CC BY
20
Клшмна пед1атр1я
УДК 615.281.8:612.017]:615.238.028.77
МЕЛЬНИКОВ О.Ф., ТИМЧЕНКО МЛ, КРИВОХАТСКАЯ АЛ, МУРЗИНА Э.А. ГУ «Институт отоларингологии им. проф. А.И. Коломийченко АМН Украины», г. Киев
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ПРЕПАРАТА СЕПТОЛЕТЕ ПЛЮС НА ФАКТОРЫ ПРОТИВОВИРУСНОГО ИММУНИТЕТА IN VITRO
Резюме. В условиях эксперимента in vitro изучено влияние препарата Септолете плюс на выработку а- и g-интерферонов клетками небных миндалин и мононуклеаров периферической крови больных хроническим тонзиллитом в присутствии индуктора интерферона и без него, а также на цитолитическую активность в отношении ксеногенных эритроцитов. Установлено, что препарат Септолете плюс активировал продукцию раннего интерферона и выступал в роли кофактора при использовании индуктора интерфероноге-неза — ридостина. Препарат умеренно стимулировал цитолитическую активность естественных цито-токсических клеток миндалин и периферической крови.
Ключевые слова: Септолете плюс, интерферон, противовирусный иммунитет.
Введение
Сегодня в связи с повышением уровня заболеваний, обусловленных вирусами, и особенно гриппа, наблюдается увеличение числа исследований, направленных на изучение антивирусных свойств фармацевтических препаратов, которые используются как противовоспалительные средства [2, 6]. Одним из эффективных препаратов с антисептическим характером действия, которые широко используются в отоларингологии, является препарат местного применения Септолете плюс, состоящий из цетилпиридиния хлорида (антисептический компонент) и анестетика (бензокаин). Ранее было показано, что Септолете плюс не обладает депрессорным действием на состояние местного иммунитета, основанного на определении иммуноглобулинов, лактоферрина и цитокинов в ротоглоточном секрете больных острым фарингитом [8]. Известно, что одним из основных антивирусных механизмов является продукция ранних интерферо-нов — а- и Ь- и более позднего у-интерферона [5]. Эти интерфероны на первых этапах вирусного заражения могут блокировать вирусную информационную РНК в инфицированной клетке и препятствовать репродукции вирусов. Далее интерфероны способны активировать естественные цитотоксические клетки (ЕЦК) и цитотоксические Т-лимфоциты [4]. По мнению авторов, механизм антивирусной защиты состоит из таких последовательных механизмов:
— внутриклеточная ингибиция ранними интерфе-ронами репродукции вирусов;
— удаление с помощью ЕЦК и Т-лимфоцитов инфицированных клеток;
— приобретение здоровыми клетками, которые находятся возле очага заражения, резистентности к инфицированию за счет ранних интерферонов;
— привлечение в очаг заражения макрофагов и лейкоцитов и активация их функциональной активности.
Цель работы — исследовать in vitro антивирусные свойства препарата Септолете плюс, его способность усиливать продукцию интерферонов и деструктивные свойства тканевых и кровяных естественных цитоток-сических клеток.
Материал и методы исследования
Исследования in vitro проведены на клетках небных миндалин и периферической крови 12 больных хроническим тонзиллитом в возрасте 7—19 лет. Этим больным по показаниям проведена тонзиллэктомия. Клеточный материал получен из ткани миндалин и крови в соответствии с рекомендациями О.Ф. Мельникова и И.П. Кайдашева [7, 10]. Культивирование клеток проводили в питательной среде RPMI-1640 с добавками (L-глютамин, эмбриональная телячья сыворотка 5%, гентамицин 40 мкг/мл) в течение 18 часов для определения уровня цитолиза и в течение 24 часов — для определения интерферонопродукции с различными концентрациями препарата: 1 и 2. Контролем служили образцы культивируемых клеток крови и миндалин без препарата, в которых определяли исходный уровень активности и через 24 часа культивирования. Разведение препарата Септолете плюс 1 соответствовало добавлению к клеткам 0,1 мл водно-солевого экстракта, содержащего 1 измельченную таблетку препарата в 5 мл раствора Хэнкса и стерилизованного пропуска-
(^торо&ёе ^¿Г/ребёнка
2(23) • 2010
Клтт'чна пед!атр!я
Таблица 1. Продукция a-интерферона клетками небных миндалин и крови in vitro
под действием Септолете плюс
Группа Концентрация a-интерферона, пг/мл
Клетки небных миндалин, М ± m Клетки периферической крови, M ± m
Исходный уровень 8,4 ± 0,9 8,2 ± 1,5
Септолете плюс 15,3 ± 1,8* (< 0,01) 17,0 ± 2,9* (< 0,05)
Септолете плюс + ридостин 22,1 ± 3,3 (< 0,07) 25,0 ± 4,3* (> 0,05)
Примечание: * — в сравнении с препаратом.
Таблица 2. Цитолитическая активность клеток небных миндалин и крови больных хроническим тонзиллитом при культивировании с различными концентрациями препарата Септолете плюс
Группа Активность деструкции мишеней — % эритроцитолиза
Клетки небных миндалин, М ± m Клетки периферической крови, M ± m
Исходная взвесь клеток 20,1 ± 6,0 28,6 ± 10,1
+ Септолете плюс 1 24,7 ± 4,5 34,6 ± 10,3
+ Септолете плюс 2 26,0 ± 7,3 36,0 ± 11,3
нием через фильтр типа Millipore. Разведение 2 соответствовало 0,01 мл исходной концентрации. После 18-часового культивирования в опытных и контрольных образцах определяли цитолитическую активность клеток в отношении эритроцитов цыплят по спектро-фотометрическому методу (анализатор Stat Fax 2100, США), описанному О.Ф. Мельниковым и Т.А. Заяц [11]. В надосадочной жидкости после суточного культивирования клеток определяли содержание а- и g-интерферонов иммуноферментным методом с помощью набора реактивов ООО «Протеиновый контур» (СПб., РФ) и иммуноферментного анализатора Stat Fax 2100 (США). Кроме того, для проверки предположения о возможной потенцирующей интерфероно-образование способности препарата в отдельные пробы с указанными концентрациями препарата добавляли индуктор интерфероногенеза — ридостин по 0,1 мл. Все пробы выполнялись в дублирующем исполнении. Материалы статистически обработаны с применением метода углового преобразования (j) по Фишеру [1].
Результаты исследований и их обсуждение
В ходе исследования установлено, что препарат Септолете плюс достоверно усиливал образование ранних (а) интерферонов в культуре как клеток миндалин, так и клеток крови и обладал потенцирующим действием при добавлении ридостина (табл. 1). На продукцию позднего, иммунного интерферона (g) как клетками небных миндалин, так и клетками крови препарат влияния не оказывал (рис. 1). Это обстоятельство определяет исключительную целесообразность применения Септолете плюс на ранних этапах инфекционного вирусного процесса, т.к. во время рассасывания в ротовой полости препарат контактирует с поверхностью небных миндалин или диффузными лимфоидными фолликулами и может активировать в них продукцию а-интерферона.
Что касается влияния препарата на цитолитиче-скую активность клеток крови и небных миндалин, то достоверного усиления этой активности выявлено не
было (табл. 2), хотя вектор отклонений при добавлении различных концентраций препарата был одинаковым в сторону усиления деструктивной способности клеток (30—89 % от исходной величины) при использовании Септолете плюс в 9 из 12 наблюдений.
Известно, что активация функции ЕЦК связана с влиянием системы интерферона и других цитокинов [13] и до известной степени определяет противовирусный потенциал препарата [3, 4, 9]. Исходя из того, что препарат способен активировать синтез ранних интер-феронов, играющих важную роль на начальных этапах инфекционного процесса [12], можно считать целесообразным применение препарата Септолете плюс на начальных стадиях вирусной инфекции.
Выводы
1. Раствор препарата Септолете плюс в условиях культивирования с клетками небных миндалин или периферической крови активирует синтез а-интерферона.
2. Препарат Септолете плюс способен усиливать действие индуктора g-интерферона — ридостина в условиях in vitro.
50
45 40 35 с; 30
1» 20
15
10
Исходи. Септолете 1 Септолете 2
□ Миндалины
Кровь
Рисунок 1. Влияние препарата Септолете плюс в различных концентрациях на продукцию a-интерферона клетками небных миндалин и периферической крови in vitro
www.pediatric.mif-ua.com
53
Клтт'чна педтатр!я
2(23) • 2010
3. Не выявлено существенных изменений в продукции позднего интерферона (у) в культуре клеток крови и миндалин под действием препарата Септолете плюс.
4. Препарат Септолете плюс не угнетал активности естественных цитотоксических клеток крови и миндалин in vitro и имел вектор изменений в сторону стимуляции деструктивной активности мононуклеаров.
5. Препарат Септолете плюс может применяться при массовых вирусных заболеваниях верхних дыхательных путей.
Список литературы
1. Гублер Е. В. Математические методы анализа и распознавания патологических процессов — Л.: Медицина, 1978. — 294 с.
2. Еропкин М.Ю., Коновалов Н.И., Григорьева В.А. и др. Действие препарата Инфлюцид in vitro против пандемического штамма 2009 г. А (H1N1) «свиного» («мексиканского») гриппа// Традиционная медицина. — 2009. — № 3(18). — С. 8-12.
3. Дранник Г.Н. Клиническая иммунология и аллергология. — К.: Полиграф-Плюс, 2006. — 481 с.
4. Ершов Ф.И., Норовлянский А.Н., Мезенцева М.В. Ранние цитокиновые реакции при вирусных инфекциях // Цитокины и воспаление. — 2004. — Т. 3, № 1. — С. 3-6.
5. Ершов Ф.И. Система интерферонов в норме и патологии. — М.: Медицина, 1996. — 240 с.
6. Мельников О.Ф., Тимченко С.В., Фараон И.В., Бре-дун А.Ю. Исследование противовоспалительных свойств тон-
Мельников О.Ф., Тимченко М.Д., Кривохатська Л.Д., Мурз1на Е.А.
ДУ «1нститут отоларингологи¡м. проф. А.1. Коломийченко АМН Украни, м. Ки'1в
ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНЕ ВИВЧЕННЯ ВПЛИВУ ПРЕПАРАТУ СЕПТОЛЕТЕ ПЛЮС НА ФАКТОРИ ПРОТИВ^УСНОГО ¡МУЖТЕТУ IN VITRO
Резюме. В умовах експерименту in vitro вивчено вплив препарату Септолете плюс на вироблення a- i g-штерферошв клггинами пщнебшних мигдалин i мононуклеарiв перифе-рично1 кровi хворих is хрошчним тонзилиом у присутносп iндуктора штерферону та без нього, а також на цитолиичну актившсть щодо ксеногенних еритроцитав. Установлено, що препарат Септолете плюс активував продукцш ранньо-го штерферону i вщгравав роль кофактора при викорис-танш шдуктора интерфероногенезу — ридостину. Препарат помiрно стимулював цитолггачну актившсть природних цитотоксичних клиин мигдалин i периферично'1 кров1
Kro40Bi слова: Септолете плюс, штерферон, противiрус-ний iмунiтет.
зилотрена в эксперименте // Журн. вушн., нос. i горлових хвороб. — 2008. — № 6. - С. 37-40.
7. Кайдашев 1.П. Методи клтчних та експериментальних до^джень у медицит. — Полтава: Полимет, 2003. — 319 с.
8. Заболотный Д.И., Пшеничкина В.Д., Вольская О.Г., Мельников О.Ф. Клинико-иммунологическая характеристика больных хроническим фарингитом в стадии обострения при лечении препаратом Септолете плюс // Журн. вушн., нос. i горлових хвороб. — 2007. — № 6. — С. 2-8.
9. Кривицкая В.З., Сомнина А.А, Сухолвецкая В.Ф. Иммунопатологический аллергический ТН-2 тип противовирусного гуморального иммунитета у детей с респираторно-синцитиальной вирусной ин-фекцией//Цитокины и воспаление. — 2004. — Т. 3, № 3. — С. 34-37.
10. Мельников О.Ф. Иммунологические аспекты генеза хронического тонзиллита и регуляции функциональной активности небных миндалин: Дис... д-ра мед. наук: 14.00.16/ Институт физиологии АН УССР. — К., 1981. — 294 с.
11. Мельников О.Ф., Заяц Т.А. Сравнительная оценкарадио-изотопного и спектрофотометрического методов регистрации цитолиза //Лаб. диагностика. — 1999. — № 2. — С. 32-34.
12. Никулин Б.А. Оценка и коррекция иммунного статуса. — М.: ГЭОТАР, 2008. — 375 с.
13. Симбирцев А.С. Цитокины: классификация и биологические функции//Цитокины и воспаление. — 2004. — Т. 3, № 2. — С. 16-22.
Впервые опубликовано: Перинатология и педиатрия. — 2010. — № 1(41)
Получено 15.03.10 □
Melnikov O.F., Timchenko M.D., Krivokhatskaya L.D., Murzina E.A.
SI Institute of Otorhinolaryngology named after prof. A.I. Kolomiychenko AMS of Ukraine, Kyiv, Ukraine
EXPERIMENTAL STUDY OF INFLUENCE OF SEPTOLETE PLUS ON FACTORS OF ANTIVIRAL IMMUNITY IN VITRO
Summary. There was studied experimentally the influence of Septolete plus on production of a- and g-interferon by tonsillar cells and peripheral blood mononuclear cells of patients with chronic tonsillitis in the presence of interferon inductor and without it, and also on cytolytic activity regarding xenogenic erythrocytes. It was defined that Septolete plus had activated the production of early interferon and acted as cofactor at use of interferonogenesis inductor — ridostin. The preparation moderately stimulated cytolytic activity of natural cytotoxic cells of tonsils and of peripheral blood.
Key words: Septolete plus, interferon, antiviral immunity.
оороЬёе ^ОГТрЗЮвна
