CC BY
33
116
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
токсичности на крысах: суммарные дозы 300 мг/кг ® 1,5 максимально переносимой дозы (МПД), 200 мг/кг = 1 МПД и 100 мг/кг = 1/2 МПД. Продолжительность наблюдения — 45 сут. Исследования местно-раздражающего действия ЛЛФО проведены на 42 кроликах породы шиншилла, полученных из ОПХ «Манихино». ЛЛФО вводили однократно в краевую вену уха кролика в рекомендованной концентрации 15,7 мг/мл и в 10 и в 20 раз меньшей.
Результаты. ЛЛФО при трехкратном ежедневном внутривенном применении не вызывала гибели животных, не оказывала влияния на общее состояние животных, не изменяла их поведенческие реакции. ЛЛФО вызывала дозозависимые снижение массы тела животных и алло-пецию, уменьшение числа лейкоцитов на 3-и сутки опыта с восстановлением к 7-м суткам; в суммарной дозе 300 мг/кг — уменьшение числа тромбоцитов на 7-14-е сутки наблюдения с восстановлением к 21-м суткам. ЛЛФО вызывала дозозависимое нарушение барьерной функции печени (снижение уровня аланинаминотрансферазы на 3-и сутки наблюдения; в суммарной дозе 300 мг/кг — с неполным восстановлением к концу опыта). ЛЛФО в исследованных дозах оказывала влияние на функцию почек, вызывая на 3-и сутки опыта недозозависимое увеличение содержания мочевины с неполным восстановлением в суммарных дозах 200 и 100 мг/кг с дальнейшим ростом показателя в суммарной дозе 300 мг/кг к 45-м суткам. Кроме того, в суммарной дозе 300 мг/кг в анализе мочи крыс на 15-е и 45-е сутки наблюдения обнаружены гиалиновые цилиндры, а также отмечено увеличение относительной массы почек на 45-е сутки наблюдения. Препарат вызывал недо-зозависимые качественные изменения показателей электрокардиограммы, проявляющиеся нарушением сердечного ритма (желудочковой экстрасистолией) в суммарной дозе 100 мг/кг на 15-е и 30-е сутки опыта, и появлением патологического комплекса QS в суммарной дозе 300 мг/кг на 3-и и 30-е сутки наблюдения. ЛЛФО вызывала на 3-и сутки дозозависимое уменьшение относительной массы тимуса (с неполным восстановлением к концу опыта) и селезенки (с полным восстановлением к концу опыта). ЛЛФО обладает умеренным местно-раздражающим действием.
Заключение. Полученные результаты позволяют рекомендовать ЛЛФО для дальнейшего изучения.
А.А. Черепанов1-2, А.А. Липенгольц12, Е.Ю. Григорьева1, А. В. Смирнова1, В.Н. Кулаков2 СРАВНИТЕЛЬНОЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ БИОРАСПРЕДЕЛЕНИЯ КОНТРАСТНЫХ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ РАЗНЫХ СПОСОБОВ ВВЕДЕНИЯ НА МЫШАХ С ТРАНСПЛАНТИРОВАННЫМИ ОПУХОЛЯМИ IN VIVO
ФГБУ«РОНЦим. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва; 2ФГБУ ГНЦ «ФМБЦ им. А. И. Бурназяна», Москва
Введение. Для планирования и проведения экспериментальных исследований бинарной лучевой терапии с существующими контрастными препаратами для компьютерной томографии (КТ) и магнитно-резонансной томографии (МРТ) на лабораторных животных необходима инфомация о биораспределении применяемых препаратов и их динамики.
Принципиальное значение имеет не только интегральное накопление препарата в органах или тканях, но и характер распределения препарата в конкретном органе. Для решения подобной задачи нами было проведено исследование распределения 2 контрастных препаратов для КТ и МРТ на мышах in vivo с помощью рентгеновской КТ.
Цель — провести исследование детального биораспределения и его динамики 2 контрастных препаратов у мышей с трансплантированными опухолями in vivo для 3 способов введения.
Материалы и методы. Было проведено исследование биораспределения рентгеноконтрастного препарата Ультра -вист-370 и магнитно-резонансного препарата Дипентаст на мышах. Были ипользованы мыши-самки линии C57B16 с трансплантированными подкожно в правую заднюю голень опухолями. Исследования проводились для 2 опухолей: меланомы B16F10 и аденокарциномы молочной железы Са755. Исследования проводились на 9-10-е сутки после трансплантации. Были исследованы биораспределения для 3 способов введения: внутрибрюшинного, ретро-орбитального и интратуморального. Препараты вводились однократной болюсной инъекцией в объеме 0,1 мл. Исследования проводились на визуализирующей системе IVIS. Томограммы животных снимались до введения препарата, сразу же после введения препарата и в течение 30 мин с интервалом 5 мин.
Результаты. Показано, что биораспределение исследованных контрастных препаратов зависит от способа введения. При ретроорбитальном введении оба препарата быстро поступали в кровенаполненные органы, включая опухоль. После чего наблюдалось выведение из крови с мочей и накопление препаратов в мочевом пузыре. При внутрибрю-шинном введении оба препарата медленно всасывались из места введения. Большое количество препаратов наблюдалось в области брюшины и спустя 20 мин после введения. Регистрируемого накопления в опухолях не наблюдалось. При интратуморальном введении также происходило длительное удержание препаратов (более 20 мин) в тканях обеих опухолей и медленное выведение с мочей.
Заключение. Для проведения исследований бинарной лучевой терапии с существующими контрастными препаратами эффективным является ретроорбитальное/внутри-венное введение контрастных препаратов.
Ж.Р. Черкасова1, С.А. Цуркан1, Г. Б. Смирнова2, Ю.А. Борисова2, Е.М. Трещалина2
ЭКСПРЕССИЯ РЕЦЕПТОРОВ К а-ФЕТОПРОТЕИНУ В ГОМОГЕНАТАХ ОПУХОЛЕЙ ЧЕЛОВЕКА SW620, T47D И В КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК HEPG2 ИЗ КОЛЛЕКЦИИ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА
ООО «ФармАксесс», Москва;
2ФГБУ«РОНЦим. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Введение. Развитие таргетной терапии злокачественных новообразований невозможно без адекватных моделей опухолевого роста in vitro и in vivo. В качестве значимых для прогноза эффективности используют, как правило, культуры клеток и/или перевиваемые опухоли человека, растущие в виде подкожных (п/к) ксенографтов у иммуно-дефицитных мышей. Определение специфической мишени
№1 / том 15 / 2016
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ» 117
на таких моделях открывает возможность их использова- плекс, состоящий из транспортного белка а-фетопротеина ния при доклиническом изучении новых таргетных препа- (АФП) и известного индуктора апоптоза. Ранее показано, ратов, в частности направленных на рецепторы к а-фетопро- что препарат активен in vivo на подкожных (п/к) ксено-теину (АФП) (receptors for alfa fetoprotein, ReCAF). графтах некоторых опухолей человека, экспрессирующих Цель исследования — определение экспрессии ReCAF рецепторы АФП. Уровень ингибирования роста п/к опу-на опухолевых моделях, предлагаемых для доклиническо- холей сопряжен с уровнем экспрессии рецепторов в гомо-го изучения АФП-содержащих препаратов. генатах или суспензии опухолей. Наиболее чувствительным Задачи исследования. 1) Адаптация метода компетент- оказался рак молочной железы человека Т47В/АФП+++. ного хемилюминесцентного анализа на специфических Специфичность связывания препарата Аимпила с АФП-моноклональных антителах (МКА) для гомогенатов и куль- рецептором в опухоли ранее не изучали. туры клеток опухолей человека; 2) количественное опре- Цель исследования — определение специфичности деление экспрессии ReCAF в опухолевых моделях. связывания препарата Аимпила с рецепторами АФП Материалы и методы. Использовали гомогенаты в гомогенатах наиболее чувствительной модели опухоли п/к ксенографтов опухолей человека (рак молочной желе- человека. зы T47D, рак толстой кишки SW620) у Balb/c nude мышей Задачи исследования. 1) Разработка твердофазного и культуру клеток рака печени HepG2. Опухоли сонифи- иммунохемилюминесцентного анализа (ИХА) по типу цировали 30 с на льду ультразвуковым гомогенизатором «сэндвич» на специфических моноклональных антителах (BIL0N-150Y, КНР) при 60 Вт (40 %) с последующим цен- (МКА) для гомогенатов и культуры клеток опухолей че-трифугированием 10 мин при 13000 об/мин до получения ловека; 2) количественное определение связывания пре-однородных гомогенатов-супернатантов для иммунохеми- парата Аимпила с АФП-рецептором в п/к ксенографтах люминесцентного анализа (ИХА). Для количественного Т47D/АФП+++. определения ReCAF в гомогенатах использовали ранее Материалы и методы. Для тестирования использовали разработанный ИХА «РЕКАФ», основанный на компетент- конъюгат препарата Аимпила с акридином и гомогенат п/к ном одностадийном анализе присутствующих в образце ксенографтов рака молочной железы человека Т47D/АФП+++ молекул АФП-рецептора с фиксированным количеством у Balb/c nude мышей. Опухоль сонифицировали 30 с на льду меченого конъюгата (АФП-рецептор — акридин) за связы- ультразвуковым гомогенизатором (BIL0N-150Y, КНР) вание со специфическими МКА. Гомогенат нормальной при 60 Вт (40 %) с последующим центрифугированием 10 ткани мыши служил отрицательным контролем, клеточная мин при 13000 об/мин до получения однородных гомоге-суспензия К-562 — положительным контролем. Наличие натов-супернатантов для проведения разработанного нами рецепторов АФП в гомогенатах опухолей подтверждали ИХА. Твердофазный ИХА с высокоспецифичными МКА по стандартной методике Лэммли на полиакриламидном типа IgM к рецептору АФП проводили в 2 стадии: 1) свя-гель-электрофорезе и вестерн-блоттингом с использовани- зывание молекул рецептора АФП в гомогенате T47D ем специфических МКА. с МКА, иммобилизованными на твердой фазе, где серию Результаты. Результаты ИХА показали, что в гомоге- разбавлений гомогената наносили вертикально на планшет нате T47D содержится 9152 Ед/мл, в гомогенате SW620— с МКА и выдерживали 2 ч; 2) на иммобилизованном план-2839 Ед/мл, а в культуре клеток HepG2—4865 Ед/мл ReCAF. шете горизонтально проводили двукратные разбавления Видно, что количество ReCAF убывает в ряду T47D > HepG2 люминесцентного конъюгата и измеряли результаты свя-> SW620. В контрольных и тестируемых образцах по этой зывания на 96-микропланшетном флэш-люминометре Glomax методике выявлено большое количество рецепторов с мо- (Promega, США) после часовой инкубации при комнатной лекулярной массой 67 кДа, которые подтверждены на по- температуре и тщательного промывания микропланшета. лиакриламидном гель-электрофорезе и иммунологически Результаты. Конъюгат Аимпила — акридин в концен-при помощи МКА. трации 800 нг/мл демонстрирует высокую специфичность Заключение. Таким образом, из протестированных мо- связывания с АФП-рецепторами высокочувствительной делей наиболее адекватной для доклинического изучения к нему Т47D/АФП+++ независимо от разбавления гомоге-АФП-содержащих таргетных препаратов можно считать ната. При этом максимальный эффект наблюдался при рак молочной железы человека T47D с аутокринным типом 10-кратном разбавлении гомогената Т47D/АФП+++ без гормональной зависимости, дающий п/к ксенографты «насыщения» центров связывания. Чувствительность сиу иммунодефицитных мышей. стемы ограничена степенью разбавления гомогената. Заключение. Препарат Аимпила проявляет высокую Ж. Р. Черкасова1, С.А. Цуркан1, Г. Б. Смирнова2, специфичность связывания с рецепторами АФП в относи-Ю.А. Борисова2, Е.М. Трещалина2 тельно низкой концентрации 800 нг/мл в чувствительной СПЕЦИФИЧНОСТЬ СВЯЗЫВАНИЯ ПРЕПАРАТА к нему опухоли - раке молочной железы Т47D/АФП+++. АИМПИЛА С РЕЦЕПТОРАМИ а-ФЕТОПРОТЕИНА Увеличение специфичности связывания с рецептором НА ПОВЕХНОСТИ ОПУХОЛИ ЧЕЛОВЕКА T47D до максимального «насыщения» системы возможно при ИЗ КОЛЛЕКЦИИ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА увеличении концентрации Аимпила и плотности гомоге-ООО «ФНЦ«ФармАксесс», Москва; ната. Полученные данные позволяют предположить, что 2ФГБУ «РОНЦим. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва связанные с рецептор-опосредованным действием эффек-Введение. Препарат Аимпила представляет собой за- ты Аимпила будут проявляться в невысоких разовых дозах патентованный в РФ пероральный нековалентный ком- и дозозависимо.
№1 / том 15 / 2016 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
