CC BY
9© Коллектив авторов, 2012 УДК 618.3-06:616.379-008.64]-07:618.56
ЭКСПРЕССИЯ СОСУДИСТОТРОПНЫХ СИГНАЛЬНЫХ МОЛЕКУЛ В ТКАНИ ПЛАЦЕНТ ПРИ ГЕСТАЦИОННОМ САХАРНОМ ДИАБEТЕ
Р.В. Капустин, О.Н. Аржанова, доктор медицинских наук, профессор, В.О. Полякова, доктор биологических наук
Научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта, СЗО РАМН, Санкт-Петербург E-mail: Kapustin.Roman@gmail.com
При оценке уровня экспресии сосудисто-эндотелиального фактора роста (VEGF) и эндотелиальной NO-синтазы (eNOS) в ткани плаценты при гестационном сахарном диабете (ГСД) наиболее высокая экспрессия данных вазоактивных факторов в плаценте выявлена у родильниц с ГСД на диетотерапии, а наименьшая — при ГСД на инсулинотерапии. Это может объяснять больший процент неблагоприятных перинатальных исходов у беременных с плохо контролируемым СД и высокой гипергликемией, характерной для пациенток на инсулинотерапии.
Ключевые слова: гестационный сахарный диабет, плацента, VEGF, eNOS
VASCULAR TROPIC SIGNALING MOLECULES EXPRESSION IN THE PLACENTAL TISSUE SAMPLES FROM PUERPERAE WITH GESTATIONAL DIABETES MELLITUS R.V. Kapustin, O.N. Arzhanova, V.O. Polyakova
Federal State Budgetary Institution «D. O. Ott Research Institute of Obstetrics and Gynecology» of the Russian Academy of Medical Sciences, Saint-Petersburg, Russia
The assessment of vascular endothelial growth factor (VEGF) and endotelial NO — synthase (eNOS) expression levels in placental tissue samples obtained from pregnant females with gestational diabetes mellitus (GDM) has been performed. The highest level of these vasoactive factors expression was displayed to be in placental tissue samples from GDMpuerperae who received nutritional therapy, and the lowest expression level was detected in PTS from GDM patients receiving insulin therapy. It can explain bigger rate of adverse perinatal outcomes in pregnancy with poorly controlled diabetes mellitus and high degree of hyperglycemia, typical for patients receiving insulin therapy.
Key words: gestational diabetes mellitus, placenta, VEGF, eNOS
ВВЕДЕНИЕ
Поддержание нормального роста и трофики плаценты — важный процесс для адекватного развития плода. Доказано, что задержка внутриутробного роста плода, развитие преэклампсии и гестационного сахарного диабета (ГСД) связаны с сосудистой дисфункцией плаценты [11, 12]. Плацента развивается из внешнего слоя клеток морулы, образуя трофобласт, который дифференцируется в цитотрофобласт и син-цитиотрофобласт, в результате чего формируются первичные ворсины [3]. Трансформация и созревание ворсин от первичных до 3-го порядка включает в себя: дальнейшую дифференцировку цитотрофобласта в синцитиотрофобласт, активный ангиогенез и рост сосудистого дерева, продольный рост капилляров с образованием сосудистых лакун [13, 23]. Таким образом, адекватный плацентарный васкулогенез и ангиогенез являются взаимосвязанными процессами, которые влияют на развитие плода во время беременности.
При ГСД происходят изменения структуры плаценты на макро- и микроструктурном уровнях.
Н. Madsen и соавт. показали [28], что при СД уменьшается доставка кислорода к фетоплацентарному комплексу. Нарушение диффузии кислорода обусловлено утолщением базальной мембраны трофобласта за счет усиления синтеза коллагена IV типа, а также большим сродством кислорода к гликированному гемоглобину [7, 9]. В результате низкого уровня оксигенации происходит компенсаторный синтез проангиогенных факторов, таких, как фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), эндотелиальная NO-синтаза (eNOS), фактор роста фибробластов 2 (FGF2), лептин, инсулино-подобный фактор роста (IGF) [21]. Гиперэкспрессия этих факторов способствует активной пролиферации плацентарных эндотелиоцитов, вследствие чего плацента при ГСД более васкуляризированная, чем при нормально протекающей беременности. В плаценте при диабете беременных также уменьшается количество терминальных ворсин и возрастает число промежуточных ворсин (по сравнению с должными для данного гестационного срока) [25, 34]. Однако, по данным L. Pietro и соавт., плацента с ГСД при мягкой
степени гипергликемии характеризуется повышенным числом терминальных ворсин [15]. Исследования на крысах показали, что увеличение роста сосудов и повышенной васкуляризации при ГСД связано с более высоким уровнем матричных металлопротеи-наз — ММП-2 и ММП-9, которые являются одними из основных регуляторов внеклеточного матрикса [41]. Макроскопически плацента при ГСД не только более васкуляризированная, но и больших массы и размеров (в отличие от последов при нормально протекающей беременности) [42].
При ГСД строма ворсинок отечная, с большим количеством плацентарных макрофагов (клеток Кащенко — Гофбауера). Увеличение числа этих клеток способствует повышению синтеза фактора некроза опухоли-а (ФНОа), интерлейкинов ИЛ-1, 6, 8 и леп-тина, которые изменяют метаболическую и эндокринную функцию плаценты [4, 5, 35]. Таким образом, ги-перваскуляризация и увеличение количества ворсин в плаценте при ГСД связаны с адаптационными процессами, которые способствуют поддержанию нормальной диффузии кислорода через плаценту в условиях нарушенного транспорта метаболитов при СД.
Плацента не имеет адренергической и холинер-гической иннервации [38], поэтому ее сосудистый тонус поддерживается за счет местных гуморальных факторов, продуцируемых эндотелиоцитами и клетками крови.
Оксид азота (N0) и ферменты его синтеза — эн-дотелиальная и индуцибельная N0-синтаза ^N08 и ГК0Б) активно регулируют развитие эмбриона и имплантацию трофобласта [24]. Кроме этого, тонус сосудов в плаценте находится под контролем нескольких вазоактивных мессенджеров, из которых N0 является ключевым [36]. С другой стороны, ва-скулогенез и ангиогенез в плаценте зависит от активности фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) и его рецепторов VEGFR-1 (ИМ) и VEGFR-2 ^К-1), трансформирующего фактора роста р-1 (TGF Р-1), ангиопоэтина (А^-1, -2) [10]. VEGF является важнейшим регулятором как нормального, так и патологического ангиогенеза [33]. Он играет важную роль в формировании новых кровеносных сосудов [17]. Во время беременности VEGF участвует в пролиферации, миграции и метаболической активности трофобласта [6 , 40], стимулируя высвобождение оксида азота посредством eN0S, играющего важную роль в регуляции плацентарного кровотока [30, 31].
В I триместре беременности eN0S сильнее экс-прессируется в цитотрофобласте и на эндотелиоци-тах капилляров первичных и промежуточных ворсин [16]. С ростом срока беременности происходят увеличение и перераспределение экспрессии eN0S, в основном в синцитиотрофобласте и эндотелиальных клетках сосудов плаценты [14].
Исследования показали, что повышенная экспрессия eN0S встречалась при сосудистой дисфунк-
ции в моделях диабета у животных [20, 32]. Вместе с тем нарушенный синтез NO может приводить к изменению маточно-плацентарного кровотока и ограничению роста и развития плода при ГСД [18, 30, 39].
В литературе имеются единичные данные об экспрессии VEGF и eNOS в ткани плаценты при ГСД. Тем не менее в различных исследованиях установлена повышенная экспрессия VEGF и его рецепторов VEGFR-1, VEGFR-2 и VEGFR-3 в плаценте при беременности, осложненной гипергликемией [15, 29]. Противоречивы данные об уровнях экспрессии eNOS в ткани плаценты при ГСД. L. Fiona и соавт. [19] не нашли различий в экспрессии eNOS при диабетически измененной и нормальной плаценте, в то же время S. Gilbert и соавт. опубликовали противоположные результаты [22]. Практически нет данных о различиях в содержании в плаценте VEGF и eNOS в зависимости от типа коррекции диабета (диета, инсулинотерапия).
В связи с изложенным целью исследования явилось изучение уровней экспрессии VEGF и еNOS в ткани плаценты при ГСД.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Материалом послужила плацента 52 родильниц, полученная в ФГБУ НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта СЗО РАМН. Все женщины были объединены в 3 группы: 1-я — 27 больных ГСД на диетотерапии (ГСДд); 2-я — 20 больных ГСД на ин-сулинотерапии (ГСДи) и 3-я — контрольная группа, в которую вошли 5 женщин без нарушения углеводного обмена.
Всем беременным проводили пробу на толерантность к глюкозе (ПТГ) с 75 г глюкозы в 16—28 нед (для верификации диагноза ГСД), учитывали показатель гликированного гемоглобина (HbA1c, %), среднесуточную гликемию. Оценивали течение беременности и родов у пациенток исследуемых групп, среднюю массу новорожденных, их оценку по шкале Апгар, наличие признаков диабетической фетопатии. Морфологическое исследование плацент проводили общепринятыми методами с окраской гематоксилином и эозином. Для иммуногистохимического исследования использовали первичные моноклональные мышиные античеловеческие антитела к следующим маркерам: VEFG (1:50, Dako), NitricOxyde Synthase (3:50, Novocastra). В качестве вторичных антител использовали систему EnVision (Dako), содержащую полимер, конъюгированный с молекулами вторичного антитела и пероксидазой хрена. Для визуализации окрасок пероксидазу хрена проявляли диаминобен-зидином (1:50, Dako). Морфометрическое исследование осуществляли с применением микроскопа Nikon Exlipse 400, персонального компьютера на базе Intel Pentium 4 и программного обеспечения «Видеотест-Морфология 5.2» В каждом случае анализировали 5 полей зрения при увеличении ><400. Оптическую плотность экспрессии измеряли в условных едини-
цах, относительную площадь экспресии (отношение площади, занимаемой иммунопозитивными клетками, к общей площади клеток в поле зрения) — в %.
Статистическую обработку проводили с использованием пакета прикладных программ Microsoft Excel 2007 (Microsoft Corporation, USA) и «Statistica v6.0» (Statsoft, Inc. USA). Для определения статистической значимости различий между количественными параметрами исследуемых групп использовали критерий Манна—Уитни. Для оценки различий между качественными параметрами исследуемых групп использовали критерий х2. Различия считали достоверными при p<0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Средний возраст беременных в 1-й группе составил 31,8+3,2 года, во 2-й — 32,4+4,6 года, в 3-й — 29,4+2,2 года. Количество родов у женщин исследуемых групп достоверно не отличалось. Среднесуточная гликемия в 1-й группе составила 5,65+0,6 ммоль/л, во 2-й — 6,34+0,5 ммоль/л, в 3-й — 4,8+0,6 ммоль/л (p<0,05 по сравнению с контролем). Наибольший показатель HbAlc % был во 2-й группе (6,3+0,4%), наименьший — в 3-й (4,9+0,3); в 1-й группе он составил 5,9+0,4% (p<0,05 по сравнению с контролем).
Беременность при ГСД протекала с большим числом осложнений, ведущее место среди них занимал гестоз (в 1-й группе — 84%, во 2-й — 90%). При этом более тяжелые формы гестоза чаще встречались у беременных, получавших инсулинотерапию (средне-тяжелая — у 15%, тяжелая — у 7,4%). Среди других осложнений беременности достоверно чаще (р<0,05) встречались урогенитальные инфекции (в 1-й группе —62,96%, во 2-й — 40%), многоводие (соответственно 29,6 и 60%), макросомия плода (22,2 и 60%), плацентарная недостаточность (18,5 и 35%).
Осложнения в родах в основном заключались в несвоевременном излитии околоплодных вод (в 1-й группе — 51,8%, во 2-й — 35%) и высокой частоте кесарева сечения (соответственно 25,9 и 55%; p<0,05). В контрольной группе осложнений беременности и родов не было.
В 1-й группе в 93% случаев произошли срочные роды, родились дети со средней массой тела 3530+370 г и оценкой по шкале Апгар 7,6+0,3 балла. Во 2-й группе срочные роды произошли в 85% случаев, средняя масса тела новорожденных составила 3850+280 г, оценка по шкале Апгар 7,2+0,4 балла. Признаки диабетической фетопатии выявлены у 16,5% новорожденных с ГСДд и 65% — с ГСДи (р<0,001). В контрольной группе все роды были срочными, признаков диабетической фетопатии у новорожденных не было.
При морфологическом исследовании плацент установлено, что в 22,2% случаев в 1-й и 45% во 2-й группе они не соответствовали сроку беременности. Чаще патологическая незрелость последов была обусловлена диссоциированным созреванием ворсин. В плаценте выявлялись инфильтративные изменения по типу мононуклеарного (50%) и лимфолейкоци-тарного (68,5%) децидуита. В 81,4% последов в 1-й группе и 85% во 2-й верифицировались массивные отложения фибриноида и кальция в межворсинчатом пространстве, наблюдалось избыточное количество коллагена вокруг крупных артерий. Дисциркулятор-ные нарушения характеризовались явлениями острого нарушения кровообращения (ОНК) — в плаценте в 48,1% случаев, элементами плацентарной недостаточности — в 20%. Следует отметить, что в 2 (10%) случаях в плаценте были выявлены структурные изменения, характерные для декомпенсированной плацентарной недостаточности. В контрольной группе дисциркуляторные и инфильтративные изменения отсутствовали (табл. 1).
Иммуногистохимическое исследование показало положительную реакцию с антителами к VEGF на эндотелиоцитах капилляров и клетках трофобла-ста плаценты. Наибольшая площадь экспрессии выявлена в 1-й группе — 5,9+0,3%, т.е. в 2 раза больше, чем в контроле (2,9+0,2%), и в 10 раз больше, чем при ГСДи (0,58+0,05%). Такая же картина выявлена при оценке относительной площади экспрессии; показатели оптической плотности в исследуемых группах достоверно не различались (табл. 2, рис. 1—3).
Таблица 1
ЧАСТОТА ДИСЦИРКУЛЯТОРНЫХ И ИНФИЛЬТРАТИВНЫХ ИЗМЕНЕНИЙ (В %) В ПЛАЦЕНТЕ В ИССЛЕДУЕМЫХ ГРУППАХ
Строение плаценты Инфильтративные изменения Плацентарная недостаточность
Группа соответствует сроку беременности не соответствует сроку беременности нет монону-клеарный децидуит лимфолей-коцитарный децидуит нет ОНК хроническая компенсированная хроническая субкомпенси-рованная хроническая декомпенси-рованная
1-я 77,8 22,2 18,5 37 68,5 18,5 48,2 11,1 22,2 -
2-я 55 45 20 50 30 20 30 20 20 10
3-я (контрольная) 100 - - - - - - - - -
Таблица 2
ЭКСПРЕССИЯ VEGF В ПЛАЦЕНТЕ ПРИ ГСД (M±m)
Показатель VEGF Группа
1-я 2-я 3-я (контрольная)
Площадь экспрессии, % 5,9±0,3* 0,58+0,05** 2,9+0,2
Оптическая площадь, у.е. 0,171+0,004*** 0,169+0,005*** 0,172+0,09
Относительная площадь экспрессии, % 0,169+0,02** 0,0163+0,004** 0,08+0,03
* — p<0,05; ** — р<0,01; *** — по сравнению с контрольной группой (здесь и в табл. 3).
Рис. 1. Экспрессия VEGF в ткани плаценты при ГСДд (х400)
Рис. 2. Экспрессия VEGF в ткани плаценты при ГСДи (х400)
Рис. 3. Экспрессия VEGF в ткани плаценты в контрольной группе (*400)
Экспрессия eNOS в основном проявлялась в синцитиотр о ф о бласте. Иммуногистохимическая реакция была выраженной и характеризовалась наибольшей площадью экспресии в 1-й группе (7,6±0,6%), и наименьшей — во 2-й (1,37+0,16%). Характеристики относительной площади экспрессии в этих группах имели ту же направленность, данные оптической плотности также достоверно не различались. Указанные параметры в контрольной группе в отличие от основных были в пределах средних значений (4,2+0,37%) (табл. 3, рис. 4—6).
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
У беременных с ГСД наблюдается более высокий процент акушерских осложнений и морфологических изменений плацентарного комплекса [1, 2]. Полученные данные позволяют считать, что в ответ на гипергликемию запускаются выраженные компенсаторные реакции в плаценте. При ГСДд происходят более «мягкие» метаболические изменения. Это позволяет плаценте поддерживать адекватную трофическую функцию за счет увеличения синтеза вазоактивных медиаторов (VEGF и eNOS). Повышение VEGF при легкой гипергликемии может способствовать ангиогенезу в плацен-
Таблица 3
ЭКСПРЕССИЯ ENOS В ПЛАЦЕНТЕ ПРИ ГСД (M±m)
Показатель eNOS Группа
1-я 2-я 3-я (контрольная)
Площадь экспрессии, % 7,6+0,6* 1,37+0,16* 4,2+0,37
Оптическая площадь, у.е. 0,193+0,05*** 0,187+0,03*** 0,189+0,01
Относительная площадь экспрессии, % 0,213+0,04* 0,038+0,003** 0,118+0,03
Рис. 4. Экспрессия eNOS в ткани Рис. 5. Экспрессия eNOS в ткани Рис. 6. Экспрессия eNOS в ткани пла-плаценты при ГСДд (х 400) плаценты при ГСДи (х 400) центы в контрольной группе (х 400)
тарной ткани и объясняет гиперваскуляризацию и увеличение количества терминальных ворсин [15, 29].
При ГСДи под действием высокой гипергликемии происходит срыв адаптации фетоплацентарного комплекса. В результате снижается уровень ключевых факторов (VEGF и eN0S) в плаценте, нарушается маточно-плацентарный кровоток, что приводит к генерализованной эндотелиальной дисфункции. Происходит неблагоприятное перераспределение количества ворсин за счет снижения уровня терминаль-
ЛИТЕРАТУРА
ных и увеличения числа склерозированных незрелых и промежуточных ворсин. Это объясняет более высокую частоту гестоза и плацентарной недостаточности у беременных с ГСДи.
Полученные данные свидетельствуют о наличии прямой связи между неконтролируемой гипергликемией и структурными изменениями в плаценте, что диктует необходимость более ранней диагностики ГСД и поддержания адекватной гликемии у беременных с целью сокращения числа перинатальных осложнений.
1. Акушерские и патоморфологические особенности течения беременности у женщин с гестационным сахарным диабетом / Аржанова О.Н. [и др.]
// Журнал акушерства и женских болезней. - 2011; 60 (3): 44-48.
2. Акушерские и перинатальные осложнения при гестационном сахарном диабете / Бурумкулова Ф.Ф. [и др.] // Журнал акушерства и женских болезней. - 2011; 60 (3): 69-74.
3. Милованов А.П. Патология системы мать-плацента-плод. - М., Медицина 1999. -348 с.
4. Сельков С.А., Павлов О.В., Соколов Д.И. Механизмы иммунорегуляции развития плаценты // Журнал акушерства и женских болезней. - 2011; 60 (3): 136-140.
5. Activation of phospholipase A2 is associated with generation of placental lipid signals and fetal obesity. /Varastehpour A. [et al.] // J. Clin. Endocrinol Metab. - 2006; 91: 248-255.
6. Ahmed A., Perkins J. Angiogenesis and intrauterine growth restriction. // Baillieres Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol. -2000; 14: 981-998.
7. Analysis of the collagens of diabetic placental villi / Leushner J.R. [et al.] // Cell Mol Biol. - 1986; 32: 27-35.
8. Andrea Leiva. Fetoplacental Vascular Endothelial Dysfunction as an Early Phenomenon in the Programming of Human Adult Diseases in Subjects Born from Gestational Diabetes Mellitus or Obesity in Pregnancy // Exp Diabetes Res. - 2011; 2011: 349286.
9. Altered perlecan expression in placental development and gestational diabetes mellitus / Yang WC. [et al.] // Placenta. -2005; (26): 780-788.ф
10. Burton G.J., Charnock-Jones D.S., Jauniaux E. Regulation of vascular growth and function in the human placenta // Reproduction. - 2009; 138: 895-902.
11. Casanello P., Escudero C., Sobrevia L. Equilibrative nucleoside (ENTs) and cationic amino acid (CATs) transporters: implications in foetal endothelial dysfunction in human pregnancy diseases // Curr Vasc Pharmacol. - 2007; 5: 69-84.
12. Chaddha V., Viero S., Huppertz B. Developmental biology of the placenta and the origins of placental insufficiency // Semin Fetal Neonatal Med. - 2004; 9: 357-369.
13. Demir R., Kayisli U.A., Cayli S. Sequential steps during vasculogenesis and angio-genesis in the very early human placenta // Placenta. - 2006; 27: 535-539.
14. Dotsch J., Hogen N., Nyul Z., Hanze J., Knerr I., Kirschbaum M. Increase of endothelial nitric oxide synthase and endothelin-1 mRNA expression in human placenta during gestation // Eur J. Obstet Gynecol Reprod Biol. - 2001; 97: 163-167.
15. Effect of impaired glucose tolerance during pregnancy on the expression of VEGF receptors in human placenta / Pietro L. [et al.] // Placenta. - 2010; 31 (9): 770-780.
16. Expression and functional analysis of endothelial nitric oxide synthase (eNOS) in human placenta / Rossmanith W.G., [et al.] // Mol Hum Reprod. - 1999; 5: 487-494.
17. Expression of vascular endothelial growth factor receptors 1, 2 and 3 in placentas from normal and complicated pregnancies / Helske S [et al.) // Mol Hum Reprod.
- 2001; 7: 205-210.
18. Equilibrative nucleoside transporters in fetal endothelial dysfunction in diabetes mellitus and hyperglycaemia / Westermeier F. [et al.) // Current Vascular Pharmacology. -2009; 7 (4): 435-449.
19. Fiona L., Janice L. Increased Nitrotyrosine in the Diabetic Placenta // Diabetes Care. -2008; 21 (10): 1753-1758.
20. Foxo1 links hyperglycemia to LDL oxidation and endothelial nitric oxide synthase dysfunction in vascular endothelial cells
/ Tanaka J. [et al.) // Diabetes. - 2009; 58: 2344-2354.
21. Josko J, Mazurek M. Transcription factors having impact on vascular endothelial growth factor (VEGF) gene expression in angiogen-esis // Med Sci Monit. - 2004; 10: 89-98.
22. Gilbert S., Mathias J. Expression of inducible nitric oxide synthase inplacenta of women with gestational diabetes // The Faseb Journal. - 1996; 5: 777-784.
23. Herr F., Baal N., Widmer-Teske R., McKin-non T., Zygmunt M. How to study placental vascular development? // Theriogenology.
- 2010; 73: 817-822.
24. Kaufmann P., Black S., Huppertz B. Endovas-cular trophoblast invasion: implications for the pathogenesis of intrauterine growth retardation and preeclampsia // Biol Reprod.
- 2003; 69: 1-7.
25. Kucuk M., Doymaz F. Placental weight and placental weight-to-birth weight ratio are increased in diet- and exercise-treated gestational diabetes mellitus subjects but not in subjects with one abnormal value on 100-g oral glucose tolerance test // J Diabetes Complications. - 2009; 3: 25-31.
26. Leach L. Placental vascular dysfunction in diabetic pregnancies: intimations of fetal cardiovascular disease? // Microcirculation. - 2011; 18 (4): 263-269.
27. Lopa Leach, Alice Taylor, and Flavia Sciota. Vascular dysfunction in the diabetic placenta: causes and consequences // J. Anat. - 2009; 215: 69-76.
28. Madsen H, Ditzel J. Blood-oxygen transport in first trimester of diabetic pregnancy // Acta Obstet Gynecol Scand. - 1984; 63: 317-320.
29. Effect of impaired glucose tolerance during pregnancy on the expression of VEGF
receptors in human placenta / Marini M., [et al.) // Reprod Fertil Dev. - 2008; 20 (7): 789-801.
30. Myatt L. Review: reactive oxygen and nitrogen species and functional adaptation of the placenta // Placenta. - 2010; 31: 66-69.
31. Myatt L., Eis A., Brockman D.E., Greer I.A., Lyall F. Endothelial nitric oxide synthase in placental villous tissue from normal, pre-eclamptic and intrauterine growth restricted pregnancies // Hum Reprod. -1997; 12: 167-172.
32. Nagareddy P.R., Xia Z., McNeill J.H., MacLeod K.M. Increased expression of iNOS is associated with endothelial dysfunction and impaired pressor responsiveness in streptozotocin-induced diabetes // Am. J. Physiol Heart Circ Physiol. - 2005; 289: 2144-2152.
33. Ng Y.S., Krilleke D., Shima D.T. VEGF function in vascular pathogenesis // Exp Cell Res. -2006; 312: 527-537.
34. Placental pathology in women with gestational diabetes / Daskalakis G. [et al.) //Acta Obstet Gynecol Scand. - 2008; 87: 403-407.
35. Phillips T.A., Ni J., Hunt J.S. Death-inducing tumour necrosis factor (TNF) superfamily ligands and receptors are transcribed in human placentae, cytotrophoblasts, pla-cental macrophages and placental cell lines // Placenta. - 2001; (22): 663-672.
36. Poston L., McCarthy A.L., Ritter J.M. Control of vascular resistance in the maternal and feto-placental arterial beds // Pharmacol Ther. - 1995; 65: 215-239.
37. Pregnancy plasma glucose levels exceeding the American Diabetes Association thresholds, but below the National Diabetes Data Group thresholds for gestational diabetes mellitus, are related to the risk of neonatal macrosomia, hypoglycaemia and hyperbilirubinaemia / Ferarra A. [et al.) // Diabetologia. - 2007; (50): 298-306.
38. Reilly R.D., Russell P.T. Neurohistochemi-cal evidence supporting an absence of adrenergic and cholinergic innervation in the human placenta and umbilical cord // Anat Rec. - 1977; 188: 277-286.
39. Review: differential placental microvascular and microvascular endothelial dysfunction in gestational diabetes / Sobrevia L. [et al.) // Placenta. - 2011; 25: 159-164.
40. Shiraishi S., Nakagawa K., Kinukawa N. Im-munuhistochemical localization of vascular endothelial growth factor in the human placenta // Placenta. - 1996; 17: 111-121.
41. The role of nitric oxide on matrix metallopro-teinase 2 (MMP2) and MMP9 in placenta and fetus from diabetic rats / Pustovrh M.C. [et al.) // Reproduction. - 2007; 134: 605-613.
42. Taricco E, Radaelli T, Nobile de Santis MS, Ce-tin I. Foetal and placental weights in relation to maternal characteristics in gestational diabetes // Placenta. - 2003; 24: 343-347.
