CC BY
52
DOI: 10.24411/0235-2990-2019-10001
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
Экспресс-анализ чувствительности бактерий к бета-лактамным антибиотикам с помощью резонатора с поперечным электрическим полем
*О. И. ГУЛИЙ12, Б. Д. ЗАЙЦЕВ3, О. А. КАРАВАЕВА1, Л. Г. ЛОВЦОВА2, С. К. МЕХТА4, И. А. БОРОДИНА3
1 Институт биохимии и физиологии растений и микроорганизмов РАН, Саратов
2 Саратовский государственный аграрный университет им. Н. И. Вавилова, Саратов
3 Институт радиотехники и электроники им. В. А. Котельникова РАН, Саратовский филиал, Саратов
4 Мизорам Университет, Аиджал, Индия
Rapid Analysis of the Sensitivity of Bacteria to Beta-Lactam Antibiotics by Using a Resonator with a Lateral Electric Field
O. I. GULIY12, B. D. ZAITSEV3, O. A. KARAVAEVA1, L. G. LOVTSOVA2, S. K. MEHTA4, I. A. BORODINA3
1 Institute of Biochemistry and Physiology of Plants and Microorganisms of the Russian Academy of Sciences, Saratov
2 Saratov State Vavilov Agrarian University, Saratov
3 Kotel'nikov Institute of Radio Engineering and Electronics of the Russian Academy of Sciences, Saratov branch, Saratov
4 Mizoram University, Aizawl, India
Показана возможность экспресс-анализа чувствительности бактерий к бета-лактамным антибиотикам на примере ампициллина с помощью пьезоэлектрического резонатора с поперечным электрическим полем. Установлено, что показателем чувствительности микробных клеток к антибиотику и критерием его воздействия является величина разницы между регистрируемым сигналом датчика для суспензии клеток без воздействия антибиотика и сигналом датчика после воздействия антибиотика. Данные, полученные с помощью датчика, подтверждены стандартным микробиологическим методом определения чувствительности микробных клеток к ампициллину. Анализ чувствительности/устойчивости микробных клеток к ампициллину проводился непосредственно в жидкой фазе без иммобилизации антибиотика на поверхности пьезоэлект-рика. Преимуществами данного подхода является высокая чувствительность метода, точность измерений (в пределах ±2%) и короткое время проведения анализа (в пределах 10 мин). Полученные результаты демонстрируют перспективность использования пьезоэлектрического резонатора с поперечным электрическим полем для анализа чувствительности/устойчивости микробных клеток к ампициллину.
Ключевые слова: Escherichia coli; бета-лактамные антибиотики, пьезоэлектрический резонатор с поперечным электрическим полем, ампициллин.
The study shows the possibility of rapid analysis of bacterial sensitivity to beta-lactam antibiotics on the example of ampi-cillin by using a piezoelectric resonator with a lateral electric field. It is established that the indicator of the sensitivity of microbial cells to the antibiotic and the criterion of its impact is the difference between the recorded sensor signal for cell suspension without the antibiotic and the sensor signal after the exposure to an antibiotic. The data obtained using the sensor confirmed the standard microbiological method for determining the sensitivity of microbial cells to ampicillin. The analysis of microbial cell sensitivity/resistance to ampicillin was carried out directly in the liquid phase without immobilizing the antibiotic on the surface of the piezoelectric. The advantages of this approach are high sensitivity of the method, measurement accuracy (within ± 2%) and short analysis time (within 10 minutes). The results show the benefits of using a piezoelectric resonator with a transverse electric field for analyzing the sensitivity/resistance of microbial cells to ampi-cillin.
Keywords: escherichia coli; beta-lactam antibiotics, piezoelectric resonator with lateral electric field, ampicillin.
Введение
Определение чувствительности бактерий к антибактериальным препаратам является важ-
© Коллектив авторов, 2019
Адрес для корреспонденции: 410049 г. Саратов, проспект Энтузиастов, 13. ИБФРМ РАН
нейшей и в то же время едва ли не самой трудоёмкой и затратной процедурой в микробиологической лаборатории. На сегодняшний день не существует методов, которые позволили бы с абсолютной достоверностью прогнозировать клинический эффект антибиотиков при лечении инфекционных болезней. В то же время, данные результа-
тов определения чувствительности бактерий к определённым антибиотикам служат ориентиром для выбора и коррекции антибактериальной терапии. При этом важным моментом является временной диапазон, в течение которого будут получены результаты о наличии или отсутствии чувствительности клеток к тем или иным антибиотикам. Поэтому разработка новых технологий и экспресс-методов определения чувствительности бактерий к действию антимикробных препаратов весьма актуальна для микробиологии, медицины и биотехнологии.
Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам делятся на 2 группы: диффузионные методы и методы разведения. Диффузионные методы могут быть осуществлены как с использованием дисков с антибиотиками, так и с помощью Е-тестов [1—3]. Методы разведения используют либо разведение в жидкой питательной среде (бульоне), либо разведение в агаре [1—4]. Созданы автоматизированные системы для определения чувствительности бактерий к антибиотикам. В одних системах автоматизированы только операции разведения и инкубации, тогда как рост бактерий определяется традиционными методами. В других системах все начальные операции выполняются вручную и автоматизированы лишь этапы считывания и регистрации результатов. Некоторые системы автоматизации предусматривают создание программ для всех операций, используемых в определении чувствительности бактерий к антибактериальным препаратам (приготовление образца и бактериального посевного материала, инкубация, считывание результатов и их регистрация) [5—8].
Методы электрофизического анализа (в том числе электроакустические) микробных клеток при воздействии на них антибактериальных препаратов являются весьма перспективными для оценки воздействия антибиотиков на микробные клетки. Например, в работе [8] предложен пьезо-кварцевый сенсор на основе сульфаметоксазол-белкового конъюгата для проточного определения сульфаниламидов в объектах окружающей среды (до 0,15 нг/мл). В качестве рецепторных молекул использованы поликлональные антитела, перекрёстно реагирующие с сульфаметази-ном, гемисукцинатом сульфаметазина и стрептоцидом, которые являются структурными аналогами сульфаметоксазола. Методы электроакустического анализа всё чаще привлекают внимание учёных для исследования различных биологических взаимодействий. Особое внимание уделяется датчикам на основе акустической линии задержки с акустическими волнами в пьезоэлектрических пластинах и пьезоэлектрическим резонаторам с поперечным электрическим полем, которые обладают высокой чувствительностью к кон-
тактирующей жидкости, т. к. реагируют на изменение как механических, так и электрических её свойств. Кроме того, с помощью таких датчиков возможен анализ биологических объектов непосредственно в жидкой фазе без нанесения на поверхность активных реагентов и проведение анализа в течение короткого промежутка времени. Описанные преимущества открывают перспективы использования метода электроакустического анализа для определения чувствительности микробных клеток к антибактериальным препаратам.
Ранее быша показана возможность определения и идентификации микробных клеток путём регистрации их специфического взаимодействия с другими микроорганизмами: бактериофагами [9], антителами [10] и миниантителами [11] с помощью датчиков на основе резонатора с поперечным электрическим полем.
Цель работы — исследование возможности использования акустического датчика на основе пьезоэлектрического резонатора с поперечным электрическим полем для определения чувствительности микробныгх клеток Escherichia coli к ампициллину.
Материал и методы
Бактериальные штаммы и условия выращивания бактерий. В работе использовали бактерии E.coli B-878 и E.coli K-12 (pUC-18), полученные из коллекции ризосферных микроорганизмов ИБФРМ РАН (Саратов) (http://collec-tion.ibppm.ru/).
Микроорганизмы хранили при +4°С и пересевали каждые 2 нед.
Для культивирования бактерий использовали жидкую питательную среду LB [12] следующего состава (г/л): NaCl (ЗАО «ЛенРеактив», Россия) — 5,0; пептон (Becton, Dickinson & Co., США) — 10,0; дрожжевой экстракт (DIFCO, США) — 5,0. Полужидкая среда LB содержала 0,7% агар-агара; твердая — 1,5% и 3% агар-агара.
Проведение анализа с помощью электроакустического датчика. Все эксперименты по изучению изменений физических свойств суспензий микробных клеток при взаимодействии с антибиотиками проводились с помощью специально изготовленного датчика на основе пьезоэлектрического резонатора с поперечным электрическим полем в диапазоне частот 6—7 МГц. Этот датчик, представленный на рис. 1, быи разработан в Саратовском филиале Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института радиотехники и электроники им. В. А. Котельникова РАН сотрудниками лаборатории физической акустики [14]. Основой датчика является пластина (1) ниобата лития X-среза толщиной 0,5 мм. На нижней стороне пластины были нанесены два прямоугольных электрода (2) с размерами 5x10 мм2 с зазором между ними 3 мм. Область вокруг электродов и часть электродов были покрыты специальным лаком (6), который демпфировал паразитные волны Лэмба [13] и обеспечивал достаточно высокую добротность ~ 630. Возбуждаемая акустическая волна (3) с поперечной электрической поляризацией (вектор P) распространялась вдоль нормали к поверхности пластины (волновой вектор к). На верхней стороне пластины быи приклеен жидкостной контейнер (5) объёмом ~1 мл.
Воздействие ампициллина с разной концентрацией на бактериальные клетки штамма E.coli В-878 приводило к изменению физических параметров суспензии клеток, которым
Рис. 1. Схема акустического датчика, содержащего резонатор с двумя прямоугольными электродами на пластине ниобата лития X-среза и жидкостной контейнер.
Примечание. Вид сбоку (а) и снизу (б) на биологический датчик: 1 - пьезоэлектрическая пластина; 2 - электроды; 3 - акустический луч; 4 - контейнер для жидкости; 5 - жидкость; 6 - демпфирующий слой лака; k и P- направления волнового вектора и электрической поляризации волны, соответственно, X и Y - кристаллографические оси пластины.
соответствовали изменения аналитического сигнала (частотные зависимости реальной и мнимой частей электрического импеданса) датчика. На первом этапе измерений в жидкостной контейнер вносилась суспензия клеток и измерялись частотные зависимости реальной и мнимой частей электрического импеданса датчика в отсутствии ампициллина. Измерения проводились с помощью прецизионного измерителя LCR параметров 4285A (Agilent). Эти зависимости использовались в качестве контроля. Затем к суспензии клеток добавляли антибиотик с заданной концентрацией и измерения повторялись. В экспериментах использовались следующие значения концентрации антибиотика: 2,5; 5,0; 7,5; 10,0 и 20,0 мкг/мл. Было установлено, что время воздействия ампициллина на микробные клетки, при котором происходит стабилизация регистрируемого сигнала, составляет 10 мин.
Все эксперименты проводились не менее чем пять раз. Относительная погрешность результатов измерений составляла 2%, т. е. при проведении нескольких экспериментов с одним и тем же взаимодействием суспензии клеток с антибиотиком значения реальной и мнимой частей электрического импеданса имели разброс значений на любой частоте в пределах ±2%. Кривые на рисунках строились по средним значениям, полученным в результате не менее 5 измерений. Но, поскольку данные полу-
Рис. 2. Частотные зависимости реальной (а) и мнимой (б) частей электрического импеданса при воздействии ампициллина на микробные клетки E.coli В-878. Примечание. 1 — контроль - суспензия клеток без добавления антибиотика; 2, 3, 4, 5 и 6 — суспензия клеток с добавлением антибиотика с разной концентрацией: 2,5, 5,0, 7,5, 10,0 и 20 мкг/мл, соответственно, при времени воздействия антибиотика 5 мин.
чены при измерении более чем 1000 точек, при демонстрации графиков планки погрешностей (около 2%) не видны.
Результаты и обсуждение
Поскольку в клинической практике при выборе антибиотиков руководствуются принципом принадлежности антибактериального препарата к определённой группе, в работе использовали одну из наиболее многочисленных групп, а именно бета-лактамные антибиотики [4]. В качестве индикаторного препарата использовали ампициллин, поскольку антибиотик активен в отношении ряда грамотрицательных палочек, в качестве объекта исследования использовались микробные клетки Е.еоН. Идея экспериментов заключалась в сравнительном исследовании изменений регистрируемых параметров датчика при воздействии разных концентраций ампициллина на клетки Е.еоН В-878, находящиеся в суспензии.
Как видно из представленных на рис. 2 (а, б) данных, изменение электрического импеданса
Результаты определения жизнеспособности (ж. с.) бактериальных клеток Е.соН В-878 методом высева на плотную питательную среду после их обработки ампициллином
Контроль, клетки без Клетки после воздействия разных концентраций ампициллина:
обработки антибиотиком 7 мкг/мл 10 мкг/мл 15 мкг/мл 20 мкг/мл
Количество ж. с., Количество ж. с., Количество ж. с., Количество ж. с., Количество ж. с., колоний Х108 % колоний Х108 % колоний Х105 % колоний Х105 % колоний Х105 %
107±0,5 Г00 40±0,8 37 19±0,6 17 17±0,4 В П±1 10
происходило уже при минимальном количестве ампициллин в образце (2,5 мкг/мл). Поскольку датчик фиксирует изменения реальной и мнимой частей импеданса уже при внесении микробных клеток, а затем фиксирует изменение аналитического сигнала после добавления ампициллина, решающим моментом является определение разницы между величиной сигнала до и после добавления антибиотика к суспензии клеток. На рис. 3 представлены зависимости изменения реальной части электрического импеданса от концентрации ампициллина для различных частот (6,2; 6,5 и 6,8 МГц). Из представленных данных видно, что вне зависимости от того, на какой частоте производится расчёт данных, полученные значения практически совпадают. Видно, что с увеличением концентрации вносимого антибиотика в клеточную суспензию изменение реальной части импеданса во всём диапазоне увеличивается вплоть до концентрации антибиотика 7,5 мкг/мл. Такая зависимость изменения величины электроакустического сигнала, вероятно, обусловлена механизмом действия антибиотика.
ЕШегоЬаШпасеае принято считать чувствительными при их ингибировании ампициллином в концентрации <8 мкг/мл. Можно предположить, что зафиксированные датчиком изменения сигнала при концентрации ампициллина вплоть до 7,5 мкг/мл (рис. 3) обусловлены бак-териостатическим действием антибиотика, при котором клетки утрачивают способность к образованию перегородок в процессе деления. Этот факт препятствует процессу их деления и происходит образование волокнистых бактерий. Наряду с этим деформация клеточной оболочки увеличивается, и это приводит к изменению её проницаемости как для внутриклеточных, так и внеклеточных компонентов и выходом из клетки макромолекул цитоплазмы, сопровождающееся изменением проводимости суспензии. Этот процесс приводит к возрастанию реальной части импеданса, как показано на рис. 2, а. При высоких значениях концентрации (8—20 мкг/мл) ампициллин проявляет бактерицидное действие, которое приводит к лизису клеток, который наступает при деформации клеточной оболочки [14].
Поскольку изменение параметров акустического датчика при использовании высоких концентраций антибиотика мы связываем с бактерицидным действием ампициллина, для контроля
0,9
о,о Н-1-1-1-1
о 5 10 15 20
С, мкг/мл
Рис. 3. Зависимость изменения реальной части электрического импеданса от концентрации ампициллина для частот: 1 — 6,2; 2 — 6,5; 3 — 6,8 МГц.
данного предположения проводились эксперименты по определению жизнеспособности клеток после воздействия ампициллина. В качестве контроля жизнеспособности клеток использовался стандартный метод подсчёта колоний клеток после их обработки ампициллином (2,5; 5,0; 7,5; 10,0 и 20,0 мкг/мл).
Показано, что после обработки клеток ампициллином в высоких концентрациях количество жизнеспособных колоний чувствительного штамма значительно сократилось (таблица).
Таким образом, на основании данных микробиологического анализа можно утверждать, что с помощью метода акустического анализа подтверждается чувствительность микробных клеток штамма В-878 к действию ампициллина.
Дополнительно был поставлен эксперимент по изучению влияния ампициллина на изменение физических параметров суспензии клеток Е.соН К-12 (риС-18), обладающего плазмидой риС-18, несущей устойчивость к ампициллину. Условия проведения эксперимента были такими же, как и при использовании клеток Е.соН В-878. Из представленных данных на рис. 4 видно, что в этом случае частотные зависимости реальной и мнимой частей импеданса не изменялись при добавлении антибиотика.
При определении количества жизнеспособных клеток Е.соН К-12 (риС-18) путём их высева на плотную питательную среду после обработки клеток ампициллином (10 мкг/мл) выявлено, что количество колоний до и после воздействия антибиотиком практически не изменилось.
1,4
1,2
1,0
s о 0,8
ОС 0,6
0,4
0,2
0,0
6,04 6,24 6,44 6,64 6,84 7,04
f, МГц
б
■4.2
■5.1
6,4 6,24 6,44 6,64 6,84 7,04
f, МГц
Рис. 4. Частотные зависимости реальной (а) и мнимой (б) частей электрического импеданса при воздействии ампициллина (10 мкг/мл) на микробные клетки E.coli К-12 ^UC-18).
Примечание. 1— контроль - суспензия клеток без добавления антибиотика; 2 — суспензия клеток с добавлением антибиотика.
При сравнении результатов исследований для суспензий клеток, чувствительных (см. рис. 2) и устойчивых (см. рис. 4) к исследуемому антибиотику штаммов, видно, что при воздействии ампициллина на микробные клетки акустический датчик фиксирует изменение выходных параметров лишь при условии, что штамм является чувствительным к действию изучаемого антибиотика.
ЛИТЕРАТУРА
1. Gillespie S.H., McHugh T.D. (eds.) Antibiotic Resistance Protocols: Second Edition, Methods in Molecular Biology, vol. 642, Springer Science+Business Media, LLC 2010.
2. NCCLS. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing; ninth informational supplement M100-S9. 1999; 19 (1).
3. Methods for the determination of susceptibility of bacteria to antimicrobial agents. EUCAST Definitive document. Clin Microbiol Infect 1998; 4: 291-296.
4. Сухорукова M.B. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам: что стоит за результатом. Клин микробиол антимикроб химиотер. - 2013. - Т. 15. - № 3. - С. 219-229. / Sukhorukova M.V. Opredelenie chuvstvitel'nosti mikroorganizmov k antibiotikam: chto stoit za rezul'tatom. Klin mikrobiol antimikrob khimioter 2013; 15: 3: 219-229. [in Russian]
5. Cavalieri S.J., Biehle J.R.., Sanders W.E. Jr. Synergistic activities of clar-ithromycin and antituberculous drugs against multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis. Antimicrob Agents Chemother 1995; 39: 1542-1545.
6. Fleschin S., Bala C., Bunaciu A.A., PanaitA., AboulEnein H.Y. Enalapril microbial biosensor. Prepar Biochem Biotechnol 1998; 28: 261-269.
Что касается клеток, устойчивых к изучаемому антибиотику, то для них указанные изменения не наблюдаются. Следовательно, данные, полученные с помощью вышеописанного электроакустического датчика, полностью подтверждаются результатами микробиологического анализа.
Таким образом, установлено, что изменения физических параметров суспензий клеток при действии ампициллина значительно отличаются для чувствительных и резистентных штаммов E.coli. Показана возможность регистрации воздействия бета-лактамных антибиотиков на примере ампициллина на микробные клетки E.coli с помощью пьезоэлектрического резонатора с поперечным электрическим полем. Показателем чувствительности микробных клеток к антибиотику является разница между регистрируемым сигналом датчика для суспензии клеток без воздействия антибиотика и после воздействия антибиотика, при этом критерием воздействия является изменение сигнала не менее 5%. Анализ проводился в жидкой фазе без иммобилизации антибиотиков на поверхности пьезоэлектрика. Преимуществами данного подхода является высокая чувствительность метода, точность измерений (в пределах ±2%) и короткое время проведения анализа (в пределах 10 мин). Следует отметить, что с помощью стандартных микробиологических методов результат высева и определение инги-бирующего действия антибиотиков получают не ранее чем через 18—20 ч.
Полученные данные являются перспективными для развития нового экспресс-метода определения чувствительности/устойчивости микробных клеток к ампицилину.
Работа выполнена при частичной финансовой поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (проекты №№ 19-07-00300 и 19-0700304).
7. Galindo E., Lagunas F., Osuna J., Soberon X., Garcia J.L. A microbial biosensor for 6-aminopenicillanic acid. Enzym Microb Technol 1998; 23 (5): 331-334.
8. Ермолаева Т. H., Калмыкова E. H., Шашканова О. Ю. Пьезоквар-цевые биосенсоры для анализа объектов окружающей среды, пищевых продуктов и для клинической диагностики. Росс хим журн. - 2008. - T. LII. - № 2. - С. 17-29. / Ermolaeva T. N, Kalmykova E. N., Shashkanova O. Yu. P'ezokvartsevye biosensory dlya analiza ob"ektov okruzhayushchey sredy, pishchevykh produk-tov i dlya klinicheskoy diagnostiki. Ross khim zhurn 2008; LII: 2: 17—29. [in Russian]
9. Zaitsev B.D., Kuznetsova I.E., Shikhabudinov A.M., Ignatov O.V, Guliy O.I. Biological sensor based on the lateral electric field excited resonator. IEEE Transacti Ultrason Ferroelect Frequency Control 2012; 59 (5): 963-969.
10. Гулий О.И., Зайцев Б.Д., Бородина È.A., Теплых A.A., Игнатов O.B. Aкуcтичеcкий метод анализа бaктеpиaльныx клеток. Биофизика. - 2016. - Т. 61. - № 4. - С. 744-757. / Guliy O.I, Zaytsev B.D., Bopodina I.A., Teplyx A.A., Ignatov O.V. Akucticheckiy metod analiza baktepial'nyx kletok. Biofizika 2016; 61: 4: 744—757. [in Russian]
11. Гулий О.И., Зайцев Б.Д., Kyзнецова И.Е., Шиxaбyдинoв A.M., Дык-ман Ë.A., Староверов C.A. и др. Определение спектра литической
активности бактериофагов методом акустического анализа. Биофизика. — 2015. — Т. 60. — № 4. — С. 722-28. / Guliy O.I, Zaytsev B.D., Kuznetsova I.E., SHikhabudinov A.M., Dykman L.A., Staroverov S.A. i dr. Opredelenie spektra liticheskoy aktivnosti bakte-riofagov metodom akusticheskogo analiza. Biofizika 2015; 60: 4: 722—728. [in Russian] 12. Гулш О.И., Зайцев Б.Д., Кузнецова И.Е., ШuxaбyдuновA.M., Караваева O.A., Дыкман Л.А. u др. Получение фаговых мини-антител и их использование для детекции микробных клеток с помощью электроакустического датчика. Биофизика. — 2012. — Т. 57. — № 3. — С. 460—67. / Guliy O.I, Zaitsev B.D., Kuznetsova I.E., Shikhabudinov A.M., Karavaeva O.A., Dykman L.A. i dr. Poluchenie fagovuch antitel i ich icpolzovanie dla detekcii mikrabnuch kletok s pomochy electoakustich-eskogo datchika. Biofizika 2012; 57: 3: 460—467 [in Russian]
СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ:
Гулш Ольга Ивановна (Guliy O. I.) — д. б. н., профессор, ведущий научный сотрудник лаборатории биохимии Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института биохимии и физиологии растений и микроорганизмов Российской академии наук (ИБФРМ РАН), Саратов; профессор кафедры микробиологии, биотехнологии и химии ФГБОУ ВО Саратовский государственный аграрный университет им. Н. И. Вавилова, Саратов Зайцев Борт Давыдовт (Zaitsev B. D.) — доктор физ-мат. наук, профессор, заведующий лабораторией физической акустики Саратовского филиала Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института радиотехники и электроники им. В. А. Котельникова РАН, Саратов Караваева Ольга Aлeкcaндpовнa (Karavaeva O. A.) — к. б. н., научный сотрудник лаборатории биохимии Федерально-
13. Зайцев Б.Д., Кузнецова И.Е., Шихабудинов A.M., Васильев A.A. Новый способ подавления паразитных мод в пьезоэлектрическом резонаторе с поперечным электрическим полем. Письма в Журнал технической физики. — 2011. — Т. 37. — № 11. — С. 27—33. / Zaytsev B.D., Kuznetsova I.E., Shikhabudinov A.M., Vasil'ev A.A. Novyy sposob podavleniya parazitnykh mod v p'ezoelektricheskom rezonatore s poperechnym elektricheskim polem. Pis'ma v ZHurnal tekhnicheskoy fiziki 2011; 37: 11: 27—33. [in Russian]
14. Бриан Л.Е. Бактериальная резистентность и чувствительность к химиопрепаратам. М., Медицина, 1984. — С. 124—135. / Brian L.E. Bakterial'naya rezistentnost' i chuvstvitel'nost' k khimiopreparatam. M., Meditsina, 1984; 124—135. [in Russian]
го государственного бюджетного учреждения науки Института биохимии и физиологии растений и микроорганизмов РАН (ИБФРМ РАН), Саратов Ловцова Лариса Геннадиевна (Lovtsova L. G.) — к. тех. н., доцент кафедры микробиологии, биотехнологии и химии ФГБОУ ВО Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилов, Саратов Мехта С. К. (Mehta S. К.) — профессор, Dr. Algal Biochemistry and Molecular Biology Laboratory Department ofBotany, School of Life Sciences. Mizoram University, Индия Бородина Ирина Анатольевна (Borodina I. A.) — к. физ-мат.н., ведущий научный сотрудник лаборатории физической акустики Саратовского филиала Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института радиотехники и электроники им. В. А. Котельникова РАН, Саратов
