CC BY
31
JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2018 - V. 25, № 1 - P. 79-86
УДК: 612.822.014.1:577.112 DOI: 10.24411/1609-2163-2018-16014
ЭКСПРЕССИЯ мРНК HIF-1a И HIF-3a,УРОВЕНЬ НИТРОТИРОЗИНА, цГМФ И ИНТЕРЛЕЙКИНОВ В ГОМОГЕНАТЕ МОЗГА МОНГОЛЬСКИХ ПЕСЧАНОК С ОСТРЫМ НАРУШЕНИЕМ МОЗГОВОГО
КРОВОТОКА
С.С. КИРЕЕВ
ФГБОУ ВО «Тульский государственный университет», медицинский институт, ул. Болдина, 128, Тула, 300012, Россия
Аннотация. Установлено, что моделирование ишемии головного мозга приводит к значительному увеличению экспрессии матрично рибонуклеиновой кислоты hypoxia-inducible factor 1-alpha и незначительной экспрессии матричная рибонуклеиновая кислота hypoxia-inducible factor 3а на 4-й день модельной патологии в ткани головного мозга. Курсовая инъекция исследуемых лекарств в течение 4 дней после экспериментальной ишемии приводит к значительному увеличению экспрессии Hypoxia-inducible factor 1-alpha, приводящего к этой глутоксиму этой серии (в 37 раз выше контрольной группы) >selenase (в 20 раз более высокий контроль) > пирацетам (в 17 раз более высокий контроль) > глутаредоксин (в 15 раз более высокий контроль). Это увеличение экспрессии hypoxia-inducible factor 1-alpha увеличивает устойчивость нейронов к гипоксии. Следует отметить, что инъекции глутаредоксина приводили к увеличению матрично рибонуклеиновой кислоты экспрессии hy-poxia-inducible factor 3-alpha по сравнению с контрольными значениями, а селеназа и глютоксим существенно не изменяли экспрессию этого гена. Результаты этих исследований показывают, что по сравнению с животными, обдуманными зверем, группа песчанок с инсультом показала значительное увеличение уровней нитротирозина, tumor necrosis factor alpha interfering и снижение уровней guanine cyclic monophosphate, interleukin-4. Курс лечения селеназой, глутоксимом и гутаредоксином повышает уровень interleukin 4 и снижает уровень нитротирозина, tumor necrosis factor alpha- и guanine cyclic monophosphate. Результаты подтверждают наличие нейропротективных свойств в селеназе, глу-токсиме и глутаредоксине. Эти свойства были идентифицированы по их способности восстанавливать баланс тиолдисульфида, повышать уровень interleukin 4 и экспрессию hypoxia-inducible factor 1-alpha и снижать высокие уровни нитротирозина и провоспалительных интерлейкинов при ишемиче-ском повреждении.
Ключевые слова: церебральная ишемия, Hypoxia-inducible factor 1-alpha, интерлейкины, циклический гуанозинмонофосфат, нитротирозин, селеназа, глутоксим, глутаредоксин.
Введение. Высокий риск смертности и ин-валидизации в последствие острой церебральной ишемии диктует необходимость поиска новых подходов фармакологической коррекции данной патологии [1,2,9]. Поиск эффективных нейропротекторов на сегодня идет по двум направлениям: первое это повышение устойчивости нервной ткани к условиям гипоксии и второе ограничение интенсивности оксидатив-ного и нитрозативного стресса, снижение местной воспалительной реакции и последствий ишемии/гипоксии тканей [1,10].
В свете проблемы гипоксии при церебральных патологиях головного мозга, большое значение уделяется регуляторным белкам, которые индуцируются в ответ на гипоксию -белкам семейства Hypoxia-inducible factor 1-alpha (HIFs). Данные белки играют ведущую роль в системном ответе организма на сниже-
ние кислорода, и синтезируются в большинстве тканей, а максимальная их экспрессия отмечена в нейронах [11-18].
Гипоксия является фактором, при котором клетки переходят на нитратно-нитритное дыхание с образованием оксида азота (NO), который в условиях оксидативного стресса в нервной ткани образует токсичные активные дериваты пероксинитрит (ONOO-), ион нитрозония (NO+), нитроксил (NO) и диазоттриоксид (N2O3), которые являются главными факторами нитро-зирующего стресса при ишемии. При фокальной форме ишемии к 3-4 суткам гиперпродукция токсичных форм азота в условиях сохраняющегося оксидативного стресса является результатом действия индуцибелной NOS, которая интенсивно продуцируется активированными глиальны-ми клетками и клетками воспаления при участии
провоспалительных цитокинов, tumor necrosis factor alpha (TNF-a), interleukinlfi (IL-1/3) [6].
Факторы Hypoxia-inducible factor 1-alpha (HIF-la) и hypoxia-inducible factor 3-alpha (HIF-3a), которые участвуют в формировании основы долговременной адаптации к гипоксии, а также регуляция гиперпродукции АФА и активности NOS являются перспективными мишенями для разработки стратегии лечения острых нарушений мозгового кровообращения, в генезе которых ведущую роль играет гипоксия. В литературе имеются убедительные данные положительного действия индукторов Hypoxia-inducible factor 1-alpha (HIF-la) и ингибиторов NOS по ограничению прогрессирования ишемии мозга [11].
Цель исследования - изучить характер экспрессии матричной рибонуклеиновой кислоты (мРНК) HIF-la и HIF-3a, уровень цитокинов guanine cyclic monophosphate, interleukin-4. (IL-4), (TNF-a), (IL-ip), нитротирозина и циклического гуанозинмонофосфата (цГМФ) в гомогенате мозга монгольских песчанок с экспериментальной острой недостаточности мозгового кровообращения (ОНМК) на фоне курсового лечения модуляторами системы глутатиона - селеназы, глутоксима и глуторедоксина.
Объекты и методы исследования. Экспериментальная часть выполнена на 60 самцах монгольских песчанок (Meriones unguiculatus) массой 60-80 г. Животные содержались на стандартном рационе питания и питья с 12 часовым циклом смены света/темноты на протяжении всего эксперимента. Исследования на животных проводились в соответствии с Директивой Европейского Союза 2010/10/63 EU. Экспериментальные группы формировали по 10 особей одинакового веса в группе. Согласно с программой исследования, использовали общепринятую в данное время модель экспериментального острого нарушения мозгового кровообращения - необратимую одностороннюю перевязку общей сонной артерии. Операцию выполняли под тиопенталовым наркозом (40 мг/кг), путём хирургического доступа выделяли общую сонную артерию, подводили под нее шелковую лигатуру и перевязывали. Для изучения действия препаратов животным вводили селеназу (Arzneimittel GmbH, Germany) -50 мкг/кг, глутоксим (ФАРМА-ВАМ, Москва) -50 мг/кг и глутаредоксин (Sigma, Aldrich) -200 мкл/кг в течение всего срока наблюдения
(4 суток). Препараты вводили внутрибрюшинно 1 раз в сутки. Животным контрольной группы на протяжении эксперимента внутрибрюшин-но вводили физиологический раствор в эквивалентном объеме. Животным группы сравнения по той же схеме вводили пирацетам в дозе 500 мг/кг. В качестве интактной группы использовали ложнооперированных животных, которым выделяли сонную артерию, но не перевязывали. По окончании эксперимента согласно протоколу исследования, животных наркотизировали тиопенталом натрия (40 мг/кг), декапитировали, вскрывали черепную коробку и извлекали головной мозг.
Исследование биохимических маркеров проводили в гомогенате головного мозга. Мозг промывали в 0,25 М сахарозном буфере (рН 7,4) охлажденном до 20C и измельчали в 10 кратном объеме этого же буфера, используя гомогенизатор Silent Crusher S (Heidolph). Грубую часть гомогената удаляли путем центрифугирования при 40С на центрифуге Eppendorf-5804R при 3000 об/мин в течение 20 мин. Содержание нитротирозина, цГМФ, IL-4, IL-ip, TNF-a определяли с помощью твердофазного иммуно-ферментного анализа методом ELISA с использованием тест-наборов («HyCult biotechnology», «e-Bioscience» и «ENZO») в соответствии с прилагаемыми к наборам инструкциями.
Полимеразно-цепная реакция в режиме реального времени. Для определения уровня экспрессии исследуемых генов использовали ам-плификатор CFX96™Real-Time PCR Detection Systems («Bio-Rad Laboratories, Inc.», США) и набор реактивов для проведения ПЦР-РВ в присутствии SYBR Green R-402 («Синтол», Россия). Финальная реакция смеси для амплификации включала краситель SYBR Green, ДНК - поли-меразу SynTaq с игибирующими активность фермента антителами, по 0,2 мкл прямого и обратного специфических праймеров, dNTP -дезоксинуклеозидтрифосфаты, 1 мкл матрицы (кДНК). Реакционную смесь доводили до общего объема 25 мкл добавлением деионизирован-ной Н2О. Специфические пары праймеров (5'-3') для анализа исследуемых и референс генов были подобраны с помощью программного обеспечения PrimerBlast (www.ncbi.nlm.nih. gov/tools/primer-blast) и изготовлены фирмой ThermoScientific, США. Амплификация происходила при таких условиях: инициированная денатурация 95°C - 10 мин.; далее 50 циклов: денатурация - 95°С, 15 сек., отжиг праймеров -
JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2018 - V. 25, № 1 - P. 79-86
58-63°С, 30 сек., эллонгация - 72°С, 30 сек. Регистрация интенсивности флуоресценции происходила автоматически в конце стадии эллон-гации каждого цикла по каналу автоматически SybrGreen. В качестве референ-гена для определения относительного значения изменения уровня экспрессии исследуемых генов был использован ген actin, beta (Actb). Нормальность распределения оценивали по критериям Колмогорова-Смирнова (D) и Shapiro-Wilk (W). Полученные данные были проанализированы вариационно-статистическим методом с использованием критерия [/-параметра Манна-Уитни. Результаты исследования обработаны с применением статистического пакета лицензионной программы «STATISTICA® for Windows 6.0» (StatSoft Inc., № AXXR712D833214FAN5). Все результаты представлены в виде M±m, где М -среднее значение, m - ошибка среднего, для всех видов анализа статистически значимыми считали различия при р<0,05.
Таблица 1
Показатели экспрессии мРНК HIF-1a в гомогенате мозга монгольских песчанок с ОНМК и на фоне лечения (M±m, п=10)
Группа животных Экспрессии мРНК HIF-1a,y.e.
По отношению к ЛО По отношению к контролю
Ложно-оперированные 1.00000±0.32381
ОНМК 1.00000±0.21165
ОНМК+селеназа 0.88749±0.06702 20.36108± 1.03035*
ОНМК+ глутоксим 1.56550±1.27181 37.89533±7.18197*
ОНМК+глутаредоксин 0.70213±0.13905 15.74745±3.05498*
ОНМК+пирацетам 0.73577±0.30162 17.07044±4.36168*
Примечание: *- отличия достоверны (р<0,05) по отношению к группе контроля
Результаты и их обсуждение. Анализ экспрессии мРНК ШF-1a и HIF-3a у животных с ОНМК представлен в табл. 1 и 2. Показатели экспрессии мРНК HIF-1a в группах, получавших исследуемые препараты, имеют относительно контроля более высокие цифровые значения, чем соответствующие значения по отношению к ЛО группе. Характер экспрессии мРНК HIF-3a в экспериментальных группах получавших модуляторы ТДС, имеет обратную зависимость — более низкое значение по отношению к контролю и более высокое значение в отношении ЛО, что может объясняться экспрессией данной изоформы в более раннем гипоксическом периоде.
Таблица 2
Показатели экспрессии мРНК ИШ-За в гомогенате мозга монгольских песчанок с ОНМК и на фоне лечения (М±т, п=10)
Группа животных Экспрессии мРНК HIF-3a,ye
По отношению к ЛО По отношению к контролю
Ложно-оперированные 1.00000±0.23806
ОНМК+селеназа 1.00000±0.08766
ОНМК+глутоксим 0.12623±0.07283 0.08465±0.04886
ОНМК+глутаредоксин 2.66670±0.26479 1.78905±0.17758
ОНМК+пирацетам 9.02424±2.68003 6.05445± 1.84938*
ОНМК+пирацетам 1.65044±0.12303 1.10734±0.08257
Примечание: * - отличия достоверны (р<0,05) по отношению к группе контроля
Рис. 1. Экспрессия мРНК HIF-1a
Рис. 2. Экспрессия мРНК Ш¥-3а 1 - селеназа;
2 - глутоксим; 3 - глутаредоксин; 4 - пирацетам, с-контроль
Наглядно видно из рис 1,что курсовое назначение исследуемых препаратов в течение 4 суток после модельной ОНМК, приводит к достоверному повышению экспрессии HIF-1a, лидирует в этом ряду глутоксим (в 37 раз выше контрольной группы)>селеназа (в 20 раз выше
контроля) >пирацетам (в 17 раз выше контроля) > глутаредоксин (в 15 раз выше контроля). Такое индуцирующее действие исследуемых препаратов на экспрессию HIF-1a имеет достаточно важное значение в условиях гипоксии. Стабилизированная HIF-1, впоследствии активирует экспрессию генов способствующих клеточной адаптации к этим условиям. К ним относятся EPO, VEGF, HSPs, белки увеличивающие метаболизм глюкозы (переносчики глюкозы, гликолитические ферменты). Некоторые из генов, таких как ЕРО и VEGF, обеспечивают прямую защиту клеток от гипоксического стресса. Другие, такие как HSPs, могут повышать уровень GSH, способствуя стабилизации HIF-1. Кроме того ряд зарубежных работ указывает на то, что HIF-1 может повышать уровень GSH в мозге крыс, подверженных гипоксии (Shrivastava et al, 2008), что приведет к повышению выживаемости нейронов в условиях гипоксии и истощении антиоксидантной защиты клетки. В ранних наших исследованиях показана способность у изучаемых препаратов повышать уровень GSH в условиях гипоксии/ишемии [3-5], что с другой стороны обеспечивает оптимальные условия для стабилизации HIF-1. Все вышесказанное указывают на то, что поддержание уровня GSH и снижение токсичности ROS является частью HIF-1-опосредованной нейрозащиты под действием проводимой терапии [12,14,15]. Как видно из табл. 2 и рис. 2 достоверные отличия ( р< 0,05) в отношении экспрессии HIF-3a, показал только глуторедоксин (в 6 раз выше группы контроля). Изменения этого показателя при лечении остальными препаратами носил лишь характер тенденции а селеназа вообще оказалась не эффективной в отношении экспрессии HIF-3a. Выявленный у глутаредоксина эффект, может быть обусловлен стабилизирующей и индуцирующей ролью аддуктов глутатиона, образующихся в рекциях S-глутатионилирования под действием GRx-1 в условиях ишемии [15]. Полученные в ходе эксперимента данные свидетельствуют, что экспрессия HIF-1a, обеспечивает защиту на более поздних этапах гипоксии, тогда как HIF-3a, оказывает позитивное модулирующее действие в первые часы ишемии, что согласуется с литературными источниками [11].
Локальное воспаление является обязательным последствием оксидативного и нитро-зирующего стресса, развивающегося вследствие ишемии мозга, что приводит к активации
микроглии. Активированная микроглия является источником гиперпродукции АФА, АФК и индуцибельной NOS. В полученном нами на 4 сутки ишемии гомогенате мозга монгольских песчанок отмечено статистически значимое (р<0,05) повышение уровня нитротирозина (в 4.3 раза), TNF-a (в 4,6 раза), IL-1ß (в 2,5 раза) с оновременным снижением цГМФ на 33,3%, что говорит о повышении продукции токсичных дериватов оксида азота и снижении биодоступности NO в условиях гипоксии. Уровень IL-4 снизился на 82,9% в сравнении с ложно-оперированными животными, что свидетельствует о наличии локальной воспалительной реакции в зоне экспериментальной ишемии (табл. 3).
Таблица 3
Уровень цГМФ, нитротирозина и цитокинов при экспериментальном ОНМК и при терапии модуляторами ТДС (M±m, «=10)
Примечание: * - изменения статистически значимы по отношению к группе ЛО (р<0,05), # - изменения статистически значимы по отношению к группе контроля (р<0,05)
Курсовая терапия модуляторами системы глутатиона приводит к статистически значимому (р<0,05) повышению содержания проти-воспалительного IL-4 (селеназа на 11,8%, глу-токсим на 23,7% и глутаредоксин на 19,7% в сравнении с группой контроля). Такое повышение IL-4 подавляет провоспалительную активность макрофагов и секрецию ими TNF-a и IL-lfi. Это выражается в достоверном (р<0,05) снижении содержания TNF-a у всех изучаемых препаратов (селеназа на 69,6%, глутоксим на 75,9%, глутаредоксин на 31,6% в сравнении с контрольной группой), снижение уровня IL-lfi не показало статистически значимых отличий в сравнении с группой контроля и носило лишь характер тенденции. Описанное изменение соотношений между противовоспалительными и провоспалительными цитокинами первое
Группы животных Нитротиро-зин. нмоль/г ткани TNF-a, пг/мл IL-1ß, пг/мл IL-4, пг/мл цГМФ, мМоль/мл
ЛО 10,90±1,28 0.17±0.0б1 0.1б±0.04б 12,9±0,25 0,12±0,0032
ОНМК 47.б0±4.20* 0.79±0.18* 0.4±0.13* 7.05±0.14* 0.09±0.0032*
ОНМК+селе наза 21,40±2,24# 0.24±0.02б# 0,39±0,057 7,88±0,52# 0,08±0,0021#
ОНМК+глуто ксим 12,40±1,15# 0,19±0,038# 0.37±0.07б 8,72±1,28# 0,037±0,004#
ОНМК+глута редоксин 11,90±1,13# 0,54±0,2# 0,31±0,12 8,44±0,75# 0.045 ±0.038#
ограничивает локальную воспалительную реакцию в зоне ишемической полутени, что повышает шансы нервной клетки к выживанию, и второе предотвращает цитокин- опосредованное повышение активности индуцибельной NOS. Последнее, проявляется в снижении гиперпродукции NO (снижение уровня цГМФ се-леназа на 11,1%, глутоксим на 58,9%, глутаре-доксин на 50%), а также уровня токсичных дериватов оксида азота-нитротирозина (в группе с введением глутоксима - на 73,94%; селеназы - на 55%; глутаредоксина - на 75%). Все вышеперечисленное приводит к снижению цитоток-сического отека в зоне пенумбры в острый период ишемии и ограничению реакций нитро-зирующего стресса. Снижение концентрации провоспалительных цитокинов под действием изучаемых препаратов возможно оказывает по нашему мнению позитивное регулирующее действие на активность редокс-чувствительных транскрипционных факторов (NF-1, AP-1, NF-kB), главных участников апоп-тотического и некротического сценария гибели клетки. Таким образом, свойства селеназы, глутоксима и глутаредоксина ограничивать реакции оксидативного и нитрозативного стресса за счет их антиоксидантного, энерготропного и митопротективного действия [3-5,7,8] дополняется способностью снижать цитотоксический отек в зоне ишемии и повышать устойчивость нейрона к гипоксии, что объясняет возможность их использования в качестве средств, вторичной нейропротекции.
Выводы:
1. Моделирование ОНМК приводит к достоверному повышению мРНК HIF-1a, HIF-3a нитротирозина, TNF-a и И-1р, с одновременным снижением Д-4 и цГМФ.
2. Курсовое назначение модуляторов ТДС (селеназы, глутоксима и глуторедоксина) приводит к статистически значимой экспрессии мРНК HIF-1a, что определяет важность этого гена в отдаленном периоде гипоксии.
3. Влияние исследуемых препаратов на экспрессию мРНК HIF-3a не оказались достоверными, кроме группы глутаредоксина, что по-видимому связано со способностью у препарата повышать экспрессию данного гена в первые часы гипоксии.
4. Курсовое введение препаратов (селеназы, глутоксима и глутаредоксина) приводило к ограничению реакций нитрозирующего стресса (снижение значений нитротирозина и цГМФ)
5. Терапия изучаемыми препаратами оказало позитивное влияние на соотношение про-воспалительного цитокина TNF-a и К-4 в пользу последнего.
6. Введение селеназы, глутоксима и глуто-редоксина не оказало достоверных отличий от группы контроля на показатель
7. Полученные данные являются экспериментальным обоснованием для применения глутоксима, глутаредоксина и селеназы в комплексной терапии острого нарушения мозгового кровотока.
THE MRNA EXPRESSION OF HIF-1A AND HIF-3A, NITROTYROSINE, СGMP AND INTERLEUKINS IN THE MONGOLIAN GERBILS BRAIN WITH ACUTE ISCHEMIA
S.S. KIREEV
Tula State University, Medical Institute, Boldina street, 128, Tula, 300012, Russia
Abstract. It has been established that the cerebral ischemia modeling leads to a significant increase matrix ribonucleic acid expression of hypoxia-inducible factor 1-alpha and insignificant mRNA expression of hypoxia-inducible factor 3-alpha on the 4th day of model pathology in brain tissue. The course injection of the study drugs within 4 days after the experimental ischemia leads to a significant increase in the expression of hypoxia-inducible factor 1-alpha, leading in this series glutoxim (37 times higher than the control group) >selenase (20 times higher control) >pyratsetam (17 times higher control) > glutaredoxin (15 times higher control). This increase in hypoxia-inducible factor 1-alpha expression increases the neuron's resistance to hypoxia. It should be noted that injections of glutaredoxin resulted in an increase in matrix ribonucleic acid of hypoxia-inducible factor 3-alpha expression relative to control values, and selenase and glutoxim did not significantly change the expression of this gene. The results of these studies show that compared with the sharm operated animals, the group of gerbils with stroke showed significant increase of ni-trotyrosine, tumor necrosis factor alpha interleukin 4 , levels and a decrease in interleukin 4 guanine cyclic monophosphate levels. A course of treatment with selenase, glutoxim and gutaredoxin increase of IL-4 level
JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2018 - V. 25, № 1 - P. 79-86
and decrease nitrotyrosine, tumor necrosis factor alpha- and guanine cyclic monophosphate levels. The results confirm the presence of neuroprotective properties in selenase, glutoxim and glutaredoxin. These properties were identified by their ability to restore the thiol-disulfide balance, to raise the level of interleukin 4 and the expression of hypoxia-inducible factor 1-alpha and reduce the high levels of nitrotyrosine and proinflammatory interleukins in ischemic brain injury, resulting in the reduction of neuronal loss following a stroke.
Keywords: cerebral ischemia, Hypoxia-inducible factor 1-alpha, interleukins, cGMP, nitrotyrosine, sele-nase, glutoxim, glutaredoxin.
Литература
References
1.Беленичев И.Ф., Черний В.И., Нагорная Е.А. Ней-ропротекция и нейропластичность. Логос, 2015. 510 с.
1. Belenichev IF, Cherniy VI, Nagornaya EA. Neyro-protektsiya i neyroplastichnost' [Neuroprotection and neuroplasticity]. Logos; 2015. Russian.
2. Беленичев И.Ф. Рациональная нейропротекция. Донецк: Издатель Заславский А.Ю., 2009. С. 262.
2. Belenichev IF. Ratsional'naya neyroprotektsiya [Rational neuroprotection]. Donetsk: Izdatel' Zaslavskiy A.Yu.; 2009. Russian.
3. Беленичев И.Ф., Литвиненко Е.С. Ферментативное и неферментативное звено тиол-дисульфидной системы в головном мозге экспериментальных животных с церебральной ишемией: эффекты селена-зы // Фармаколопя та лжарська токсиколопя. 2015. № 1. С. 13-16.
3. Belenichev IF, Litvinenko ES. Fermentativnoe i nefermentativnoe zveno tiol-disul'fidnoy sistemy v golovnom mozge eksperimental'nykh zhivotnykh s tserebral'noy ishemiey: effekty selenazy [Enzymatic and non-enzymatic link of thiol-disulfide system in the brain of experimental animals with cerebral ischemia: effects of selenase]. Farmakologiya ta likars'ka toksikologiya. 2015;1:13-6. Russian.
4. Беленичев И.Ф., Литвиненко Е.С. Нейропротек-тивные эффекты при модуляции глутатионовой системы головного мозга, влияние на летальность, неврологический дефицит, оксиддативный стресс в условиях экспериментальной ОНМК // Вкник проблем бюлогл i медицини. 2016. Т. 3, № 2. С. 94-99.
4. Belenichev IF, Litvinenko ES. Neyroprotektivnye effekty pri modulyatsii glutationovoy sistemy golovno-go mozga, vliyanie na letal'nost', nevrologicheskiy de-fitsit, oksiddativnyy stress v usloviyakh eksperimen-tal'noy ONMK [Neuroprotective effects in the modulation of the glutathione system of the brain, the effect on lethality, neurological deficit, oxidative stress in experimental ONM]. Visnik problem biologiï i meditsini. 2016;3(2):94-9.
5. Беленичев И.Ф., Литвиненко Е.С. Нейропротек-тивная активность модуляторов тиол-дисульфидной системы в условиях моделирования глутаматной эксайтотоксичности in vitro // Фармаколопя та лжарська токсиколопя. 2017. № 45 (55). С. 20-27.
5. Belenichev IF, Litvinenko ES. Neyroprotektivnaya aktivnost' modulyatorov tiol-disul'fidnoy sistemy v usloviyakh modelirovaniya glutamatnoy eksaytotok-sichnosti in vitro [Neuroprotective activity of thiol-disulphide system modulators under conditions of glutamate excitotoxicity modeling in vitro]. Farmakologiya ta likars'ka toksikologiya. 2017;4-5 (55):20-7. Russian.
6. Беленичев И.Ф., Стеблюк В.С., Камышный А.М. Характер экспрессии мРНК iNOS И еМОБ в миокарде крыс с алкогольной кардиомиопатией и на фоне проводимой терапии метаболитотропными // Вкник проблем бiологii i медицини. 2017. № 2 (136). С. 82-87.
6. Belenichev IF, Steblyuk VS, Kamyshnyy AM. Kha-rakter ekspressii mRNK iNOS I eNOS v miokarde krys s alkogol'noy kardiomiopatiey i na fone provodimoy terapii metabolitotropnymi [The character of the expression of iNOS and eNOS mRNA in the myocardium of rats with alcoholic cardiomyopathy and against the background of ongoing therapy with metabotropic]. Visnik problem biologii i meditsini. 2017;2(136):82-7.
7. Буй Тхи минь Тху. Фармакологическая характеристика селенсодержащих соединений (обзор) //
7. Buy Tkhi min' Tkhu. Farmakologicheskaya kharak-teristika selensoderzhashchikh soedineniy (obzor)
JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2018 - V. 25, № 1 - P. 79-86
Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. Пяти-горск.ГФА,-Пятигорск, 2007. Вып. 62. С. 448-450.
[Pharmacological characteristics of selenium-containing compounds (review)]. Razrabotka, issledo-vanie i marketing novoy farmatsevticheskoy produkt-sii: sb. nauch. tr. Pyatigorsk. GFA,-Pyatigorsk; 2007. Vyp. 62. Russian.
8. Бурова Е.Б. Трансактивация рецептора эпидер-мального фактора роста окисленным глутатионом и его фармакологическим аналогом глутоксимом в клетках А 431 // Доклады академии наук. 2005. Т. 404, №1. С. 1-3.
8. Burova EB. Transaktivatsiya retseptora epider-mal'nogo faktora rosta okislennym glutationom i ego farmakologicheskim analogom glutoksimom v kletkakh A 431 [Transactivation of epidermal growth factor receptor by oxidized glutathione and its pharmacological analogue of glutoxim in A 431 cells]. Doklady akademii nauk. 2005;404(1):1-3. Russian.
9. Киреев С.С., Ларченко В.И. Церебральная гемодинамика и возможности оптимизации при критических состояниях у новорожденных в условиях отделения реанимации // Неонатолопя, хiрургiя та перинатальна медицина. 2011. Т. I, № 2. С. 51-54.
9. Kireev SS, Larchenko VI. Tserebral'naya gemodinamika i vozmozhnosti optimizatsii pri kriticheskikh sostoyaniyakh u novorozhdennykh v usloviyakh otde-leniya reanimatsii [Cerebral hemodynamics and optimization possibilities for critical conditions in newborns in conditions of intensive care unit]. Neonatologiya, khirurgiya ta perinatal'na meditsina. 2011;I(2):51-4.
10. Киреев С.С., Токарев А.Р., Малыченко Т.В. Ген-дерно-климатические особенности обращаемости населения за медицинской помощью по поводу артериальной гипертензии // Вестник новых медицинских технологий. Электронное издание. 2014. № 1. Публикация 7-11. URL: http://medtsu.tula.ru/VNMT/Bulletin/E2014-1/4843.pdf (Дата обращения: 19.09.2014).
10. Kireev SS, Tokarev AR, Malychenko TV. Genderno-klimaticheskie osobennosti obrashchaemosti nasele-niya za meditsinskoy pomoshch'yu po povodu arteri-al'noy gipertenzii [Gender and climatic features of the population's access to medical care for arterial hypertension]. Vestnik novykh meditsinskikh tekhnologiy. Elektronnoe izdanie. 2014[cited 2014 Sep 19];1[about 7p.]. Russian. Available from:
http://medtsu.tula.ru/VNMT/Bulletin/E2014-1/4843.pdf.
11. Новиков В.Е., Левченкова О.С. Новые направления поиска лекарственных средств с антигипокси-ческой активностью и мишени для их действия // Экспериментальная и клиническая фармакология. 2013. Т. 76, №5. С. 37-46.
11. Novikov VE, Levchenkova OS. Novye napravleniya poiska le-karstvennykh sredstv s antigi-poksicheskoy aktivnost'yu i mi-sheni dlya ikh deystviya [New directions in the search for drugs with antihypoxic activity and targets for their action]. Eksperi-mental'naya i klinicheskaya far-makologiya. 2013;76(5):37-46. Russian.
12. ^карев А.Р., Киреев С.С. Гипоксия при артериальной гипертензии (краткий обзор литературы) // Вестник новых медицинских технологий. 2016. T. 23, № 2. С. 233-239.
12. Tokarev AR, Kireev SS. Gipoksiya pri arterial'noy gipertenzii (kratkiy obzor literatury) [Hypoxia in hypertension (a brief review of the literature)]. Vestnik novykh meditsinskikh tekhnologiy. 2016;23(2):233-9. Russian.
13. Alan McIntyre & Adrian L Harris. Metabolic and hypoxic adaptation to antiangiogenic therapy: a target for induced essentiality // EMBO Molecular Medicine. 2015. Vol. 7, № 4. P. 368-379.
14. Marc Heidbreder, Frederike Fro" Hlich, Olaf Jo" Hren. Hypoxia rapidly activates HIF-3 mRNA expression // The FASEB Journal. 2003. Vol. 17. P. 1541-1543.
15. Prabhu Ramamoorthy and Honglian Shi. Ischemia induces different levels of hypoxia inducible factor-1a
13. Alan McIntyre & Adrian L Harris. Metabolic and hypoxic adaptation to antiangiogenic therapy: a target for induced essentiality. EMBO Molecular Medicine. 2015;7(4):368-79.
14. Marc Heidbreder, Frederike Fro" Hlich, Olaf Jo" Hren. Hypoxia rapidly activates HIF-3 mRNA expression. The FASEB Journal. 2003. Vol;17:1541-3.
15. Prabhu Ramamoorthy and Honglian Shi. Ischemia induces different levels of hypoxia inducible factor-1a
JOURNAL OF NEW MEDICAL TECH
protein expression in interneurons and pyramidal neurons // Acta Neuropathological Communications URL: www.actaneurocomms.org/content 2014. P. 1-10.
16. Florian Rieß. Regulation of expression and functional characterization of human HIF-3a. München, 2015. 111 p.
17. Oingdong Ke and Max Costa. HIF-1, A New Target for Therapy // Mol Pharmacol. 2006. Vol. 70. P. 14691480.
GIES - 2018 - V. 25, № 1 - P. 79-86
protein expression in interneurons and pyramidal neurons // Acta Neuropathological Communications URL: www.actaneurocomms.org/content 2014.
16. Florian Rieß. Regulation of expression and functional characterization of human HIF-3a. München; 2015.
17. Oingdong Ke and Max Costa. HIF-1, A New Target for Therapy. Mol Pharmacol. 2006;70:1469-80.
18. Yosuke Watanabea,b, Colin E. Murdocha,b,1, Soichi Sanob, Yasuo Idoc, Markus M. Bachschmida,b, Richard A. Cohena,b, and Reiko Matsuia. Glutathione adducts induced by ischemia and deletion of glutaredoxin-1 stabilize HIF-1a and improve limb revascularization. www.pnas.org/cgi/doi/10.1073/pnas.1524198113 PNAS.
18. Yosuke Watanabea,b, Colin E. Murdocha,b,1, Soichi Sanob, Yasuo Idoc, Markus M. Bachschmida,b, Richard A. Cohena,b, and Reiko Matsuia. Glutathione adducts induced by ischemia and deletion of glutare-doxin-1 stabilize HIF-1a and improve limb revasculari-zation.
www.pnas.org/cgi/doi/10.1073/pnas.1524198113 PNAS.
