CC BY
31
УДК: 616.62-003.7-092.4:615.32
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ АПРОБАЦИЯ НОВОЙ БИОМЕДИЦИНСКОЙ СУБСТАНЦИИ ИЗ СВИНЫХ ПОЧЕК ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ МОЧЕКАМЕННОЙ БОЛЕЗНИ
Александр Юрьевич ЖАРИКОВ, Вячеслав Витальевич ЛАМПАТОВ, Валерий Михайлович БРЮХАНОВ, Ольга Сергеевна ТАЛАЛАЕВА, Юрий Григорьевич МОТИН, Ганна Викторовна ПАВЛЯШИК, Дмитрий Владимирович ЕЛИСЕЕВ
ГБОУ ВПО Алтайский государственный медицинский университет Минздрава России 656038, г. Барнаул, просп. Ленина, 40
Цель данной работы - апробировать в условиях экспериментальной мочекаменной болезни (МКБ) антилито-генную активность новой биомедицинской субстанции из свиных почек. Эксперименты проведены на двух группах аутбредных самцов крыс сток Вистар по 15 особей в каждой. В первой (контрольной) группе животные на протяжении 6 недель получали в виде питья 1%-й раствор этиленгликоля (ЭГ). Крысам второй группы (группа лечения) начиная с 4-й недели на фоне продолжающегося потребления ЭГ ежедневно применяли новую биомедицинскую субстанцию из сырья свиных почек в дозе 1,0 на крысу. Производство субстанции осуществлялось на ЗАО «Алтайвитамины» (г. Бийск, Алтайский край, Россия) методом лиофильного высушивания. В обеих группах каждые 3-4 дня в моче, собранной за сутки, определяли концентрацию ионов оксалата, фосфата и кальция, активность маркерных ферментов: лактатдегидрогеназы, у-глутамилтрансферазы и ^ацетил-Р-Э-глюкозаминидазы, а также показатели активности свободнорадикального окисления (СРО) в почках. Гистохимическим методом Косса на почечных срезах крыс определяли наличие кальций-позитивных отложений. У крыс контрольной группы фиксировалось развитие выраженной экспериментальной МКБ, признаками которой являлись пересыщение мочи оксалат-ионами, существенное увеличение активности маркерных ферментов, активация процессов СРО в почках, а также отложение в почках кальциевых депозитов. В группе лечения наблюдалось существенное облегчение протекания экспериментальной патологии, о чем свидетельствовало ослабление пересыщения мочи оксалат-ионами, выраженное снижение ферментурии, а также угнетение процессов СРО и значительное уменьшение количества кальциевых отложений и их размеров. В результате проведенных экспериментов получены свидетельства высокой антилитогенной активности новой биомедицинской субстанции из свиных почек.
Ключевые слова: антилитогенное действие, биомедицинская субстанция.
Ранее нами установлено, что длительное применение сырья из свиных почек приводит к существенному облегчению протекания экспериментальной мочекаменной болезни (МКБ) у крыс [1]. Характерными диагностическими признаками этого стали ослабление пересыщения мочи оксалат-ионом, выраженное снижение активности маркерных ферментов повреждения почечного эпителия, угнетение процессов свободнорадикального окисления (СРО) в почечной
ткани, а также значительное уменьшение количества и размеров кальциевых отложений в почках [1]. Эти результаты позволили предположить, что сырье из свиных почек может являться весьма перспективным источником для разработки нового эффективного антилитогенного средства.
Учитывая вышесказанное, мы поставили цель апробировать в условиях экспериментальной МКБ антилитогенную активность новой биомедицинской субстанции из свиных почек.
Жариков А.Ю. - д.б.н., проф. кафедры фармакологии, e-mail: [email protected] Лампатов В.В. - д.б.н., проф. кафедры фармакологии, e-mail: [email protected] Брюханов В.М. - д.м.н., зав. кафедрой фармакологии, e-mail: [email protected] Талалаева О.С. - к.м.н., доцент кафедры фармакологии, e-mail: [email protected] Мотин Ю.Г. - к.м.н., доцент кафедры патологической анатомии, e-mail: [email protected] Павляшик Г.В. - e-mail: [email protected] Елисеев Д.В. - e-mail: [email protected]
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Эксперименты проведены на 30 аутбредных самцах крыс сток Вистар массой 220-280 г, которые находились в индивидуальных клетках, приспособленных для сбора мочи, в условиях стандартной лабораторной диеты. Моделирование МКБ осуществлялось по общепринятой этилен-гликолевой модели, согласно которой литогенез провоцируется постоянным употреблением подопытными животными в виде питья 1%-го раствора этиленгликоля (ЭГ) [2].
Подопытные животные были разделены поровну на 2 группы. В первой (контрольной) группе крысы на протяжении 6 недель получали в виде питья 1%-й раствор ЭГ. Крысам второй группы (группа лечения) начиная с 4-й недели на фоне продолжающегося потребления ЭГ ежедневно в течение последующих 3-х недель в пищевой рацион включали биомедицинскую субстанцию из свиных почек в дозе 1,0 на крысу.
Технологическое производство биомедицинской субстанции из свиных почек осуществлялось на ЗАО «Алтайвитамины» (г. Бийск, Россия) в соответствии с двусторонним договором. Технология производства базировалась на методе лиофильного высушивания и состояла из следующих этапов: 1) подготовка биологического материала - размораживание сырых свиных почек при комнатной температуре, удаление поверхностного жира, гомогенизация на лабораторном гомогенизаторе при 10 тыс. оборотов в минуту в течение 5 минут, взвешивание и распределение гомогената на тарированные поддоны ровным слоем толщиной не более 0,5 см; 2) заморозка (стеклование) продукта при температуре -45 °С в течение 4 ч; 3) первичная сушка - высушивание продукта в вакуумной камере при температуре -40 °С и давлении 10 Па на протяжении 48 ч; 4) вторичная сушка - досушивание продукта при температуре +20 °С в течение 6 ч. В результате описанного процесса удалось добиться удаления 80 % влаги из биологического материала при сохранении его структурной и функциональной целостности.
Каждые 3-4 дня в обеих экспериментальных группах собирали суточный объем мочи, в которой определяли концентрацию ионов ок-салата, фосфата и кальция, а также экскрецию креатинина. Кроме того, каждые 7 дней измеряли активность в моче маркерных ферментов повреждения почечного эпителия: лактатдегидро-геназы - ЛДГ (характеризует степень цитолиза клеток), у-глутамилтрансферазы - ГГТ (свидетельствует о степени повреждения клеточных мембран), К-ацетил-Р^-глюкозаминидазы -
НАГ (демонстрирует функциональные нарушения нефроцитов).
Содержание оксалат-иона в моче определяли при помощи ВЭЖХ по разработанной нами методике [4]. В качестве элюентов использовали 80%-й раствор ацетонитрила при градиенте от 0 до 100 % и 0,1%-й раствор серной кислоты. Скорость подачи элюентов - 100 мкл/мин, объем элюирования - 1000 мкл, температура хрома-тографической колонки - 35 оС. Детектирование проводилось при длине волны X = 210 нм. Для расчетов применялся калибровочный график, который строили, используя стандартный раствор оксалат-иона в концентрации 1 мг/мл ^1ика, Германия). Содержание фосфат-ионов определяли методом фотоэлектроколориметрии (ФЭК) при длине волны X = 440 нм. Методика основана на реакции образования фосфорно-молибдено-ванадиевого комплекса, который имеет характерную желтую окраску. Ионы кальция в моче также определяли методом ФЭК по реакции с о-крезолфталеин-комплексоном при длине волны X = 590 нм.
Активность ЛДГ определяли методом спек-трофотометрии при длине волны X = 340 нм. В основе метода лежит реакция восстановления пирувата до молочной кислоты. Эта реакция катализируется ЛДГ, а ее скорость пропорциональна активности фермента. Каталитическая активность ГГТ, для измерения которой использовался метод ФЭК, рассчитывалась пропорционально количеству п-нитроанилина, образующегося в результате реакции взаимодействия L-y-глутамил-3-карбокси-4-нитроанилида и глицилглицина и детектируемого при длине волны X = 400 нм. Активность НАГ определяли по модифицированной методике D. МагиЛ [7], согласно которой активность НАГ пропорциональна количеству п-нитрофенола, образующегося в результате реакции гидролиза ферментом п-нитро-К-ацетил-Р-глюкозамида. Количество п-нитрофенола измеряли спектрофотометрически при длине волны X = 400 нм. Активность всех определяемых ферментов рассчитывали относительно концентрации креатинина в моче, выражавшейся в мг/л, и обозначали в условных единицах (ЕД/мг креати-нина).
По истечении 6-й недели эксперимента с целью изучения активности процессов СРО, важного индикатора литогенеза [3, 5], а также для проведения морфологических исследований почек подопытных животных по 5 крыс из каждой группы подвергали эвтаназии с соблюдением требований Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации (2000 г.). Суммар-
ный показатель концентрации всех прооксидан-тов и свободнорадикальных метаболитов, общую прооксидантную активность (ОПА) определяли в гомогенате коркового вещества почек по интенсивности окраски флуоресцентного комплекса, образующегося при взаимодействии продуктов перекисного окисления ТВИН-80 с тиобарби-туровой кислотой. Дополнительно определяли концентрацию в ткани малонового диальдегида (МДА) и других тиобарбитуратреактивных продуктов окисления жирных кислот (ТБРП). Для оценки антиоксидантного статуса клеток определяли общую антиоксидантную активность (ОАА) и активности антиоксидантных ферментов: ката-лазы, супероксиддисмутазы (СОД) и глутатион-пероксидазы (ГПО). ОАА оценивали по степени ингибирования Fe2+/аскорбат-индуцированного окисления ТВИН-80 гомогенатом ткани (гемоли-затом эритроцитов). Активность каталазы определяли по подавлению ферментом окисления молибдата натрия перекисью водорода. Активность СОД оценивали по содержанию в пробе нитроформазана, окрашенного продукта восстановления нитротетразолия супероксидными анион-радикалами. Маркером активности ГПО служило содержание восстановленного глутатиона, определяемого по цветной реакции с реактивом Эллмана.
Морфологическое исследование почек крыс выполняли с использованием светооптической микроскопии. В качестве фиксирующей жидкости применяли 10%-й раствор формалина. Для оценки изменений коркового и мозгового вещества почки срезы ткани толщиной 4-6 мкм окрашивали гематоксилином и эозином. На срезах толщиной 10-15 мкм гистохимическим методом Косса определяли наличие соединений кальция как отложения черного цвета. Ядра при этом окрашиваются в красный, а остальные тканевые структуры - в розовый цвет. Увеличение х 100, х 400.
Полученные результаты обрабатывали статистическим методом вариационных рядов с использованием критерия Манна-Уитни [6]. Все расчеты велись по общепринятым формулам. Результаты представлены в виде М ± т, где М - выборочное среднее, т - ошибка среднего, п - количество образцов мочи для анализа в указанный день наблюдения.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
В результате шестинедельного применения ЭГ у крыс контрольной группы фиксировались характерные биохимические и морфологические
признаки развития экспериментальной МКБ. Так, уже на 3-й день опыта в моче подопытных животных формировался стабильно высокий уровень оксалат-иона, сохранявшийся на протяжении всего эксперимента (табл. 1). Кроме того, у крыс контрольной группы наблюдался последовательный рост активности в моче маркерных ферментов. Как видно из табл. 3, к исходу 6-й недели моделирования патологии активность ЛДГ увеличилась в 2,9 раза, ГГТ - в 1,6 раза, НАГ - в 3,8 раза (для всех -р < 0,001 относительно исходного уровня). Параллельно наблюдалась отчетливая картина развития окислительного стресса (табл. 3). Так, концентрация ТБРП увеличилась в 8,3 раза (р < 0,001) и на 7,5 % снижалась активность ГПО (р < 0,03). Наиболее весомым подтверждением возникновения литогенных процессов в почках крыс контрольной группы явились результаты морфометрии, согласно которым количество кальциевых депозитов в области почечного сосочка составило 27,4 ± 3,22 в поле зрения, а их средний размер - 12,0 ± 0,62 мкм.
В группе лечения в первые 3 недели моделирования заболевания также наблюдались типичные биохимические признаки нефролитиаза (табл. 2). К таковым следует отнести пересыщение мочи оксалат-ионом и усиление ферменту-рии, вследствие чего активность в моче ЛДГ и НАГ к концу 3-й недели наблюдения превышала исходный уровень в 2,1 и 1,6 раза соответственно (для обоих -р < 0,001). Однако впоследствии проведенное лечение привело к существенному облегчению протекания экспериментальной МКБ (см. табл. 2). Так, наблюдалось снижение уровня мочевой концентрации оксалат-иона в 1,3-1,5 раза относительно показателя 21-го дня. Кроме того, ферментативная активность в моче подопытных животных, получавших лечение, существенно ослаблялась, в результате чего активность ЛДГ к концу эксперимента была даже в 2,1 раза меньше исходного уровня. Аналогичная динамика прослеживалась и в отношении активности НАГ (табл. 4).
Помимо этого, были выявлены существенные изменения выраженности окислительного стресса в почечной ткани подопытных крыс. Как следует из табл. 3, по завершении курса назначения биомедицинской субстанции из свиных почек концентрация ТБРП уменьшилась относительно контроля заболевания в 3,7 раза (р < 0,001), при том что активность всех трех антиоксидантных ферментов значительно возросла, как в сравнении с контролем заболевания, так и относительно уровня интактных животных. Наконец, согласно результатам морфометрии, количество кальцие-
Таблица 1
Показатели экскреторной функции почек у крыс контрольной группы в условиях
экспериментальной МКБ
Содержание Содержание Содержание каль- Диурез, Содержание креа-
оксалата, мг/мл фосфата, мг/мл ция, мкмоль/мл мл/сут тинина, ммоль/сут
Дни Исходный уровень
— 9,1 ± 0,38 1,8 ± 0,10 5,3 ± 0,36 7,1 ± 0,38
(п = 15) (п = 15) (п = 15) (п = 15)
Моделирование нефролитиаза
3 1,3 ± 0,29* 9,0 ± 0,47 1,9 ± 0,19 5,9 ± 0,65 9,3 ± 0,66*
(п = 12) (п = 12) (п = 8) (п = 12) (п = 8)
7 1,2 ± 0,14* 8,0 ± 0,44 1,3 ± 0,09* 5,4 ± 0,48 8,5 ± 0,61
(п = 15) (п = 15) (п = 15) (п = 15) (п = 15)
10 1,3 ± 0,10* 8,5 ± 0,40 Не определялось 6,5 ± 0,64 Не определялось
(п = 9) (п = 9) (п = 9)
14 1,4 ± 0,13* 8,2 ± 0,33 1,6 ± 0,22 5,9 ± 0,43 6,3 ± 0,44
(п = 15) (п = 15) (п = 15) (п = 15) (п = 15)
17 1,1 ± 0,10* 8,1 ± 0,21 1,9 ± 0,13 7,7 ± 0,96* 10,9 ± 0,63*
(п = 15) (п = 15) (п = 15) (п = 15) (п = 15)
21 1,3 ± 0,13* 7,4 ± 0,46* 1,9 ± 0,23 6,7 ± 0,55* 7,2 ± 0,49
(п = 15) (п = 15) (п = 15) (п = 15) (п = 15)
24 1,6 ± 0,17* 5,9 ± 0,43* 1,4 ± 0,14 7,6 ± 1,41 9,2 ± 0,84
(п = 15) (п = 15) (п = 15) (п = 15) (п = 15)
28 1,6 ± 0,16* 6,2 ± 0,40* 1,5 ± 0,10 7,7 ± 0,78* 8,6 ± 1,00
(п = 15) (п = 15) (п = 15) (п = 15) (п = 15)
31 1,3 ± 0,12* 7,9 ± 0,63 1,5 ± 0,28 9,4 ± 1,73* Не определялось
(п = 8) (п = 8) (п = 8) (п = 8)
35 1,3 ± 0,12* 6,1 ± 0,50* 1,6 ± 0,06 8,2 ± 1,01* 8,4 ± 0,74
(п = 15) (п = 15) (п = 15) (п = 15) (п = 15)
38 1,7 ± 0,21* 8,2 ± 0,17 Не определялось 5,6 ± 0,64 9,8 ± 0,68*
(п = 9) (п = 8) (п = 9) (п = 9)
42 1,3 ± 0,14* 6,2 ± 0,45* 1,6 ± 0,17 9,0 ± 1,19* 8,3 ± 1,03
(п = 15) (п = 15) (п = 15) (п = 15) (п = 14)
Примечание. Здесь и в табл. 2-4: * - отличие от величины соответствующего показателя интактных животных статистически значимо прир < 0,05.
вых депозитов, формирующихся в области почечного сосочка пролеченных крыс, уменьшилось относительно контроля заболевания в 12,5 раза (с 27,4 ± 3,22 до 2,2 ± 2,00 в поле зрения), а их средний размер - в 3,2 раза (с 12,0 ± 0,62 мкм до 3,7 ± 3,55 мкм; р < 0,001).
Обсуждая полученные результаты, отметим, что проведенные эксперименты наглядно продемонстрировали высокую антилитогенную активность новой биомедицинской субстанции из свиных почек. При этом обращает на себя внимание политаргетный характер терапевтического эффекта новой субстанции при экспериментальной мочекаменной болезни. Мишенями для коррекции стали такие звенья патогенеза оксалатного
нефролитиаза, как окислительный стресс в почечной ткани, повреждение уротелия, пересыщение мочи литогенными ионами и кристаллизация почечных конкрементов. Все это закономерно воплотилось в существенное снижение количества и размеров кальциевых отложений в почках подопытных крыс.
Не исключено, что политаргетное действие новой субстанции определяется комплексом ее биомедицинских свойств, зависящих от органического состава тканей свиных почек. Изучение этих свойств и поиск действующего начала в новой субстанции станет предметом дальнейших наших исследований. Пока же с определенной долей уверенности можно полагать, что техно-
Таблица 2
Влияние новой биомедицинской субстанции из свиных почек на показатели экскреторной функции почек у крыс группы лечения в условиях экспериментальной МКБ
Дни Содержание оксалата, мг/мл Фосфата, мг/мл Содержание кальция, мкмоль/мл Диурез, мл/сут Содержание креа-тинина, ммоль/сут
Исходный уровень
- 9,0 ± 0,20 (п = 15) 2,2 ± 0,10 (п = 15) 4,0 ± 0,49 (п = 15) 5,8 ± 0,52 (п = 15)
Моделирование нефролитиаза
3 1,5 ± 0,13 (п = 15) 9,4 ± 0,91 (п = 13) 2,1 ± 0,18 (п = 15) 3,5 ± 0,56 (п = 15) 5,9 ± 0,54 (п = 15)
7 1,8 ± 0,19 (п = 11) 8,6 ± 0,20 (п = 12) 1,4 ± 0,13* (п = 15) 4,1 ± 0,16 (п = 15) 6,5 ± 0,69 (п = 14)
10 1,6 ± 0,11 (п = 15) 7,6 ± 0,15 (п = 15) 1,8 ± 0,08* (п = 15) 4,3 ± 0,72 (п = 15) 4,9 ± 0,52 (п = 14)
14 1,6 ± 0,12 (п = 13) 7,7 ± 0,31 (п = 10) 1,8 ± 0,17* (п = 12) 4,2 ± 0,73 (п = 14) 6,6 ± 0,63 (п = 14)
17 1,4 ± 0,09 (п = 15) 8,3 ± 0,36 (п = 15) 1,5 ± 0,06* (п = 15) 5,3 ± 0,84 (п = 15) 7,2 ± 0,77 (п = 15)
21 1,5 ± 0,11 (п = 12) 11,3 ± 0,28* (п = 14) 2,0 ± 0,21 (п = 13) 4,1 ± 0,67 (п = 15) 7,1 ± 0,52 (п = 15)
Лечение
24 1,2 ± 0,10 (п = 14) 11,5 ± 0,46* (п = 14) 1,1 ± 0,05* (п = 14) 4,5 ± 0,64 (п = 14) 6,4 ± 0,78 (п = 14)
28 1,0 ± 0,07 (п = 14) 10,8 ± 0,40* (п = 14) 2,4 ± 0,16 (п = 14) 5,9 ± 0,93 (п = 14) 8,3 ± 0,95* (п = 14)
31 1,1 ± 0,09 (п = 15) 11,2 ± 0,38* (п = 15) 1,6 ± 0,06* (п = 15) 4,7 ± 0,69 (п = 15) 6,4 ± 0,92 (п = 15)
35 1,1 ± 0,05 (п = 14) 11,4 ± 0,32* (п = 15) 1,5 ± 0,09* (п = 15) 4,8 ± 0,39 (п = 15) 7,1 ± 0,63 (п = 15)
38 0,9 ± 0,07 (п = 12) 11,5 ± 0,34* (п = 15) 1,2 ± 0,06* (п = 15) 5,4 ± 0,73 (п = 15) 7,8 ± 0,90 (п = 15)
42 1,0 ± 0,08 (п = 15) 11,2 ± 0,41* (п = 15) 1,3 ± 0,06* (п = 15) 5,2 ± 0,83 (п = 15) 7,3 ± 0,84 (п = 15)
Таблица 3
Показатели активности свободнорадикального окисления в почках крыс с экспериментальной МКБ в контроле и в условиях применения новой биомедицинской субстанции из свиных почек
Показатель Исходный уровень Контрольная группа Группа лечения
Содержание ТБРП, мкМ 2,9 ± 0,18 24,1 ± 0,62* 6,5 ± 0,64*-#
ОПА, % 75,5 ± 2,71 78,2 ± 2,71 73,0 ± 2,24
Активность каталазы, % 11,9 ± 0,79 13,6 ± 1,50 28,5 ± 2,66*-#
Активность СОД, % 14,9 ± 1,61 11,6 ± 1,26 23,4 ± 1,03«
Активность ГПО, % 37,4 ± 1,88 29,9 ± 2,45* 39,7 ± 1,80#
Примечание. # - отличие от величины соответствующего показателя животных контрольной группы статистически значимо при р < 0,05.
Таблица 4
Ферментативная активность в моче крыс с экспериментальной МКБ в контроле и в условиях применения новой биомедицинской субстанции из свиных почек, ЕД/мг креатинина в сутки
Дни Контрольная группа Группа лечения
ЛДГ ГГТ НАГ (х10-3) ЛДГ ГГТ НАГ (х10-3)
Исходный уровень
0,18 ± 0,015 (n = 15) 0,26 ± 0,015 (n = 15) 8,4 ± 0,32 (n = 15) 0,21 ± 0,015 (n = 11) 0,33 ± 0,015 (n = 10) 9,8 ± 0,46 (n = 15)
Моделирование не( зролитиаза
7 0,32 ± 0,024* (n = 15) 0,30 ± 0,015 (n = 15) 14,4 ± 2,48* (n = 15) 0,35 ± 0,025 (n = 14) 0,36 ± 0,015 (n = 14) 10,5 ± 0,48 (n = 14)
14 0,50 ± 0,033* (n = 15) 0,32 ± 0,011* (n = 15) 19,4 ± 1,40* (n = 15) 0,44 ± 0,034 (n = 14) 0,42 ± 0,014 (n = 14) 15,3 ± 0,97 (n = 14)
21 0,52 ± 0,032* (n = 15) 0,37 ± 0,015* (n = 15) 20,1 ± 2,11* (n = 15) 0,45 ± 0,013 (n = 13) 0,36 ± 0,011 (n = 8) Не определялось
Лечение
28 0,44 ± 0,018* (n = 15) 0,30 ± 0,010 (n = 15) 17,2 ± 0,90* (n = 15) 0,36 ± 0,020 (n = 14) 0,38 ± 0,016 (n = 14) 7,3 ± 0,33 (n = 14)
35 0,45 ± 0,025* (n = 15) 0,42 ± 0,049* (n = 15) 15,4 ± 1,26* (n = 15) 0,09 ± 0,014 (n = 15) 0,36 ± 0,018 (n = 13) 6,5 ± 0,52 (n = 15)
42 0,53 ± 0,018* (n = 15) Не определялось 31,9 ± 2,86* (n = 15) 0,10 ± 0,008 (n = 15) 0,37 ± 0,013 (n = 14) 8,5 ± 0,37 (n = 15)
логическая обработка тканей свиных почек, по крайней мере щадящими методами, не снижает их антилитогенной активности, что создает хорошие предпосылки для разработки оптимальной технологической схемы производства нового антилитогенного средства.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Установлено, что трехнедельное применение новой биомедицинской субстанции из свиных почек при экспериментальной мочекаменной болезни сопровождается выраженным антилитоген-ным действием, не уступающим по силе сырью из свиных почек.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Брюханов В.М., Жариков А.Ю., Зверев Я.Ф. и др. Опыт применения сырья из свиных почек для фармакологической коррекции экспериментального нефролитиаза // Бюл. СО РАМН. 2011. 31. (3). 97-103.
2. Жариков А.Ю., Брюханов В.М., Зверев Я.Ф., Лампатов В.В. Современные методы моделирования оксалатного нефролитиаза // Нефрология. 2008. 12. (4). 33-36.
3. Жариков А.Ю., Зверев Я.Ф., Брюханов В.М., Лампатов В.В. Механизм формирования кристаллов при оксалатном нефролитиазе // Нефрология.
2009. 13. (4). 37-50.
4. Жариков А.Ю., Лампатов В.В., Зверев Я.Ф. и др. Новый способ определения оксалат-ионов в моче // Клиническая лабораторная диагностика.
2010. (12). 3-5.
5. Зверев Я.Ф., Брюханов В.М., Талалаева О.С. и др. О роли процессов свободнорадикального окисления в развитии экспериментального нефролитиаза // Нефрология. 2008. 12. (1). 58-63.
6. Хафазиянова Р.Х., Бурыкин И.М., Алеева Г.Н. Математическая статистика в экспериментальной и клинической фармакологии. Казань: Медицина, 2006. 374 с.
7. Maruch D. Rapid colorimetric assay of ß-galac-tosidase and N-acetyl-ß-glucosaminidase in human urine // Clin. Chim. Acta. 1976. 73. 453-446.
EXPERIMENTAL APROBATION OF NEW BIOMEDICINE SUBSTENCE FROM PORK KIDNEYS AT THE EXPERIMENTAL KIDNEY STONE DISEASE
Alexander Yurjevich ZHARIKOV, Vyacheslav Vitaljevich LAMPATOV, Valery Mikhajlovich BRYUKHANOV, Olga Sergeevna TALALAEVA, Yury Grigorjevich MOTIN, Ganna Viktorovna PAVLYASHIK, Dmitri Vladimirovich ELISEEV
Altay State Medical University of Minzdrav of Russia 656038, Barnaul, Lenin av., 40
The aim of present investigation was approbation in experimental kidney stone disease conditions antilitogenic action of new biomedicine substance from pork kidney. Experiments were performed on 30 male divided into 2 groups. In control group 1 % solution of ethylenglycole (EG) was given as drink for the rats during 6 weeks. The rats of therapy group were given EG during 6 weeks and the substance from raw material of pork kidneys was administrated in dose 1 g/rat from the 4-th week. Generating of substance from raw material of pork kidneys was carried out by the joint-stock company «Altayvitaminy». Technology of generating is based on lyophilic dehumidification. The oxalate, phosphate and calcium concentrations, activity of urothelium injury marker enzymes: lactate dehydrogenase (LDH), y-glutamyl transferase (GGT), N-acetyl-p-D-glucose aminidase (NAG), and oxygen's free radicals activity were determined every 3-4 days in both rats groups. The calcium deposits were evaluated in the rats kidney sections by Van Koss hystochemical method. Chronic use of EG in control group resulted in experimental kidney stone disease progression which was indicated by oxalate super saturation in urine, enhancing of marker enzymes activity, activation of oxidative stress in the kidney and in the blood, and forming calcium deposits near renal papilla. The treatment of experimental nephrolithiasis led to the great relief. It was indicated by the significant reduction of oxaluria, pronounced decrease of marker enzymes activity: LDH, GGT, NAG, and reduction of oxidative stress. Finally, it was confirmed by morphological studies, which detected very significant reduction of calcium deposits number and their sizes. The evidence of high antilitogenic activity of new biomedicine substance from pork kidney has been revealed as the result of the research.
Key words: antilitogenic action, biomedicine substance.
Zharikov A.Yu. - doctor of biological sciences, professor of the chair for pharmacology, e-mail: [email protected]
Lampatov V.V. - doctor of biological sciences, professor of the chair for pharmacology, e-mail: [email protected] Bryukhanov V.M. - doctor of medical sciences, head of the chair for pharmacology, e-mail: [email protected] Talalaeva O.S. - candidate of medical sciences, assistant ofprofessor of the chair for pharmacology, e-mail: [email protected]
Motin Yu.G. - candidate of medical sciences, assistant ofprofessor of the chair for pathological anatomy,
e-mail: [email protected]
Pavlyashik G.V. - e-mail: [email protected]
EliseevD.V. - e-mail: [email protected]
