ЭКСПРЕССИЯ р53 И ЕЕ КОРРЕЛЯЦИЯ С МАРКЕРОМ PCNA ПРИ ПОЛИПОЗНОМ РИНОСИНУСИТЕ Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2024 - Vol. 31, № 3 - P. 98-101

УДК: 616.211-006.5-089 DOI: 10.24412/1609-2163-2024-3-98-101 EDN OZFEFM

ЭКСПРЕССИЯ р53 И ЕЕ КОРРЕЛЯЦИЯ С МАРКЕРОМ PCNA ПРИ ПОЛИПОЗНОМ РИНОСИНУСИТЕ Д.Г. ПАВЛУШ*, Е.Н. ПАВЛУШ**, А.С. ЕРЕМЕЕВА*, И.В. КОВАЛЕВА*

* Тихоокеанский государственный медицинский университет Минздрава России, пр-т Острякова, д. 2, г. Владивосток, 690002, Россия

**ГБУЗ Приморская краевая клиническая больница № 1, ул. Алеутская, д. 53, г. Владивосток, 690000, Россия

Аннотация. Актуальность. Полипозный риносинусит сопровождается эпителиальной метаплазией, формированием воспалительных клеточных инфильтратов, фиброзом и отеком. Целью исследования явилось изучение экспрессии проапопто-тических (p53) и распределение PCNA-иммунореактивных клеток в слизистой оболочке полости носа при полипозном риноси-нусите. Материалы и методы исследования. Исследованы полипы и слизистая оболочка носа, полученные во время хирургической операции (полипотомия) у пациентов женского и мужского пола в возрасте от 40-70 лет (средний возраст 53,7 ± 2,6). Группа исследования представлена пациентами с клиническим диагнозом - полипозный риносинусит без сопутствующей острой воспалительной патологии слизистой оболочки полости носа (n = 50). По гистологической картине полипы были разделены на отечные, эозинофильные и фиброзные. Группа сравнения - пациенты без полипозной патологии, которым была выполнена риносептопластика (n = 20). Результаты и их обсуждение. По сравнению с контролем обнаруживается повышенная экспрессия всех факторов. Основная часть маркируемых клеток располагается в собственной пластинки слизистой оболочки, относительно небольшое число клеток выявляется в составе эпителиального пласта. Отечный, эозинофильный тип полипозного риносинусита характеризуются повышенной экспрессией р53 и PCNA, а при фиброзном типе снижена экспрессия только р53, количественно снижена экспрессия PCNA. Заключение. Полученные результаты изучаются в связи с данными о регулирующей роли апоптоза в патогенезе полипозного риносинусита.

Ключевые слова: продуктивное воспаление слизистой оболочки, метаплазия, апоптоз, р53, PCNA.

EXPRESSION OF р53 AND ITS CORRELATION WITH THE PCNA MARKER IN POLYPOUS RHINOSINUSITIS D.G. PAVLUSH*, E.N. PAVLUSH**, A.S. EREMEEVA*, I.V. KOVALEVA*

'Pacific State Medical University of the Ministry of Health of Russia, 2 Ostryakova Ave., Vladivostok, 690002, Russia "State Budgetary Institution of Healthcare «Primorsky Regional Clinical Hospital No. 1», 53 Aleutskaya str., Vladivostok, 690000, Russia

Abstract. Relevance. Polypous rhinosinusitis is accompanied by epithelial metaplasia, formation of inflammatory cell infiltrates, fibrosis and edema. The purpose of the research was to study the expression of pro-apoptotic cells (p53) and distribution of PCNA-immunorective ones in the nasal mucosa in polypous rhinosinusitis. Materials and methods. Polyps and nasal mucosa obtained during surgery (specifically, polypotomy) in female and male patients aged 40-70 (average age was 53.7 ± 2.6) were studied. The study group included patients with a clinical diagnosis of polypous rhinosinusitis without concomitant acute inflammatory pathology of the nasal mucosa (n = 50). According to the histological picture, polyps were divided into edematous, eosinophilic and fibrous. The comparison group included patients without polypous pathology who underwent rhinoseptoplasty (n = 20). Results and their discussion. Compared to the control, increased expression of all factors is detected. The main part of the marked cells is located in the lamina propria of the mucous membrane; a relatively small number of cells are detected in the epithelial layer. The edematous, eosinophilic type of polypous rhinosinusitis is characterized by increased expression of p53 and PCNA, and in the fibrotic type, the expression of only p53 is reduced, and the expression of PCNA is quantitatively reduced. Conclusion. The obtained results are studied in connection with data on the regulatory role of apoptosis in the pathogenesis of polyposis rhinosinusitis.

Key words: productive inflammation of the mucous membrane, metaplasia, apoptosis, p53, PCNA.

Введение. Полипозный риносинусит (ПРС) является хроническим заболеванием слизистой оболочки полости носа и околоносовых пазух. Он характеризуется рецидивирующим ростом полипов, разрастанием железистого эпителия с пролиферацией провоспали-тельных клеток в собственной пластинке слизистой оболочки и фиброзом глубокого слоя слизистой оболочки [1, 3]. Полипозный риносинусит часто встречается в сочетании с заболеваниями, такими как муко-висцидоз, непереносимость аспирина, астма, хронический ринит, что позволяет предположить многофакторную этиологию и патогенез [3, 6, 10].

По гистологическому строению полипы полости носа делят на отечные, эозинофильные и фиброзные [1, 3]. Ткань полипа инфильтрирована воспалительными клетками, большей частью эозинофилами, покрыта однослойным многорядным реснитчатым эпителием, который может меняться в сторону гиперплазии и плоскоклеточной метаплазии. В поли-позной ткани отмечается повышенная пролифера-тивная активность, которая отличается от нормальной слизистой оболочки полости носа и околоносовых пазух [3, 4].

ВЕСТНИК НОВЫХ МЕДИЦИНСКИХ ТЕХНОЛОГИЙ - 2024 - Т. 31, № 3 - С. 98-101 JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2024 - Vol. 31, № 3 - P. 98-101

Поскольку повышенная пролиферация клеток часто связана с высокой степенью рецидивирования и малигнизации, мы попытались определить биологические особенности ткани полипов. С помощью иммуногистохимических методов и оценить экспрессию проапоптотического фактора ^53), общий знаменатель различных непролиферативных процессов и их взаимосвязь с маркером ядерного антигена пролиферирующих клеток (PCNA) [5, 8].

Цель исследования - определение экспрессии проапоптотического (^53) фактора, а также распределение пролиферирующих PCNA-иммунорективных клеток в слизистой оболочке полости носа при поли-позном риносинусите.

Материалы и методы исследования. Исследованы полипы и слизистая оболочка носа, полученные во время хирургической операции (полипотомия) у пациентов женского и мужского пола в возрасте от 40-70 лет (средний возраст 53,7 ± 2,6). Группа исследования представлена пациентами с клиническим диагнозом - полипозный риносинусит без сопутствующей острой воспалительной патологии слизистой оболочки полости носа (п = 50). По гистологической картине полипы были разделены на отечные, эозино-фильные и фиброзные.

В качестве группы сравнения исследовались два вида образцов слизистой оболочки полости носа. Первая группа (контроль I) - материал слизистой оболочки нижних носовых раковин, полученный у пациентов с диагнозом «искривление перегородки носа», которым была проведена эстетическая риносепто-пластика без полипозной и сопутствующей воспалительной и аллергической патологии (п = 20).

Вторая группа (контроль II) - материал слизистой оболочки нижних носовых раковин (п = 50), полученный у пациентов с клиническим диагнозом «полипозный риносинусит», которые вошли в группу исследования.

Включение пациентов в исследуемую и группу сравнения осуществлялось при наличии документального согласия пациента и направления в отори-ноларингологическое отделение Владивостокской клинической больницы № 1.

Для иммуногистохимического исследования материал фиксировали в 10 % нейтральном формалине на фосфатном буфере в течение 24 часов, после чего промывали 0.1 М натрий-фосфатном буфере (pH 7,2) с 6-7 кратной сменой раствора, промывали и заливали в парафин по общепринятой методике. Срезы толщиной 10 мкм монтировали на предметные стекла, депарафинировали и инкубировали с кроличьими поликлональными первичными антителами против p53, PCNA (Abcam, США), разведенными в отношении 1:250 в фосфатном буфере, содержащем Тритон Х-100 и нормальную козью сыворотку, в течение ночи при комнатной температуре. После промывки срезы в течение 1 ч. Инкубировали в растворе

биотинилированных вторичных антител против IgG кролика, при разведении 1:100 (Vector Laboratories, США), а затем в растворе авидин-пероксидазного комплекса (Vectastain ABC Kit, Vektor Laboratories, США). Срезы затем промывали фосфатным буфером в течение 10-20 минут, обезвоживали и заключали в монтирующую среду Витрогель. В качестве контроля из среды исключали первичные антитела, окрашивание клеток отсутствовало.

Препараты просматривали в световом микроскопе AxioScope A1 (Carl Zeiss, Германия) и фотографировали с помощью цифровой камеры AxioCam ICc3 (CarlZeiss, Германия). Относительную плотность клеток вычисляли в единице объема (из расчета на 0,01 мм2) ткани с учетом поправки на толщину среза и диаметр ядра. Статистический анализ результатов проводили с использованием программ Microsoft Excel 2010 и Statistica 10. Значение исследуемых объектов отличалось от нормального распределения (для проверки использовали критерии Шапиро-Уилка). Первоначально использовали однофакторный дисперсионный анализа (one-way ANOVA), с последующим анализом Тьюки. Статистическую достоверность между сравниваемыми группами определяли с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни (U-критерий). В сравниваемых группах количественные данные представляли в виде медианы и межквартильных интервалов Med (Нкв, Вкв), где Med - медиана, Нкв - нижний квартиль, Вкв - верхний квартиль. Критический уровень значимости в данном исследовании принимали p<0,05.

Результаты и их обсуждение. Результаты, полученные нами при помощи иммуногистохимиче-ского анализа представлены на рис. 1. Повышенная экспрессия маркера р53 представлена диффузно и распределена во всех слоях ткани эозинофильного типа полипа. Ниже средних значений экспрессия р53 и PCNA обнаружена в ткани фиброзного типа полипов, умеренные значения получены в отечном типе. В группе сравнения показатели PCNA были достоверно ниже, чем значения в ткани полипов (рис.).

Можно считать, что хроническое воспаление вызывает рост полипозной ткани в полости носа и околоносовых пазух, приводит к образованию разных популяций клеток, которые могут или элиминироваться через апоптоз, а другие клетки могут способствовать гиперплазии и метаплазии ткани слизистой оболочки в верхних дыхательных путях.

Наши результаты соотносятся с другими исследованиями и показывают, что повышенная экспрессия р53 играет важную роль в патогенезе полипоз-ного риносинусита и может препятствовать малигнизации [7, 9, 10].

Исследование экспрессии р53 и его связь с РCNA дает понимание о сложных биологических процессах и пролиферации, молекулярных механизмах саморегуляции и контроля в ткани полипов [6, 10, 11].

JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2024 - Vol. 31, № 3 - P. 98-101

no

13.5 12.0 11.S 11.0 10.5 10.0

Литература / References

<f

J*

a)

6)

7.5-

7.0-

6.5-

a 6.0-

3

X 5.5-

8

>s 5.0-

о

m 4.5-

ï

s 4.0-

о

с о 3.5-

I

>. s 3.0-

I

X 2.5-

л

i 20-

о 1.5-

ц

с 1.0-

05-

0.0-

fl

jr

//

•шУ 'У ■A- ej>

Jf J*

S *

B)

J?

Г)

Рис. Сравнительный анализ pS3 (a, 6), PCNA (в, г) - иммунопозитивной площади слизистой оболочки полости носа между разными типами полипов.

Примечание: а, в - эпителий, б,г - собственная пластинка. Результаты представлены в виде Med (Нкв, Вкв), * - различия статистически значимы в сравнении с контролем, ** - попарное сравнение (при p < 0,05; критерий Манна-Уитни)

Заключение. Полипозный риносинусит характеризуется продуктивным воспалением, которое сопровождается гиперплазией слизистой оболочки и рецидивирующим ростом полипов. Клинико-морфо-логические типы полипов показывают неодинаковую экспрессию факторов апоптоза и пролиферации. Наименьшая экспрессия р53, отмечается при фиброзном типе, наиболее высокая - при эозинофильном типе, умеренная при отечном типе полипов. Различная экспрессия проапоптотических факторов противостоит воспалительным пролиферативным процессам и является потенциальной мишенью фармакотерапии для достижения контроля полипозного рино-синусита, особенно после хирургического лечения.

1. Павлуш Д.Г., Павлуш E.H., Матвеева Н.Ю., Калиниченко С.Г., Дюйзен И.В. Хронический полипозный риносинусит: этиопатогенетические механизмы его возникновения // Медицина. 2018. Т. 6, № 2. С. 69-78. DOI: 10.29234/2308-9113-2018-6-2-6978 / Pavlush DG, Pavlush EN, Matveeva NYU, Kali-nichenko SG, Dyuizen IV. Khronicheskii polipoznyi rinosinusit: ehtiopatogeneticheskie mekhanizmy ego vozniknoveniya [Chronic polyposis rhinosinusitis: eti-opathogenetic mechanisms of its occurrence]. Med-itsina. 2018;6:69-78. Russian.

2. Павлуш Д.Г., Матвеева Н.Ю. Локализация NO-синтазы и малых апоптотических молекул в слизистой оболочке полости носа при полипозном ри-носинусите // Тихоокеанский медицинский журнал. 2022. № 3. С. 63-69. DOI: 10.34215/1609-1175-2022-363-69 / Pavlush DG, Matveeva NYU. Lokalizatsiya NO-sintazy i malykh apoptoticheskikh molekul v slizistoi ob-olochke polosti nosa pri polipoznom rinosinusite [Localization of nitric oxide synthases and small apoptotic molecules in the nasal mucosa in polypoid rhinosinusitis]. Tikhookeanskii meditsinskii zhurnal. 2022;3:63-9. Russian.

3. Brescia G., Alessandrini L., Giacomelli L., Par-rino D., Zanotti C., Tealdo G., Franz L., Carraro V., Barion U., Marioni G. A classification of chronic rhinosinusitis with nasal polyps based on structured histopathol-ogy // Histopathology. 2020. Vol. 76, № 2. P. 296-307. DOI: 10.1111/his.13969 / Brescia G, Alessandrini L, Gia-comelli L, Parrino D, Zanotti C, Tealdo G, Franz L, Car-raro V, Barion U, Marioni G. A classification of chronic rhinosinusitis with nasal polyps based on structured his-topathology. Histopathology. 2020;76(2):296-307. DOI: 10.1111/his.13969.

4. Brescia G., Zanotti C., Parrino D., Barion U., Marioni G. Nasal polyposis pathophysiology: Endotype and phenotype open issues // Am J Otolaryngol. 2018. Vol. 39, № 4. P. 441-444. DOI: 10.1016/j.am-joto.2018.03.020 / Brescia G, Zanotti C, Parrino D, Barion U, Marioni G. Nasal polyposis pathophysiology: En-dotype and phenotype open issues. Am J Otolaryngol. 2018;39(4):441-4. DOI: 10.1016/j.amjoto.2018.03.020.

5. Cheng X., Ferrell J.E. Jr. Apoptosis propagates through the cytoplasm as trigger waves // Science. 2018. Vol. 10, № 361. P. 607-612. DOI: 10.1126/sci-ence.aah4065 / Cheng X, Ferrell JE Jr. Apoptosis propagates through the cytoplasm as trigger waves. Science. 2018;10(361):607-12. DOI: 10.1126/science.aah4065.

6. European Position Paper on Rhinosinusitis and Nasal Polyps 2020 / Fokkens W.J. [et al] // Rhinology. 2020. № 20. P. 1-464. DOI: 10.4193/Rhin20.600 / Fokkens WJ, et al. European Position Paper on Rhinosi-nusitis and Nasal Polyps 2020. Rhinology. 2020;20:1-464. DOI: 10.4193/Rhin20.600.

7. Huriyati E., Darwin E., Yanwirasti Y., Wahid I. Differences in Expression of Inflammatory Mediator in Mucosal and Polyp Tissue between Chronic Rhinosinusitis and Recurrent Chronic Rhinosi-nusitis // Open Access Maced J Med Sci. 2019. Vol. 31, № 7. P. 1733-1738. DOI: 10.3889/oamjms.2019.341 / Huriyati E, Darwin E, Yanwirasti Y, Wahid I. Differences in Expression of Inflammatory Mediator in Mucosal and Polyp Tissue between Chronic Rhinosinusitis and Recurrent Chronic Rhinosinusitis. Open Access Maced J Med Sci. 2019;31(7):1733-8. DOI: 10.3889/oamjms.2019.341.

8. Klingler A.I., Stevens W.W., Tan B.K., Peters A.T., Poposki J.A., Grammer L.C., Welch K.C., Smith S.S., Conley D.B., Kern R.C., Schleimer R.P., Kato A. Mechanisms and biomarkers of inflammatory endotypes in chronic rhinosinusitis without nasal polyps // J Allergy Clin Immunol. 2021. Vol. 147, № 4. P. 1306-1317. DOI: 10.1016/j.jaci.2020.11.037 / Klingler AI, Stevens WW, Tan BK, Peters AT, Poposki JA, Grammer LC, Welch KC, Smith SS, Conley DB, Kern RC, Schleimer RP, Kato A. Mechanisms and biomarkers of inflammatory endotypes in chronic rhinosinus-itis without nasal polyps. J Allergy Clin Immunol. 2021;147(4):1306-17.

Jfi

JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2024 - Vol. 31, № 3 - P. 98-101

DOI: 10.1016/j.jaci.2020.11.037.

9. Pan L., Liu Z. Classification of chronic rhinosinusitis with nasal polyps based on eosinophilic inflammation // Zhonghua Er Bi Yan Hou Tou Jing Wai Ke Za Zhi. Chinese. 2019. Vol. 7, № 54. Р. 222-226. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-0860.2019.03.013 / Pan L, Liu Z. Classification of chronic rhinosinusitis with nasal polyps based on eosinophilic inflammation. Zhonghua Er Bi Yan Hou Tou Jing Wai Ke Za Zhi. Chinese. 2019;7(54):222-6. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-0860.2019.03.013.

10. Savlevich E., Gaganov L., Kochnova M., Egorov V. In search of diverse endotypes of chronic rhinosinusitis with Nasal polyps in patients living in different geographical regions of the Russian Federation: pilot study // Clinical and Translational Allergy. 2017. Vol. 7, № 3. P. 11 /

Savlevich E, Gaganov L, Kochnova M, Egorov V. In search of diverse en-dotypes of chronic rhinosinusitis with Nasal polyps in patients living in different geographical regions of the Russian Federation: pilot study. Clinical and Translational Allergy. 2017;7(3):11.

11. Zhang Y., Gevaert E., Lou H., Wang X., Zhang L., Bachert C., Zhang N. Chronic rhinosinusitis in Asia // J Allergy Clin Immunol. 2017. Vol. 140, № 5. Р. 1230-1239. DOI: 10.1016/j.jaci.2017.09.009 / Zhang Y, Gevaert E, Lou H, Wang X, Zhang L, Bachert C, Zhang N. Chronic rhinosinusitis in Asia. J Allergy Clin Immunol. 2017;140(5):1230-9. DOI: 10.1016/j.jaci.2017.09.009.

Библиографическая ссылка:

Павлуш Д.Г., Павлуш Е.Н., Еремеева А.С., Ковалева И.В. Экспрессия р53 и ее корреляция с маркером PCNA при полипозном ри-носинусите // Вестник новых медицинских технологий. 2024. № 3. С. 98-101. DOI: 10.24412/1609-2163-2024-3-98-101. EDN OZFEFM.

Bibliographic reference:

Pavlush DG, Pavlush EN, Eremeeva AS, Kovaleva IV. Ekspressiya p53 i ee korrelyatsiya s markerom PCNA pri polipoznom rinosinusite [Expression of р53 and its correlation with the PCNA marker in polypous rhinosinusitis]. Journal of New Medical Technologies. 2024;3:98-101. DOI: 10.24412/1609-2163-2024-3-98-101. EDN OZFEFM. Russian.