Научная статья на тему 'ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПАРАМЕТРОВ ЭКСПРЕССНОГО МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОКСИДАЗНОЙ АКТИВНОСТИ'

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПАРАМЕТРОВ ЭКСПРЕССНОГО МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОКСИДАЗНОЙ АКТИВНОСТИ Текст научной статьи по специальности «Промышленные биотехнологии»

CC BY
35
11
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Журнал
Гигиена и санитария
Scopus
ВАК
CAS
RSCI
PubMed
Ключевые слова
колиформные бактерии / Е. coll / бактерицидное действие / оксидазная активность / мембранная фильтрация / coliform bacteria / E. coli / bactericidal activity / oxidase activity / membrane filtration

Аннотация научной статьи по промышленным биотехнологиям, автор научной работы — Я.Я. Буторина

Экспериментально обоснованы параметры экспрессного теста (1—2 мин) определения оксидазной активности одновременно всех бактерий, выросших на мембранном фильтре после фильтрации воды. Впервые установлено, что оксидазные реактивы (водные растворы тетраметил-n-фенилендиамина дигидрохлорида и демитил-n-фенилендиамина дигидрохлорида) не оказывают влияния на жизнеспособность и ферментативную активность бактерий после контакта в течение 1 ч. Усовершенствован алгоритм экспрессного теста определения оксидазной активности: допустимое время контакта бактерий с оксидазными реактивами и способы минимизации влияния на биохимическую активность бактерий после контакта. Разработан ускоренный метод определения колиформных бактерий на основе лактозной среды с тергитолом-7 и агара Эндо с использованием экспрессного метода определения оксидазного теста: время окончательного ответа 18—24 ч. Метод включен в ГОСТ Р 52426—2005.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по промышленным биотехнологиям , автор научной работы — Я.Я. Буторина

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

EXPERIMENTAL RATIONALE FOR THE PARAMETERS OF A RAPID METHOD FOR OXIDASE ACTIVITY DETERMINATION

Experimental rationale is provided for the parameters of a rapid (1-2-min) test to concurrently determine the oxidase activity of all bacteria grown on the membrane filter after water filtration. Oxidase reagents that are the aqueous solutions of tetramethyl-p-phenylenediamine dihydrochloride and demethyl-p-phenylenediamine dihydrochloride have been first ascertained to exert no effect on the viability and enzymatic activity of bacteria after one-hour contact. An algorithm has been improved for the rapid oxidase activity test: the allowable time for bacteria to contact oxidase reagents and procedures for minimizing the effect on bacterial biochemical activity following the contact. An accelerated method based on lactose medium with tergitol 7 and Endo agar has been devised to determine coliform bacteria, by applying the rapid oxidase test: the time of a final response is 18-24 hours. The method has been included into GOST 52426-2005.

Текст научной работы на тему «ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПАРАМЕТРОВ ЭКСПРЕССНОГО МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОКСИДАЗНОЙ АКТИВНОСТИ»

С Н. Н. БУТОРИНА, 2010 УДК 579. 842. 11:57». 22]. 083. I

Н. Н. Буторина

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПАРАМЕТРОВ ЭКСПРЕССНОГО МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОКСИДАЗНОЙ АКТИВНОСТИ

НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды им. А. Н. Сысина РАМН, Москва

Экспериментально обоснованы параметры экспрессного теста (1—2 мин) определения оксидазной активности одновременно всех бактерий, выросших на мембранном фильтре после фильтрации воды. Впервые установлено, что оксидазные реактивы (водные растворы тетраметил-п-фенилендиамина дигидрохлорида и де-митил-п-фенилендиамина дигидрохлорида) не оказывают влияния на жизнеспособность и ферментативную активность бактерий после контакта в течение 1 ч. Усовершенствован алгоритм экспрессного теста определения оксидазной активности: допустимое время контакта бактерий с оксидазными реактивами и способы минимизации влияния на биохимическую активность бактерий после контакта. Разработан ускоренный метод определения колиформных бактерий на основе лактозной среды с тергитолом-7 и агара Эндо с использованием экспрессного метода определения оксидазного теста: время окончательного ответа 18—24 ч. Метод включен в ГОСТ Р 52426-2005.

Ключевые слова: колиформные бактерии, Е. соН, бактерицидное действие, оксидазная активность, мембранная фильтрация

N. N. Butorina. - EXPERIMENTAL RATIONALE FOR THE PARAMETERS OF A RAPID METHOD FOR OXIDASE ACTIVITY DETERMINATION

Experimental rationale is provided for the parameters of a rapid (1-2-min) test to concurrently determine the oxidase activity of all bacteria grown on the membrane filter after water filtration. Oxidase reagents that are the aqueous solutions of tetramethyl-p-phenylenediamine dihydrochloride and demethyl-p-phenylenediamine dihydrochloride have been first ascertained to exert no effect on the viability and enzymatic activity of bacteria after one-hour contact. An algorithm has been improved for the rapid oxidase activity test: the allowable time for bacteria to contact oxidase reagents and procedures for minimizing the effect on bacterial biochemical activity following the contact. An accelerated method based on lactose medium with tergitol 7 and Endo agar has been devised to determine coliform bacteria, by applying the rapid oxidase test: the time of a final response is 18-24 hours. The method has been included into GOST 52426-2005.

Key words: coliform bacteria, E. coli, bactericidal activity, oxidase activity, membrane filtration

Ускорение микробиологического анализа является основой своевременности проведения профилактических мероприятий. Трудность разработки ускоренных методов микробиологического анализа заключается в необходимости подращивания сконцентрированных на мембранных фильтрах бактерий до видимых колоний. Внедрение в практику метода мембранной фильтрации, который по сравнению с титрационным методом сокращает время анализа на 24 ч и позволяет получить более точный количественный результат, не решило проблему, поскольку длительность анализа (48 ч по международному стандарту ИСО 9308-1:2000 [5] и 72 ч по методическим указаниям России МУК 4. 2. 1018-01 [11]) не позволяет регулировать технологию во-доподготовки до поступления воды к потребителю. В целях ускорения анализа более успешным является усовершенствование этапа идентификации колиформных бактерий и Е. coli, в частности использование специфичности их ферментативной активности [8, 13].

Исследованиями Steel (14] было показано, что, как правило, анаэробам, грамположительным бактериям, коккам не свойственно наличие высокоактивного фермента цитохромоксидазы. В то же время большинство грамотрицательных аэробных и факультативно аэробных бактерий обладают цито-хромными системами. Исключение составляет семейство Enterobacteriaceae, ни у одного представи-

Буторина Н. Н. — науч. сотр. лаб. санитарной микробиологии и паразитологии (sysin@comcor. ru)

теля которого не отмечено положительной реакции на оксидазу [10, 12, 15]. Отсутствие фермента цитохромоксидазы у колиформных бактерий открывает возможность при определении оксидазного теста на мембранном фильтре надежно идентифицировать их от посторонней водной оксидазополо-жительной микрофлоры.

Предложен быстрый метод определения оксидазной активности одновременно всех выросших бактерий непосредственно на мембранном фильтре [1, 3, 4]. Ограничением к использованию этого метода является предположение о бактерицидно-сти оксидазных реактивов и их влиянии на биохимическую активность бактерий после контакта [2, 6, 7]. Важность решения этого вопроса связана с необходимостью дальнейшей идентификации колиформных бактерий и выявления Е. coli по биохимическим тестам.

Влияние оксидазных реактивов тетраметил-п-фенилендиамина дигидрохлорида (ТМ) и диметил-п-фенилендиамина дигидрохлорида с а-нафтолом (ДМ) на жизнеспособность бактерий изучено диско-диффузным методом по МУК 4. 2. 1890-04 [9] путем наложения хлопчатобумажных тестов, пропитанных 1% растворами оксидазных реактивов, на газон суточной культуры бактерий на питательном агаре.

Показано, что 1% водный раствор ТМ, использующийся при постановке оксидазного теста по ИСО 9308-1:2000, не оказывает какого-либо действия на изученные оксидазоотрицательные бактерии. В то же время наблюдалось в той или иной

Таблица 1

Бактерицидное действие оксидазиого реактива ДМ на оксидазоположительные и оксндазоотрицательные бактерии

№ штамма, п/п Оксидазная активность Зона угнетения роста под воздействием реактива, мм

Тест-культура сухой реактив а-нафтол сухой реактив дм 1% ДМ + 1% а-нафтол (7:3) 1% водный раствор ДМ

I Salmonella enteritidis АТСС 5765 — 4 3-5 0 0

2 Salmonella infantis spp. - 4 2-3 0 0

3 Escherichia coli 1257 - 3 2-3 0 0

4 Escherichia coli 675 - 4 3-5 0 0

5 Klebsiella spp. - 2 1 0 0

6 Staphylococcus aureus 906 - 5-6 7 3 2-3

7 Enterococcus faecalis ATCC 29212 - 1-2 2-3 0 0

8 Enterococcus faecalis spp. - 3 2-3 0 0

9 Enterococcus faccium spp. - 5 2-4 I 0

10 Enterococcus faecium spp. - 3 2-3 2 0

11 Pseudomonas aeruginosa 10145 + 1 5-7 1 0

12 Pseudomonas spp. + 2 5 1 0

13 Pseudomonas spp. + 2 4-5 2 0

14 Штамм из сточных вод + 7 5-7 0 0

1S Штамм из сточных вод + 10 10-12 0 0

16 Штамм из сточных вод + 5-7 5 1 0

17 Штамм из сточных вод + 9-10 10-12 1-2 0

18 Штамм из сточных вод - 2-3 5 0 0

19 Штамм из сточных вод - 2-3 2 0 0

20 Штамм из сточных вод - 4 2 0 0

степени угнетение роста оксидазоположительной микрофлоры.

Аналогичные закономерности выявлены при изучении влияния оксидазного реактива ДМ на жизнеспособность бактерий: 1% водный раствор ДМ и 1% водный раствор ДМ в смеси с 1% спиртовым раствором а-нафтола в соотношении 7:3 (по прописи МУК 4. 2. 1018-01) не оказывали какого-либо влияния на изученные бактерии семейства Enterobacteriaceae (табл. 1).

На оксидазоположительную микрофлору, выделенную из сточных вод, водные растворы в ДМ вообще не оказывали воздействия, только отдельные оксидазоположительные штаммы оказались чувствительными к ДМ в сочетании с а-нафтолом. Таким образом, не обнаружено бактерицидного действия водных растворов реактивов ТМ и ДМ, используемых при постановке оксидазного теста, на изученные бактерии семейства Enterobacteriaceae.

На следующем этапе исследований более чувствительным методом изучали действие реактивов ДМ и ТМ на биохимические свойства колиформ-ных бактерий. Определяли способность бактерий к ферментации углеводов до кислоты и газа, что является одним из основных тестов идентификации индикаторной группы бактерий. Эксперименты проводили на модели тест-микроорганизма Е. coli 1257 как основного представителя группового показателя.

Мембранные фильтры с выросшими на них колониями накладывали колониями вверх на смоченную реактивом фильтровальную бумажку (по МУК

4. 2. 1018-01), находившуюся в чашке Петри. Закрытую чашку выдерживали при комнатной температуре. Время воздействия реактива составляло 2—

5, 30, 60 и 120 мин. После контакта с реактивом способность бактерий Е. coli к проявлению ферментативной активности с образованием кислоты

и газа определяли путем посева в пробирки с полужидкой средой Гисса с лактозой и последующей инкубацией посевов при температуре 37°С.

В этих экспериментах также изучали влияние питательной среды, на которой выращивались бактерии Е. coli. Помимо агара Эндо, рекомендуемого МУК 4. 2. 1018-01, испытали лактозный агар с тер-гитолом, который рекомендован ИСО 9308-1:2000.

Реактив ТМ не оказывал влияния на скорость роста и биохимическую активность бактерий Е. coli

120

2 3 4 5 Время ферментации, ч

♦ Контроль — Х- ■ ТМ, 30 мин

......■...... ТМ, 2 мин ......^...... ТМ, 60 мин

- Д - ТМ, 5 мин —ТМ, 120 мин

Рис. 1. Влияние длительности контакта оксидазного реактива ТМ на скорость ферментации лактозы до кислоты и газа бактериями Е. соК.

Таблица 2

Влияние приема переноса мембранного фильтра обратно на питательную среду после контакта с реактивом ДМ на динамику ферментации лактозы бактериями Е. coli, выросшими на агаре Эндо

Время контакта с реактивом ДМ. мин Время нахождений фильтра на среде после переноса, мин Время ферментации лактозы до газообразования, мин (л = 40; М±т)

Контроль — 210 ±8,9

4 0 234 ± 11,7

5 225 ± 16,9

30 156 ± 12,5

60 144 ± 4

5 0 264 ± 8,9"

5 243 ± 12,1*

30 204 ± 17,2

60 156 ±4

Примечание. Значимое увеличение времени ферментации по сравнению с контролем: * — р < 0,05; ** — р < 0,001.

даже при длительном контакте в течение 2 ч (рис. 1). Как в контроле, так и после выдерживания на реактиве ТМ реакция ферментации лактозы развивалась одинаково быстро. Признаки роста, образование кислоты отмечали уже через 1 ч после посева в пробирки со средой Гисса с лактозой. Начало газообразования наблюдалось через 2 ч во всех вариантах опыта, кроме бактерий, подвергшихся действию ТМ в течение 120 мин. Реакция ферментации полностью завершилась через 3—4 ч.

Изучение бактерицидного действия ДМ, который наряду с ТМ рекомендован для определения оксидазной активности в нашей стране в соответствии с МУК 4. 2. 1018-01, позволило установить влияние времени контакта с реактивом ДМ на рост и биохимическую активность Е. coli, выращенных на агаре Эндо. Результаты исследований представлены на рис. 2. Интервал экспозиции 5 мин выбрали как допустимый отечественными методическими документами.

Как видно на рис. 2, при непосредственном контакте бактерий на мембранном фильтре с реактивом ДМ в течение 2—5 мин начало ферментации лактозы сдвигалось на 1—2 ч по сравнению с контролем, а время окончания реакции — на 2 ч. Однако статистические исследования показали несущественность отклонений при времени контакта с ДМ в течение 2 мин (р > 0,05). При контакте бактерий Е. coli с реактивом ДМ в течение 5 мин наблюдались статистически значимые различия между контрольной и опытной группами бактерий (р < 0,001).

Более продолжительный контакт с реактивом в течение 30—60 мин оказывал существенное бакте-риостатическое (в 40—60% посевов) и частичное бактерицидное действие, а после 120 мин контакта — полностью бактерицидное действие в 100% посевов. Следует отметить, что при этом существенно возросло время ферментации лактозы (24 ч), в то время как в контроле биохимическая реакция полностью завершилась через 4 ч.

Изучение воздействия оксидазных реактивов на биохимическую активность бактерий Е. coli, выросших на лактозном агаре с тергитолом, не вы-

явило существенных различий в скорости ферментативных реакций и подтвердило закономерности, полученные при выращивании бактерий на агаре Эндо и описанные выше. За время контакта с реактивом до 5 мин статистически значимых различий в биохимической активности между контрольным и опытными вариантами не обнаружено (р > 0,05). Более длительный контакт в течение 5— 120 мин оказал влияние на испытуемый тест-микроорганизм, что выражалось в замедлении биохимической реакции (при времени контакта до 30 мин), а также в бактериостатическом и бактерицидном действии оксидазного реактива при дальнейшей экспозиции. Так, при контакте бактерий Е. coli с реактивом в течение 5 мин наблюдалось влияние оксидазного реактива в виде задержки начала газообразования на 2 ч по сравнению с контролем. Различия между контрольным и опытными вариантами достоверны (р < 0,001).

При контакте с реактивом ДМ в течение 30 мин только у 70% бактерий сохранились жизнеспособность и биохимическая активность, при этом в 40% посевов начало газообразования сдвигалось на 4 ч по сравнению с контролем. В 30% посевов газообразование отметили только через 24 ч, когда по методическим документам ведется учет результатов. При длительности контакта 60—120 мин наблюдали более сильное бактериостатическое и бактерицидное влияние реактива.

Разрабатывали методические приемы по снижению влияния реактива ДМ на биохимическую активность бактерий Е. coli. Изучали прием, основанный на переносе мембранного фильтра после проявления оксидазной реакции обратно на питательную среду с последующим пересевом колоний для идентификации по тесту ферментации лактозы. При этом оценивали влияние времени контакта

120-1

Время ферментации, ч ♦ ■ ■ Контроль — Х- • ДМ, 30 мин

......■-■••• ДМ, 2 мин ......•>)<;•••••• ДМ, 60 мин

- Д - ДМ, 5 мин -•■#-■-ДМ, 120 мин

Рис. 2. Влияние длительности контакта оксидазного реактива ДМ на скорость ферментации лактозы до кислоты и газа бактериями Е. coli.

Таблица 3

Влияние компонента реактива ДМ (днметил-п-фенилендиамина дигидрохлорнда) на время ферментации лактозы бактериями Е. сои

Вариант опыта

Время контакта с реактивом ДМ, мин

Время ферментации лактозы до образования газа, мнн (п ™ 10; М±п)

Контроль (питательный агар) I % водный раствор ДМ

5

30 60

156 ± 9,8 168 ± 8,0 144 ± 9,8 144 ± 9,8

с реактивом и нахождения мембранного фильтра на питательной среде после переноса обратно на питательную среду до пересева колоний бактерий на среду Гисса с лактозой.

Исследования проводили в направлении выявления времени контакта тест-микроорганизмов Е. coli с оксидазным реактивом ДМ, в течение которого реактив не влиял на биохимическую активность бактерий. Через 1, 2, 3, 4 и 5 мин контакта с реактивом ДМ фильтры переносили обратно на агар Эндо и определяли скорость биохимической реакции сразу же после переноса фильтра, а также через 5, 30 и 60 мин. Контролем служили результаты определения скорости ферментации лактозы бактериями Е. coli, не подвергнутыми действию реактива (табл. 2).

При времени контакта с реактивом ДМ в пределах 1—4 мин и посеве колоний на среду Гисса с лактозой сразу же после переноса мембранного фильтра с бактериями обратно на агар Эндо отметили несущественное увеличение времени ферментации лактозы на 25 мин (по средним данным из 10 повторностей 4 независимых экспериментов). Статистически значимых различий между контрольным и опытными вариантами не обнаружили (р > 0,05). Дальнейшее (5—60 мин) выдерживание фильтра с бактериями на питательной среде снимало негативное действие реактива ДМ.

При контакте бактерий на фильтре с реактивом ДМ в течение 5 мин (как это допускается в МУК 4. 2. 1018-01) время ферментации лактозы сразу после контакта с реактивом достоверно задерживалось на 54 мин (р < 0,001). При выдерживании мембранного фильтра с бактериями на питательной среде в течение 5 мин после контакта с оксидазным реактивом продолжалось последействие реактива, различия между контрольным и опытным вариантами оставались статистически значимыми (р < 0,05). Полученные данные служат основанием для изменения алгоритма выполнения экспрессного оксидазного теста.

При дальнейшем выдерживании фильтра на среде в течение 30 и 60 мин негативное действие реактива прекращалось, биохимическая активность бактерий восстанавливалась. Даже длительное выдерживание фильтра с бактериями в течение 24 ч после контакта с реактивом не влияло на биохимическую активность. Это убедительно подтверждает эффективность предложенного приема прерывания негативного действия реактива путем пе-

реноса мембранного фильтра после контакта с реактивом обратно на питательную среду.

Для разработки ускоренного метода определения колиформных бактерий на основе рекомендуемой ИСО 9308-1:2000 лактозной среды с тергито-лом использовали ту же схему экспериментального обоснования параметров экспрессного метода определения оксидазной активности, что и при работе с агаром Эндо.

Выявили, что при времени контакта с реактивом ДМ в пределах 1—4 мин при посеве колоний сразу же после переноса мембранного фильтра в среду Гисса с лактозой происходила небольшая задержка ферментации лактозы. Статистически значимых различий не получили (р > 0,05). Выдерживание мембранного фильтра на питательной среде в течение 2—120 мин прекращало действие реактива ДМ, динамика ферментации лактозы бактериями была сходной с контрольными вариантами. При контакте бактерий с реактивом на фильтре в течение 5 мин начало ферментации лактозы достоверно задерживалось на 60 мин (р < 0,01). Выдерживание фильтра на среде в течение 2—120 мин после 5-минутного контакта с оксидазным реактивом не снимало угнетения скорости ферментации лактозы. Различия оказались статистически значимы (р < 0,05). Это может быть объяснено тем, что лак-тозный агар с тергитолом является менее ингиби-торной средой, чем агар Эндо, и воздействие реактива ДМ на выросшие на нем бактерии более выражено.

Таким образом, экспериментально доказано на двух питательных средах (агар Эндо и лактозный агар с тергитолом), что при времени контакта с оксидазным реактивом ДМ в пределах 4 мин, переносе мембранного фильтра обратно на питательную среду и дальнейшем нахождении на среде в течение длительного времени (до 2 ч) полностью снимается негативное действие реактива ДМ на тест-микроорганизмы Е. coli.

С целью обоснования рекомендаций по уменьшению неблагоприятного действия реактива ДМ на жизнедеятельность бактерий изучили влияние компонентов реактива на жизнедеятельность бактерий. Результаты, приведенные в табл. 3, показы-

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Таблица 4

Влияние спиртового раствора а-нафтола на динамику ферментации лактозы бактериями Е. coli

Время кон- Время ферментации

Вариант опыта такта с реактивом дм, лактозы до образования газа, мин

мин (л= 10; Mim)

Контроль (питательный агар) — 138 ± 4,90

Соотношение спиртового рас-

твора а-нафтола и воды 3:7 2,5 165 ± 11,8«

5 192 ± 14,97"

30 855 ± 195,00"'

Соотношение спиртового рас- 2,5 156 ± 9,80

твора а-нафтола и воды 5 147 ± 13,75

2,5:7,5 30 168 ± 4,90"

Примечание. Значимое увеличение времени ферментации по сравнению с контролем: * — р < 0,05; ** — р < 0,01; "• - р < 0,001.

вают, что основная составная часть реактива ДМ (1% водный раствор диметил-п-фенилендиамина дигидрохлорида) не влияет на ферментативные свойства бактерий Е. coli даже при длительном времени контакта (1 ч).

В следующих сериях экспериментов выявили (табл. 4), что другая составная часть реактива (1% спиртовой раствор а-нафтола в соотношении с водой 3:7) при контакте с бактериями Е. coli уже в течение 2,5 и 5 мин достоверно задерживала время ферментации лактозы. В то же время при соотношении спиртового раствора а-нафтола и воды 2,5:7,5 влияния испытуемой смеси в течение этого же интервала времени на биохимические свойства бактерий не выявлено.

На основании этих экспериментов усовершенствовали, по сравнению с МУК 4. 2. 1018-01 алгоритм выполнения экспрессного метода (1 мин) определения оксидазного теста при использовании реактива ДМ.

При работе с реактивом ДМ изменили соотношение 1% спиртового раствора а-нафтола (2,5 части) и 1% водного раствора диметил-п-фенилендиамина (7,5 частей), уменьшили допустимое время контакта с реактивом до 4 мин, исключили ограничение времени посева бактерий в подтверждающие среды для идентификации после переноса фильтра с бактериями обратно на питательную среду. В случае необходимости дальнейшей идентификации оксидазоотрицательных бактерий пересев колоний на подтверждающие среды целесообразно производить не сразу же после проявления реакции, а после переноса на питательную среду и последующего выдерживания свыше 5 мин. Этот прием полностью исключает негативное действие реактива ДМ и ускоряет время получения ответа по тесту ферментации лактозы на 1—2 ч.

При работе с реактивом ТМ, не влияющим на жизнедеятельность бактерии при контакте, исключили этап переноса фильтра обратно на среду после проявления оксидазной активности, не ограничивали время посева бактерий в подтверждающие среды для дальнейшей идентификации колиформ-ных бактерий и Е. coli.

Таким образом, экспериментально обосновали выполнения экспрессного теста (1—4 мин) определения оксидазной активности одновременно всех бактерий, выросших после концентрирования из воды на мембранном фильтре. Усовершенствовали алгоритмы выполнения экспрессного метода определения оксидазной активности бактерий при ис-

пользовании реактивов ДМ и ТМ. На основе экспрессного теста определения оксидазной активности разработали ускоренный метод определения колиформных бактерий, окончательный ответ выдается за 18—24 ч. Метод исключает субъективную выборку колоний — основную причину ошибок микробиологического анализа. Метод прост, доступен для выполнения практическими лабораториями, экономичен, а также существенно уменьшает время контакта исследователя с канцерогенными оксидазными реактивами. Метод включен в ГОСТ Р 52426—2005 "Обнаружение и количественный учет Е. coli и колиформных бактерий. Метод мембранной фильтрации".

Л итература

1. Артемова Т. 3. // Лабораторное дело. —1971. — № 8. — С. 502-505.

2. Боткин Е. А., Лямин А. В. // Тезисы V конф. молодых ученых России с международным участием "Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины". — М., 2008. — С. 69.

3. Буторина Н. Н., Загайнова А. В. // Сборник Всероссийской науч. -практ. конф. молодых ученых и специалистов "Окружающая среда и здоровье". — Суздаль, 2005. — С. 330—331.

4. Буторина Н. Н. // Материалы науч. -практ. конф. молодых ученых "Проблемы гигиенической безопасности и здоровье населения". - М„ 2009. — С. 233 -236.

5. ИСО 9308—1:2000. Вода питьевая. Обнаружение и количественный учет Е. coli и колиформных бактерий. Ч. 1. Метод мембранной фильтрации. — М., 2000.

6. Контроль качества и безопасности минеральных вод по химическим и микробиологическим показателям: Метод, рекомендации № 96/225. Утв. Минздравом РФ 07. 04. 97 г. — М„ 1997.

7. Методические указания по осуществлению государственного надзора за судовыми установками очистки и обеззараживания сточных вод № 4260-87. Утв. Главным государственным санитарным врачом СССР 05. 03. 87 г. — М„ 1987.

8. Недачин А. Е., Артемова Т. 3., Иванова Л. В. и др. // Гиг. и сан. - 2007. - № 5. - С. 36-39.

9. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам: Метод, указание. 4. 2. 1890-04. Утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 04. 03. 2004 г. - М„ 2004.

10. Определитель бактерий Берджи / Под. ред. Дж. Хоулта и др.: Пер. с англ. — М., 1997. — Т. 1.

11. Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды: Метод, указания 4. 2. 1018-04. — М., 2002.

12. Falter A., ScMeifer К. Н. //]. Clin. Microbiol. - 1981. - Vol. 13, N 6. - P. 1031-1035.

13. Rompre A., Servais P., Baudart J. et al. // J. Microbiol. Meth. — 2002. - Vol. 49, N 1. - P. 31-54.

14. Steel K. J. // J. Gen. Microbiol. - 1961. - Vol. 25. - P. 297-306.

15. Tarrand J. J., Groschel D. H. // J. Clin. Microbiol. - 1982. -Vol. 16, N 4. - P. 772-774.

Поступила 23. 03. 10

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.