CC BY
12отходов по смертности и изменению плодовитости цериодафний. ФР. 1.39.2001.00282. — М.: Ак-варос, 2001. — 52 с.
6. Обухова Л.М., Ведунова М.В., Конторщико-ва К.Н. и др. Морфофизиологический анализ плазмы крови при эндогенной интоксикации // Вестник Нижегородского университета им. Н.И. Лобачевского, 2007. — № 6. — С. 104-107.
7. Шабалин В.Н., Шатохина С.Н. Аутогенные ритмы и самоорганизация биологических жидкостей // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 1996. — Т. 122. — № 10. — С. 364-371.
8. Шабалин В.Н., Шатохина С.Н. Морфология биологических жидкостей человека. — М.: Хризо-стом, 2001. — 304 с.
Материал поступил в редакцию 25.09.08.
L.M. Obukhova, M.Y. Bezrukov ASSESSMENT OF WASTES TOXICITY USING THE WEDGE-LIKE DEHYDRATION METHOD
State Medical Academy of Nizhni Novgorod N.I. Lobachevskii State University of Nizhni Novgorod
To evaluate toxicity of aquatic wastes, a method of wedge-like dehydration was applied using a 10 % solution of serum albumin as a test-object. A linear dependence was found out between a total of abnormal particularities in its structural macro pattern and concentration and toxicity of the added solution and samples of aquatic waste: the higher toxicity, the larger amount of observed particularities. The convergence of the results received with the use of the developed modification of wedge-like dehydration is higher than at biological testing using Ceriodaphnia affinis.
УДК 614.72 : 613.63
Р.А. Сулейманов, Т.К. Валеев*
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ДАННЫЕ ПО ГИГИЕНИЧЕСКОМУ НОРМИРОВАНИЮ АГИДОЛА-21 В АТМОСФЕРНОМ ВОЗДУХЕ НАСЕЛЕННЫХ МЕСТ
ФГУН «Уфимский НИИ медицины труда и экологии человека» Роспотребнадзора
По результатам эспериментов на лабораторных животных и наблюдениях на волонтерах обоснованы величины ПДК агидола-21 в атмосферном воздухе населенных мест: максимальная разовая — 0,5 мг/м3 и среднесуточная — 0,3 мг/м3. Лимитирующий показатель — резорбтивное действие, класс опасности — 3.
Ключевые слова: токсичность, экспериментальные исследования, лабораторные животные, агидол-21.
Введение. Для придания горюче-смазочным материалам, моющим средствам и многим химическим товарам улучшенных эксплуатационных показателей (минимальная коррозийная активность, максимальная устойчивость к окислению, стандартная вязкость и др.) к ним в небольшом количестве добавляются особые компоненты — стабилизаторы и присадки. В настоящее время широко распространены алкилфе-нольные стабилизаторы и присадки, получаемые на основе фенола. К одной из эффективных и широко применяемых групп алкилфенольных соединений относятся так называемые вещества — агидолы.
* фрагмент диссертационной работы
Изучаемое нами химическое вещество — 2-трет-бутил-4-гексилфенол (агидол-21) относится к классу алкилфенолов и представляет собой вязкую медообразную жидкость от янтарного до коричневого цвета с ароматическим запахом, не растворяется в воде, растворяется в этаноле, толуоле. Эмпирическая формула: С16Н26О. Молекулярная масса — 234,4. Техническое название — агидол-21. Гигиенический регламент в атмосферном воздухе для данного вещества отсутствует.
Целью настоящей работы явилось обоснование предельно-допустимой концентрации аги-дола-21 в атмосферном воздухе населенных мест.
Материалы и методы исследований. Исследования проводили согласно требованиям методи-
Таблица 1
Время наступления достоверных токсических эффектов в зависимости от уровня концентрации
Показатель биологического действия Концентрация агидола-21, мг/м3 Время наступления эффекта, часы
Суммационно-пороговый показатель (СПП) 150 34
50 150
20 200
10 400
Поведенческие реакции: «норковый рефлекс» 150 39
50 92
20 350
10 390
Лактатдегидрогеназа (ЛДГ) 150 19
50 62
20 110
10 250
Аланинаминотрансфераза (АЛТ) 150 42
50 130
20 500
10 590
ческих указаний [1]. Для определения вещества в воздухе использовали утвержденный в установленном порядке химический метод, принцип которого — улавливание агидола-21 из воздуха поглотителем, наполненным толуолом, в который внесен раствор пара-бромфенола, используемый в качестве внутреннего стандарта, с последующим определением на газовом хроматографе с пламенно-ионизационным детектором после хроматографического разделения на капиллярной колонке. Расчет средних концентраций за период хронического эксперимента проводили на основе построения кумулятивных кривых.
Ингаляционное воздействие агидола-21 на животных осуществляли в 200-литровых камерах с нижним диффузором, через который проводили отсос воздуха. Воздух подавался в камеру, проходя через силикогельный поглотитель. Для отбора проб в камеру вмонтирован штуцер на уровне зоны дыхания. Камера для контрольных животных находилась в отдельной комнате. Проведение болезненных процедур и декапита-цию экспериментальных животных осуществляли с соблюдением требований к процедуре эвтаназии [2].
Исследование хронического действия вещества проведено на белых беспородных крысах-самцах с массой тела 200—210 г. Длительность круглосуточной ингаляционной экспозиции составила 3 мес с последующим периодом наблюдения в течение 1-го мес. При оценке функционального состояния целостного организма бы-
ли использованы следующие показатели: общее состояние, масса тела, спонтанная двигательная активность, суммационно-пороговый показатель (СПП), лактатдегидрогеназа (ЛДГ), ас-партатаминотрансфераза (АСТ), аланинамино-трансфераза (АЛТ), щелочная фосфатаза (ЩФ), сульфгидрильная (SH) группа, холестерин, общий белок, количество лейкоцитов, эритроцитов, содержание гемоглобина, масса внутренних органов. Исследования по определению отдаленных эффектов проведены в соответствии с МУ [5]. Достоверность результатов исследований учитывали по критерию t-Стьюдента при p < 0,05.
Результаты и обсуждение. Изучение рефлекторного действия вещества выполнено с участием 20 волонтеров в возрасте от 24 до 53 лет (мужчины и женщины). При определении порога обонятельного ощущения исследовали 7 концентраций вещества. Каждая концентрация была предъявлена волонтерам по три-четыре раза. Обработку экспериментальных данных проводили методом пробит-анализа [1, 7]. В результате установлено, что вещество обладает слабым ароматическим запахом, порог обонятельного ощущения определен на уровне 3,1 мг/м3, угол наклона прямой составил 35 класс опасности — 4, коэффициент запаса — 1,8. ПДК 20-минутного периода осреднения агидола-21 обоснована на уровне 1,72 мг/м3.
В остром эксперименте при пероральном введении экспериментальным животным (мы-
Таблица 2
Основные токсикометрические параметры агидола-21, установленные на основе зависимости «концентрация-время»
Показатель Угол наклона прямой «концентрация-время», градусы Параметры токсичности и опасности
класс опасности порог хронического действия, мг/м3 коэффициент запаса недействующие концентрации, мг/м3
СПП 137 3 1,5 5 0,3
Норковый рефлекс 140 3 1,3 6 0,22
АЛТ 132 3 2,6 8 0,32
ЛДГ 129 3 1,8 10 0,18
Таблица 3
Параметры токсичности и опасности агидола-21, установленные по различным методическим схемам нормирования загрязнителей атмосферы
Показатель Класс опасности Порог хронического действия мг/м3 Коэффициент запаса Недействующие концентрации, мг/м3 Рекомендуемые уровни ПДКсс
хронич. краткоср. хронич. краткоср. хронич. краткоср. хронич. краткоср. хронич. краткоср.
Норковый рефлекс 3 1,52 1,3 6 0,3 0,22
СПП 3 1,52 1,5 5 0,3 0,3
АЛТ 3 1,52 2,6 8 0,3 0,32
ЛДГ 3 1,52 1,8 10 0,3 0,18 0,2
АСТ 1,52 0,3
Интегральный показатель опасности «В» 3 5,3 0,29
ши) продукта в виде 50 % суспензии в растительном масле определена среднесмертельная доза на уровне 1050 (766,9^1396,5) мг/кг, что позволило отнести агидол-21 к 3-му классу опасности (умеренно опасные вещества). Определенная методом одной точки величина среднесмер-тельной дозы продукта составила 1010 мг/кг для крыс и 675 мг/кг — для мышей, что свидетельствует об отсутствии различий в видовой и половой чувствительности к продукту.
Среднесмертельную концентрацию вещества определить не удалось, так как при создании в ингаляционной камере максимально достижимой концентрации при 4-х часовом ингаляционном воздействии, гибель животных в течение всего периода наблюдения отсутствовала. Порог острого действия агидола-21 определен на уровне 357,4 мг/м3.
При исследованиях местного раздражающего действия и кожно-резорбтивных свойств, выполненных в соответствии с МУ [3], установлено, что продукт обладает выраженным раздражающим действием и способностью проникать через неповрежденную кожу. Кумулятивные свойства продукта определены как слабо выраженные (Ссит = 9,6). При изучении аллергенных
свойств согласно МУ [4] установлено, что изучаемое вещество не способствует аллергизации организма.
В ходе проведения хронического 3-х месячного эксперимента изучено воздействие 4-х концентраций агидола-21, фактические уровни которых составили: 9,84, 4,92, 1,52 и 0,30 мг/м3. При ингаляционном воздействии на крыс максимальной концентрации — 9,84 мг/м3, были отмечены изменения функционального состояния животных. Так, через 1 мес после начала эксперимента СПП, показатели поведенческих реакций статистически достоверно изменяются и не приходят в норму до конца эксперимента. Количество лейкоцитов у животных опытной группы к концу эксперимента уменьшилось, а затем восстановилось. Количество эритроцитов достоверно снижается к концу эксперимента, однако эта величина находится в пределах физиологических колебаний. Исследование активности ферментов выявило стойкое возрастание активности АЛТ, АСТ, ЛДГ, ЩФ, SH-групп. Можно полагать, что в данном случае повышение активности ферментов в сыворотке крови является следствием повреждения клеточных мембран, которое сопровождается выходом в кровь цито-
плазматических ферментов. При определении массы внутренних органов достоверных изменений не выявлено.
При экспозиции животных в концентрации 4,92 мг/м3 проявления интоксикации подобны таковым, как и при действии агидола-21 в первой концентрации, но они носили менее выраженный характер: происходили статистически достоверные изменения двигательной активности, «норкового» рефлекса, СПП. Гематологические изменения характеризуются увеличением количества гемоглобина, биохимические — сдвигами в показателях функционального состояния печени.
Хроническое поступление препарата в кон-центрациии 1,52 мг/м3 в организм подопытных животных вызвало небольшие отклонения в поведении, увеличение активности ферментов, но эти изменения носили обратимый характер.
При ингаляционном воздействии вещества в концентрации 0,30 мг/м3 проявлений интоксикации и изменений функционального состояния организма у подопытных животных не отмечено. Это дает основание считать, что исследуемое вещество в этой концентрации не оказывает отрицательного влияния на организм, а концентрацию 1,52 мг/м3 можно принять за пороговую.
При проведении исследований по определению отдаленных эффектов установлено, что изучаемое вещество не обладает гонадотоксиче-ским и эмбриотоксическим действием. Также не выявлено мутагенного влияния вещества.
В результате обработки и анализа полученного материала в ходе проведения хронического эксперимента установлено: интегральный показатель «В» составил 0,47, что позволило отнести агидол-21 к 3-му классу опасности. Среднесуточная ПДК с учетом коэффициента запаса (5,3) составила — 1,29 мг/м3. Так как агидол-21 является веществом, обладающим преимущественно резорбтивным действием, максимальная разовая ПДК определялась на уровне 98 % вероятности ее проявления в хроническом эксперименте и составила 0,48 мг/м3.
Для подтверждения экспериментально установленных пороговой и подпороговой концентраций, в ходе хронического воздействия вещества, нами была использована методическая схема — «концентрация-время-эффект», предложенная М.А. Пинигиным [6], в основе которой лежит установление зависимости времени наступления токсических эффектов, при непродолжительном воздействии на организм лабораторных животных высоких, средних и низких концентраций вещества.
Эксперимент проводили на белых крысах-самцах с исходной массой 120—140 г. Животные
были разделены на 4 контрольных и 4 опытных групп по 20 особей в каждой. Крыс содержали в камерах в аналогичных условиях как и при хронической затравке. Длительность непрерывного ингаляционного воздействия в заданных концентрациях вещества (150, 50, 20 и 10 мг/м3) составила от 19 до 590 ч. Оценка функционального состояния животных проведена при изучении наиболее чувствительных показателей, характерных для токсикодинамики вещества — состояние центральной нервной системы (СПП, «норковый рефлекс»), биохимические показатели крови (ЛДГ, АЛТ). Время наступления достоверных токсических эффектов в зависимости от уровня концентрации представлены в табл. 1.
В результате проведения эксперимента и графической обработке полученных данных на двойной логарифмической сетке были установлены основные токсикометрические параметры, результаты которых представлены в табл. 2. Наименьший порог хронического действия составил 1,3 мг/м3, недействующая концентрация (с учетом коэффициента запаса) — 0,22 мг/м3, класс опасности — 3.
Уровни пороговых концентраций по определяемым показателям в краткосрочном эксперименте близки с пороговыми концентрациями, определенными в ходе проведения хронического 3-х месячного эксперимента. Так, уровень пороговой концентрации по СПП в краткосрочном эксперименте составил 1,5 мг/м3, а в хроническом — 1,52 мг/м3, АЛТ — 2,6 и 1,52 мг/м3, ЛДГ — 1,8 и 1,52 мг/м3, «норковый рефлекс» — 1,3 и 1,52 мг/м3 (табл. 3).
Заключение. Неблагоприятные последствия при воздействии агидола-21 на организм теплокровных животных выражаются влиянием на центральную нервную систему (СПП, поведенческие реакции) и печень (увеличение ферментативной активности) и, по-видимому, являются следствием общетоксического действия продукта. Проведенные исследования позволяют отнести изучаемый продукт к веществам, обладающим преимущественно резорбтивным действием.
Рекомендуемый нами уровень среднесуточной ПДК агидола-21 в атмосферном воздухе населенных мест — 0,3 мг/м3, максимальной разовой — 0,5 мг/м3. Лимитирующий показатель ре-зорбтивное действие. Класс опасности 3-й (умеренно опасное вещество).
Список литературы
1. Временные методические указания по обоснованию ПДК загрязняющих веществ в атмосферном воздухе населенных мест. — М., 1989.
2. Куфлина С.А., Павлова Т.Н. Эвтаназия экспериментальных животных: Метод. рекомендации. — М., 1985.
3. Методические указания к постановке исследований по изучению раздражающих свойств и обоснованию ПДК избирательно действующих раздражающих веществ в воздухе рабочей зоны. № 2196-80. - М, 1980.
4. Методические указания к постановке исследований по обоснованию предельно допустимых концентраций промышленных химических аллергенов в воздушной среде (рабочая зона и атмосфера). - М, 1991.
5. Методы экспериментального исследования по установлению порогов действия промышленных
ядов на генеративную функцию с целью гигиенического нормирования (Методические указания). № 1744-77. - М, 1978.
6. Пинигин М.А. Биологическая эквивалент -ность в решении методических задач гигиенического регламентирования атмосферных загрязнений: Автореф. дис. д-ра наук. - М., 1977.
7. Сидоренко Г.И., Андреещева Н.Т. // Материалы научных исследований по гигиене атмосферного воздуха, гигиене воды и санитарной охраны водоемов. - М, 1972. - Ч. 1. - С. 100-106.
Материал поступил в редакцию 09.09.08.
R.A. Suleimanov, T.K. Valeyev
EXPERIMENTAL DATA ON THE HYGIENIC REGULATION OF AGIDOL-21 IN THE ATMOSPHERIC AIR OF RESIDENTIAL SETTINGS
Ufa Research Institute of Occupational Health and Human Ecology
Basing on the results of experiments in laboratory animals and observations of volunteers, the values of MACs of Agidol-21 in the atmospheric air of residential settings were substantiated as follows: maximum single dose 0.5 mg/m3, daily average dose 0.3 mg/m3; limiting indicator- absorptive action; hazard class — 3.
УДК 614.878
Т.Ю. Жармухамедова, О.Н. Хохлова, Т.А. Гуськова, А.Н. Мурашев
ОБЕСПЕЧЕНИЕ КАЧЕСТВА ИССЛЕДОВАНИЙ БЕЗОПАСНОСТИ ХИМИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ, БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ И НАНОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ПРОДУКТОВ В СООТВЕТСТВИИ С ПРАВИЛАМИ НАДЛЕЖАЩЕЙ
ЛАБОРАТОРНОЙ ПРАКТИКИ
Филиал Института биоорганической химии имени академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, Пущино, Московская обл.
Организация, занимающаяся изучением безопасности химических веществ, биотехнологических и нанотех-нологических продуктов в соответствии с правилами GLP (надлежащая лабораторная практика), должна иметь службу обеспечения качества, которая назначается менеджментом из числа сотрудников, не участвующих в исследованиях, и призванная проводить независимую оценку полноты соблюдения требований GLP. Служба обеспечения качества должна быть знакома с процедурами проведения исследований и подотчетна непосредственно руководству исследовательской организации.
Ключевые слова: исследовательская организация, служба обеспечения качества, аудит, правила надлежащей лабораторной практики.
Нормативные правила надлежащей лабораторной практики (Good Laboratory Practice — GLP) были созданы для обеспечения качества и достоверности экспериментальных данных в исследованиях безопасности химических соединений, биологических и нанотехнологических продуктов. Правила GLP представляют собой
концепцию управления исследованиями, охватывающую процесс организации, подготовки и проведения исследования, контроль выполнения процедур, получение и документирование данных и составление отчета. Соблюдение правил GLP обязательно при выполнении исследований, требуемых национальными регуляторны-
