CC BY
27
2006
Известия ТИНРО
Том 145
УДК 574.5:581.5
Е.А.Масленко, Л.В.Михайлова, Г.А.Петухова (ФГУП "Госрыбцентр", г. Тюмень)
ЭКОЛОГИЧЕСКАЯ ОПАСНОСТЬ ПАРАТОЛУИЛОВОЙ КИСЛОТЫ ДЛЯ ПРЕСНОВОДНЫХ НИЗШИХ И ВЫСШИХ РАСТЕНИЙ
На примере паратолуиловой кислоты показано токсическое и мутагенное действие производных бензола на пресноводные водоросли и высшие водные растения. Действие относительно высоких концентраций кислоты на продуцентов проявляется в угнетении роста и фотосинтеза растений. Наиболее чувствительными к действию исследуемого вещества оказались пигментная система и клетки корней растений.
Maslenko E.A., Mihajlova L.V., Petuhova G.A. Ecological danger of p-toluene acid for freshwater algae and supreme plants // Izv. TINRO. — 2006. — Vol. 145. — P. 279-288.
Toxicity of p-toluene acid on freshwater plants and its mutageneous activity is investigated for the range of concentration up to 1000 mg/l. The acid derivatives oppressed growth of the plants and the process of their photosynthesis. Destructions of cells and tissues were caused by infringements at molecular level. The most sensitive parameter was chromosomal aberrations in cells of supreme plants, in particular in their roots and pigments. The infringements were registered already from the concentration 0.1 mg/l. The higher was concentration of the pollutant, the more chromosomal infringements were found out. The high concentration caused visible destruction of cells and tissues. Oppression of growth rate of plants has begun under the concentration 1 mg/l for duckweed and 50 mg/l for algae. Under the concentration > 100 mg/l the duckweed was died. The algae were more steady for the pollution and died under its concentration > 500 mg/l.
Паратолуиловая (метилбензойная) кислота (п-ТК) относится к классу ароматических карбоновых кислот — производных ксилолов. По биологическому действию она должна быть близка как к ксилолам, так и к ароматическим карбо-новым и дикарбоновым кислотам — бензойной, фталевой, изофталевой, терефта-левой, тримеллитовой, — которые образуются при окислении нафталина или ароматических углеводородов ряда бензола, в молекулах которых есть 2-3 боковые цепи. Известно, что родоначальник этой группы веществ — бензол — обладает выраженным токсическим и мутагенным действием как на теплокровных животных и человека, так и на водные организмы (Фельд, 1985; Peilak-Walker et аЬ, 1985; Тульчинская, Кожанова, 1986; Вредные химические вещества ..., 1998).
Данных о токсическом влиянии ароматических кислот на водные организмы в литературе очень мало. Однако, поскольку эти вещества широко используются в пищевой промышленности, в производстве красителей и душистых веществ, в синтезе пластических масс, в том числе полиэфирных волокон (Вредные вещества в промышленности, 1976), и со сточными водами могут попадать в
279
водоемы, существует необходимость оценки их токсического влияния на гидроби-онтов, в том числе продуцентов (высшие и низшие растения).
Характеристики тест-объектов
В опытах использовали культуру зеленых водорослей Scenedesmus quadricauda Breb. и ряску Lemna minor Linne. Используемые тест-объекты культивировались согласно существующим методикам (Методические указания ..., 1998; Методическое руководство ..., 2002).
Зеленая протококковая микроводоросль Sc. quadricauda Breb. образует 2-, 8-клеточные однорядные ценобии. Размножается апланоспорами (Определитель пресноводных водорослей ..., 1986). Широко распространена в пресноводных водоемах. Благодаря сравнительно высокому темпу размножения водоросли используются в качестве тест-объектов, поскольку на них можно проследить действие токсиканта в ряду поколений и выявить отдаленные последствия интоксикации, охарактеризовать состояние процесса первичного образования органического вещества. Водоросли обладают морфологическими признаками клетки, но реагируют на внешнюю среду как самостоятельный организм (Владимирова, Се-мененко, 1962; Хоботьев и др., 1971).
Ряска L. minor Linne — свободноплавающее растение. Вегетативное тело ряски имеет вид листа (листеца). Форма листеца эллиптическая, на нем выделяют проксимальный с двумя кармашками и дистальный конец. В кармашках, которые называют почечными, закладываются вегетативные почки, дающие начало вегетативным растениям. При достижении зрелости завершившие рост дочерние листецы полностью выделяются из кармашка. Листья ряски одиночные или соединены в небольшую группу короткими или удлиненными ножками. Ряска весьма удобна для культивирования, нетребовательна к сложным питательным средам. Средняя длина листецов составляет 4-5 мм, средняя продолжительность жизни одного листеца — 30 дней. Цикл размножения относительно короткий, 35 дней (Мережко, Якубовский, 1976). Корень ряски простой, неветвящийся, с корневым чехликом, располагается перпендикулярно листецу (Тахтаджан, 1982).
Характеристика тестируемого вещества
Паратолуиловая (метилбензойная) кислота СН3С6Н4СООН представляет собой бесцветное кристаллическое вещество, хорошо растворимое в этаноле, диэ-тиловом эфире, ацетоне, плохо растворимое в воде. Молекулярная масса 136,2. Температура плавления 179,6 0С, температура кипения 263 0С, возгорания — 275 0С (Химический энциклопедический словарь, 1983).
В экспериментах использовались свежеприготовленные растворы п-ТК в диапазонах концентраций, определенных в предварительных кратковременных опытах: от 6,2 до 1000,0 мг/л для Sc. quadricauda и от 0,01 до 1000,0 мг/л для L. minor. Опыты проводили в 3 повторностях при температуре 20 ± 2 0С. Смену растворов производили на 7-, 14-, 21-е сут. Для приготовления растворов и в контроле (К) использовали отстоянную пресную воду (Методические указания ..., 1998; Методическое руководство., 2002).
Регистрируемые показатели: численность клеток, гибель и темп роста культуры микроводорослей, изменение показателей продукции и деструкции; выживаемость, рост и пигментный состав листецов ряски, гибель клеток и хромосомные аберрации в клетках корней.
Генотоксичность п-ТК исследовали по числу хромосомных аберраций в делящейся зоне корней растений. В ходе анализа учитывали количество клеток с нормальными и нарушенными анафазами (Немцова, 1970; Бочков и др., 1972; Методическое руководство ..., 2002). Для учета живых и мертвых клеток в корнях ряски применили методику, разработанную В.Г.Хоботьевым с соавторами
(1971) для водорослей. Для прижизненного окрашивания использовали метиле-новый синий в фосфатном буфере. Определение ассимилирующей способности оценивали согласно методике Az-рH-теста (Методические указания ..., 1989). Концентрацию пигментов фотосинтеза, экстрагируемых спиртом, определяли на спектрофотометре '^ресоГ' при длинах волн 662, 644, 440 нм (Методические указания., 1989). Статистическая обработка данных и корреляционный анализ выполнены по общепринятым методикам (Лакин, 1980).
Ответные реакции 5с. quadricauda на действие паратолуиловой кислоты
В экспериментах на водорослях паратолуиловая кислота до 4-х сут опыта замедляла темп размножения клеток во всем диапазоне исследуемых концентраций. С 7-х сут замедление темпа сохранялось в максимальных концентрациях 1000 и 500 мг/л, что сопровождалось снижением численности клеток (рис. 1, 2).
Рис. 1. Темп размножения клеток Sc. quadricauda (% к контролю) при различных концентрациях п-ТК в среде: 1 — 50 мг/л, 2 — 100, 3 — 250, 4 — 500, 5 — 1000 мг/л; * — статистически достоверные отклонения от контроля
Fig. 1. Rate of duplication of cells Sc. quadricauda (% to control) in different concentrations р-ТА in the circumstances: 1 — 50 mg/l, 2 — 100, 3 — 250, 4 — 500, 5 — 1000 mg/l; * — statistical reliable distinction from control
к, % 600
500 -
400
300 -
200
100 -
сут
0
Рис. 2. Изменение численности клеток Sc. quadricauda (% к контролю) при различных концентрациях п-ТК в среде: 1 — 50 мг/л, 2 — 100, 3 — 250, 4 — 500, 5 — 1000 мг/л;
* — статистически достоверные отклонения от контроля
Fig. 2. Change of number of cells Sc. quadricauda (% to control) in different concentrations р-ТА in the circumstances: 1 — 50 mg/l, 2 — 100, 3 — 250, 4 — 500, 5 — 1000 mg/l;
* — statistical reliable distinction from control
к, % 120
100
80
60 -
40
20
0
04
7 14 2 1 28*3 СУТ
Уменьшение плотности культуры было обусловлено как снижением темпа размножения (удлинением времени между генерациями), так и ростом гибели клеток Бс. quadricauda. Доля погибших клеток в концентрациях 500 и 1000 мг/л возрастала относительно К в 6-9 раз соответственно к 14- и 21-м сут. В концентрациях более 250 мг/л наблюдалось побурение и оседание клеток на
дно емкостей к 7-14-м сут опыта, что свидетельствовало о гибели культуры. Паратолуиловая кислота полностью ингибировала рост культуры в максимальных концентрациях к 14-21-м сут.
В растворах с высокими концентрациями п-ТК клетки погибали не только в результате прямого токсического действия, но и в связи с изменением рН среды. Снижение рН до 5,3 было зафиксировано на 14-е сут в растворе, содержащем 1000 мг/л п-ТК, что может быть результатом постепенного растворения избыточной п-ТК.
К относительно низким концентрациям п-ТК (ниже 50 мг/л) Sc. quadricauda, может адаптироваться, о чем свидетельствуют как показатель общей численности клеток, так и коэффициент прироста численности. К 14-м сут во всех концентрациях, кроме максимальной, коэффициент прироста либо приближался к контролю, либо превышал его и коррелировал с колебаниями численности (г = 0,93). К концу эксперимента коэффициент прироста численности водорослей практически не отличался от контроля при концентрациях 100 мг/л и ниже, хотя функциональная активность клеток при действии п-ТК в концентрации 50 мг/л и выше была существенно снижена (табл. 1).
Таблица 1
Расчет продукции и деструкции в опытах со Sc. quadricauda при различных концентрациях п-ТК в среде, % к контролю
Table 1
Calculation of production and destruction in experiences with Sc. quadricauda in different concentrations p-TA in the circumstances, % to control
Показатель Концентраци я п-ТК, мг/ л
25 50 100 250 500 1000
Валовая продукция 98, 2 95,3* 83,7** 52,3*** 15,1*** 10,5***
Деструкция 114, 3 340,0** 280,0** 220,0** 200,0* 200,0*
Чистая продукция 93, 0 80,2*** 71 g*** 42 0*** 3,7*** 0***
* Статистически достоверные отклонения от контроля, Р < 0,05. ** Р < 0,01. *** Р < 0,001.
В растворах от 50 и до 1000 мг/л валовая продукция была ниже, чем в контроле, на 4,7-89,5 % (Р = 0,05-0,001), а чистая продукция — на 19,896,3 % (Р = 0,001). В максимальной концентрации величина чистой первичной продукции имела отрицательное значение в связи с угнетением и гибелью значительной части культуры клеток, а также активизацией деструкционных процессов (на 100-240 % по сравнению с контролем) начиная с концентрации 50 мг/л. Нормальное функционирование водорослей отмечалось лишь в растворах с концентрацией ниже 50 мг/л. Траты на обмен были выше, чем продукция органического вещества. Возможно, и сапрофитная микрофлора, разлагая органические вещества, потребляла кислород быстрее, чем его продуцировали фотосинтетики.
Таким образом, концентрации п-ТК 500-1000 мг/л являются летальными для Sc. quadricauda. Выраженным токсическим действием обладает концентрация 250 мг/л, которая замедляет темп размножения и снижает численность клеток микроводорослей. Недействующей по всем исследуемым показателям является концентрация 25 мг/л.
Ответные реакции L. minor на действие паратолуиловой кислоты
Ряска проявила достаточно высокую устойчивость по отношению к п-ТК. Максимальная гибель листецов отмечалась при концентрации 1000 мг/л — 63 % в I поколении (Fj) и 82 % — во II (F2). К 8-м сут, когда в растворе,
содержащем 1000 мг/л п-ТК, выживаемость листецов была снижена более чем наполовину (табл. 2), они сильно отставали в росте и к 12-м сут погибали (табл. 3). Рост листецов в растворе, содержащем 100 мг/л п-ТК, был снижен в течение всего эксперимента на 18-28 %, и в результате к 24-м сут наступила полная гибель шестого поколения ряски.
Незначительное, но статистически достоверное уменьшение выживаемости всех поколений вызывала концентрация 10 мг/л. Концентрация 1 мг/л п-ТК практически не влияла на выживаемость растений, однако снижала темп роста листецов F2 F3 F4 и F5 поколений в среднем на 14 % от контроля. Концентрации 0,1 мг/л и 0,01 мг/л не снижали выживаемость и размеры листецов ряски ни в один из сроков наблюдения.
Причиной отставания роста растений могли быть клеточные нарушения, что подтверждают данные об изменении содержания пигментов в листецах ряски. Так, снижение роста растений при концентрациях 1 и 10 мг/л сопровождалось уменьшением хлорофилла "а" соответственно на 30 и 44 % относительно контроля, что свидетельствует о неблагоприятном воздействии п-ТК на функциональную активность клетки и растения в целом (рис. 3).
Рис. 3. Изменение концентрации пигментов фотосинтеза в листецах ряски к 28-м сут опыта: I — хлорофилл "а", II — хлорофилл "б", III — каротино-иды; * — статистически достоверные отклонения от контроля
Fig. 3. Change of concentration of pigments of photosynthesis in duckweed by the 28 days of experience: I — chlorophyll "а", II — chlorophyll "б", III — carotеnoids; * — statistical reliable distinction from control
Содержание других пигментов фотосинтеза также снижалось по мере увеличения концентрации п-ТК. Устойчивое уменьшение хлорофиллов "а" и "б" начиналось с 0,1 мг/л, а каротиноидов — с 1 [г/л, и уже при 10,0 мг/л различие с контролем достигало 54 и 69 % соответственно для хлорофилла и каротиноидов. Из всего диапазона концентраций только при минимальной (0,01 мг/л) содержание пигментов не отличалось от контрольного уровня.
К концу эксперимента растения выжили только при концентрациях 10 мг/ л и ниже. В корнях растений из растворов, содержащих 1 и 10 мг/л п-ТК, гибель клеток превышала контроль в 2,3 и 3,2 раза, а число хромосомных аберраций — соответственно в 3,7 и 5,9 раза (табл. 4). При концентрации 0,1 мг/л число хромосомных аберраций в клетках корней ряски превышало контроль в 2,3 раза, хотя различие не подтвердилось статистически.
Таким образом, п-ТК при концентрации от 100 мг/л и выше обладает остролетальным действием. Концентрации ниже 100,0 мг/л (до 1,0 мг/л) снижают выживаемость отдельных поколений ряски, затормаживают рост и уменьшают содержание пигментов фотосинтеза в клетках листецов, влияют на жизнеспособность клеток корней, вызывая нарушения в хромосомном аппарате, т.е. обладают токсическим и мутагенным действием.
Недействующей по всем исследуемым показателям является концентрация 0,01 мг/л.
Изменение выживаемости листецов L. minor (% к контролю) при различных концентрациях п-ТК в среде, X ± S
X Table 2
Change probability of survival of leaves L. minor (% to_control) in different concentrations p-TA in the circumstances, X ± S_
X
Кон-
цент- Сутки
рация,
мг/л 1_4_8_12_16_20_24_28
Fj
0(К) 100-0,1 100-0,1 100-0,1
0,01 100-0,1 100-0,1 100-0,1
0,1 100-0,1 100-0,1 100-0,1
1 100-0,1 100-0,1 96,8±1,76*
10 100-0,1 99,0±0,99 95,4±2,1*
100 100-0,1 96,4±1,86 86,9±3,4*
1000 100-0,1 78,4±4,11* 34,7±4,76*_
_Fs_
0(К) 100-0,1 100-0,1 100-0,1
0,01 100-0,1 100-0,1 100-0,1
0,1 100-0,1 100-0,1 100-0,1
1 100-0,1 100-0,1 100-0,1
10 100-0,1 98,3±1,9 96,4±1,9*
100 84,4±3,6* 70,0±4,6* 58,8±4,9*
1000 65,2±4,76* 17,8±3,82* 0,0±0,1*
0(К) 100-0,1 100-0,1 100-0,1
0,01 100-0,1 100-0,1 100-0,1
0,1 100-0,1 100-0,1 100-0,1
1 100-0,1 100-0,1 100-0,1
10 99,0±0,99 99,0±0,99 92,8±2,6*
100 95,0±2,2* 88,2±3,3* 70,8±4,6*
_F_
0(К) 100-0,1 100-0,1 100-0,1
0,01 100-0,1 100-0,1 100-0,1
0,1 100-0,1 100-0,1 100-0,1
1 100-0,1 100-0,1 100-0,1
10 100-0,1 99,0±0,99 94,6±2,6*
100 96,0+1,96* 87,2±3,3* 66,5±4,71*
0(К) 100-0,1 100-0,1 100-0,1
0,01 100-0,1 100-0,1 100-0,1
0,1 100-0,1 100-0,1 100-0,1
1 100-0,1 100-0,1 100-0,1
10 100-0,1 97,5±1,6 94,2±2,3*
100 90,1±2,99* 74,7±4,3* 47,8±4,99*
0(К) 100-0,1 100-0,1 100-0,1
0,01 100-0,1 100-0,1 100-0,1
0,1 100-0,1 100-0,1 100-0,1
1 100-0,1 100-0,1 100-0,1
10 100-0,1 91,0±2,9* 85,3±3,5*
100 38,2±4,9 0,0+0,1
_F_
0(К) 100-0,1 100-0,1
0,01 100-0,1 100-0,1
0,1 100-0,1 100-0,1
1 100-0,1 100-0,1
10_100-0,1 96,8±1,8*
Изменение длины листецов L. minor (мм) при различных концентрациях п-ТК в среде, X ± S
X Table 3
Change of length of leaves L. minor (millimeters-in different concentrations p-TA in the circumstances, X ± S _
X
Кон-
цент- Сутки
рация,
мг/л 1_4_8_12_16_20_24_28
Fj
0(К) 0,3±0,10 4,1±0,09 4,3±0,13
0,01 0,2±0,08 4,4±0,19 4,4±0,14
0,1 0,3±0,11 4,3±0,14* 4,8±0,11*
1 0,4±0,07 3,8±0,11 4,3±0,17
10 0,3±0,07 3,4±0,10 * 3,9±0,12*
100 0,2±0,10 2,6±0,06* 3,1±0,14*
1000 0,3±0,07 2,2±0,08* 2,9±0,15*_
_Fi.
0(К) 0,2±0,10 3,5±0,11 4,7±0,16
0,01 0,3±0,12 3,4±0,14 4,7±0,16
0,1 0,3±0,11 3,4±0,09 4,5±0,10
1 0,2±0,08 3,0±0,10* 4,6±0,10
10 0,1±0,09 2,7±0,15* 3,6±0,19*
100 0,1±0,03 2,0±0,10* 3,4±0,17*
1000 0,1±0,05 1,9±0,05* 0,0±0,1*
0(К) 0,5±0,15 3,7±0,11 4,5±0,09
0,01 0,5±0,08 3,9±0,17 4,6±0,13
0,1 0,4±0,16 3,6±0,14 4,4±0,19
1 0,3±0,10 3,5±0,14 4,1±0,05*
10 0,4±0,09 2,9±0,09* 4,1±0,03*
100 0,1±0,19* 2,0±0,15* 3,7±0,09*
_Fi_
0(К) 0,5±0,12 3,4±0,11 4,6±0,09
0,01 0,6±0,10 3,6±0,10 4,7±0,11
0,1 0,4±0,14 3,6±0,12 4,7±0,18
1 0,5±0,16 3,4±0,09 4,3±0,07*
10 0,3±0,09 2,9±0,07* 4,0±0,12*
100 0,2±0,08* 2,0±0,15* 3,6±0,18*
0(К) 0,5±0,11 3,4±0,16 4,4±0,07
0,01 0,4±0,10 3,6±0,18 4,5±0,16
0,1 0,5±0,06 3,3±0,11 4,4±0,11
1 0,4±0,09 3,2±0,14 4,0±0,10*
10 0,2±0,07* 2,5±0,04* 3,5±0,10*
100 0,3±0,02* 2,0±0,08* 3,1±0,10*
0(К) 0,3±0,07 3,4±0,12 4,4±0,13
0,01 0,3±0,13 3,5±0,19 4,5±0,12
0,1 0,3±0,15 3,4±0,18 4,3±0,15
1 0,2±0,10 3,4±0,16 4,2±0,19
10 0,1 ±0,08 2,3±0,10* 3,1±0,06*
100 0,1±0,08* 0,0+0,0*
_F_
0(К) 0,1±0,04 3,0±0,10
0,01 0,3±0,15 3,2±0,17
0,1 0,2±0,09 3,1±0,09
1 0,2±0,14 2,9±0,16
10 0,1±0,07 2,0±0,07*
Изменения в корневых клетках ряски к 28-м сут опыта при различных концентрациях п-ТК в среде
Table 4
Changes in root cells of duckweed by the 28 days of experiment, in different concentrations p-TA in the circumstances
Концент- Проанали- Кол-во Проанализировано Частота
рация, зировано мертвых клеток хромосомных
мг/л клеток клеток, % в ана-телофазе аберраций, %
0 (К) 8780 2,2 ± 0,25 124 1,5 ± 1,09
0,01 9060 1,9 ± 0,29 102 1,9 ± 1,35
0,1 9090 2,0 ± 0,27 115 3,4 ± 1,69
1 10020 5,0 ± 0,13* 139 5,6 ± 1,95*
10 9700 7,1 ± 0,17* 104 8,9 ± 2,79*
* Статистически достоверные отклонения от контроля.
Исследуемая паратолуиловая кислота уже на начальном этапе эксперимента проявляла токсическое действие. В культуре водорослей Sc. quadricauda клетки деформировались, плавали в толще раствора в виде сгустков, частично теряли пигмент. Это могло быть следствием нарушения пигментообразования и возникновения мутаций (Фельд, 1985; Тульчинская, Кожанова, 1986).
К концу эксперимента, вероятно, в результате накопления исследуемых веществ, темп размножения Sc. quadricauda замедлялся (с 21-х сут), что отразилось на приросте численности и выживаемости водоросли, возрастала доля мертвых клеток в культуре. Способность растений накапливать ароматические углеводороды показана И.А.Велдре и М.А.Трапидо (1991). Высокая гибель клеток объясняется истощением защитных механизмов, поскольку имеющихся у клеток возможностей для репарации нарушений хватает только на определенное время (Гапочка, 1986; Сиренко, Смирнова, 1993; Гапочка и др., 2001).
Начальные процессы ответного действия связаны в первую очередь со снижением эффективности световых реакций фотосинтеза и могут выражаться в снижении образования НАДФ*Н2 и АТФ, что является основной причиной ухудшения физиологического состояния и продукционных возможностей водорослей (Плеханов, Чемерис, 2003). В растворах п-ТК валовая продукция снижалась прямо пропорционально концентрациям исследуемых веществ.
В опытах с ряской L. minor наиболее чувствительным показателем было возникновение хромосомных аберраций в клетках высших растений, которые регистрировались уже при концентрации п-ТК 0,1 мг/л, в то время как гибель клеток и тканей отмечалась при более высоких концентрациях. Известно, что ароматические углеводороды влияют на содержание нуклеиновых кислот, состав и содержание свободных нуклеотидов в клетке, в связи с чем происходят изменения в первичной структуре ДНК и процессе биосинтеза нуклеиновых кислот (Дивавин, 1985). Хромосомные перестройки могут быть одной из причин гибели клеток (Инге-Вечтомов, 1989; Ильинских и др., 1992), что подтвердили и наши исследования. В опытах с высоким процентом хромосомных аберраций доля мертвых клеток в корнях ряски возрастала (в 3-4 раза выше, чем в контроле).
Достоверные морфометрические отклонения, угнетение скорости роста растений отмечались начиная с концентрации 10 мг/л. Генерализованные нарушения, гибель ряски обнаружены при больших концентрациях — от 100 мг/л и выше.
Таким образом, паратолуиловая кислота оказывает на растения токсическое и мутагенное действие, вызывая нарушения на разных уровнях организации, в том числе молекулярном и клеточном, что приводит к функциональным нарушениям и гибели всего растения.
Литература
Бочков H.H., Демина Ю.С., Лучник Н.В. Классификация и методы учета хромосомных аберраций в соматических клетках // Генетика. — 1972. — Т. 8, № 5. — С. 133-142.
Велдре И.А., Трапидо М.А. Накопление бенз-а-пирена в гидробионтах некоторых озер Эстонии // Экспериментальная водная токсикология. — Рига: Зинатне, 1991. — Вып. 15. — С. 128-137.
Владимирова М.Г., Семененко В.Е. Интенсивная культура одноклеточных водорослей. — М.: АН СССР, 1962. — 55 с.
Вредные вещества в промышленности / Под ред. Н.В.Лазарева, Э.Н.Левиной. — М.: Химия, 1976. — Т. 1. — 428 с.
Вредные химические вещества. Природные органические соединения / Под ред. В.А.Филова, Ю.И.Мусийчука, Б.А.Ивина. — СПб., 1998. — 229 с.
Гапочка Л.Д. Об адаптации водорослей к токсическому воздействию // Экспериментальная водная токсикология. — Рига: Зинатне, 1986. — Вып. 11. — С. 124128.
Гапочка Л.Д., Шавырина О.Б., Дрожжина Т.С. Экспериментальное исследование популяционных аспектов устойчивости микроводорослей к токсическому воздействию // Тез. докл. 8-го съезда Гидробиологического общества РАН. — Калининград, 2001. — С. 114-115.
Дивавин М.А. Нуклеиновые кислоты морских гидробионтов при углеводородном антропогенном воздействии // Влияние нефти и нефтепродуктов на морские организмы и их сообщества. — Л.: Гидрометеоиздат, 1985. — С. 74-75.
Ильинских H.H., НовицкиЁ В.В., Вачугова H.H., Ильинских И.Н. Микроядерный анализ и цитогенетическая нестабильность. — Томск: Томский университет, 1992. — 269 с.
Инге-Вечтомов С.Г. Генетика с основами селекции. — М.: Высш. шк., 1989. — 591 с.
Лакин Г.Ф. Биометрия. — М.: Просвещение, 1980. — 213 с.
Мережко Ю.А., Якубовский О.Г. Высшая водная растительность как фактор, предотвращающий загрязнение водоемов поверхностным стоком // Формирование и контроль качества поверхностных вод. — 1976. — № 3. — С. 34-38.
Методическое руководство по определению методом биотестирования токсичности вод, донных отложений, загрязняющих веществ и буровых растворов. — М.: РЭФИА, НИА-Природа, 2002. — 117 с.
Методические указания по установлению предельно допустимых концентраций вредных веществ для рыбохозяйственных водоемов и дополнительных характеристик, нужных для расчета ПДС. — Л.: ГосНИОРХ, 1989. — 50 с.
Методические указания по установлению эколого-рыбохозяйствен-ных нормативов (ПДК и ОБУВ) загрязняющих веществ для воды и водных объектов, имеющих рыбохозяйственное значение. — М.: ВНИРО, 1998. — 145 с.
Hемцова Л.С. Метафазный метод учета перестроек хромосом. — М.: Наука, 1970. — 105 с.
Определитель пресноводных водорослей СССР. — Л.: Наука, 1986. — Вып. 10. — 360 с.
Плеханов С.Е., Чемерис Ю.К. Ранние эффекты токсического действия цинка, кобальта, кадмия на фотосинтетическую активность водоросли Chlorella pyrenoidosa Chick D-39 // Изв. РАН. Сер. биол. — 2003. — № 5. — С. 610-616.
Сиренко П.А., Смирнова H.H. Цитофизиологический метод экспресс оценки токсичности природных вод // Гидробиол. журн. — 1993. — Т. 29, № 4. — С. 95-101.
Тахтаджан А.Л. Систематика магнолиофитов. — М., 1982. — 333 с.
Тульчинская В.П., Кожанова Г.А. Контроль за нефтяными загрязнениями морской воды с применением культур эукариотов и альготестов // Биоиндикация и биотестирование природных вод. — Ростов-на-Дону, 1986. — С. 144.
Фельд Е.Г. Оценка мутагенной опасности бензола и ряда его производных // Гигиена и санитария. — 1985. — № 7. — С. 21-23.
Химический энциклопедический словарь. — М.: Сов. энциклопедия, 1983. — 791 с.
Хоботьев В.Г., Илларионов В.И., Юнасова Т.Н. Методика определения живых и мертвых клеток сине-зеленых и зеленых водорослей с помощью красителей // Методики биологических исследований по водной токсикологии. — М.: Наука, 1971. — С. 181-183.
Peilak-Walker P., Walker J.K., Evans H.H., Blumer J.L. Relationship between the oxidation potential of benzene metabolites and their inhibitory effect of Dna synthesis in L5478YS cells // Mol. Pharmacol. — 1985. — № 6. — P. 560-566.
Поступила в редакцию 22.12.05 г.
