CC BY
65
УДК 612.36-002: 612.014.462.9
Ю.В. Башкирова, С.М. Тарабукина, Ж. Мутайхан, Т.А. Кояпакова, М.А. Колпаков
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ И КЛИНИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПРИМЕНЕНИЯ ЭНТЕРОСОРБЦИИ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ТОКСИЧЕСКОМ ГЕПАТИТЕ
ГУ НИИ клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН, Новосибирск ГОУ ВПО Новосибирский государственный университет
На модели хронического токсического гепатита у крыс показано участие лимфатической системы в формировании ответной реакции на токсическое поражение печени, заключающееся в депонировании в центральной лимфе продуктов липидной пероксидации и активном включении антиоксидантов в реакции их нейтрализации с перераспределением церулоплазмина в лимфатическое русло. Применение энтеросорбента СУМС-1 в течение 28 дней у животных с хроническим токсическим гепатитом, улучшая функциональное состояние печени, приводит и к снижению концентрации продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в плазме крови и центральной лимфе. Применение энтеросорбента СУМС-1 в комплексной терапии больных туберкулезом легких с лекарственным токсическим поражением печени купирует клинико-лабораторные проявления эндотоксикоза, устраняет явления непереносимости антибактериальных препаратов. При использовании энтеросорбента увеличивается скорость элиминации изониазида, уменьшается его объем распределения, при этом площадь под кинетической кривой не изменяется. Концентрация первичных и вторичных продуктов ПОЛ в плазме на фоне сорбентной терапии снижается, а содержание церулоплазмина и а-токоферо-ла не изменяется.
Ключевые слова: экспериментальный хронический токсический гепатит, лекарственный гепатит у больных туберкулезом, энтеросорбция
Энтеросорбция за последнее время получила широкое применение в клинической практике при лечении практически всех заболеваний. Важным фактором распространения энтеросорбции является то, что этот метод обладает малым побочным действием при введении сорбента в дозах, обеспечивающих достаточную эффективность, и дает возможность в кратчайшие сроки уменьшить уровень токсичных агентов в организме [1]. Проведенные клинические испытания и научные данные, полученные в процессе применения энтеросорбентов в различных клиниках, позволили выявить прямые и опосредованные эффекты энтеросорбции и сделать заключение о необходимости включения энтеросорбентов как компонентов в комплексную терапию при различной терапевтической патологии [2].
Целью настоящего исследования явилось изучение восстановительных процессов в печени при энтеросорбционной коррекции хронического токсического поражения печени в эксперименте и клинике.
Материалы и методы исследования
Экспериментальная часть исследования выполнена на крысах-самцах Вистар массой около
220 г. Исследование проводились в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу Министерства здравоохранения СССР от 12.08.1977 г. № 755). Животные находились в отдельных клетках при искусственном освещении в режиме 12:12, температуре +26±1 °С и содержались на стандартном рационе. Потребление корма и воды не ограничивали. Животных брали в эксперимент через 18 часов после последнего кормления. Модель хронического токсического поражения печени создавали путем энтерального введения тетрахлорметана и этанола в течение 4 недель [3]. Интактные животные составили контрольную группу. Животные на 28-е сутки токсического воздействия составили 1-ю группу. Группы 2 и 3 составили животные на 14-е и 28-е сутки после прекращения токсического воздействия соответственно, никакие методы коррекции в этих группах не применялись. Животным в группах 4 и 5 ежедневно, в течение 14 и 28 суток соответственно, начиная с первого дня после прекращения токсического воздействия, в корм добавляли энтеросорбент СУМС-1 из расчета 6% от веса сухого корма. Количество животных в каждой группе составило 9-12.
В предыдущих исследованиях нами было показано, что на 28-е сутки токсического воздействия (группа 1) наблюдаются максимальные лабораторные проявления цитолитического и холестатического синдромов, выраженное угнетение ферментных систем микросомального окисления, активизация процессов липидной пе-роксидации [4].
Взятие лимфы из цистерны грудного протока производили под тиопенталовым наркозом [5]. В плазме крови и центральной лимфе определяли содержание продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) — малонового диальдегида (МДА) [6], диеновых конъюгатов (ДК) [7], состояние системы антиоксидантов оценивали по количеству альфа-токоферола [8] и церулоплазмина [9]. Концентрацию ДК выражали в единицах оптической плотности и соотносили с количеством общих лигшдов (Е233/мг) [7]. Значения индекса окисленности (ИО) липидов выражали в условных единицах (УЕ) [10].
В клинической части исследования обследовано 53 больных с распространенным инфильтра-тивным туберкулезом легких. Средний возраст пациентов составил 47,3±3,2 года. Мужчин было 32, женщин — 21. Все больные получали противотуберкулезные препараты в общепринятых дозах, в соответствии с массой тела пациентов. Дополнительное обследование всех больных не выявило присутствия в крови HBsAg и суммарных антител к вирусу гепатита С. При поступлении в клинику туберкулеза биохимические показатели, характеризующие функциональное состояние печени, были в пределах нормы. В процессе приема противотуберкулезных препаратов у больных был диагностирован хронический лекарственный гепатит. Пациенты были разделены на две группы: контрольную (I) и основную (И). Первую группу составили 22 больных, у которых при выявлении клинико-лабораторных проявлений лекарственного поражения печени, помимо отмены препаратов, проводилась традиционная детоксикационная терапия с использованием форсированного диуреза, гепатопротекторов и витаминных препаратов. Пациентам основной группы (31 человек) с целью детоксикации дополнительно был назначен энтеросорбент СУМС-1 в
суточной дозе 0,5 г/кг массы в 4 приема за 1 час до приема пищи ежедневно в течение 14 дней.
Определение активности аланинаминотран-сферазы (АлАТ), аспартатаминотрансферазы (АсАТ), щелочной фосфатазы (ЩФ), концентрации общего билирубина (ОБ) и конъюгированного билирубина (КБ), а также значений тимоловой пробы (ТП) в плазме крови проводилось с помощью соответствующих диагностических наборов фирмы «Вектор-Бест».
Для оценки активности ПОЛ в плазме крови определяли концентрацию МДА и ДК, а также церулоплазмина и а-токоферола по указанным выше методикам. Исследование проводили двукратно во всех группах с интервалом в две недели.
Исследование фармакокинетики изониазида (ИН) проводили по следующей схеме. ИН вводили внутривенно струйно в дозе 10 мг/кг массы больного. Взятие крови производили из локтевой вены через 2, 4, 6 и 8 часов после введения препарата. Концентрацию ИН в плазме крови определяли спектрофотометрически [И]. Концентрация изониазида определялась по калибровочным кривым известных концентраций препарата. Рассчитывали следующие фармакокинетические параметры [12]: константу скорости элиминации (Ке|), период полуэлиминации (Т ), кажущуюся начальную концентрацию (С ), удельный объем распределения препарата (Уа), общий клиренс препарата (С,), площадь под кинетической кривой (Б).
Исследование соответствовало этическим стандартам биоэтического комитета, входящего в состав ГУ НИИКиЭЛ СО РАМН, разработанным в соответствии с Хельсинкской декларацией Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2000 г. и Правилами клинической практики в Российской Федерации, утвержденными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. № 266. Все лица, участвующие в исследовании, дали информированное согласие на участие в исследовании.
Полученные результаты обрабатывали статистически с использованием критериев Стьюдента, Колмогорова-Смирнова.
Таблица 1
Содержание ДК (Е233/мг липидов) и МДА (нмоль/мл) в плазме крови и центральной лимфе крыс
с хроническим токсическим гепатитом
Контроль Группа 1 Группа 2 Группа 3 Группа 4 Группа 5
Плазма крови 1 2 0,98±0,07 1,89±0,27 0,77±0,08 * 3,14±0,30* 0,68±0,04 * 2,47±0,21 * 0,62±0,06 * 2,44±0,27 * 0,79±0,06 * 2,14±0,23 0,76+0,07* 1,86±0,11
Лимфа 1 2 0,33±0,04 1 1,44±0,21 0,87±0,07 * 4,57±0,46*1 0,46±0,03 *1 2,85±0,27 * 0,38±0,03 1 1,80±0,15 1 0,37±0,05 1 2,26±0,19 * 0,34±0,04 1 1,39±0,09 1
Примечание. 1 — диеновые конъюгаты, 2 — малоновый диальдегид. * — достоверность различий в сравнении с соответствующим параметром контрольных животных, 1 — достоверность различий в паре плазма-лимфа (¥<0.05).
Результаты исследования
Изучение содержания продуктов ПОЛ у крыс с хроническим токсическим гепатитом обнаружило (Таблица 1), что на 28-е сутки воздействия в плазме крови отмечается снижение концентрации ДК на 21,4%, что может объясняться активным расходованием промежуточных продуктов ПОЛ в реакциях пероксидации, при этом в центральной лимфе концентрация ДК возрастает в 2,6 раза в сравнении с контрольной группой. В группах 2 и 3 концентрация ДК в плазме крови остается сниженной по сравнению с интактными животными, в лимфе наблюдается постепенное снижение содержания ДК (в группе 2 концентрация ДК превышает контрольный уровень в 1,4 раза, в группе 3 достоверно не отличается от контрольных значений). Концентрация МДА в плазме крови и в лимфе на 28-е сутки токсического воздействия возрастает (в плазме крови в 1,66 раза, в лимфе в 3,17 раза). В группе 2 концентрация МДА в плазме крови и лимфе снижается, но остается повышенной по сравнению с интактными животными. К 56-м суткам в группе 3 концентрация МДА в плазме крови была на 29,1% выше контрольных значений, а в лимфе не отличалась от показателей интактных крыс. Изучение содержания а-токоферола в динамике токсического воздействия не выявило достоверных изменений его концентраций в плазме крови ни одной групп (Таблица 2). Однако в центральной лимфе на 28-е сутки создания модели обнаружено снижение концентрации а-токоферола на 48,1% по сравнению с контрольными значениями. После прекращения токсического воздействия концентрация а-токоферола в лимфе постепенно увеличивалась, но не достигала уровня интактных крыс и оставалась сниженной в 3-й группе на 26,6%. Содержание церулоплазмина в плазме крови у животных 1-й группы не изменялось в сравнении с показателями контрольной группы. В то же время в центральной лимфе животных 1-й группы концентрация церулоплазмина была повышена в
1,35 раза по сравнению с контролем. На протяжении всего восстановительного периода концентрация церулоплазмина в лимфе была повышена по сравнению с контролем (42-е сутки на 65,5%,
56-е сутки на 54,5%).
Применение СУМС-1 в течение 14 и 28 дней не привело к значительным изменениям концентрации ДК ни в плазме крови, ни в лимфе по сравнению с животными, оставленными без лечения. Однако наблюдалась отчетливая тенденция к уменьшению содержания ДК в центральной лимфе. Использование сорбента СУМС-1 позволило нормализовать уровень МДА в плазме крови и снизить его концентрацию до уровня интактных крыс. Через 28 дней энтеросорбции концентрация МДА в лимфе и плазме крови не отличались от показателей интактных животных. При этом концентрация МДА в плазме крови была на 23,7%, а в лимфе на 22,8% ниже, чем в группе
3. Применение СУМС-1 в течение 14 и 28 суток существенно не изменяло концентрацию а-токоферола в плазме крови и центральной лимфе по сравнению с группами, в которых «лечение» не проводилось. На фоне приема СУМС-1 в группе 4 в плазме крови концентрация церулоплазмина не отличалась от контрольного уровня, но была на 19,8% ниже, чем в группе 2. Концентрация церулоплазмина в лимфе при энтеросорбции в течение 14 дней оставалась выше контроля на 47,6%. Достоверных различий в концентрации церулоплазмина в плазме крови и лимфе в группе 4 не выявлено. Увеличение срока энтеросорбции до 28 суток достоверно не изменяло концентрацию церулоплазмина ни в плазме крови, ни в лимфе.
Таким образом, в условиях хронического токсического поражения печени лимфатическая система является своеобразным «депо» продуктов липидной пероксидации. Накопление в центральной лимфе продуктов перекисного окисления липидов сопровождается снижением концентрации а-токоферола и увеличением содержания церулоплазмина. Поэтому в условиях развития хронического токсического гепатита лимфатическая система может рассматриваться как точка приложения применения корригирующих методов. Применение энтеросорбента СУМС-1 в течение 28 дней у животных с хроническим токсическим гепатитом, улучшая функциональное состояние печени, приводит и к снижению концентрации продуктов ПОЛ в плазме крови и центральной
Таблица 2
Содержание а-токоферола (мкг/мл) и церулоплазмина (мг%) в плазме крови и центральной лимфе крыс
с хроническим токсическим гепатитом
Контроль Группа 1 Группа 2 Группа 3 Группа 4 Группа 5
Плазма крови 1 2 4,20±0,45 33,90+1,03 4,27±0,43 38,72 ±3,07 4,14±0,47 42,68±4,04 * 4,23±0,40 35,97±1,71 4,48+0,35 32,85±2,64 4,64±0,42 35,84±3,78
Лимфа 1 2 6,09±0,62 1 17,85±1,13 1 3,16±0,39 *1 24,06±2,16 *1 3,95±0,35 * 29,54±2,43 *1 4,47±0,45 * 27,57±1,98 *1 3,96±0,31 * 28,34±2,31 * 4,43+0,46 25,55±1,83*1
Примечание. 1 — а-токоферол, 2 — церулоплазмин. * — достоверность различий в сравнении с соответствующим параметром контрольных животных, 1 — достоверность различий в паре плазма-лимфа (Р<0.05).
160
Т1/2 Со Vd Cl Kel S
'“I
Щконтрольная группа □ основная группа (СУМС-1)
Рис. Фармакокинетика изониазида на фоне применении СУМС-1 в течение 14 Очей у больных туберкулезом легких с лекарственным поражением печени.
* достоверность различий внутри групп до и после лечения; # достоверность различий между основной и контрольной группами (Р<0.05).
лимфе, тем самым проявляется лимфопротекторное действие эитеросорбцп п. СУМС-1 на правах функционального синергиста играет роль лим-фопротезирующего фактора, сохраняя дренаж-но-детоксикационные возможности регионарных лимфатических структур [11.
Этот саногенный механизм энтеросорбции был подтвержден нами в клинической части исследования. В результате проведенного исследования установлено, что применение энтеросор-бента СУМС-1 в течение 14 дней купировало явления лекарственной непереносимости противотуберкулезных препаратов, то есть исчезли проявления интоксикации: улучшилось общее состояние, нормализовалась температура, прекратилась тошнота, улучшился аппетит, исчезла боль в правом подреберье. При этом отмечалось снижение активности трансаминаз, щелочной фосфатазы в плазме крови, уменьшение значений тимоловой пробы, нормализация пигментного обмена. Таким образом, применение энтеросорбента СУМС-1 и комплексном лечении больных туберкулезом легких с лекарственным поражением печени улучшает функциональное состояние печени, устраняет явления непереносимости противотуберкулезных препаратов. Изменение фармакокинетических параметров изониазида при использовании СУМС-1 (Рисунок) свидетельствует об увеличении скорости метаболизма препарата, поскольку наблюдается уменьшение времени полуэлиминации, что также подтверждает улучшение метаболической функции печени.
Таблица 3
Состояние системы про- и антиоксидантов плазмы крови больных туберкулезом с токсическим лекарственным гепатитом на фоне применения СУМС-1 в течение 14 дней
Гр Vllllbl
Параметры Контрольная Основная (с СУМС-1)
До лечения После лечения До лечения После лечения
ТФ. мкг/мл 23,5+2,4 21,1 ±2.7 24.8±2.6 25.9±3.0
ЦП. мг".. .40.1 ±3.7 34.7±3,9 35,0±3.8 38.6±3.2
МДА, нМ/мл 1.8710.18 2.30±0,1(> * 1,91 ±0,16 1.72+0,14#
ДК. Е233/МГ 1.39 г 0.13 1.40±0.19 1.36+0.11 1.03±<). 10 * г
Примечание. ' - достоверность различий внутри основной и контрольной групп 1>о и после лечения; # достоверное!ньраз-личий междч основной и контрольной гриппами после лечения (Р<0.05).
При изучении состояния системы про- п антиоксидантов плазмы крови (Таблица 3) не выявлено различий между I и II группами «до лечения». В плазме крови больных I группы на фоне двухнедельного лечения не обнаружено достоверного изменения концентрации церулоплазмина н а-токоферола, наблюдалась тенденция к увеличению содержания продуктов ПОЛ, а концентрация МДА была повышена на 23.0%. У больных II группы концентрация ДК уменьшалась на 24.3%, количество МДА имело тенденцию к снижению, а содержание церулоплазмина и а-токоферола не менялось. Сравнение результатов исследования содержания продуктов ПОЛ у больных контрольной п основной групп после 14 дней лечения выявило повышенный уровень продуктов ПОЛ I) контролыюй группе.
Таким образом, результаты проведенного исследования свидетельствуют о перспективности использования энтеросорбента СУМС-1 в лечении больных туберкулезом легких с лекарственными токсическими поражениями печени, а единые патогенетические механизмы поражения печени делают возможным использование энтеросорбции при токсических поражениях печени различного генеза. Включение энтеросорбента СУМС-1 в лечение больных туберкулезом легких с лекарственным токсическим поражением печени позволяет устранит ь явления непереносимости противотуберкулезных препаратов, улучшает метаболическую активность печени, не уменьшает экспозицию организма к изоииазиду п ис требует коррекции дозы основного противотуберкулезного препарата изониазида. Энтеросорбция с использованием СУМС-1 у больных туберкулезом с клинико-лабораторными проявлениями лекарственного поражения печени уменьшает содержание первичных и вторичных продуктов
ПОЛ в плазме крови, не влияет на концентрацию антиоксидантов церулоплазмина и а-токоферола в плазме крови, предотвращая развитие окислительного стресса.
Исследование поддержано Грантом Президента Российской Федерации МД-1389.2006.7
EXPERIMENTAL AND CLINICAL ASPECTS OF ENTEROSORBTION IN CHRONIC TOXIC HEPATITIS
Yu.V. Bashkirova, S.M. Tarabukina, G. Mutaikhan, T.A. Kolpakova, M.A. Kolpakov
Participation of lymphatic system in formation of response to the toxic defeat of liver is shown on the model of a chronic toxic hepatitis at rats. It has been found out deposition in the central lymph of products of lipid peroxidation and active inclusion of antioxidants in reaction of their neutralization with redistribution of ceruloplasmin in a lymphatic channel. Usage of SUMS-1 enterosorbent within 28 days at animals with a chronic toxic hepatitis, improving a functional condition of a liver, results in decrease of concentration of products the lipid peroxidation in plasma of blood and the central lymph. Usage of SUMS-1 enterosorbent in complex therapy of patients with pulmonary tuberculosis and drug toxic hepatitis stops clinical and laboratory signs of endo-toxicosis, eliminates the phenomena of intolerance of anti-bacterial preparations. Usage of SUMS-1 enterosorbent leads to the increase of isoniazide elimination rate, its volume of distribution is decreased, thus the area under a kinetic curve is not changed. Concentration of primary and secondary products of lipid peroxidation in plasma on a background of enterosorbent therapy is decreased, and the amount of ceriloplasmone and a-tocopherol is not changed.
Литература
1. Бородин, Ю.И. Эндоэкология, лимфодогия и здоровье / Ю.И. Бородин // Бюл. СО РАМН. — 1999. — № 2. - С. 5-7.
2. Рачковская, JI.H. Углеродминеральные сорбенты для медицины / Л.Н. Рачковская. — Новосибирск, 1996. - 234 с.
3. Скакун, Н.П. Эффективность витогепата и сире-пара в сочетании с карсилом при хроническом поражении печени / Н.П. Скакун, И.П. Мосейчук, Я.Я. Гиль // Эксперим. и клин, фармакол. — 1992. — Т. 55. — № 1. _ с. 61-63.
4. Гепатоиротекторные свойства водного экстракта пятилистника кустарникового при хроническом токсическом гепатите / М.А. Колпаков, О.Р. Грек, Ю.В. Башкирова и др. // Бюлл. эксперим. биол. мед. — 2001. — Т. 131,- №5. -С. 554-556.
5. Лимфатическая система, стресс, метаболизм /
A.В. Ефремов, А.Р. Антонов, Ю.И. Бородин и др. — Новосибирск, 1999. — 194 с.
6. Каган, В.Е. Проблема анализа эндогенных продуктов иерекисного окисления липидов: Итоги науки и техники ВИНИТИ АН СССР / В.Е. Каган, О.Н. Орлов, Л.Л. Прилипко. — М., 1986. — 136 с.
7. Колосова, Н.Г. Микрометод УФ-спектрофотомет-рии диеновых конъюгатов / Н.Г. Колосова, Л.Б. Ким,
B.Ю. Куликов // Лаб. дело. — 1988. — № 9. — С. 73-74.
8. Teylo?’, S.L. Sensitive fluorometric method for tissue tocoferol analysis / S.L. Teylor, M. Lamden, A.L. Tappel // Lipids. - 1976. - Vol. 11. - P. 530-538.
9. Тен, Э.В. Экспресс-метод определения активности церулоплазмина в крови / Э.В. Тен // Лаб. дело. - 1981. -№ 6. - С. 334-335.
10. Мальцева, E.JI. Взаимосвязь изменений вязкости и степени окисленности липидов с активностью адени-латциклазы в плазматических мембранах клеток печени и мозга после введения антиоксиданта in vivo / Е.Л. Мальцева, Н.В. Боровок, И. Златанов // Биол. мембраны. - 1995. - Т. 12. - № 6. - С. 591-597.
11. Морозов, А.В. Модифицированный метод определения изониазида в сыворотке крови и органах животных / А.В. Морозов, Н.Д. Шаталова, С.И. Платов // Пробл. туб. — 1991. — № 7. — С. 51-53.
12. Холодов, J1.E. Клиническая фармакокинетика / Л.Е. Холодов, В.Г1. Яковлев. — М., 1985. — 464 с.
