CC BY
2© Коллектив авторов, 2021 Вопросы онкологии, 2021. Том 67, № 5
УДК 616.61-006
DOI 10.37469/0507-3758-2021-67-5-694-698
Л.В. Спирина12, З.А. Юрмазов1, Е.А. Усынин1, И.В. Кондакова1
Экспрессия и содержание VHL в ткани рака почки, связь с клинико-морфологическими параметрами заболевания и транскрипционными и ростовыми факторами
1 Нии онкологии Томского НИМЦ 2 сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
Введение. Гиперэкспрессия фактора на фоне недостатка VHL является ключевым событием, связанным с манифестом и прогрессией светлоклеточного почечноклеточно-го рака. Однако значение данного показателя для развития заболевания и формирования ответа на таргетную терапию до конца неясно. Цель исследования заключалась в изучении связи экспрессии и содержания VHL в ткани рака почки с клинико-морфологиче-скими параметрами и уровнем мРНК транскрипционных факторов ОТ-кВ р65, ОТ-кВ р50, Н№-1, Н№-2, ростового фактора VEGF и СА1Х.
Материалы и методы. В исследование включено 39 пациентов с почечно-клеточным раком. Локализованная форма заболевания (Т1-2ШМ0) диагностирована у 20 больных, 19 пациентов имели диссеминированный процесс (T1-3N0-1M1). Материалом исследования являлась нормальная и опухолевая ткань, полученная при выполнении хирургического этапа лечения. Экспрессия VHL определялась методом ПЦР в реальном времени. Содержание белка pVHL оценивали с помощью метода Вестерн Блоттинг.
результаты. В результате проведенного исследования отмечено, что рост уровня мрнК VHL в ткани опухоли совместно с количественным снижением соответствующего белка был связан с увеличением размера опухоли. распространенность заболевания и развитие отдаленных метастазов были ассоциированы с ростом как мрнК, так и содержанием белка VHL в трансформированной опухолевой ткани. отмечено наличие отрицательной корреляции между уровнем мРНК VHL, содержанием соответствующего белка и положительная ассоциация с экспрессией гена ОТ-кВ р65. Содержание VHL в опухоли было ассоциировано с падением уровня мРНК NF-кВ р50, №-кВ р65 и VEGF.
Обсуждение. Повышение экспрессии гена VHL и содержания соответствующего белка в ткани опухоли способствовало росту мРНК
транскрипционных факторов, в частности ОТ-кВ, что, в свою очередь, сопровождалось прогрессией опухоли. Увеличение содержания белка VHL в опухолевой ткани приводило к снижению уровня мРНК транскрипционных и ростовых факторов, что, вероятно, связано с их инактивацией, в том числе и за счет протеасомного расщепления. Эти взаимодействия, на наш взгляд, являются важными этапами в онкогенезе рака почки.
Заключение. Увеличение экспрессии гена VHL и содержания белка pVHL имеет решающее значение в развитии заболевания, формировании отдаленных метастазов за счет активации транскрипционных, ростовых факторов.
Ключевые слова: VHL, pVHL, светлокле-точный рак почки, транскрипционные и ростовые факторы
Введение
Рак почки является распространенной злокачественной опухолью. Следует отметить, что более 50% заболевших нуждаются в проведении системной противоопухолевой терапии на момент первичного обращения или при прогрес-сировании опухолевого процесса после попытки радикального лечения [1]. Широко известен вклад дефицита белка-онкосупрессора — белка фон Хиппель-Линдау (рVHL) в развитие свет-локлеточного рака почки, который представляет собой компонент Е3 убиквитин-лигазы [2]. Известно, что соматическая мутация данного гена связана с нарастанием уровня фактора и сопровождается интенсивным ростом опухоли [3].
Молекулярная картина развития накопления фактора НШ на фоне недостатка VHL является ключевым событием, связанным с манифестом и прогрессией светлоклеточного почечно-кле-точного рака [1, 3]. Применение таргетной терапии при данном гистотипе связано с блокированием ключевых сигнальных каскадов. Однако, несмотря на все успехи лекарственная терапия не позволяет достичь высокой эффективности, а
обусловлено это рядом биологических и молекулярных факторов, формирующих агрессивное течение заболевания [4]. Имеются единичные исследования, предпринимавшие попытки поиска предсказательных маркеров, основанных на пути pVHL/HIF-1/VEGF [5, 6], однако они не подтверждаются в рандомизированных исследованиях и клинической практике.
Кроме того, в настоящее время найдено около 32 клинически значимых мутаций гена VHL и большое количество незначимых изменений гена [7]. Однако сам факт наличия мутаций VHL, без учета особенностей биологического поведения опухоли, не всегда влияет на течение, исход заболевания и эффективность таргетной терапии [2].
Интенсивность молекулярных процессов он-когенеза определяет течение заболевания. Известно, что уровень pVHL в ткани опухоли значительно снижен по сравнению с прилежащей нетрансформированной тканью и коррелирует со стадией заболевания [8]. Имеются единичные данные о роли экспрессии VHL при развитии рака почки, где уровень показателя снижается по сравнению с неизмененной тканью
[9, 10].
Роль белка VHL в прогрессировании заболевания опосредована его участием в широком спектре онкологических процессов. Известно, что в присутствии нормального белка VHL сиг-налинг ОТ-кВ-супрессирован [11, 12, 13, 14].
Проведенные исследования показывают разносторонний характер изменений в онкогене опухоли почки. В целом связь белка с клиническими особенностями заболевания, ассоциации с молекулярными маркерами практически не изучены. Статья направлена на поиск новых потенциальных мишеней целевой противоопухолевой терапии. Цель исследования заключалась в изучении экспрессии и содержания VHL в ткани рака почки в связи с клинико-морфологически-ми параметрами и уровнем мРНК транскрипционных факторов ОТ-кВ р65, ОТ-кВ р50, Н№-1, Н^-2, ростового фактора VEGF и СА1Х.
Материалы и методы
В исследование включено 39 пациентов с почечнокле-точным раком. Проведение данной работы одобрено этическим комитетом НИИ онкологии Томского НИМЦ. Все процедуры с вовлечением больных были проведены в соответствии с Протоколом Хельсинской декларации по правам человека (1964 г.) Все больные подписывали информированное согласие на участие в исследовании.
Локализованная стадия заболевания (Т1-2ШМ0) диагностирована у 20 больных, 19 имели диссеминированный процесс (Т1-3Ш-1М1). Всем пациентам с локализованным раком было проведено хирургическое лечение в клиниках НИИ онкологии Томского НИМЦ. Больным с диссемини-рованным процессом проводилось комбинированное лече-
ние, которое включало 2-месячный курс предоперационной таргетной терапии тирозинкиназным ингибитором пазопа-нибом 800 мг один раз в сутки с последующим выполнением хирургического этапа в объеме нефрэктомии/резекции почки.
Материалом исследования являлись образцы опухолевой и неизмененной ткани почки, полученные при проведении оперативного лечения, находящиеся на расстоянии не менее одного см от границы опухоли, которые после забора замораживались и хранились при температуре -80 °С.
Выделение РНК. РНК выделяли с помощью набора RNeasy mini Kit, содержащего ДНК I (Qiagen, Germany). Для оценки количества выделенной РНК на спектрофотометре NanoDrop-2000 (Thermo Scientific, USA) оценивали концентрацию и чистоту выделенной РНК. Концентрация РНК составила от 80 до 250 нг/мкл, А260/ А280=1,95-2,05; А260/А230=1,90-2,31. Целостность РНК оценивалась при помощи капиллярного электрофореза на приборе TapeStation (Agilent Technologies, USA) и набора R6K ScreenTape (Agilent Technologies, USA). RIN составил 5,6-7,8.
Количественная ПЦР с обратной транскрипцией в режиме реального времени. Уровень экспрессии генов оценивали при помощи количественной обратно-транскриптазной ПЦР в режиме реального времени (RT-qPCR) с использованием красителя SYBR Green на амплификаторе iCycler (BioRad, USA). Для получения кДНК на матрице РНК проводили реакцию обратной транскрипции с помощью набора OT m-MuLV-RH (БиоЛабмикс, Россия) со случайными гексану-клеотидными праймерами в соответствии с инструкцией к набору. ПЦР ставили в трех репликах в объеме 25 мкл, содержащем 12,5 мкл Биомастер HS-qPCR SYBR Blue (Био-Лабмикс, Россия), 300 нМ прямого и обратного праймеров и 50 нг кДНК. CAIX: F 5$-GTTGCTGTCTCGCTTGGAA-3$, R 5^-CAGGGTGTCAGAGAGGGTGT-3^; HIF-1a: F 5ф- CAAGAACCTACTGCTAATGCCA-Зф, R 5ф- TTTGGTGAGGCTGTCCGA-Зф; EPAS1: F 5ф- TGGAGTATGAAGAGCAAGCCT-Зф, R 5ф-GGGAACCTGCTCTTGCTGT-3ф; NFKB1:
F 5ф-CGTGTAAACCAAAGCCCTAAA-3ф, R
5ф-AACCAAGAAAGGAAGCCAAGT-3ф; RELA:
F 5ф-GGAGCACAGATACCACCAAGA-3ф, R
5ф-GGGTTGTTGTTGGTCTGGAT-3ф; VEGFA:
F 5ф-AGGGCAGAATCATCACGAA-3ф, R
5ф-TCTTGCTCTATCTTTCTTTGGTCT-3ф; KDR:
F 5ф-AACACAGCAGGAATCAGTCA-3ф, R
5ф-GTGGTGTCTGTGTCATCGGA-3ф; GAPDH:
F 5ф- GGAAGTCAGGTGGAGCGA-3ф, R 5ф-GCAACAATATCCACTTTACCAGA-3ф.
Двухшаговая программа амплификации включала один цикл — 94 °С, 10 мин — предварительная денатурация; 40 циклов — один шаг 94 °С, 10 с и 2 шаг 20 с — при температуре 60 °С. Праймеры были подобраны с использованием программы Vector NTI Advance 11.5 и базы данных NCBI (http://www.ncbi.nlm. nih.gov/nuccore).
В качестве референсного гена использовали ген «домашнего хозяйства» фермента GAPDH (glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase), уровень экспрессии каждого целевого гена нормализовали по отношению к экспрессии GAPDH. Количественный анализ экспрессии проводили по 2AACt по отношению к конститутивно-экспрессируемому гену-рефери фермента GAPDH.
Получение гомогенатов. Замороженную ткань (100 мг) гомогенизировали в жидком азоте, затем ресуспендировали в 300 мкл 50 мМ трис-HCl буфера (pH=7,5), содержащего 2 мМ АТФ, 5 мМ хлорид магния, 1 мМ дитиотреитол, 1мМ ЭДТА и 100 мМ хлорид натрия. Гомогенат центрифугировали 60 мин при 10 000 g и 4 °С.
Электрофорез. Электрофорез проводили по Laemmli в 13% полиакриламидном геле.
Вестерн блоттинг. После электрофореза переносили полипептиды на PVDF-мембрану (Immobylon, Millipore, США). Иммунодетекцию проводили с антителами к phospho-VHL(Ser68) (Affinity Biosciences, USA). Затем мембрану подвергали обработке системой хемилюминес-центной детекции ECL (GE Healthcare, Великобритания). Анализ результатов осуществляли с использованием системы визуализации ChemiDocTMTouch Imaging System, а их плотность оценивали с помощью компьютерной программы «ImageLab» (BioRad, США). Стандартизация проводилась относительно Р-актина. Результаты выражали в процентах от содержания показателей в неизмененной ткани.
Статистическую обработку результатов проводили с применением пакета программ Statistica 12.0. Проверку нормальности проводили с помощью с помощью критерия Колмогорова-Смирнова. Результаты определения экспрессии генов представлены как Me (Q1; Q3). Значимость различий независимых параметров оценивали по критерию Манна-Уитни. Различия считали значимыми при р<0,05. Для проведения корреляционного анализа использовали критерий Спирмена.
Результаты
В ткани опухоли почки уровень мРНК и содержание VHL зависели от стадии заболевания и распространенности опухолевого процесса (табл. 1). Рост экспрессии изучаемого показателя в 12,5 раза выше у пациентов со стадией заболевания T3-4N0-1M1 по сравнению с пациентами с размером опухоли T1-2N0M0 был отмечен на фоне падения фосфорилированной
формы белка в 5 раз в изучаемых группах больных. Наиболее значимые изменения были выявлены при изучении распространенности опухолевого процесса. Экспрессия гена и содержание VHL связаны с развитием отдаленных метастазов. Зафиксировано возрастание уровня мРНК и уровня белка данного показателя у пациентов с диссеминированной формой в 32,0 и 2,68 раза соответственно, по сравнению с пациентами с локализованным раком.
Отмечено повышение уровня мРНК НШ-2, ОТ-кВ р50 в 2,8 раза, соответственно, и СА1Х в 1,3 раза в первичной опухоли со стадией Т3-4Ш-1М1 по сравнению с Т1-2ШМ0. Также показано, что формирование отдаленных метастазов сопровождалось ростом экспрессии ядерных факторов ОТ-кВр50 и ОТ-кВр65 в 4,0 и 2,8 раза соответственно, по сравнению с пациентами с локализованной формой заболевания (табл. 2).
Наличие значимых связей между экспрессией гена и содержанием белка фон хиппель-Линдау было подтверждено и при проведении корреляционного анализа. Так, отмечено наличие корреляции между уровнем мРНК VHL, содержанием соответствующего белка (г=-0,46; р=0,005) и экспрессией ОТ-кВ р65 (г=0,3; р=0,006). Содержание VHL было ассоциировано с экспрессией ОТ-кВ р50 (г=-0,36; р=0,022), ОТ-кВ р65 (г=-0,34; р=0,022) и VEGF (г=-0,30; р=0,05).
Таблица 1. Экспрессия гена VHL и содержание pVHL в ткани опухоли пациентов в зависимости от размера опухоли и распространенности заболевания, Me ^1; Q3)
Размер опухоли (критерий Т) Распространенность заболевания
T1-2N0M0 T3-4N0-1M0-1 Локализованная форма (T1-2N0M0) Диссеминированная форма (T1-4N0-1M1)
Уровень мРНК VHL, УЕ 7,00 (2,00; 31,32) 87,50 (4,22; 128,00)* 2,00 (0,50;4,0) 64,00 (8,46;128,00)**
Содержание pVHL, % к неизмененной ткани 77,20 (42,25; 99,79) 15,30 (11,30; 46,07)* 55,00 (20,10; 93,61) 147,54 (100,54; 156,78)**
Примечание. * Значимость различий по сравнению с пациентами с размером опухоли Т1-21М0М0, р<0,05; ** значимость различий по сравнению с локализованной формой, р<0,05.
Показатель, УЕ Размер опухоли (критерий Т) Распространенность заболевания
T1-2N0M0 T3-4N0-1M1 Локализованная форма (T1-2N0M0) Диссеминированная форма (T1-4N0-1M1)
HIF-1 1,29 (0,11; 2,53) 0,79 (0,09; 3,50) 1,20 (0,11; 3,30) 1,07 (0,01; 6,60)
HIF-2 0,94 (0,13; 2,87) 2,68 (0,13; 128,00)* 1,00 (0,13; 4,00) 1,13 (0,01; 3,50)
NF-kB p50 1,07 (0,1; 12,72) 3,00 (0,03; 9,13)* 1,00 (0,08; 12,72) 4,08 (0,10; 6,92)*
NF-kB p65 1,39 (0,22; 4,60) 1,64 (0,66; 12,73) 1,00 (0,08; 12,725) 2,83 (0,01; 6,60)*
VEGF 1,39 (0,13; 25,00) 1,00 (0,13; 16,00) 1,35 (0,13; 25,00) 1,03 (0,00; 3,43)
CAIX 1,97 (0,31; 2,00) 2,56 (0,85; 5,00)* 0,81 (0,02; 2,00) 0,07 (0,01; 25,1)
VEGFR2 0,74 (0,16; 8,57) 0,75 (0,25; 16,00) 1,00 (0,33; 16,00) 0,32 (0,04; 12,5)
Примечание. * Значимость различий по сравнению с пациентами с размером опухоли Т1-2ШЮМ0, р<0,05; ** значимость различий по сравнению с локализованной формой, р<0,05.
Таблица 2. Экспрессия генов ядерных факторов Н^-1, Н^-1, NF-кBp50 и NF-кBp65, ростовых факторов в зависимости от размера опухоли и распространенности заболевания, Me(Q1; Q3)
raL tuRTvA-
* *
Tp
mflNA / / r
NF-kB p65
protein
>"F-kB р50
VEGF
Корреляционные связи между уровнем мРНК VHL и содержанием
pVHL в ткани опухоли с транскрипционными и ростовыми факторами. Обозначения: сплошная линия — прямая корреляция, пунктир — отрицательная корреляция
Обсуждение
В результате проведенного исследования отмечено, что рост экспрессии гена VHL совместно со снижением уровня его белка был связан с увеличением размера опухоли. Распространенность заболевания сопровождалась ростом как мРНК, так и содержанием VHL в опухоли. Известно, что уровень pVHL и экспрессия гена в трансформированной ткани значительно снижены по сравнению с прилежащей тканью и коррелируют со стадией заболевания, что особенно выражено при наличии отдаленных метастазов [8-10].
Интенсивность молекулярных процессов в онкогенезе рака почки связана с ролью белка в регуляции основных клеточных процессов [1517]. Так, выявленные изменения были связаны с повышением экспрессии транскрипционных факторов Н№-2, ОТ-кВ р50, ОТ-кВр65 и фермента СА1Х.
Наличие значимых связей между экспрессией и содержанием белка фон Хиппель-Линдау было подтверждено и при проведении корреляционного анализа. Повышение уровня мРНК VHL связано со снижением содержания соответствующего белка и ростом экспрессии транскрипционного фактора ОТ-кВ р65. Однако повышение количества pVHL в ткани опухоли было ассоциировано со снижением экспрессии ОТ-кВ р65, ОТ-кВ р50 и VEGF.
На рисунке представлены корреляционные связи между уровнем мРНК VHL и содержанием pVHL в ткани опухоли с транскрипционными и ростовыми факторами. Отмечено, что
содержание белка VHL приводило к супрессии уровня мРНК транскрипционных и ростовых факторов, что, вероятно, связано с их инактивацией, в том числе и за счет протеасомного расщепления. При этом возрастание экспрессии VHL способствовало росту мрнК транскрипционных факторов, в частности NF-kB.
Заключение
Соотношение экспрессии и содержания белка VHL имеет решающее значение в развитии рака почки и появлении отдаленных метастазов с учетом гетерогенности мутационных изменений гена VHL. Выявлены ассоциации между содержанием активированной формы белка pVHL, экспрессией гена, уровнем мРНК транскрипционных и ростовых факторов в ткани почечно-клеточного рака. Стоит отметить, что в случае прогрессии заболевания и развития диссемини-рованной формы, происходит увеличение количества активированного белка фон Хиппель Лин-дау на фоне активации ключевых молекулярных каскадов, способствующих росту инвазивного и метастатического потенциала опухоли. Выявлены взаимосвязи между транскрипционным и ростовыми факторами в ткани светлоклеточного рака почки, которые ответственны за развитие и прогрессирование заболевания. Вероятно, развитие рака почки связано в том числе с ростом уровня мРНК и содержанием белка VHL, который также регулирует ключевые процессы он-когенеза.
Авторы внесли равнозначный вклад в работу над статьей.
ЛИТЕРАТУРА
1. Chung C. From oxygen sensing to angiogenesis: Targeting the hypoxia signaling pathway in metastatic kidney cancer // Am J Health Syst Pharm. 2020;77(24):2064-2073. https://doi:10.1093/ajhp/zxaa308. PMID: 33016992
2. Kim BJ, Kim JH, Kim HS, Zang DY Prognostic and predictive value of VHL gene alteration in renal cell carcinoma: a meta-analysis and review // Oncotarget. 2017;8(8):13979-13985. https://doi:10.18632/oncotarget.14704
3. Lessi F, Mazzanti CM, Tomei S et al. VHL and HIF-1 : gene variations and prognosis in early-stage clear cell renal cell carcinoma // Med Oncol. 2014;31(3):840. https:// doi:10.1007/s12032-014-0840-8 Epub 2014 Jan 21. PMID: 24446253.
4. Choueiri TK, Fay AP, Gagnon R et al. The role of aberrant VHL/HIF pathway elements in predicting clinical outcome to pazopanib therapy in patients with meta-static clear-cell renal cell carcinoma // Clin Cancer Res. 2013;19(18):5218-26. https://doi:10.1158/1078-0432. CCR-13-0491. Epub 2013 Jul 23. PMID: 23881929; PM-CID: PMC4522695.
5. Spirina LV, Usynin YA, Yurmazov ZA et al. Transcription factors NF-kB, HIF-1, HIF-2, growth factor VEGF, VEG-
FR2 and carboanhydrase IX mRNA and protein level in the development of kidney cancer metastasis // Mol Biol (Mosk). 2017;51(2):372-377. Russian. https:// doi:10.7868/S0026898417020197. PMID: 28537244.
6. Spirina LV, Usynin EA, Yurmazov ZA et al. Effect of Targeted Therapy With Pazopanib on Expression Levels of Transcription, Growth Factors and Components of AKT/m-TOR signaling Pathway in Patients with Renal Cell Carcinoma // Asian Pac J Cancer Prev. 2017;18(11):2977-2983. https://doi:10.22034/APJCP.2017.18.11.2977. PMID: 29172268; PMCID: PMC5773780
7. Alves MR, Carneiro FC, Lavorato-Rocha AM et al. Mutational status of VHL gene and its clinical importance in renal clear cell carcinoma // Virchows Arch. 2014;465(3):321-30. https://doi:10.1007/s00428-014-1629-z. Epub 2014 Jul 16. PMID: 25027579.
8. Ferchichi I, Kourda N, Sassi S et al. Aurora A overexpression and pVHL reduced expression are correlated with a bad kidney cancer prognosis // Dis Markers. 2012;33(6):333-40. https://doi:10.3233/DMA-2012-00942. PMID: 23151618; PMCID: PMC3810770.
9. Xiao-Fen W, Ting C, Jie L et al. Correlation analysis of VHL and Jade-1 gene expression in human renal cell carcinoma // Open Med (Wars). 2016;11(1):226-230. https:// doi:10.1515/med-2016-0043
10. Spirina LV, Kondakova IV, Yurmazov ZA et al. VHL Expression in Kidney Cancer: Relation to Metastasis Development, Transcription and Growth Factors and Component of Akt/m-TOR Signaling Pathway // Bull Exp Biol Med. 2019;167(5):671-675. https://doi:10.1007/s10517-019-04596-9. Epub 2019 Oct 17. PMID: 31625068.
11. Kim DS, Choi YB, Han BG et al. Cancer cells promote survival through depletion of the von Hippel-Lindau tumor suppressor by protein crosslinking // Oncogene. 2011;30(48):4780-90. https://doi:10.1038/ onc.2011.183. Epub 2011 May 30. PMID: 21625219.
12. Yang H, Minamishima YA, Yan Q, et al. pVHL acts as an adaptor to promote the inhibitory phosphoryla-tion of the NF-kappaB agonist Card9 by CK2 // Mol Cell. 2007;28(1):15-27. https://doi:10.1016/j.mol-cel.2007.09.010. PMID: 17936701; PMCID: PMC2128776.
13. Wang J, Ma X Jiang H et al. Overexpression of von Hippel-Lindau protein synergizes with doxorubi-cin to suppress hepatocellular carcinoma in mice // J Hepatol. 2011;55(2):359-68. https://doi:10.1016/j. jhep.2010.10.043. Epub 2010 Dec 17. PMID: 21168458.
14. Walmsley SR, McGovern NN, Whyte MK, Chilvers ER. The HIF/VHL pathway: from oxygen sensing to innate immunity // Am J Respir Cell Mol Biol. 2008;38(3):251-5. https://doi:10.1165/rcmb.2007-0331TR. Epub 2007 Oct 11. PMID: 17932373.
15. Evans AJ, Russell RC, Roche O et al. VHL promotes E2 box-dependent E-cadherin transcription by HIF-mediated regulation of SIP1 and snail // Mol Cell Biol. 2007;27(1):157-69. https://doi:10.1128/MCB.00892-06. Epub 2006 Oct 23. PMID: 17060462; PMCID: PMC1800649.
16. Arias-Gonz lez L, Moreno-Gimeno I, del Campo AR et al. ERK5/BMK1 is a novel target of the tumor suppressor VHL: implication in clear cell renal carcinoma // Neopla-sia. 2013;15(6):649-59. https://doi:10.1593/neo.121896. PMID: 23730213; PMCID: PMC3664997.
17. Mikhaylova O, Stratton X Hall D et al. VHL-regulated MiR-204 suppresses tumor growth through inhibition of LC3B-mediated autophagy in renal clear cell carcinoma // Cancer Cell. 2012;21(4):532-46. https://doi:10.1016/j. ccr.2012.02.019. PMID: 22516261; PMCID: PMC3331999.
Поступила в редакцию 15.06.2021 г.
L.V Spirina12, Z.A. Yurmazov1, E.A. Usynin1, I.V. Kondakova 1
Expression and content of VHL in kidney cancer tissue, relationship with clinical and morphological parameters of the disease, expression of transcriptional and growth factors
1 Cancer Research Institute, TNRMC, Tomsk, Russia
2 Siberian State Medical University, Tomsk, Russia
Introduction. The molecular picture of the HIF overexpression withVHL deficiency is a key event associated with the manifestation and progression of clear cell renal cell carcinoma. However, this indicator's significance for the development of the disease and the formation of a response to targeted therapy is not clear. The study aimed to study the relationship between the expression and content of VHL in kidney cancer tissue with clinical, morphological parameters, mRNA level NF-kB p65, NF-kB p50, HIF-1, HIF-2, VEGF, and CAIX.
Material and methods. The study included 39 patients with renal cell carcinoma. The disease>s localized form (T1-2N0M0) was diagnosed in 20 patients; 19 patients had a disseminated process (T1-3N0-1M1). The study>s material was normal, and tumor tissue was obtained during the surgical stage of treatment. VHL expression was determined by realtime PCR. The pVHL protein content was estimated using the Western Blotting method.
Results. As a result of the study, it was noted that an increase in the VHL expression, together with a decrease in its protein level, was associated with an increase in tumor size. The prevalence of the disease was accompanied by an increase in both mRNA and VHL content in cancers. There was a negative correlation between the level of VHL expression, the content of the corresponding protein, and a positive association with the expression of NF-kB p65. VHL content in cancers was associated with decreased expression of NF-kB p50, NF-kB p65, and VEGF.
Discussion. An increase in VHL expression and protein's content in tumor tissue promoted the growth of mRNA of transcription factors, in particular NF-kB, which is accompanied by tumor spread. An increase in the VHL protein content led to the suppression of the mRNA level of transcriptional and growth factors, which is probably associated with their inactivation, including through proteasome cleavage, and is an important stage in oncogenesis.
Conclusion. An increase in the expression of the VHL gene and the content of the pVHL protein is of decisive importance in the development of the disease, the formation of distant metastases due to the activation of transcriptional and growth factors.
Key words: clear cell kidney cancer, VHL, pVHL, tran-scriptional and growth factors
