CC BY
85
УДК 547.854.4
С. П. Иванов, Т. Р. Нугуманов, Ю. И. Муринов
Экспресс-метод определения содержания примеси 6-метилурацила в 5-гидрокси-6-метилурациле
Институт органической химии УНЦ РАН 450054, Уфа, пр. Октября, 71, тел. (347) 235-54-00; е-та11: ivanov_sp@anrb.ru
Предлагается экспресс-метод анализа содержания примеси 6-метилурацила в образце 5-гидрокси-6-метилурацила методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием спект-рофотометрического детектора.
Ключевые слова: 5-гидрокси-6-метилурацил, 6-метилурацил, ВЭЖХ, анализ.
Известный иммуномодулятор 1 5-гидро-кси-6-метилурацил (1) (ГМУ) получают окислением 6-метилурацила (2) (МУ), персульфатом аммония 2. В связи с этим в образцах ГМУ всегда содержится примесь МУ. Для оценки качества ГМУ требуется экспресс-метод анализа содержания МУ в нем. Ранее было предложено определение 6-метилурацила в ГМУ методом ГЖХ 3. В этой работе при пробаподго-товке проводилось силилирование данных ура-цилов, что, на наш взгляд, весьма трудоемко.
O
O
N I
Н
-OH
-снз
Н
N ON
N I
н
Целью настоящей работы явилась разработка эффективного метода количественного определения содержания примеси МУ в образце ГМУ без химической модификации данных соединений.
Экспериментальная часть
В работе использовали 5-гидрокси-6-метилурацил, синтезированный по методике 2, и 6-метилурацил квалификации «х. ч.» (Реа-хим, Россия), перекристаллизованные из водных растворов.
УФ-спектры регистрировали на спектрофотометре Specord M40. Все определения проводились с использованием кварцевых кювет с толщиной поглощающего слоя 0.2 см при комнатной температуре (18 оС).
Хроматографический анализ водных растворов образцов ГМУ (1 мг/мл) проводился на хроматографе ^q^cbrarn (Венгрия) с применением колонки с фазой Luna C18, 5 мкм, с размерами 250 х 4.6 мм (Phenomenex, США). В качестве подвижной фазы использовался элюент состава вода : ацетонитрил = 95:5 со скоростью потока 1 мл/мин. Детектирование проводилось при длинах волн 215, 239 и 272 нм. Сбор и обработка хроматографических данных осуществляли с использованием программы Мультихром, версия 1.5 (Ampersand, Россия).
Результаты и их обсуждение
Были приготовлены водные растворы ГМУ и МУ с концентрациями 5-10-4, 4-10-4, 3-10-4, 2-10-4, 1-10-4, моль/л. Для всех растворов записаны УФ-спектры. На рис. 1 приводятся спектры для трех концентраций (5-10-4, 3-10-4 и 1-10-4 моль/л). Как видно из рисунка, при сравнении спектров ГМУ и МУ с одинаковой концентрацией, имеются изобестические точки при 215, 239 и 272 нм, что свидетельствует о том, что при данных длинах волн коэффициенты поглощения 5-гидрокси-6-метил-урацила и 6-метилурацила одинаковы. Следовательно, соотношение площадей пиков ГМУ и МУ на хроматограммах, полученных с использованием спектрофотометрического детектора при данных длинах волн будет пропорционально их относительному процентному содержанию в образце (рис. 2).
Для анализа были использованы 8 образцов технического ГМУ, содержащих разное количество МУ. Регистрацию хроматограмм каждого образца проводили при трех длинах
Дата поступления 09.03.07 42 Башкирский химический журнал. 2007. Том 14. №1
Рис. 1. УФ-спектры водных растворов 5-гидрокси-6-метилурацила (-) и 6-метилурацила (.....■). 1 — 5.010 4;
2 - 3.010-4; 3 - 1.010-4 моль/л
тУ 2500-
Т
г
1
2000
1500-
1000
500
2
еИ1
1 1 1
1 ---_|---- ---+ - 1 ---_|----
X 1 1 1 X X 1 1 1
1 1 1 Т т 1- 1 1 1 т
---_|---- 1 ---+ - - ---_|---- 2
800 -
600
400--
0
1
2
3
4
5
6
7
тУ
200--
0
1
2
3
4
5
6
7
г
г
тУ 2500-
г
2000
Рис. 2. Хроматограммы образца 3, полученные при 215 (а), 239 (б) и 272 нм (в). 1 — 5-гидрокси-6-метил-урацил, 2 — 6-метилурацил
волн. В табл. 1 приводятся данные по процентному соотношению площадей пиков соединений 1 (верхняя цифра) и 2 (нижняя цифра, выделена курсивом). При этом за 100% принимается сумма площадей пиков ГМУ и МУ.
Таблица 1
Отношение площадей пиков (%) соединений 1 и 2 в хроматограммах образцов 5-гидрокси-6-метилурацила
Как видно из результатов анализа, величины площадей пиков ГМУ и МУ, полученные при 239 нм, в основном ниже, чем при 215 и 272 нм. Вероятно, это связано с более низким молярным коэффициентом поглощения данного соединения в УФ-спектрах водных растворов при 239 нм (рис. 1). В связи с этим для количественного определения примеси в образце методом ВЭЖХ предлагается детектирование при 215 и 272 нм.
Таким образом, нами предлагается экспресс-метод анализа содержания 6-метилураци-ла в образце 5-гидрокси-6-метилурацила методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Литература
1. 2. 3.
Образец X, нм
215 239 272
1 91,33 8,67 88,89 11,11 92,29 7,71
2 98,39 1,61 98,98 1,02 99,10 0,90
3 96,60 3,40 95,73 4,27 97,05 2,95
4 85,51 14,49 84,63 15,37 83,76 16,24
5 91,48 8,52 89,04 10,99 90,83 9,17
6 93,13 6,87 90,80 9,20 93,43 6,57
7 92,46 7,54 90,03 9,97 92,44 7,56
8 93,16 6,84 92,71 7,29 95,25 4,75
Мышкин В. А., Бакиров А. Б. Оксиметилура-цил (очерки экспериментальной фармакологии).- Уфа: ДАР, 2001.- 218 с. Кривоногов В. П., Толстиков Г. А., Мури-нов Ю. И., Зарудий Ф. А. // Хим.-фарм. ж.-1993.- Т. 27, № 2.- С. 38. Зеленова Л. М., Балтина Л. А., Берг А. А., Уманская Л. И., Кривоногов В. П., Мури-нов Ю. И., Толстиков Г. А. // Хим.-фарм. ж.-1990.- Т. 24, № 4.- С. 77.
