CC BY
22
■ ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ И МЕЖДИСЦИПЛИНАРНЫЕ ТЕХНОЛОГИИ
ДЛЯ КОРРЕСПОНДЕНЦИИ
Белянина Елена Валерьевна -кандидат ветеринарных наук, научный сотрудник Центра доклинических исследований АО «Генериум» (пос. Вольгинский, Российская Федерация) E-mail: belyanina@ibcgenerium.ru https://orcid.org/0000-0003-1304-9009
Ключевые слова:
критическая ишемия нижних конечностей; экспериментальное моделирование; рекомбинантный фактор роста эндотелия (VEGF165)
Экспериментальное моделирование критической ишемии нижних конечностей
Овсепян А.А., Белянина Е.В., Бочарова Е.Н., Борзов А.А., Каторкина Е.И., Аксенова М.С., Лыков М.В.
Акционерное общество «Генериум», 601125, пос. Вольгинский, Владимирская обл., Российская Федерация
Актуальность. На протяжении десятилетий сердечно-сосудистые заболевания остаются одной из основных причин смерти в мире. Значительную часть среди них составляет поражение магистральных и периферических сосудов. Критическая ишемия нижних конечностей (КИНК) встречается в 500-1000 случаев на 1 млн населения. При этом фармакологическая терапия критической ишемии является неотъемлемой частью комплексного лечения, а при невозможности оперативного вмешательства ей принадлежит главенствующая роль. Для того чтобы иметь возможность изучать различные подходы в области фармакотерапии, необходимо использовать адекватную хирургическую модель КИНК. Цель - отработать и внедрить в практику модель КИНК.
Материал и методы. В работе использовали 50 мышей (25^ и 25?) линии ВА1_В/с в возрасте 8-10 нед. В процессе эксперимента выполнены хирургическое моделирование КИНК и оценка тканевой перфузии ишемизированной задней конечности. На 48-е сутки после моделирования КИНК проводили патоморфологический и гистологический анализ задней конечности животных. По результатам проведенного исследования была отработана модель КИНК. На данной модели показана эффективность препарата VEGF165. Отработаны его дозировка и схема применения.
Заключение. В результате эксперимента была сформирована рабочая модель КИНК, которая в перспективе может быть широко использована в доклинической практике для оценки эффективности новых разрабатываемых препаратов, а также схем лечения КИНК при комплексной терапии.
Финансирование. Исследование выполнено при финансовой поддержке АО «Генериум». Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Для цитирования: Овсепян А.А., Белянина Е.В., Бочарова Е.Н., Борзов А.А., Каторкина Е.И., Аксенова М.С., Лыков М.В. Экспериментальное моделирование критической ишемии нижних конечностей // Клиническая и экспериментальная хирургия. Журнал имени академика Б.В. Петровского. 2023. Т. 11, № 1. С. 70-76. 001: https://doi.org/10.33029/2308-1198-2023-11-1-70-76
Статья поступила в редакцию 20.06.2022. Принята в печать 30.01.2023.
Experimental modeling of critical lower limb ischemia
OORRESPONDENCE
Elena V. Belyanina -MD, Researcher at the Center for Preclinical Research of JSC "Generium" (village Volginsky, Russian Federation)
E-mail: belyanina@ibcgenerium.ru https://orcid.org/0000-0003-1304-9009
Ovsepyan A.A., Belyanina E.V., Bocharova E.N., Borzov A.A., Katorkina E.I., Aksenova M.S., Lykov M.V.
JSC "Generium", 601125, village Volginsky, Vladimir Region, Russian Federation
Background. For decades, cardiovascular diseases have remained one of the main causes of death in the world. A significant part of them is the lesion of the main and peripheral vessels. Critical ischemia of the lower extremities (CILE) occurs in 500-1000 cases per 1 million population. At the same time, pharmacological therapy of critical ischemia is an integral part of complex treatment, and if surgical intervention is impossible, it plays a dominant role.
In order to be able to study various approaches in the field of pharmacotherapy, it is necessary to use an adequate surgical model of critical ischemia of the hind limbs. Aim. Working out and putting into practice the model of CILE.
Material and methods. The study used 50 mice (25^ and 25?) of the BALB/c line, aged 8-10 weeks. In the course of the experiment, surgical modeling of CILE and evaluation of tissue perfusion of the ischemic hind limb were performed. On the 48th day after the CILE simulation, pathomorphological and histological analysis of the hind limb of the animals was performed. According to the results of the study, the CILE model was worked out. This model shows the effectiveness of the drug VEGF165. The scheme and dosage of the use of this drug has been worked out.
Conclusion. As a result of the experiment, a working model of CILE was formed, which in the future can be widely used in preclinical practice to evaluate the effectiveness of new drugs being developed, as well as treatment regimens for critical lower limb ischemia in complex therapy.
Keywords:
critical lower limb ischemia (CILE); experimental modeling; recombinant endothelial growth factor
(VEGU
Financing. The study was carried out with the financial support of JSC "Generium". Conflict of interest. The authors declare that there is no conflict of interest.
For citation: Ovsepyan A.A., Belyanina E.V., Bocharova E.N., Borzov A.A., Katorkina E.I., Aksenova M.S., Lykov M.V. Experimental modeling of critical lower limb ischemia. Clinical and Experimental Surgery. Petrovsky Journal. 2023; 11 (1): 70-6. DOI: https://doi.org/10.33029/2308-1198-2023-11-1-70-76 (in Russian) Received 20.06.2022. Accepted 30.01.2023.
Большой интерес к экспериментальным моделям критической ишемии нижних конечностей (КИНК) объясняется широкой распространенностью и высокой социальной значимостью этой патологии.
При этом фармакологическая терапия критической ишемии является неотъемлемой частью комплексного лечения, а при невозможности оперативного вмешательства ей принадлежит главенствующая роль [1-4].
Для того чтобы иметь возможность изучать различные подходы в области фармакотерапии, необходимо использовать адекватную хирургическую модель КИНК.
Тщательное изучение различных экспериментальных моделей показало значительный разброс как в хирургических подходах, так и в степени поражения конечностей экспериментальных животных при разработках данной модели. Таким образом, экспериментальное моделирование КИНК остается перспективным направлением исследований в доклинической практике.
Цель - разработка модели КИНК у мышей, включая отработку позитивного контроля [терапия рекомбинантным фактором роста эндотелия (VEGF165)] для последующего изучения эффективности новых препаратов.
Материал и методы
Животные
В качестве биологических тест-систем (БТС) в эксперименте использовали 50 мышей (25^
и 25?) линии BALB/c в возрасте 8-10 нед, SPF-категории (specified pathogen free), полученных из НПП «Питомник лабораторных животных» филиала ИБХ РАН (г. Пущино).
Содержание, уход за животными и экспериментальное моделирование проводили в соответствии с международными европейскими биоэтическими и российскими этическими стандартами по содержанию и обращению с лабораторными животными, нормами и правилами, указанными в Политике работы с животными АО «Генериум».
Исследование одобрено на заседании Комиссии по биоэтике АО «Генериум» (протокол № 25 от 26.01.2021).
Дизайн исследования
Были сформированы 3 группы животных:
1-я группа (n=10: 5^ и 5?) - интактный контроль;
2-я группа (n=20:10^ и 10?) - моделирование КИНК + внутримышечное введение натрия хлорида 0,9% в ишемизированную конечность, однократно, через 2 ч после моделирования КИНК, в объеме 33 мкл;
3-я группа (n=20: 10^ и 10?) - моделирование КИНК + внутримышечное введение рекомбинантного фактора роста эндотелия (VEGF165 091810, PeproTech, USA) в ишемизированную конечность, однократно, через 2 ч после моделирования КИНК, в дозе 3,3 мкг/живот-ное, в объеме 33 мкл. VEGF165 представляет собой лио-филизат для приготовления растворов для инъекций, который восстанавливали в стерильной воде для инъекций до концентрации 100 мкг/мл; готовый раствор хранили при температуре 2-8 °С не более 7 дней.
Эксперимент состоял из трех этапов: I этап -хирургическое моделирование КИНК; II этап -
клиническим осмотр ишемизированнои конечности и проведение лазер-допплеровскоИ флоуметрии (ЛДФ); III этап - патоморфологический и гистоло-гическии анализ ишемизированнои заднеи конечности животных на 48-е сутки после моделирования КИНК.
I этап. Хирургическое моделирование критической ишемии нижней конечности
Хирургическое моделирование КИНК выполняли на левой задней конечности экспериментального животного.
При подготовке БТС к работе для общей анестезии использовали инъекционный золетил-кси-лазиновый наркоз (8-10 мкл/1 г массы тела), что соответствует 26,4-30 мг/кг по золетилу (ВИРБАК, Франция) и 21,6-27 мг/кг по ксилазину. Анал-гезию проводили с помощью Флексопрофена® (ООО «ВИК - здоровье животных», Россия) (2,5% раствор для инъекций) путем внутрибрюшинной инъекции в дозе 5 мг/кг массы тела, после моделирования КИНК в день операции и в течение 3 дней после операции с интервалом примерно 24 ч.
После наступления глубокого хирургического наркоза готовили операционное поле. Для этого выбривали задние конечности вплоть до нижнего отдела передней брюшной стенки, используя машинку для окантовки. На кожу наносили крем для депиляции и примерно после 3-минутной экспозиции крем удаляли шпателем вместе с остатками волос так, чтобы получить максимально гладкую поверхность кожи. Затем кожу обрабатывали кожным антисептиком (Оптимадерм® спрей, ООО «Мирсул Бизнес Групп»), на глаза наносили гидроколлоидный гель GranuGEL® (ConvaTec Limited Deeside, CH5,2NU, UK).
Переносили БТС на подогреваемый операционный столик и укладывали в положении на спине. Под контролем хирургического стереомикроскопа, используя остроконечные глазные ножницы, делали разрез по центру внутренней поверхности бедра в области пролегания бедренной артерии длиной 1-1,5 см. Используя микрохирургические пинцеты и глазные ножницы, аккуратно вскрывали кожный разрез и обнажали мембрану, покрывающую паховую жировую ткань и подлежащие мышцы с сосудами. Используя закрытые бранши остроконечных ножниц, прокалывали мембрану под паховой жировой тканью и, раздвигая бранши, отделяли ее от подлежащих мышц живота, обнажая сосудисто-нервный пучок, находящийся под ним. При необходимости, используя ретрактор с магнитным фиксатором, подтягивали паховую жировую ткань проксимально с целью лучшего обнажения места перевязки бедренной артерии.
С помощью двух остроконечных пинцетов удаляли внешнюю мембрану, покрывающую сосудисто-нервный пучок, и выделяли его. Затем осторожно
вставив кончик остроконечного сосудистого пинцета (микрощипцы) между веной и артерией и делая сги-бательно-разгибательные движения, отделяли вену от артерии, начиная от дистального участка бифуркации глубокой бедренной артерии до подкожной артерии бедра. Таким же способом отделяли нерв от артерии и обнажали артерию на вышеуказанном участке оперативного вмешательства.
Подводили кончик остроконечного пинцета под обнаженную артерию и выводили его с противоположной стороны так, чтобы захватить заранее подготовленную лигатуру. Плавно вынимая пинцет вместе с лигатурой, проводили ее под бедренную артерию чуть выше бифуркации глубокой бедренной артерии. Повторяли процедуру для второй лигатуры и ставили ее на подкожную артерию на уровне чуть ниже бифуркации с подколенной артерией, используя шелк 6-0.
Для ориентировки в топографии оперативного вмешательства пользовались артериальной анатомией левой задней конечности мыши (рис. 1А) [2] и схематическим изображением бедренной артерии (рис. 1Б).
После того как убеждались в надежности поставленных лигатур, разрезали бедренную артерию между лигатурами, используя остроконечные глазные ножницы. Затем удаляли участок магистральной артерии, включая бедренную, подколенную артерию и начальные отделы артерии голени, пересекая отходящие от магистральной артерии ветви первого порядка, и тем самым исключали ретроградный кровоток на оперируемом участке (рис. 2).
При наличии кровотечения применяли кратковременное тампонирование кровоточащего участка сдавливанием его ватными палочками. После остановки кровотечения удаляли ретрактор, собирали в исходное состояние раздвинутые ткани и выполняли прерывистый (узловой) кожный шов, используя рассасывающуюся хирургическую нить Vicril, 6-0 (Johnson&Jonson, США).
По окончании оперативного вмешательства выполняли ЛДФ. После ЛДФ животным 2-й и 3-й экспериментальных групп делали внутримышечные инъекции натрия хлорида 0,9% и VEGF165 соответственно. Инъекции проводили под наркозом в левую заднюю лапу одноразовым инсулино-вым шприцем (0,3 мл) с иглой 30G (BD Micro-Fine™ Plus Demi, США) под контролем операционного микроскопа. После моделирования КИНК в день операции и в течение 3 дней после операции с интервалом примерно 24 ч делали аналгезию.
II этап. Клинический осмотр. Лазер-допплеровская флоуметрия
Клинический осмотр ишемизированной конечности проводили на 21, 35 и 48-е сутки эксперимента.
Бедренная
Подвздошно-бедренная артерия
Бедренная артерия
Медиальная проксимальная коленная артерия
Подколенная артерия
Подкожная артерия
А (А)
Б (B)
Рис. 1. Основные вены и артерии левой задней конечности мыши. А - артериальная анатомия левой задней конечности мыши: 1 - общая подвздошная артерия; 2 - внутренняя подвздошная артерия; 3 - подвздошно-бедренная артерия; 4 - боковая огибающая бедренная артерия; 5 - глубокая бедренная артерия; 6 - проксимальная каудальная бедренная артерия; 7 - поверхностная каудальная надчревная артерия; 8 - медиальная проксимальная коленная артерия; 9 - подколенная артерия; 10 - подкожная артерия; 11 - наружная половая артерия; 12 - запирательная артерия; Lig 1 - лигатура проксимальная; Lig 2 - лигатура дистальная; Resection - резектируемый участок артерии; Б - схема расположения основных вен и артерий левой задней конечности мыши
Fig. 1. The main veins and arteries of the Left hind Limb of the mouse. A - arterial anatomy of the left hind limb of the mouse: 1 - common iliac artery; 2 - internal iliac artery; 3 - iLio-femoraL artery; 4 - Lateral circumflex femoral artery; 5 - deep femoral artery; 6 - proximaL caudaL femoraL artery; 7 - superficiaL caudaL epigastric artery; 8 - mediaL proximaL knee artery; 9 - popLiteaL artery; 10 - subcutaneous artery; 11 - externaL genitaL artery; 12 - obturator artery; Lig 1 - proximaL Ligature; Lig 2 - distaL Ligature; Resection - resectabLe portion of the artery; B - the Layout of the main veins and arteries of the Left hind Limb of the mouse
Тканевую перфузию ишемизированной задней конечности регистрировали в проксимальной области подкожной артерии (точка 1) и в области разветвления подошвенной плюсневой артерии с латеральной стороны задней конечности (точка 2) (рис. 3).
ЛДФ регистрировали с помощью датчика лазер-допплера TSD145 (BIOPAC Systems Inc, США) и программного обеспечения AcqKnowLedge® 4.
Измерение выполняли трижды, в течение 1 мин (каждое измерение) в каждой временной точке для каждого животного, и учитывали усредненное значение 3 измерений.
Схема регистрации лазер-допплеровской флоуметрии
1. Измерение «0» - до моделирования КИНК.
2. Измерение «1-е сутки» - в течение 1 ч после моделирования КИНК.
3. Измерение «21-е сутки» - на 21-е сутки после моделирования КИНК.
4. Измерение «35-е сутки» - на 35-е сутки после моделирование КИНК.
5. Измерение «48-е сутки» - на 48-е сутки после моделирования КИНК.
Измерение «0» выполняли у животных всех экспериментальных групп на всех задних конечностях,
по его результатам статистического достоверного различия по измерениям между левой и правой задними конечностями не выявлено. Последующую регистрацию ЛДФ проводили на ишемизированной левой задней конечности.
III этап. Патоморфологический и гистологический анализ
На 48-е сутки после моделирования КИНК проводили патоморфологический и гистологический анализ. Мышей подвергали эвтаназии при помощи СО2-камеры. Затем проводили сравнительное пато-морфологическое исследование ишемизированной и интактной конечностей животных всех групп на наличие патологических изменений (некроз разных участков задних конечностей), а также мышц бедра и голени на наличие отеков и/или дегенеративно-деструктивных изменений. Для гистологического исследования отбирали икроножную мышцу голени мышей всех групп. Подготовку гистологического материала и препаратов осуществляли по стандартным методикам.
Статистическая обработка результатов. Анализ данных включал использование следующих методов и критериев: метод Two-way ANOVA для повторяющихся измерений (GraphPad Prism v. 9.1.1), с применением критерия Тьюки для попарного срав-
Рис. 2. Этапы оперативного вмешательства. А - резекция и удаление бедренной артерии: 1 - бедренная вена, 2 - бедренная артерия, 3 - седалищный нерв, 4 - проксимальная лигатура, 5 - дистальная лигатура;
Б - общий вид оперированного участка после удаления бедренной артерии: 1 - бедренная вена, 2 - седалищный нерв
Fig. 2. Stages of surgical intervention. A - resection and removal of the femoral artery: 1 - femoral vein, 2 - femoral artery, 3 - sciatic nerve, 4 - proximal ligature, 5 - distal ligature; B - general view of the operated area after removal of the femoral artery:
1 - femoral vein,
2 - sciatic nerve
А (А)
нения групп; критерий Краскела-Уоллиса (программа Statistica, версия 13, TIBCO Software Inc) для анализа данных, не имеющих нормального распределения.
Результаты
При клиническом осмотре БТС значимых физиологических и физических повреждений в области ишемизированной конечности не наблюдалось.
По результатам оценки тканевой перфузии в точках 1 и 2 отмечалось статистически значимое снижение показателей интенсивности микроциркуляции крови на 1-е сутки после моделирования КИНК у всех экспериментальных групп по сравнению с группой интактного контроля. В среднем в оперированной конечности отмечается 3-3,5-кратное снижение интенсивности кровотока.
В 1-е сутки моделирования КИНК не выявлено статистически значимых отличий внутри экспериментальных групп по показателям ЛДФ по обеим точкам исследования.
На 21-48-е сутки эксперимента наблюдалось статистически значимое улучшение кровотока в ишемизированной конечности в 3-й экспериментальной группе по сравнению со 2-й группой. При этом в 3-й экспериментальной группе сохраняется снижение показателей ЛДФ при сравнении с 1-й группой интактного контроля, что указывает на неполное восстановление патологического процесса у животных данной группы (рис. 4).
По результатам гистологического исследования мышц бедра и голени на 48-е сутки после моделирования КИНК во 2-й и в 3-й экспериментальных группах в сравнении с 1-й группой интактного контроля выявлены схожие изменения, характеризующиеся замещением части мышечной ткани соединительной (рис. 5). По интенсивности замещения части мышечной ткани соединительной от-
Б (В)
мечается статистически достоверное отличие между 1-й группой интактного контроля и 2-й и 3-й экспериментальными группами. Статистически значимые отличия наблюдались между 2-й и 3-й экспериментальными группами. Средний процент соединительной ткани в 1-й группе интактного контроля составил 1%, во 2-й экспериментальной группе -4-5%, в 3-й экспериментальной группе - 7-9%.
Обсуждение
В представленных в литературе исследованиях, посвященных моделированию КИНК, выделяют 6 основных методов индуцирования КИНК [2-4].
Данные методы включают: 1) перерезание бедренной вены в дистальном месте бифуркации глубокой бедренной вены; 2) перерезание бедренной артерии чуть ниже бифуркации глубокой бедренной артерии; 3) перерезание как бедренной артерии, так и вены; 4) резекция бедренной артерии от дистального участка бифуркации глубокой бедренной артерии до подкожной артерии; 5) резекция как бедренной артерии, так и вены от дистального участка бифуркации глубокой бедренной артерии до подкожной артерии; 6) резекция бедренной артерии в проксимальном участки бифуркации глубокой бедренной артерии [2, 4].
Задняя конечность мыши имеет хорошо развитую врожденную коллатеральную систему и, как было показано в ранее проведенных исследованиях, обладает высокой устойчивостью к ишемии. Например, простое перерезание бедренной артерии в дистальном месте бифуркации глубокой бедренной вены, не вызывало серьезных ишемиче-ских изменений (отек и нарушения кровотока), так как задняя конечность питалась за счет коллатерального кровообращения через глубокую бедренную артерию и другие ветви кровотока, включая подколенную артерию. Однако при перерезании
Рис. 3. Задняя конечность мыши: А - проксимальная область подкожной артерии: 1 - точка 1; Б - область разветвления подошвенной плюсневой артерии (латеральная сторона): 2 - точка 2
Fig. 3. The hind Limb of the mouse: A - the proximaL region of the subcutaneous artery: 1 - point 1; B - the area of branching of the pLantar metatarsaL artery (LateraL side): 2 - point 2
А (А)
Б (B)
бедренной артерии и вены наблюдались более серьезные повреждения, характеризующиеся выраженными отечными изменениями. Но данные изменения являлись следствием венозной обструкции, не связанной с нарушением кровотока в периферических артериях [4].
Напротив, когда место перерезания находилось проксимально или включало несколько ветвей, коллатеральный кровоток уменьшался, и ишемиче-ские изменения были серьезными. Полученные результаты дают возможность использовать данный метод, если необходима модель очень тяжелого ишемического повреждения. Однако степень ише-мических повреждений в пределах одной модели у разных животных была различной, так как у отдельных животных количество коллатеральных сосудов заметно различается [2, 4].
Относительно равномерное ишемическое повреждение наблюдалось при резекции бедренной артерии от дистального участка бифуркации глубокой бедренной артерии до подкожной артерии. Данный метод более всего подходит в качестве модели легкой ишемии, он был выбран нами для отработки хирургической модели КИНК в организме мышей линии ВА1_В/с с возможностью в последующем внедрить его в практику [4].
В качестве положительного контроля мы использовали VEGF . показавший значительный те-
165
рапевтический эффект в моделях КИНК [1].
Заключение
По результатам проведенного исследования отработана хирургическая модель КИНК на
А (A)
. 140 э
о
^ 120
U
S+1 100 £ IT
о =
gg 80
о.
^ о 60
# ■ * ■
■ # *
* * 1
mrvmn
8 ™ 40 -20 -
0 1 ' 21 ' 35 ' 48 ' Сутки после моделирования КИНК ■ Интактный контроль ■ МаО. 0,9% ■ VEGF (3,3 мг/кг)
* - отличие от интактного контроля по критерию
Краскелла-Уоллиса (р<0,05)
# - отличие от группы с МаО. 0,9% по критерию
Краскелла-Уоллиса (р<0,05)
Б (B)
. 140 э
о
^ 120
U
100
£
о ^
Э5 80
III
£ О 60
% 3
£ = 40 ин
/м 20 л м
1 ' 21 ' 35 ' 48 ' Сутки после моделирования КИНК ■ Интактный контроль ■ МаО. 0,9% I VEGF (3,3 мг/кг)
* - отличие от интактного контроля по критерию
Краскелла-Уоллиса (р<0,05)
# - отличие от группы с МаС1 0,9% по критерию
Краскелла-Уоллиса (р<0,05)
Рис. 4. Уровень микроциркуляции в мышцах голени после моделирования критической ишемии нижних конечностей (КИНК):
А - точка 1; Б - точка 2
Fig. 4. The LeveL of microcircuLation in the muscLes of the Lower Leg after modeLing CILE: A - point 1; B - point 2
#
Рис. 5. Мышечная ткань. Окраска гематоксилином и эозином, х20: А - 1-я группа, интактного контроля; Б - 2-я экспериментальная группа;
В - 3-я экспериментальная группа. Участки соединительной ткани указаны стрелками
Fig. 5. Muscle tissue. Hematoxylin-eosin staining, х20: A - 1st intact control group; B - 2nd experimental group; С - 3rd experimental group. Areas of connective tissue are indicated by an arrows
А (А)
Б (B)
мышах линии ВД1_В/с, которая характеризуется: 1) выраженным статистически достоверным снижением кровотока ишемизированных нижних конечностей экспериментальных групп животных в сравнении с интактной группой в 1-е сутки моделирования КИНК; 2) тенденцией к статистически значимому восстановлению кровотока на 21-48-е сутки в экспериментальной группе с VEGF165 в сравнении с интактной и экспериментальной группами с натрием хлоридом 0,9%; 3) отсутствием значимых физиологических (стойкая хромота) и физических повреждений (омертвение тканей пальцев ног, стопы, конечности,
В (С)
язвы и т.д.) в данной модели при наличии статистически значимых различий между интактной и экспериментальными группами до 48-х суток эксперимента, что позволяет говорить о хирургической модели КИНК без критических проявлений патологии.
Таким образом, полученные результаты позволяют предположить, что данная модель может быть использована для тестирования различных препаратов, в том числе биомедицинских клеточных продуктов, и схем лечения применительно к КИНК с их дальнейшим позиционированием в клинической практике.
Литература/References
1. Takako Goto T., Fukuyama N., Aki A., Kanabuchi K., Kimu-ra K., Taira H., et al. Search for appropriate experimental methods to create stable hind-limb ischemia in mouse. Tokai J Exp Clin Med. 2006; 31: 118-32.
2. Francki A., Labazzo K., He S., Baum E.Z., Abbot S.E., Herzberg U., et al. Angiogenic properties of human placenta-derived adherent cells and efficacy in hindlimb ischemia. J Vasc Surg. 2016; 64 (3): 746-56.e1.
3. Padgett M.E., McCord T.J., McClung J.M., Kontos C.D. Methods for acute and subacute murine hindlimb ischemia. J Vis Exp. 2016; 112: 54166. DOI: https://doi.org/10.3791/ 54166
4. Skjeldal S., Grogaard B., Reikeras O., Muller C., Torvik A., Svindland A. Model for skeletal muscle ischemia in rat hindlimb: Evaluation of reperfusion and necrosis. Eur Surg Res. 1991; 23: 355-65.
