CC BY
88
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ УДК 577.15v
Журнал фундаментальной медицины и биологии
ЭФФЕКТЫ ВОЗДЕЙСТВИЯ ВЫСОКИХ КОНЦЕНТРАЦИЙ САХАРОЗЫ НА АКТИВНОСТЬ ПИЩЕВАРИТЕЛЬНЫХ
ФЕРМЕНТОВ IN VITRO
Цикуниб А.Д., Кайтмесова С.Р., Дьяченко Ю.А.
Научно-исследовательский институт комплексных проблем
Адыгейский государственный университет Россия, 385000, Республика Адыгея, Майкоп, ул. Гагарина, 13
cikunib58@mail.ru
Цель. Исследование посвящено изучению особенностей влияния высоких концентраций сахарозы на вкусовую чувствительность к сладкому и активность гидролитических ферментов желудочно-кишечного тракта.
Материалы и методы. Исследовано действие сахарозы на активность ферментов желудочно-кишечного тракта in vitro. Объектами исследования служили а-амилаза слюны человека, панкреатическая липаза быка, сахаразо-изомальтазный комплекс кишечника цыплят. Сахароза исследована в диапазоне концентраций 0,75-4,5%. Вкусовую чувствительность к сладкому определяли модифицированным органолептическим методом у лиц в возрасте 15-45 лет.
Результаты. Установлено, что сахароза в высоких концентрациях снижает активность а-амилазы и интенсивность гидролиза крахмала, активирует панкреатическую липазу, повышая скорость и глубину гидролиза нейтрального жира, приводит к индукции активности и количества сахаразо-изомальтазного комплекса кишечника, увеличивая скорость расщепления сахарозы. Регулярное избыточное потребление сахарозы снижает вкусовую чувствительность к сладкому и провоцирует избыточное потребление сахарозы.
Ключевые слова: избыточное потребление сахарозы, вкусовая чувствительность к сладкому, а-амилаза, панкреатическая липаза, сахаразо-изомальтазный комплекс.
EFFECTS OF HIGH SUCROSE CONCENTRATION ON THE ACTIVITY
OF DIGESTIVE ENZYMES IN VITRO
Tsikunib A.D., Kaytmesova S.R., Dyachenko Yu.A.
Research Institute of Complex Problems Adyghe State University 13 Gagarin st., Maikop, Repablic Adyghea, 385000, Russia cikunib58@mail.ru
Purpose. This research has been carried out to study the effect of high sucrose concentration on flavoring sensitivity to sweet and on the activity of hydrolytic enzymes of a digestive tract.
Materials and methods. We investigated the effect of sucrose on activity of enzymes of the gastrointestinal tract in vitro. The objects of study served ¿-amylase of human saliva, pancreatic lipase bull, saharazo-isomaltase complex of the intestine of the chick-will strengthen. Sucrose was investigated in the concentration range of 0.75 to 4.5%. Taste sensitivity to sweet was determined organoleptically modified in individuals aged 15-45 years.
Results. Found that sucrose in high concentrations reduces the asset-ness of a-amylase activity and the intensity of starch hydrolysis, activates pancreatic lipase, increasing the speed and depth of hydrolysis of neutral fat, leads to the induction of actively-STI and the number of saharazo-isomaltase complex of the intestine, increasing the rate of RAS-selenia sucrose. Regular excessive consumption of sucrose decreases taste sensitivity to sweet vitalnosti and provokes excessive consumption of sucrose.
Keywords: excess consumption of sucrose, flavoring sensitivity to sweet, a-amylase, apancreatic lipase, sucrose-isomaltase complex.
Журнал фундаментальной медицины и биологии
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
Введение
Питание современного человека характеризуется резким в эволюционном плане и интенсивным в количественном выражении изменением нутри-ентного состава, вызванного, в первую очередь, избыточным потреблением насыщенных жиров и быстро усваиваемых углеводов, особенно сахарозы. Так, в середине XIX века годовое потребление сахарозы на человека в Европе составляло в среднем 2 кг, в 1920 году — 17 кг, а в настоящее время достигает 70 кг [1, 2]. Потребление сахарозы на душу населения в Российской Федерации в 2008 году составило в среднем 40 кг в год, и четвертое место в рейтинге регионов страны занимает Республика Адыгея с показателем 52 кг в год [3]. По данным мониторинга фактического питания различных групп населения Республики Адыгея средний уровень потребления сахарозы за последние пять лет составил 73,1 + 18,6 г, а показатель отношения сахарозы к калорийности рациона — 100ккал/2,6-4,8 г. Анализ реконструированных рационов показал, что в традиционном питании адыгов содержание сахарозы составляло в среднем 11,6+5,6 г, а отношение сахарозы к калорийности рациона — 100кал : 0,7 г, т. е., на каждые 100 калорий потреблялось сахарозы в 3,7-6,9 раза меньше, чем в настоящее время [4].
Многочисленными исследованиями установлено, что избыточное потребление сахарозы выступает фактором риска в развитии алиментарного ожирения, сахарного диабета, сердечно-сосудистых заболеваний, атеросклероза, кариеса у детей [5-10]. При этом большинство исследователей связывают физиологические механизмы воздействия избыточного потребления сахарозы с ее высоким гликемическим эффектом, меняющем гормональный профиль организма, и, в первую очередь, обмен инсулина и контринсулярных гормонов [6, 8, 11].
Практически отсутствуют данные, касающиеся рассмотрения сахарозы как самостоятельного химического соединения, способного непосредственно повлиять на метаболические процессы в организме, и, в первую очередь, процесс пищеварения. В то же время еще в 90-е годы прошлого века была выдвинута идея A.M. Уголевым и Н.Н. Иезуито-вой [12, 13] о том, что между различными компонентами пищи существуют взаимодействия, которые не являются простой конкуренцией различных веществ, в том числе за обладание ферментативно-резорбтивной поверхностью тонкой кишки, а представляют собой сложный комплекс полисубстратных процессов. Выдвинута была также гипотеза [12] о том, что смысл адаптации пищеварительной системы к качественному и количественному составу пищи состоит в изменении активности и диапазона действия пищеварительных ферментов.
Целью настоящего исследования явилось изучение особенностей и механизмов влияния высоких концентраций сахарозы на активность гидролитических ферментов желудочно-кишечного тракта и вкусовую чувствительность к сладкому.
Материалы и методы исследования
Объектами исследования служили а-амилаза (Н.Ф.3.2.1.1), панкреатическая липаза (триацил-глицерол эфиргидролаза, КФ 3.1.1.3 ), сахаразо-изомальтазный комплекс (b-D-фруктофуранозид-фруктогидролазы, КФ 3.2.1.48). Выбор материалов и объектов был обусловлен данными многолетнего мониторинга питания разных групп населения, показавшими высокий уровень потребления наряду с сахарозой крахмала (субстрата а-амилазы) и нейтрального жира (субстрата панкреатической липазы), а также тем, что сахаразо-изомальтазный комплекс (СИК) кишечника — единственный фермент, гидролизующий сахарозу [2], а, как известно, изменение концентрации химического соединения в организме влияет в первую очередь на активность фермента, осуществляющего его превращение.
Активность а-амилазы определяли амилокла-стическим методом [14], принцип которого основан на расщеплении крахмала под влиянием фермента при максимальном разведении слюны. В работе использовали свежесобранную смешанную слюну человека. Исследованию подвергали модельные среды с содержанием 0,1% крахмала и 0%, 0,75%, 1,5%, 3,0% и 4,5% сахарозы соответственно. Активность а-амилазы выражали количеством 0,1% раствора крахмала, расщепляющего 1 мл слюны при температуре 380С за 30 мин. В норме активность амилазы слюны составляет 160-320 ЕД. Чувствительность метода составляет 20 ЕД.
Об активности липазы судили по количеству жирных кислот, образующихся при гидролизе молочного жира (глубина гидролиза) за определенный промежуток времени (скорость гидролиза) под действием глицеринового экстракта поджелудочной железы быка. Поджелудочную железу, добытую непосредственно после забоя бычка, замораживали, доставляли в лабораторию, очищали от жира, измельчали и тщательно растирали в ступке с глицерином в соотношении 1:3. Полученный экстракт процеживали через 2-3 слоя марли. Глицериновый экстракт в количестве 0,5 мл вносили в 5 мл молочно-ацетатной смеси с содержанием сахарозы аналогично предыдущему опыту, модельный раствор помещали в термостат при 37о С и через 0, 20, 40 и 60 минут проводили титрование 0,1н раствором №ОН.
Влияние сахарозы на процесс эмульгирования нейтрального жира определяли получением эмульсии типа «масло-вода» путём медленного прибавления подсолнечного масла объемом 10 мл в модельные растворы объемом 20 мл, с содержанием сахарозы 0%, 0,75%, 1,5%, 3,0%, при непрерывном и сильном перемешивании в течение 5 минут. Фиксировали время образования и время самопроизвольного разрушения эмульсии.
Выявление влияния избыточного потребления сахарозы на активность СИК проводили в два этапа. I этап был направлен на получение экстракта СИК из изолированной тонкой кишки птицы, а II этап состоял в выявлении влияния разных концентраций сахарозы на активность фермента in vitro. Выбор объекта исследования был обуслов-
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
Журнал фундаментальной медицины и биологии
лен тем, что, во-первых, СИК в кишечнике птицы вырабатывается [12], во-вторых, в рационе птицы, как у большинства животных, отсутствует добавленная сахароза, что позволяет получить первичную реакцию на длительное потребление избытка добавленной сахарозы, в-третьих, экономичностью организации эксперимента.
На I этапе цыплята породы домашние серебристые в возрасте 2 месяцев (п=28) методом случайной выборки были поделены на 2 группы и рассажены в разные вольеры. Птиц обеих групп в течение месяца кормили зерном с обильным питьем, но при этом опытная группа цыплят получала воду с сахаром в концентрации 10 г на 100 мл. Наблюдение за экспериментальными животными показало, что опытная группа к концу эксперимента была менее активна: цыплята были сонные, вялые и забивались в угол. Кроме этого, цыплята опытной группы пили в среднем на 30-50 мл воды больше, чем контрольной группы, выпивавшие в среднем 150 + 15 мл. В последний день эксперимента животным прекращали подачу корма и через 12 часов декапитировали, вскрывали брюшную полость, выделяли тонкую кишку (исключая двенадцатиперстную), промывали 20-ю мл охлажденного раствора Рингера (рН=7,4) и помещали в ледяную баню. Все последующие манипуляции проводили при температуре близкой к 00С. Образцы тонкой кишки доставляли в лабораторию, где для получения экстракта СИК выделяли длиной в 15 см отрезки среднего отдела тонкой кишки, в котором наибольшая активность фермента [14, 15]. Полученный материал выворачивали слизистой наружу, инкубировали в 10 мл раствора Рингера (рН=7,4) при температуре 370С в течение 45 минут, непрерывно перемешивая со скоростью 120-140 об/мин. Экстракты СИК, полученные при инкубировании кишечника птиц опытной и контрольной групп,
объединяли с получением СИКопыт и СИКконтр.
На II этапе проведены исследования по выявлению влияния различных концентраций сахарозы на активность СИК. Для этого в модельные среды с 0,75%, 1,5%, 3,0%, 4,5% содержанием сахарозы добавляли экстракт СИК в соотношении 5:1 и инкубировали 30 минут. Глубину гидролиза сахарозы оценивали по концентрации глюкозы в модельных средах. Глюкозу определяли глюкозо-оксидазным методом с использованием прописи, представленной в тест-наборе «Фотоглюкоза». Оптическую плотность замеряли на спектрофотометре «и№КО». При этом линейная область определения концентрации глюкозы находилась в диапазоне от 2 до 20 ммоль/л.
Вкусовую чувствительность к сладкому определяли модифицированным органолептическим методом [16]. В исследовании приняли участие 65 человек в возрасте 15-18 лет, составившие возрастную группу I ВГ, 92 человека в возрасте 19-24 года — группу II ВГ (из них 85% девушек и 15% юношей), а также 30 человек в возрасте 25-45 лет — группу III ВГ.
Статистическую обработку данных проводили с помощью программы STATISTICA 6.0. Полученные результаты считали статистически значимыми при значениях р<0,05.
Результаты исследования и их обсуждение
Исследование вкусовой чувствительности к сладкому у разных возрастных групп населения и установление динамики ее изменения в зависимости от уровня потребления сахарозы показало широкий диапазон варьирования порога вкусовой чувствительности к сахарозе в зависимости и от возраста, и от содержания сахарозы в рационе питания (табл. 1).
Таблица 1
Зависимость вкусовой чувствительности от уровня потребления сахарозы
(удельный вес лиц, %)
Возрастная группа Вкусовая чувствительность (количество лиц) Уровень потребления сахарозы относительно физиологической нормы с учетом калорийности рационов
нижняя граница нормы норма выше нормы
I ВГ Высокая (п=9) 30,3 58,6 11,1
Нормальная (п=14) 21,4 71,4 7,1
Низкая* (п=9) 11,1 22,2 66,7
II ВГ Высокая (п=9) 30,3 69,7 -
Нормальная (п=14) 35,7 57,1 7,1
Низкая * (п=9) 22,2 22,2 55,6
III ВГ Высокая (п=3) 66,7 33,3 -
Нормальная (п=18) 16,7 72,2 11,1
Низкая * (п=11) - 27,3 72,7
* в категорию «низкая вкусовая чувствительность» вошли лица, не сумевшие распознать сладкий вкус ни в одном из представленных растворов сахарозы.
Журнал фундаментальной медицины и биологии
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
Как видно из таблицы 1, большинство лиц, проявивших высокую способность к распознаванию сладкого вкуса, потребляют мало сладкого, т.е. уровень потребления сахарозы относительно физиологической нормы с учетом калорийности рационов находится в норме или ниже нормы, и, наоборот, большинство участников, проявивших низкую чувствительность к сахарозе, не смогли распознать сладкий вкус ни в одном из представленных растворов сахарозы (в I ВГ — 66,7%, II ВГ — 55,6%, III ВГ — 72,7%), любят и регулярно потребляют много сладкого поскольку потребление ими сахарозы относительно физиологической нормы с
учетом калорииности рационов значительно выше нормы.
Исследование влияния сахарозы на активность пищеварительных ферментов показало (табл. 2), что при концентрации в модельноИ среде, равноИ 0,75%, сахароза не оказывала влияния на активность а-амилазы, а при 1,5% — активность фермента снижалась с интенсивностью 25,8%, при концентрации 3,0% интенсивность снижения составила 31,1%, а при концентрации 4,5% активность фермента снижалась с интенсивностью 47,7 %. Все это дает основание считать, что сахароза выступает в роли отрицательного модулятора активности а-амилазы.
Таблица 2
Изменения активности а-амилазы под влиянием сахарозы, M±m
Шифр пробы Концентрация сахарозы в модельной среде, % Активность а-амилазы через 30 мин экспозиции, ЕД
а-А контроль 0 302+53,3
а-А опыт № 1 0,75 297+60,5
а-А опыт № 2 1,5 224+75,0*
а-А опыт № 3 3,0 208+17,3*
а-А опыт № 4 4,5 144+35,8**
* р <0,05, ** р <0,01- достоверность различий с контролем.
Снижение активности а-амилазы под влиянием сахарозы, видимо, связано с тем, что сахароза, как мальтоза и изомальтоза (продукты гидролиза крахмала), является дисахаридом, и по механизму ингибирования фермента по принципу обрат-ноИ связи [14], подавляет амилазу. Ингибирующее деИствие сахарозы может быть связано также со способностью сахарозы гидратироваться в водных растворах и образовывать стоИкие гидраты за счет водородных связеИ, и в итоге повышать поверхностное натяжение раствора крахмала.
Учитывая, что а-амилаза слюны и панкреатическая амилаза имеют схожую субстратную специфичность и механизмы деИствия [14], данные, полученные с участием а-амилазы слюны, можно экстраполировать на панкреатическую амилазу и предположить, что при одновременном содержании в пище крахмала и сахарозы интенсивность переваривания крахмала в кишечнике снижается.
В таблице 3 представлены данные, полученные при изучении влияния сахарозы на реакционную способность панкреатическоИ липазы.
Таблица 3
Влияние сахарозы на активность панкреатической липазы, M±m
Шифр пробы Концентрация сахарозы в модельной среде, % /о Продолжительность деИствия панкреатическоИ липазы на субстрат, мин
Активность панкреатическоИ липазы, мл NaОН
0 20 40 60
ЛП контроль 0 0,4+0,10 1,3+0,15 1,9+0,25 1,8+0,13
ЛП опыт № 1 0,75 1,8+0,20* 2,0+0,20 1,8+0,18
ЛП опыт № 2 1,5 2,6+0,10** 2,4+0,15* 2,1+0,23*
ЛП опыт № 3 3,0 2,3+0,15* 2,2+0,20** 2,0+0,37*
ЛП опыт № 3 4,5 2,3+0,10** 2,3+0,15** 2,0+0,10*
* р <0,05 и ** р<0,01-достоверность различий с контролем
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
Журнал фундаментальной медицины и биологии
Из представленных данных видно, что в условиях контроля панкреатическая липаза достигает максимальной активности, равной 1,9+ 0,25 мл NaОН в течение 40 минут экспозиции. Далее активность фермента снижается по целому ряду причин и, прежде всего, из-за накопления жирных кислот (продуктов гидролиза нейтрального жира), что, с одной стороны, приводит к уменьшению рН модельной среды (в норме липаза активна при рН, близкой к нейтральной среде) [10], а с другой, — подавляет активность липазы по принципу обратной связи. Добавление же сахарозы приводит к увеличению и скорости, и глубины гидролиза нейтрального жира. Причем воздействие сахарозы проявляется во всех примененных концентрациях, но с разной интенсивностью. Максимальное увеличение скорости (в 2,0 раза) и глубины (в 1,4 раза) гидролиза нейтрального жира достигается при концентрации сахарозы в модельной среде, равной 1,5 %. При большем увеличении концентрации сахарозы не наблюдается дальнейшего прироста ни скорости, ни глубины гидролиза нейтрального жира. В целом сахароза выступает активатором липазы,
причем ее активирующее действие начинается с малых концентраций, существенно возрастает с увеличением концентрации до определенного уровня, выше которого активность липазы не меняется, но при этом поддерживатся на высоком уровне. Полученные результаты соответствуют данным Svatos A. [17], показавшим, что в условиях «in vitro» сахароза увеличивает активность панкреатической липазы в 1,3 раза.
Механизм активирующего действия сахарозы на скорость гидролиза нейтрального жира можно объяснить тем, что сахароза, вероятнее всего, влияет не на саму липазу, а на процесс эмульгирования жира. Известно [14], что для эффективного действия панкреатической липазы необходим ряд условий, одним из важнейших среди которых является эмульгирование нейтрального жира, в результате чего увеличивается поверхность контакта жира (субстрата панкреатической липазы) с ферментом, растворимым в водной среде, что приводит к увеличению скорости ферментативной реакции. Исследования показали, что сахароза оказывает влияние на процесс эмульгирования нейтрального жира (табл. 4).
Таблица 4
Влияние сахарозы на процесс эмульгирования нейтрального жира, M±m
Показатели Концентрация сахарозы, %
0 0,75 1,5 3,0*
Устойчивость эмульсии, час 3,4+0,38 4,5+0,52 более 6,0 ** более 6,0 **
Скорость образования эмульсии, мин. 3,8+0,25 3,5+0,29 2,6+0,33 2,8+0,28
эмульгирование достигается при более высокой скорости встряхивания, чем в предыдущих концентрациях; * после 6 ч дальнейшее наблюдение за устойчивостью эмульсии прекращали.
Как видно, сахароза увеличивает и скорость образования эмульсии, и устойчивость образовавшейся эмульсии, причем чем больше концентрация сахарозы, тем выше эффект действия. Так при увеличении концентрации сахарозы до 1,5 % скорость образования эмульсии по сравнению с контролем снижается с 3,8+0,25 мин до 2,5+0,33 мин, т.е. примерно в 1,5 раза, а устойчивость образовавшейся эмульсии изменяется с 3,4+0,38 часа до не расслаивающейся более 6,0 часов эмульсии. Следует отметить, что для получения эмульсии при концентрации сахарозы в модельной среде 3,0% эмульгирование достигается при более высокой интенсивности встряхивания. Видимо, по этой причине при такой концентрации сахарозы эффективность действия липазы несколько снижается.
Полученные результаты могут свидетельствовать о том, что при одновременном содержании в пище нейтрального жира и сахарозы интен-
сивность переваривания жира повышается, т.е. в присутствии сахарозы жир организмом лучше усваивается.
Исследования влияния различных концентраций сахарозы на активность СИК, добытого из изолированного кишечника птиц, получавших в течение месяца сахарозу (СИКопыт), и активность СИК, добытого из изолированного кишечника птиц, не получавших сахарозу (СИКконтр), показали следующие результаты (таблица 5).
Как видно из полученных данных, с увеличением концентрации сахарозы от 0,75% до 1,5% активность СИК возрастает примерно в 1,4
опыт. 1 11 '
раза, а при концентрации, равной 1,5% наблюдается наибольшая скорость (V) образования продукта гидролиза — глюкозы.
Дальнейшее увеличение концентрации субстрата до 3,0% и выше до 4,5% не приводит к увеличению скорости образования продук-
та. Активность СИК
также возрастает при
Журнал фундаментальной медицины и биологии
Влияние различных концентраций сахарозы на активность СИК, Ы+ш
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ Таблица 5
Фермент Концентрация сахарозы, %
0,0 0,75 1,5 3,0 4,5
Содержание глюкозы в модельной среде, мМоль/л
СИК опыт. 0 7,7+3,5* 10,6+2,6* 10,3+3,4* 10, 5+6,6*
СИК контр. 0 5,8+1,6 6,5+1,4 6,4+2,8 6,5+3,5
"достоверность различий р< 0,05 между СИК и СИК
г г г ' контр. опыт.
увеличении концентрации сахарозы до 1,5%, но незначительно (в 1,2 раза). Vыах, достигаемая СИК , в 1,6 раза меньше, чем V , до-
контр. ' 1 ' мах' ^
стигаемая СИК Активность СИК при
опыт. опыт. 1
концентрации сахарозы в 0,75% также выше активности СИК , в 1,3 раза: концентра-
контр.
ция глюкозы в модельноИ среде под влиянием СИК составила 5,8+1,4 мМоль/л, а под вли-
контр.
янием СИКопыт — 7,7+3,4 мМоль/л. Эту разницу можно объяснить не только разницеИ активности СИК и СИК , но также разницеИ в их
опыт. контр.
количестве: видимо, у птиц, в рационе которых практически отсутствует сахароза, в клетках кишечника вырабатывается меньше СИК, и, наоборот, у птиц, в рационе которых в течение всего опыта была добавлена сахароза, в кишечнике вырабатывается больше СИК, обладающеИ и боль-шеИ активностью.
Заключение
За последние несколько десятилетиИ в обществе произошло резкое в эволюционном отношении и интенсивное в количественном выражении увеличение потребления сахарозы. Систематическое избыточное потребление сахарозы снижает вкусовую чувствительность к сладкому и провоцирует избыточное потребление сахарозы, что способствует формированию порочного круга нутриентно-вку-совоИ зависимости. Сахароза оказывает разнонаправленное эффекторное влияние на активность отдельных ферментов желудочно-кишечного тракта: в высоких концентрациях снижает активность а-амилазы и интенсивность гидролиза крахмала, активирует панкреатическую липазу, повышая скорость и глубину гидролиза неИтрального жира, приводит к индукции активности и количества са-харазо-изомальтазного комплекса кишечника, увеличивая скорость расщепления сахарозы.
ЛИТЕРАТУРА
1. FAO/WHO: International Conference of Nutrition Major issue for Nutrition Strategies. Roma. 2003.- Р 20-35.
2. Statistisches Yahrbuch fur die Bundesrepublich Deutschland. -1995.
3. Российский статистический ежегодник. - М., 2011.
4. Цикуниб А.Д., Кайтмесова С.Р. Потребление сахарозы различными группами населения Республики Адыгея // Научно-информационный журнал НИИ КП АГУ «Наука: комплексные проблемы». -. 2013. - №1.- С. 36-44.
5. Бессесен Д.Г., Кушнер Р. Избыточный вес и ожирение. Профилактика, диагностика, лечение. М.: Бином, 2004. -С. 80-120.
6. Шарафетдинов Х.Х., Мещерякова В.А., Плотникова О.А. Сравнительная оценка послепищевой гликемии у больных сахарным диабетом 2 типа при потреблении моно- и дисахаридов и сахарозаменителей // Вопр. питания.- 2002.-№ 2.- С. 22-26.
7. Malik V.S., Schulze M.B. Intake of sugar-sweetened beverages and weight gain. A systematic review // Am J Clin Nutr.- 2006.-№ 84.- Р. 274-288.
8. Kromhout D. Diet and cardiovascular diseases // The journal of nutrition, health & aging. 2001.Vol. 5, № 3.- Р.144-149.
9. Kritchevsky D. Diet and atherosclerosis // The journal of nutrition, health & aging. 2001.Vol. 5, № 3.- Р.155-159.
10. Кузьмина H.H. Интенсивность кариеса зубов у 15-летних детей, проживающих в центральном федеральном округе России //Клинические исследования.-2009.-№1.- С 27-45.
11. Walker M., Mari A., Iayapaul M.K. et. al. Impaired beta cell glucose sensitivity and whole body insulin sensitivity as predictors of hyperglycaemic in non-diabetic subjects // Diabetologia. 2005,Vol. 48, №12.-Р. 2470-2476
12. Уголев А.М., Тимофеева Н.Н., Груздков А.А. Адаптация пищеварительной системы. Физиология адаптационных процессов. - М.; Наука, 1986. - С. 371-480.
13. Иезуитова Н.Н., Тимофеева Н.М. Пищеварение у человека и высших животных // Природа. - 1999.- № 8.- С.142-149.
14. Биохимия /под ред. Е.С. Северина, А.Я. Николаева. М. Гэотар-Медиа. 2008. - 784 с.
15. Тарвид И.Л. Характеристика пептидазной активности тонкой кишки цыплят: диссертация ... канд. биол. наук, Рига, 1983. - С. 23-54.
16. Цикуниб А.Д. Количественные методы проверки сенсорных способностей человека //Электронный лабораторный практикум.- ФГУИ НТЦ «Информрегистр». - 2011.- 48 с.
17. Svatos A. The effect of amino acids, sugars and fats on activation of pancreatic enzymes //Cas Lek Cesk. Feb.- 1994, № 5.-Р 135-140.
