CC BY
49
УДК 616.441-006.6-07
в.в. хазиев
Институт проблем эндокринной патологии им. В.Я. Данилевского НАМН Украины, 61002, Украина,
г. Харьков, ул. Артема, д. 10
Экспрессия цитокератинов в опухолях щитовидной железы
I хазиев вадим витальевич — кандидат медицинских наук, заведующий отделением эндокринной хирургии и гинекологии, I e-mail: [email protected]
Исследовалась экспрессия цитокератинов СК7, СК20, СК34$Е 12 препаратах фолликулярных аденом, 16 препаратах фолликулярного рака и 19 препаратах папиллярного рака щитовидной железы. Для фолликулярных аденом характерной была экспрессия СК7 (83,33%) и отсутствие экспрессии СК34$Е12. Препараты фолликулярного рака экспрессировали СК7 в 100% случаев. СК20 и СК34$Е12 не определялись ни в одном из препаратов. Отсутствие экспрессии СК7, высокая частота определения СК20 и СК34$Е12 (89,47-94,74%) были характерными для папиллярного рака щитовидной железы. Сопоставление полученных данных может быть полезным для дифференциальной диагностики фолликулярных неоплазий.
Ключевые слова: цитокератины, щитовидная железа, фолликулярная аденома, папиллярный рак, фолликулярный рак.
V.V. KHAZIEV
V.Ya.DanilevskyInstitute of EndocrinePathology Problems ofNational AcademyofMedicalSciences oftheUkraine, 10 Artema St., Kharkov, Ukraine, 61002
Expression of cytokeratins in tumors of the thyroid gland
I Khaziev V.V. — Cand. Med. Sc., Head of the Department of Endocrine Surgery and Gynecology, e-mail: [email protected]
The expression of cytokeratins СK7, СK20, СК34bЕ12 was studied in 24 follicular adenomas drugs, 16 follicular cancers drugs and 19 papillary thyroid cancers drugs. Expression of СK7 (83.33%) and lack of expression of ^34^12 was characteristic for follicular adenomas. Follicular cancer drugs had CK7 expression in 100% of cases and CK20 and ^34^12 were not detected. Lack of CK7 expression, high frequency of CK20 and ^34^12 definition (89,47-94,74%) was typical for papillary thyroid cancer. Comparison of the data may be useful for differential diagnosis of thyroid follicular neoplasia.
Key words: cytokeratins, thyroid, follicular adenoma, papillary carcinoma, follicular carcinoma.
Проблема диагностики злокачественных новообразований щитовидной железы (ЩЖ) связана не только и не столько с морфологическими и клиническими особенностями самих опухолей, сколько с недостаточным знанием биологической сущности новообразований. В последние годы предприняты попытки использования современных методов иммуногистохимии и молекулярной биологии для раскрытия молекулярно-генетических механизмов развития опухолей, уточнения их злокачественности и оценки прогноза [1-11].
С целью решения проблем дифференциальной диагностики эффективным считается определение цитокератинов (cytokeratins — СК). Термин «цитокератин» был введен в конце 1970-х годов, когда были идентифицированы белки, из которых построены внутриклеточные промежуточные филаменты
[12-13]. Определено более 20 различных СК, отличающихся по аминокислотному составу, молекулярному весу и изоэлектрической точке. Для разных типов эпителия характерны определенные группы СК [14]. Фолликулярный эпителий, относящийся к простым однослойных, всегда содержит СК7, 8, 18 и 19. Те же СК находят в эпителии всех типов доброкачественных и злокачественных новообразований ЩЗ [15-17]. В папиллярных карциномах в местах плоскоклеточной метаплазии находят СК1, 5, 6, 13, характерные для многослойного плоского эпителия. Эти же СК присутствуют в трабекулярных гиалинизированных аденомах [18].
Известно также, что малигнизации эпителиальных клеток может приводить к изменению спектра СК, присущего эпителию определенной локализации [19]. Этот феномен мог бы быть использован в
акушерство. гинекология. эндокринологи
'7 (76) декабрь 2013 г. ПРАКТИЧЕСКАЯ МЕДИЦИНА ^ 109
Таблица.
Частота и выраженность экспрессии цитокератинов 7, 20 та 34ЬЕ12 в опухолях щитовидной железы
Иммуногисто- химический маркер Аденомы, n = 24 Фолликулярный рак, n = 16 Папиллярный рак, n = 19
Выражен- ность экспрессии абс. количе- ство % Выражен- ность экспрессии абс. количе- ство % Выражен- ность экспрессии абс. количество %
СК7 ++ 20 83,33 + + 16 100,00 - 0 0,00
СК20 + 6 25,00 - 0 0,00 + + 18 94,74
СК34ЬЕ12 - 0 0 - 0 0,00 + 17 89,47
Примечание: «-» — нет экспрессии;
«+» — слабая экспрессия;
«++» — умеренная экспрессия;
«+ ++» — интенсивное окрашивание
качестве маркера малигнизации. Учитывая это, разными группами исследователей изучался состав СК нормального тиреоидного эпителия по сравнению с эпителием доброкачественных и злокачественных новообразований ЩЖ. В результате исследований получены данные о исключительной экспрессии СК19 в фолликулярном эпителии 92% папиллярных карцином и 3% доброкачественных новообразований [20]. На этом основании сделан вывод о высокой эффективности использования СК19 в качестве маркера папиллярных карцином [21]. Между тем существуют противоположные данные. Так, в фундаментальном исследовании Dockhorn-Dworniczak В. и соавторов обнаружено, что экспрессия СК19 с высокой частотой проявляется как в карциномах, так и в доброкачественных новообразованиях ЩЖ [22]. Другие исследователи наблюдали СК19 в эпителии нормальной ЩЖ, в 100% папиллярных карцином, 50% фолликулярных аденом, 72,7% гипер-пластических узловых зобов и аутоиммунного ти-реоидита [23, 24].
Цель данного исследования — определение экспрессии цитокератинов иного спектра (СК7, 20, 34ЬЕ12) в качестве критериев дифференциальной диагностики фолликулярных неоплазий ЩЖ.
Материалы и методы
Для исследования экспрессии СК в фолликулярных неоплазиях ЩЖ определялись СК7 (призматический эпителий) (клон ВА4, DakoCytomation), СК20 (клон ВА17, DakoCytomation) и СК высокой молекулярной массы как показательных маркеров с моноклональным антителом 34ЬЕ12 (СК1, 5, 10 и 14) (клон 34РЕ12, DakoCytomation).
Иммуногистохимическому исследованию подлежали 24 препарата тиреоидных фолликулярных аденом, 16 препаратов фолликулярного рака ЩЖ (ФРЩЖ), 19 препаратов папиллярного рака щитовидной железы (ПРЩЖ).
Срезы толщиной 4-5 мкм наносили на предметные стекла, предварительно обработанные адгезивной жидкостью (ро!у^-^те) с последующей депара-финизацией в соответствии с принятыми стандартами. Для каждого маркера выполнялись контрольные исследования с целью исключения ошибочно положительного или ложно отрицательного результата. Дальнейшую обработку проводили с использованием систем визуализации LSAB2 и LabVision
(UltraOne) в течение 10 минут с каждым реагентом с промежуточным промывкой в Трис-буферном растворе. После этого проводили реакцию с хромогеном (DAB (DakoCytomation)), микроскопически оценивая качество взаимодействия на протяжении от 20 сек. до 3 мин. Для дифференцировки структур тканей срезы дополнительно окрашивались гематоксилином Майера в течение 3 мин. Дегидратация и заливка в бальзам осуществлялись согласно известным принципам. Результат оценивали как положительный при выпадении солей хромогена именно в опухолевых клетках, причем в виде специфической реакции (мембранной или реакции цитоплазмы). Клетки, которые были положительными относительно экспрессии маркеров, изучались как минимум на 4-6 случайно выбранных полях зрения с использованием объективов х10 и х40. После подсчета 300 гистологически идентифицированных объектов (ядер или клеток) вычисляли показатели экспрессии по результатам всех изученных участков. Учитывалась положительная реакция в нормальных и опухолевых клетках фолликулярного тиреоидного эпителия.
Оценка иммуногистохимической реакции основывалась на интенсивности окраски и распределении имунопозитивных клеток по шкале: «-» — нет экспрессии, «+» — слабая экспрессия, «+ +» — умеренная экспрессия, и «+ + +» — интенсивное окрашивание.
Результаты исследования
В фолликулярных аденомах ЩЖ наблюдалась умеренная локусная экспрессия только на СК7 (20 случаев; 83,3%) (рис. 1). СК20 слабо экспрессировался в отдельных локусах опухолевой ткани (6 случаев; 25,0%) (рис. 2). Антитела к высокомолекулярным цитокератинам (клон 34ЬЕ12) не экспрессировались ни в одном из исследуемых случаев фолликулярных аденом ЩЖ.
Изучалась присутствие низкомолекулярного СК7 в материале ФРЩЖ. Антитела к СК7 реагировали в 100% представленных случаев, однако с разной степенью интенсивности: от слабоположительной локальной реакции до умеренного диффузного окрашивания опухолевой ткани. Что касается цитокератинов высокой молекулярной массы (СК20 и клон 34ЬЕ12), то в исследованных случаях экспрессия данных маркеров отсутствовала, что соответствует имеющимся литературным данным.
При исследовании ПРЩЖ, как обычноготипа, так и его фолликулярного вари анта , рыявлено, рро 94,7% случаев папиллягной карциномв!, включая фолликулярны1Й вариант, были положительны на СК20 (рис. 3). Интенсивность окрашивания колебалась от умеренной до ярковыраженной, но во всех случаях определяласл равномерная экспрессия во всей опухолевой ткани.
При определении присутствия высокомолекуляр-ны1х СК34ЬЕ12 обнаружено, что пгтитела ртигиао-вали с 89,5% ПР1_цЖ, включая его фолликулярным рарааан. В целом участки окрашпгвния в ПРЩЖ бы1ли вьирвженшыри р ра1вномерны1ми (рис. 4).
Топим образом, данные го экспрессии СК7, 20 и 34ЬЕ12 предолтавляют возможность подгвердить гипотезу о наличии уникальнохо спектра циеокера-тинов для канедойизопухолевыхформ патологти
фолликулярноьо эпителия ЩЖ, что может быть полезны м для дифференциальной .bbi^ejrnостики тирео-идных неонлази8
Е3ь>11^ OjEi ■=>■
1. Для фоллиьулярных аденом ЩЖ >c.^|:).aK;T<ej[:)noiiii <-ь>-^;а экспрессия СК7 /Э^ЗЗ0/— и ^-^(^\-tcte5I/i(5 ^(сс-прессии СК34ЬЕ12.
2. Препаратыфллликулярного рака ЩЖ :еиссп|Э<^с:-оировали СК7 в -00% случаев. СКЮ и C;i<i;:^4-l:)E^l^ hie. определялись ни ь одном из препаратов.
3. Отсутствие экспрессии СК70 лысокая частота ^1^|эе,де)^^1-1и;я СК20 иСК34ЬЕ12 (^13|£),т;':7- ^Е°^||'7^4 были характерным и для п апилляр hoi-o рака )Лп;^.
4„ Оспо3тавление солученных д.^1^н1^1)с может бытг полезным д.^я дифференциальной биатостики фолликулярных неоплазий.
ЛИТЕРАТУРА
1. Аброси мов А.Ю., Шкурко О.А. Анилиз экспрессии циклин и 01 в папиллярных микрокирциномах щитовидной железы. // Российский онкологичеекий журнал. — к008. —с <9 3. — с. 26-3p.
2. Fukunhima Л., Ito Y., Hirokawa Л. et al . Macrofollicular varla et of papillary thyroid carcinomK: its dinicopathological fea^res and longterm prognosie. // Tnlocr. Ja — P009. — Vol. 5d, № 3. — Т 503-8.
0. Tszlinger Л1Krohn KK Hauptmaan П. et a- Terspeatives tor improved and more accurate classification op ahyroid epthelial tumors // И. Clin, andocrinol. Oetab. — 2008. — Vol. 93, № 9: — Т. 3286-3294.
4. Foukakis Т., (.usnaito A., Au A.Y.M. et ail. A TCR-based nxpres-nien sipneCure ot malignancy in fodaular ^-yroid tumora // Tndocrine--daited Cancer-. - 2007. — Vol. 14, № 2. — Т. 381-391.
5. Niedziela Л., Miiceluch JK Kormrn K. Galectin-3 is not an aniver--al marl<er of malignancy in thyroid nodalar disease in chNdren and adolescents // J. Clin. Endocrinol. Metab. — 2002. — Vol. 87, № 9. —
Г 4411-4415.
6.Zeiger ЛЛ., ttpcklw A.P Oolliculir thyroid lesions, elements that dffect both diagnosis an. prognosis // J. Sarg. Oncol. — 2005. — Vrl. 09, № 3. - Т. 108-13.
7. Aca S. Thris :oie of immunchistochemiaal mcrkers in tha tiagnosis of follicutar |Matterned lesions of -he thyroid // Endocrine nathol. — .005. - Vol. -6. — О 290-309.
8. Casey Л.В., LoYse СЛ.. Uoyd R.V. Distinct^n between -ap<.ary ItP’^iroid iyperplas.a and pa-|llary thyroid carcinoma by mmunohistochemica1 sTinlng for cytokeratin 19. gal-ctin 3 and НВЛТ 1 // Endocrine Pathiol. о 0003. о Vol. 14. — Т. 55-60.
1. Kl m -.TO, Su. IK.ir., Ktnn<g 0ЖЕ Ka^ О.1!1. l'.utaltion:t Sines BRAF gene in pap Hilary thyroid carainom a and in Hashpmoto'- thysoiditic FF aathol. Int. — 20P5. — Vol. 50, П1 9. — т. 54ц-545.
00. Sucp Л., Astengo-Osuna C., Lin ВТ. et /l. НВЛЛ-1 mmunostaining im (thyroid fire needle aspirations: a useful nnarl<en in th^ diagnonis of carcinoma // 1Лоо1^т Tat.ol. — 1.997. — Vol. 10. — Pt 6T8--74.
1T Will-ms T1 D. Two propnsals regarding the (terminology of :hyroid tumors // Int. J. Surcp Pathol.. 200И. — Vol. 8, ПГ 3. — S. 18Ы83.
12, Franke W.W., Scnmld T., Osborn Ю., Weber K. PtTrmecHatOE ^iz-d filtm«enltto ophumnn endotholial ce lls // J Cell <iel. . 1979. . И°1. 81. NE 9. . 0. P70-P80.
c3. Raehas1 S.J. art al, Orief re.ost: detection of higd-molecular-oi,^ic)l^t cytokeratins in -coolastk and non-p^of:last:a tlhyroid turr.ors oaing microv.^ave an tig ^n retrl7val / Лodern Pathol. — 1995. — Vol. 8, № 8. — Р. 470-872.
14. Moll R., Franke W.W., Schiller D.L. et ail. The catalog of human cytokeratins polypeptides: Pattern of expression in normal epithelia, tumors and cultured cells // Cell. — 1982. — Vol. 31. - I3. 11-24.
15. Dockhorn-Dworniczak B., Foanke W.W., Schroder S., Ce-ernobilsky B., C^ould V. EE., Boecker W. P;stte:rn^ of expression of cytoskelet hi I proteinsin lEi^mi^n tlny^roid cj l a n d ^nd thyr oic^ c^i"ci-nomai^ Differentiation, -n ^^87. k- Vol. 35, № ^ P. 53-7-.
^(j.l^oni^^cii EE ., Nesland !).^., Ho^ ie !)., Sob rin Pio^iEjii^oes: fO. I’arlte-rrE of expression of intermediate cytokeratin filamen-s in the thyroid gland: an immunohistochemical study of simple and sLratitied epithelial-type cytokaratins // Virnhowr Aechiv. ^ 199:7. - Vol. 430, № B. ^ P. N39-245 1
^/t. Fonseca EE., Oesland J.M., SoOrinho-Sim o^<; or. Ex^re^o;<rion ci^ st ratified eeitOelial-type cytokeratins in hyalinizing trabecular adenomas i^ui^iD^rt:^ the ir n^iia^^ oicEjlr '^itli F>^^iil^i"^ c^oc^no^ia!; of tires thyroid // H^:;t:o|з^tlro io.gy.i - ^S)97. Vol . 3 1, № 4. - e. :3d0c3 ji:^;
1 dS . 3e/iHHCKair Z/.^r, ^o>kok tO.M. Hcrronri3:^o!r^HMe UMMy^Hoion-TL>rHM l/li^^CKOrO Bl>l5IEi;teHM5l .qe'r^firM Jli^iiHI LlHTOI^^fl^THHOI №10 b floonf=F>iaiinoh-Hoi- ^MTOjnorMiciti^Koi- .^uai’i^ocTniKe d/ioKaia-CT!5ia^l^bi:>d ^lD^006|3^:^0!5^hrHM UL^HT0^U,HH0M >df5/l^:!bl/1^ Ohpo/io-i-hsi. ^ ^oooi - t. ;2, oe> ^-:2. ^ c:. 56-r;o.
l3rilo^iT ^.V\L., Abraham S3 .Hi^bertts Hn.^ Li\/o:^. ^. D^flFe-rf^n^^al
^)-|Di'(^^r>ion o. cySokerarins in fo^licuiar viar^ant of popillary c^r\;^nomii: ^n ^mmL^ol^i:;^tocrlf=m^cia. sttudTd and its dikgnost.c ^ tilitty^ // Human Pa-tho^o^PT; - 1999. - Vol. 30, № 10. - P. 1166-1173.
k0. Nnnscb S.M. Pitman M.B., PiloO e.Zt ^iaciu^n -|g.C. l=^n^^^^ndli-aLci-aLionKiopsy of |3ai|3 i l.ioitH tMyroid ^arrin omai Di^tjnos^ic u tility o^ c°i',-:o|c<i2raitln 1.^ ^nrm,tno::t:a^,-.!tg // (d^nhe^r. ^ tl0(^r)i - Vol. 90, № T. — P. 707-311.
2-. Dockloom-Dwomiceak IS., Franke W.W., !E><rtiI'nodesr IS. et al. Patterns oO expression od cy^to^l<el^t^l giroS^in^ in human thyroid gland and thyroid cnnc inomas P0 \:>if-erentiation — ^^8E7 . Vod 35^ N1? 1. —
-. 53E^'a1.
|PonsEEra E., Nesland J. Mn Hoei^]., Sobrinho-E;imoes M.Pa.-t^rn of1 e^x:||tres;:sio^ o9 intm'mediate cytokcei'a^^n fi^e\n^n(t^ in th^ thy-I'oid ^liand.an i-^ /01101^0,1 i s;^ocir-^nt^<tnl atudy op simple rnd ptraOified epithelial-type cytokanatins ,// Virchows Archiv. — 1997. ^ Vo l . 430,
3 . ^ P. :s:3 9-245 .
03i Rrtael Sj.!).^ Mcl^r.own-l^y-:;^e^i^ (3., /r^s^a S.L. ..i^-i-molfecirliir^ '^/e^gh-t icyE;ol<:e5ra^in ^nd dy-tc-:<^er^t^n-^5S in tCi^d^acina:;.^ of thy^roii^ tu-moi'|f ^ocf^i-n P^t-lol^ 199k. - Vol. № 3. - P. 2K5-3kO.
WWW.PMARcHiVE.Ru
сайт журнала «практическая медицина»
