V. Abramova1,1. S . Kasatkina2

'N.N. Blokhin National Medical Research Center of Oncology of the Ministry of Health of the Russian Federation;

24 Kashirskoe Shosse, Moscow ''5478, Russia; 2Expert-Law Center; Office 3'6, Build. 27, 29—33Nizhegorodskaya St., Moscow '09052, Russia

Introduction. The appearance of high-quality and effective generics can significantly reduce the cost of health care for the drug supply of the population of Russia. According to expert estimates, the cost of treatment of cancer patients with generics of domestic can be 30— 40 % cheaper as compared to the original drugs. In Russia the pharmaceutical production company "Ozon" created by the domestic analogue of the original anticancer drug hydrea — hydroxycarbamide.

Objective: comparative study of chronic toxicity of the drug hydroxycarbamide ("Ozon", Russia) and registered reference drug hydrea (Corden Pharma Latina S. p. A, Italy) on rats.

Materials and methods. A comparative study of the toxicity of drugs was carried out on 70 non-inbred white male rats weighing 220— 250g obtained from the accredited laboratory animal nursery of LLC "Krolinfo". Both drugs were administered in parallel daily orally 5-fold in 3 doses. As a solvent, ' % starch paste was used. Doses were calculated according to the literature data on the basis of maximum tolerated dose. Standard methods of evaluation of chronic toxicity of drugs in rats were used.

Results. The obtained data on chronic toxicity of the compared forms of the domestic drug hydroxycarbamide and the reference drug hydrea do not differ significantly in terms of quantitative and qualitative toxicity (lethality, biomarkers of toxicity, morphometry of organs). Conclusion. The compared generic and commercial preparations are practically equitoxic by 5 times oral administration to rats.

Key words: hydroxycarbamide, hydrea, equitoxicity, rats

Оригинальные статьи 81

Введение но в соответствии с национальными требованиями Появление качественных и эффективных джене- с учетом методических рекомендаций [4—9]. риков позволяет существенно снизить расходы орга- Исследуемые препараты: нов здравоохранения и повысить доступность лекар- 1) ГК — отечественный препарат, производитель ственного обеспечения населения России. В России ООО «Озон» (Россия), капсулы по 500 мг, серии на производстве ООО «Озон» создан отечественный 010 317; аналог оригинального противоопухолевого препара- 2) ГД — препарат сравнения, производитель Corden та гидреа (ГД) — гидроксикарбамид (ГК). ГК имеет Pharma Latina S. p. A. (Италия), капсулы по 500 мг, такие же показания к применению и суточную дози- серии 6G03 510. ровку, как и оригинальный лекарственный препарат. В опытах по изучению хронической токсичности В экспериментах на мышах и крысах при разных оба препарата (содержимое капсул) параллельно путях введения (внутрижелудочный и внутрибрю- вводили ежедневно перорально 5-кратно в 3 дозах. шинный) изучены параметры острой токсичности В качестве растворителя использовали 1 % крахмаль-субстанции ГК. Клиническая картина острого отрав- ный клейстер. Дозы рассчитаны по данным литера-ления ГК у крыс и у мышей проявлялась в общей туры исходя из максимально переносимой дозы заторможенности и гиподинамии. Высокие токсиче- (МПД): ские (летальные) дозы вызывали у животных атак- • суммарная доза 3000 мг/кг (»2 МПД), разовая сию, адинамию, в отдельных случаях клонико-тони- доза 600 мг/кг; ческие судороги, паралич. При воздействии доз • суммарная доза 1500 мг/кг (»1 МПД), разовая 2250—5760 мг/кг у крыс и 6350—7330 мг/кг у мышей доза 300 мг/кг; наблюдались заторможенность, адинамия, паралич. • суммарная доза 750 мг/кг (»1/2 МПД), разовая Мыши погибали на 4-5-е сутки, большинство доза 150 мг/кг. крыс — на 3-4-е сутки после введения фармацевти- Контрольным животным вводили ежедневно ческой субстанции. Печень и селезенка у погибших перорально 5-кратно 1 % крахмальный клейстер животных были темные, полнокровные. Внешние в объеме, соответствующем объему максимальной признаки интоксикации у большинства животных дозы. исчезали на 11—12-е сутки после введения препарата. В каждой группе животных использовали по Макроскопический патологоанатомический осмотр 10 крыс, включая контроль, 5 крыс из каждой груп-животных, умерщвленных по окончании 14 сут на- пы выводили из эксперимента на 3-и сутки, осталь-блюдения, не выявил каких-либо существенных ные 5 — на 30-е сутки после окончания курса введе-различий в сравнении с контрольными животными ния препаратов. [1, 2]. Критериями оценки хронической токсичности При установлении LD50 при внутрибрюшинном являлись: число павших животных и сроки их гибе-введении насыщенный раствор ГК вводили белым ли, динамика массы тела (исследования проводили крысам и мышам в максимально возможном объеме на 3, 7, 14, 21 и 30-е сутки), клиническая картина (дозы составили: для крыс — от 4700 до 5700 мг/кг, интоксикации, данные клинико-лабораторных ис-для мышей — от 5800 до 6800 мг/кг) [2]. LD50 при вну- следований, поведенческие реакции и патологиче-трижелудочном введении для белых крыс и мышей ские изменения в тканях и внутренних органах, вы-составили соответственно 2719,36 ± 300,34 и 6506,9 являемые при аутопсии павших и выживших ± 569,7 мг/кг; при внутрибрюшинном — более 5700 животных, выведенных из эксперимента в конце и более 6800 мг/кг [3]. опыта (макроскопическая оценка). Продолжитель-Цель исследования — сравнительное изучение ность наблюдения за животными составляла 30 сут. хронической токсичности препарата ГК (ООО «Озон», Сравнивали действие препаратов на уровни клеток, Россия) и зарегистрированного препарата сравнения циркулирующих в периферической крови, функци-ГД (Corden Pharma Latina S. p. A., Италия) на крысах. ональное состояние печени, почек, желудочно-кишечного тракта. Материалы и методы Статистическую обработку полученных данных Сравнительное исследование токсичности ГК проводили с помощью компьютерной программы и ГД проводили на 70 неинбредных белых кры- Microsoft Excel. Рассчитывали параметры, обычно сах-самцах массой 220—250 г, полученных из аккре- используемые в токсикологии. За достоверные при-дитованного питомника лабораторных животных нимали различия прир <0,05. ООО «Кролинфо». Все животные были здоровы, имели ветеринарный сертификат качества и состоя- Результаты ния здоровья. Эксперимент проводился в период Сравнительная токсичность ГК и ГД при ежеднев-с октября по декабрь 2017 г. Исследование выполне- ном 5-кратном пероральном введении крысам-самцам

1'2019 ТОМ 18 | VOL. 18 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ | RUSSIAN JOURNAL OF BIOTHERAPY

представлена в табл. 1. Установлено, что препараты имеют практически одинаковые внешние проявления токсичности при введении в максимальной суммарной дозе 3000 мг/кг — вялость и пилоэрекция. ГК и ГД независимо от дозы не вызывали гибели животных, не изменяли их поведенческие реакции. Анализ изменения массы тела крыс после 5-кратного перорального введения ГК и ГД свидетельствует о практически одинаковом влиянии препаратов на динамику этого показателя. Масса тела крыс, получавших ГК и ГД, по сравнению с контрольными животными дозозависимо уменьшалась на 3-7-е сутки после окончания введения препаратов с последующим восстановлением к 21-30-м суткам наблюдения (рис. 1).

Динамика изменений уровней циркулирующих в периферической крови клеток в группах крыс, получавших ГК и ГД, была практически одинакова: дозозависимое уменьшение количества эритроцитов (с соответствующим снижением уровня гемоглобина и гематокрита) и дозозависимое уменьшение количества тромбоцитов. Изменение показателей периферической крови крыс отмечалось на 3-7-е сутки после ежедневного 5-кратного перорального введения ГК и ГД с последующим восстановлением к 21-30-м суткам наблюдения по сравнению с данными контрольных животных, получавших 1 % крахмальный клейстер (рис. 2, 3).

ГК и ГД после 5-кратного перорального ежедневного введения либо не изменяли уровни биомаркеров в сыворотке крови крыс по сравнению с данными

Таблица 1. Сравнительная токсичность ГК и ГД при ежедневном 5-кратном пероральном введении крысам-самцам

Препарат Разовая доза, мг/кг Суммарная доза, мг/кг Гибель от токсичности, пало/всего

Контроль 0 0 0/10

600 3000 0/10

ГК 300 1500 0/10

150 750 0/10

600 3000 0/10

ГД 300 1500 0/10

150 750 0/10

I

контрольных животных, либо вызывали однотипные изменения. Учитывая видовые особенности животных, можно сделать вывод о практически идентичном проявлении токсического действия исследуемых препаратов (рис. 4).

Установлено, что ГК и препарат сравнения ГД не отличаются по влиянию на функциональное состояние сердечно-сосудистой системы крыс (табл. 2).

При морфометрическом анализе относительной массы печени, селезенки, почек, сердца и тимуса крыс было установлено, что ГК и ГД во всех исследованных дозах практически не оказывали влияния на изменения массы данных органов либо вызывали однотипные изменения как на 3-и, так и на 30-е сутки наблюдения по сравнению с изменениями

400

350

фон 3 В 7 14 21 30

300

250

Т

ш 200

150

100

50 0

ГК 3000 мг/кг ГД 3000 мг/кг ГК 1500 мг/кг ГД 1500 мг/кг ГК 750 мг/кг ГД 750 мг/кг Контроль

Рис. 1. Динамика массы тела неинбредных крыс-самцов после 5-кратного перорального ежедневного введения ГК и ГД в равных дозах

Оригинальные статьи

83

ü

m

10

9 8 7 6 5

4 — 3 — 2 — 1 0

10 9

3 7 14 21

30

Т U

0

П I

РТТТ

ГК 3000 мг/кг

ГД 3000 мг/кг

Контроль

14 21 30

о

¡О

m

РТТТ

ГК 750 мг/кг

ГД 750 мг/кг

Контроль

10

9

Ü 8 £Р

J 7 6

I 5

t 4

CP

Ё 3

CP

п~>

3 7 14 21

30

PTTT

2 1 0

ГК 1500 мг/кг

ГД 1500 мг/кг

Контроль

Рис. 2. Сравнение динамики уровня эритроцитов в крови неинбредных крыс-самцов после 5-кратного перорального ежедневного введения ГК и ГД в равных дозах: а — суммарная доза 3000мг/кг; б — 1500мг/кг; в — 750мг/кг

а

в

1000

600

о

£Р

500

400

о

ГК 3000 мг/кг

ГД 3000 мг/кг

Контроль

700

7 14 И21

30

1 00

300

200

100

ГК 1500 мг/кг

ГД 1500 мг/кг

Контроль

800 700 600 500 400 300 200 100 0

3 7 14 21

30

IÏTÏ Г1 T7TÎÏ

1П ггн

ГК 1500 мг/кг

ГД 1500 мг/кг

Контроль

Рис. 3. Сравнение динамики уровня тромбоцитов в крови неинбредных крыс-самцов 5-кратного перорального ежедневного введения ГК и ГД в равных дозах: а — суммарная доза 3000мг/кг; б — 1500мг/кг; в — 750мг/кг

в

0

2500

3 сут ■ 30 сут

ГК 3000 мг/кг ГД 3000 мг/кг ГК 1500 мг/кг ГД 1500 мг/кг ГК 750 мг/кг ГД 750 мг/кг Контроль

Рис. 4. Уровень лактатдегидрогеназы в сыворотке крови крыс после 5-кратного перорального ежедневного введения ГК и ГД

Таблица 2. Показатели электрокардиограммы неинбредных крыс-самцов после ежедневного (в течение 5 днуй) перорального введения ГК и ГД в суммарной дозе 3000мг/кг

Группа Сутки опыта

3-и 15-е 30-е

Частота сердечных сокращений (уд/мин)

ГК 428,2 ± 21,5 424,6 ± 8,8 398,5 ± 20,7

ГД 364,2 ± 21,4 414,4 ± 19,1 354,8 ± 16,6

Контроль 445,0 ± 32,2 396,8 ± 11,0 338,2 ± 22,4

ЯЯ (с)

ГК 0,142 ± 0,007 0,142 ± 0,003 0,152 ± 0,009

ГД 0,167 ± 0,011 0,146 ± 0,007 0,170 ± 0,007

Контроль 0,138 ± 0,011 0,152 ± 0,004 0,181 ± 0,012

PQ (с)

ГК 0,060 ±Г 0,000 0,056 ± 0,002 0,0Н3 ±0,006

ГД 0,066 ± 0,019 0,064 ± 0,004 0,064 ± 0,004

Контроль 0,052 ± 0,004 0,058 ± 0,002 0,062 ± 0,005

0Г (с)

ГК 0,048 ± 0,002 0,050 ± 0,000 0,040 ± 0,000

ГД 0,048 ± 0,002 0,048 ± 0,004 0,038 ± 0,004

Контроль 0,050 ± 0,000 0,046 ± 0,002 0,044 ± 0,002

QRS (с)

ГК 0,020 ± 0,000 0,020 ± 0,000 0,020 ± 0,000

ГД 0,020 ± 0,000 0,018 ± 0,002 0,012 ± 0,002

Контроль 0,018 ± 0,002 0,018 ± 0,000 0,020 ± 0,000

кОгг риГГгДДи77н550а0млмгь/гнк/кгыг е сККтоонантттррооьллиьь

85

3 сут ■ 30 сут

0,35

0,3

0,25

0,2

н 0,15

H 0,1

I I-

о

0,05

0

ГК 3000 мг/кг ГД 3000 мг/кг ГК 1500 мг/кг ГД 1500 мг/кг ГК 750 мг/кг ГД 750 мг/кг Контроль

Рис. 5. Относительная масса тимуса

0,5 0,45 0,4 I- 0,35

3 сут

30 сут

а £Р

<и

0,3

0,25

0,2

0,15

0,1

0,05

0

ГК 3000 мг/кг ГД 3000 мг/кг ГК 1500 мг/кг ГД 1500 мг/кг ГК 750 мг/кг ГД 750 мг/кг Контроль

Рис. 6. Относительная масса сердца

массы данных органов у контрольных животных и ГД после перорального ежедневного 5-кратного (рис. 5, 6). применения на крысах, установлено, что изученные

препараты практически аналогичны по показателям Заключение количественной и качественной токсичности (кли-

На основании результатов, полученных при срав- ническая картина интоксикации, летальность, био-нительном изучении хронической токсичности ГК маркеры токсичности, морфометрия органов).

ЛИТЕРАТУРА / REFERENCES

1. Лепешко П.Н. Особенности нормирования фармакологической субстанции гидроксикарбамид. В кн.: Новые исследования молодых ученых — 2017: сборник рецензируемых научных работ. Под ред. А.В. Сикорского, О.К. Дорониной. Минск: БГМУ, 2017. С. 66-73. [Lepeshko P.N. Features of the regulation of the pharmacological substance hydroxycarbamide. In: New Studies of Young Scientists — 2017:

a collection of peer-reviewed scientific papers. Ed. by A.V. Sikorsky, O.K. Doronina. Minsk: Belarusian State Medical University, 2017. Pp. 66—73. (In Russ.)].

2. Лепешко П.Н., Соболь Ю.А. Токсикологическая оценка фармакологической субстанции гидроксикарбамид. В кн.: Материалы 17-й международной научной конференции «Сахаров-ские чтения 2017 года: экологические проблемы XXI века», Минск,

18—19 мая 2017 г. Минск: ИВЦМин-фина 2017. C. 184—5. [Lepeshko P.N., Sobol Yu.A. Toxicological assessment of the pharmacological substance hydroxycarbamide. In: Materials of the 17th International Scientific Conference "Sakharov Readings 2017: Environmental Problems of the XXI Century", Minsk, May 18—19, 2017. Minsk: ITC Ministry of Finance, 2017. Pp. 184—5. (In Russ.)].

3. Brunner R.L., McLean M., Vorhees C.V., Butcher R.E. A comparison of behavioral and anatomical measures of hydroxyurea induced abnormalities. Teratology 1978;18(3):379-84.

DOI: 10.1002/tera.1420180312. PMID: 741390.

4. Большаков О.П., Незнанов Н.Г., Бабаханян Р.В. Дидактические и этические аспекты проведения исследований на биомоделях и на лабораторных животных. Качественная клиническая практика 2002;(1):58—61. [Bolshakov O.P., Neznanov N.G., Babakhanyan R.V. Didactic and ethical aspects of research on biomodels and laboratory animals. Kachestvennaya klinicheskaya praktika = Good Clinical Practice 2002;(1):58-61.

(In Russ.)].

5. Методические указания по изучению общетоксического действия противоопухолевых фармакологических средств. В кн.: Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Под ред. Р.У. Хабриева.

2-е изд., перераб. и доп. М.: Медицина, 2005. С. 170-204. [Methodological instructions for studying the general toxic effects of antitumor drugs. In: Guide to experimental (preclinical) study of new pharmacological substances. Ed. by R.U. Khabriev. 2nd edn., revised

and additional. Moscow: Medicine, 2005. Pp. 170-204. (In Russ.)].

6. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Под ред. А.Н. Миронова. Ч. 1. М.: Гриф и К, 2012. C. 13-24. [A guide to preclinical drug research. Ed. by A.N. Mironov. Part 1. Moscow: Grif and Co, 2012. Pp. 13-24. (In Russ.)].

7. Принципы надлежащей лабораторной практики. Национальный стандарт Российской Федерации (ГОСТ 53434-2009). М.: Стандартинформ, 2010. [Principles of Good Laboratory Practice. National Standard

of the Russian Federation (GOST 53434-2009). Moscow: Standartinform, 2010. (In Russ.)].

8. Об утверждении Правил лабораторной практики. Приказ Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

от 1 апреля 2016 г. № 199н. [On approval of the Rules of Laboratory Practice. Order of the Ministry of Health and Social Development of the Russian Federation from 01 April 2016 No. 199n. (In Russ.)].

9. Гуськова Т.А. Токсикология лекарственных средств. 2-е изд., доп. М., 2008. 196 c. [Gus'kova T.A. Toxicology of medicines (second edition supplemented). Moscow, 2008. 196 p. (In Russ.)].

ORCID авторов/ORCID of authors

Н.Ю. Кульбачевская/N.Yu. Kulbachevskaya: https://orcid.org/0000-0003-4214-3475 В.А. Чалей/V.A. Chaley: https://orcid.org/0000-0001-7867-2868

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.