CC BY
6Вестник АПК
Ставрополья
;№ 1(17), 2015
УДК 639.3.09:577.112.083/852:546.6
Сухаренко Е. В., Недзвецкий В. С., Максимов В. И.
Sukharenko H. V., Nedzvetsky V. S., Maksimov V. I.
ЭФФЕКТЫ ИОНОВ АЛЮМИНИЯ НА СОСТОЯНИЕ НЕРВНОЙ ТКАНИ СОЛНЕЧНОГО ОКУНЯ В РАЗЛИЧНЫЕ СРОКИ ОНТОГЕНЕЗА
THE EFFECTS OF ALUMINUM ON NEURAL TISSUE STATE OF SUN FISH (LEPOMIS GIBBOSSUS) IN DIVERS ONTOGENESIS PERIODS
В настоящее время известно, что постэмбриональный нейрогенез является одним из наиболее важных процессов в формировании уникальных нейрональных ансамблей зрелого мозга всех позвоночных животных. Возникающие в постэмбриональный период нейроны способствуют образованию специфических для каждого индивидуума устойчивых или временных синаптических контактов, что в значительной степени определяется внешними стимулами и факторами окружающей среды. В то же время, нейрогенез в зрелом мозге обеспечивает принципиально важную функцию физиологической регенерации структур мозга. Однако уровень нейрогенеза в значительной мере вариабелен у различных филогенетических линий. Имеются данные, что во взрослом мозге млекопитающих способность к нейрогенезу, т.е. пластическим модификациям существующих нейрональных ансамблей, ограничена двумя активными зонами - зоной телеэнцефалических латеральных желудочков (SVZ) и субгранульной зоной зубчатой извилины в гипокампе (SGZ), имеющих название «матриксных зон» [15]. Известно, что нейробласты SVZ матриксной зоны мигрируют в зрительные луковицы вдоль туннелей, образованных астроцитами.
Ионы алюминия способны индуцировать оксидативный стресс в нервной ткани. Изучили действие ионов алюминия на нервные клетки мозга солнечного окуня ^еротнв Gibbossus). Показано, что воздействие на протяжении 45 дней А1С13 (10 мг/л) вызывает достоверное повышение показателей оксидативного стресса и астроглиоза в мозге рыб различных возрастных групп. Наиболее интенсивная астроглиальная реактивность выявлена в мозге особей половозрелых рыб. В то же время, повышение содержания конечных продуктов ПОЛ в мозге этой группы рыб было ниже, чем в других возрастных группах. Полученные результаты могут отражать роль астроцитов в защите нервной ткани при алюминиевой интоксикации. Выявленные возрастные различия интенсивности астроглиоза показывают более высокую способность астроцитов к пролиферации в мозге солнечного окуня в первой половине онтогенеза.
It is now known that the post-embryonic neurogenesis is one of the most important processes in the formation of a unique neuronal ensembles Mature brain of all vertebrates. Emerging in the post-embryonic period, the neurons contribute to the formation of specific for each individual stable or transient synaptic contacts, which is largely determined by external stimuli and environmental factors. At the same time, neurogenesis in the adult brain provides a fundamentally important function of the physiological regeneration of brain structures. However, the level of neurogenesis in significant variable in different phylogenetic lines. There is evidence that in the adult mammalian brain capacity for neurogenesis, i.e., It is known that neuroplasty SVZ matrix zone migrate to the optic bulbs along the tunnels formed by astrocytes.plastic modifications to the existing neuronal ensembles is limited to two active zones zone telencephalon lateral ventricles (SVZ) and subgranular zone of the dentate gyrus in hippocampi (SGZ), entitled "matrix zones [15].
Aluminum ions can induce oxidative stress into neural tissue. Studied the effects of aluminum ions on neural cells of sun fish (Lepomis Gibbossus) brain. There was observed that the treatment during 45 days with AlCl3 (10 mg/l) induce reliable increase data of oxidative stress and astrogliosis in fish brain for distinct aging groupps. Most intensive reactivity of astroglia determined in fish group with pubescence period. Whereas, the rising of content final products of POL in this group was lower than another aging groups. Obtained results can reflect the role of astrocytes for neural tissue protection against aluminum toxicity. Discovered aging differences of astrogliosis strength show higher ability of astrocytes for proliferation in sun fish brain while this is first half ontogenesis.
Keywords: astrocytes, sun fish, aluminum ions, oxidative stress.
Ключевые слова: астроциты, солнечный окунь, ионы алюминия, оксидативный стресс.
Сухаренко Елена Валериевна -
кандидат технических наук, доцент кафедры технологии и химии морепродуктов Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Керченский государственный морской технологический университет» Крым, г. Керчь Тел: 8(961)456-99-25 E-mail:helenasuhar@gmail.com
Недзвецкий Виктор Станиславович -
доктор биологических наук, профессор кафедры биофизики и биохимии Днепропетровского национального университета им. О. Гончара Украина, Днепропетровск Тел: 8(928)313-73-06 E-mail: nedzvetskyvictor@gmail.com
Sukharenko Helena Valerievna. -
Ph.D in Technical Sciences, Associate Professor of Department Technology and Chemistry Seafood Federal State Educational Institution of Higher Professional Education
«Kerch State Maritime Technological University», Kerch Tel: 8(961)456-99-25 E-mail:helenasuhar@gmail.com
Nedzvetsky Victor Stanislavovich -
Doctor of Biology Sciences Professor
of Department Biophysics and Biochemistry
Dnipropetrovsk National Universiy by Oles Gonchar,
Dnipropetrovsk
Тел: 8(928)313-73-06
E-mail: nedzvetskyvictor@gmail.com
Максимов Владимир Ильич -
доктор биологических наук, профессор кафедры физиологии, фармакологии и токсикологии им. А.Н. Голикова и И.Е. Мозгова, проректор Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина», г. Москва
Тел: 8 (495) 377-91-17 E-mail: dr.maximov@gmail.com
Maksimov Vladimir iTich-
Doctor of Biological Sciences, Vice-rector,
Professor on Physiology, Department of Physiology,
Pharmacology and Toxicology named after
A.N. Golikov and I.E. Mozgov,
Federal State Budgetary Educational Institution
of Higher Professional Education
"Moscow State Academy of Veterinary Medicine and
Biotechnology by K.I. Skryabin",
Moscow.
Тел: 8 (495) 377-91-17 E-mail: dr.maximov@gmail.com
В промышленных регионах со значительной концентрацией нефтеперерабатывающих, металлургических и химических производств действие повышенных концентраций техногенных загрязнителей может быть наиболее вероятной причиной необратимых нарушений, как в отдельных живых организмах, так и в популяциях биологических видов и экото-пов. Водные организмы наиболее уязвимы к действию поллютантов, проникновение ксенобиотиков в ткани и органы облегчает как высокая скорость диффузии в водной среде, так и их ассоциация с электролитами растворенными в воде. Избирательная способность гидробионтов к концентрации химических соединений, в сочетании с выраженной чувствительностью к ксенобиотикам с высоким окислительным потенциалом, может стимулировать различные окислительные повреждения мембранных липидов, ДНК, белков, изменения активности антиоксидантных ферментов.
К наиболее часто встречающимся загрязнениям водоемов относят контаминацию ионами металлов, значительная опасность действия которых заключается в том, что их подавляющее большинство обладает способностью формировать комплексные соединения, служащие источником вторичного загрязнения акваторий. При такой биологической трансформации экосистем необходимо учитывать, что она происходит в условиях присутствия в окружающей среде алюминия - самого распространенного в природе металла. Немаловажно, что антропогенное загрязнение водных ресурсов соединениями, приводящими к снижению кислотности среды, создает благоприятные условия для хронического роста содержания подвижных форм этого металла в природных водах. Алюминиевая токсичность в закисленных водоемах идентифицирована как одна из главных причин снижения численности популяций рыб. Известно, что интоксикация ионами алюминия приводит к нарушению процессов пластичности и поведенческих реакций у особей лосося, что также может приводить к снижению способности рыб приспосабливаться к изменяющимся условиям экосистем и как следствие - к понижению выживаемости и уменьшению численности популяций.
Показано, что А13+ стимулирует Ре2+-зависимое окисление белков, липидов миелина
и синаптических мембран нейронов [1]. В организме рыб ионы алюминия нарушают диффузию газов и транспорт ионов натрия. Физико-химические процессы, протекающие в водной среде, могут приводить к образованию высокотоксичных комплексных органических соединений, содержащих ионы алюминия. Особую токсичность алюминия связывают со способностью рыб к интенсивному выделению слизи и аккумуляцией ионов этого металла в жабрах [2]. При этом действие алюминия на функции жабр молоди рыб и мальков лосося дифференцировано. Наиболее высокая чувствительность к такому химическому стрессу выявлена у мальков, что может быть опосредовано недостаточно высокой активностью антиоксидантной защиты рыб в ранний период онтогенеза [3].
Наиболее вероятно, что механизмы токсических эффектов алюминия связаны с нарушением окислительно-восстановительного баланса и увеличением уровня оксидативных повреждений клеток различных типов тканей. В сочетании с другими тканеспецифически-ми биомаркерами изучение оксидативных повреждений и антиоксидантных процессов организма может являться одной из наиболее значимых составляющих комплексной характеристики состояния водных организмов. К таким надежным маркерам, позволяющим определить метаболические нарушения на ранних стадиях интоксикации, дифференцировать степень неблагоприятного влияния загрязнителей, оценить состояние популяций рыб в условиях техногенной нагрузки, относят гли-альный фибриллярный кислый белок (ГФКБ) нервной ткани. Оценка состояния популяций рыб с использованием в качестве биомаркера ГФКБ базируется на ответных молекулярных процессах астроглии [4], лежащих в основе наиболее универсальных реакций организма на изменения окружающей среды. Интенсивность развития реактивного астроглиоза в ответ на действие ионов алюминия подтверждается как на молекулярном (экспрессия ГФКБ), так и на клеточном (пролиферация астроци-тов) уровнях [5]. Несмотря на то, что ткане-специфические эффекты ионов алюминия и их патогенез интенсивно изучаются в последние десятилетия, действие ионов алюминия на процессы дифференциации молекулярных и клеточных процессов в онтогенезе остаются нераскрытыми.
: № 1(17), 2015
Целью данной работы было исследование токсических эффектов ионов алюминия на клетки нервной ткани солнечного окуня (Lepomis gibbosus) в различные сроки онтогенеза посредством комплексного анализа показателей оксидативного стресса и состояния цитоскеле-та астроцитов.
В исследовании использовали 48 особей солнечного окуня, представляющих одну популяцию, выращенную в аквариумах факультета биологии, экологии и медицины Днепропетровского национального университета, трех возрастных групп (6-7 месяцев, 2-3 года и старше 5 лет), в каждой из которых случайным образом 8 особей были отобраны в качестве тест-объекта, а другие 8 особей - в качестве контроля. Все группы рыб содержали отдельно в аквариумах емкостью 180 литров. Контрольные группы рыб обитали в аквариумах с очищенной фильтрацией водопроводной водой. В аквариумах с экспериментальными группами рыб концентрация ионов AI3+ составляла 10 мг/л на протяжении 45 суток. Концентрация ионов алюминия и длительность экспозиции были подобраны, на основании результатов исследований, полученных как в лабораторных [6, 7], так и природных условиях [8].
Постоянную концентрацию алюминия поддерживали путем подмены 1/4 части воды, содержащей AICI3. Подмену воды проводили 2 раза в неделю.За основу была взята методика McCormick [9].
Особи рыб всех групп подвергались полному биологическому анализу. Визуально наблюдали фенотип рыб и анализировали морфологические экстерьерные характеристики. Оценивалась доля рыб с различными морфологическими и физиологическими аберрациями. Возраст рыб определялся по чешуе путем подсчета годовых колец по методике И. И. Чугуновой [10].
Содержание и состав полипептидных фрагментов цитоскелетного ГФКБ определяли методом иммуноблотинга. Определение относительной интенсивности окрашивания полипептидных зон проводили с помощью компьютерной обработки сканированных результатов иммуноблоттинга. Количественный анализ ГФКБ - путем сравнения интенсивностей окрашивания соответствующих полипептидных зон между экспериментальными и контрольными пробами, отнесенными к количеству общего белка во фракциях. Содержание общего белка определяли методом Лоури в модификации Миллера [11].
Уровень перекисного окисления липидов в гомогенатах мозга и печени рыб измеряли с использованием тест-набора LPO-586 (Oxis, Int. Inc., USA) методом, который основан на реакции N-метил^-фенилиндола с малоновым ди-альдегидом и 4-гидроксиалкенами. Активность каталазы определяли по методу М. Королюк [12], активность супероксиддисмутазы - методом, предложенным С. Чевари [13]. Обработку полученных данных проводили методами ма-
тематической статистики для малых выборок. Относительное содержимое ГФКБ выражали в виде средней величины ± стандартная ошибка средней, достоверное различие между группами оценивали с применением ^критерия Стью-дента (Р<0,05) после проверки гипотез о нормальности распределения и различии между генеральными дисперсиями.
Результаты количественного определения ГФКБ в мозге рыб, подвергшихся воздействию ионов А13+ (экспонированные группы) и контрольных групп показали достоверное увеличение экспрессии данного астроглиального маркера во всех возрастных группах (рис. 1).
Рисунок 1 - Сравнительное содержание ГФКБ в головном мозге солнечного окуня различных возрастных при хроническом воздействии алюминия (А1) по сравнению с контрольными группами рыб (К);
** - Р<0,01; *** - Р<0,001 - достоверность отличий в сравнении с контролем
Следует отметить, что в группе рыб старше 5-ти лет ионы алюминия индуцировали возрастание содержания ГФКБ в 1,42 раза (Р<0,01). В тоже время, в группах неполовозрелых и молодых половозрелых особей экспрессия ГФКБ была увеличена по сравнению с контролем в 2,12 и 2,31 раза (Р <0,01 и Р <0,001 соответственно). Такое значительный рост экспрессии ГФКБ указывает на развитие астроглиальной реактивации в ответ на действие ионов алюминия.
Вызванное присутствием в среде обитания повышенных концентраций алюминия возрастание экспрессии белка промежуточных фиал-ментов глии, сопровождается появлением деградированных полипептидных фрагментов ГФКБ. Такие полипептидные фрагменты образуются, как правило, в ходе ограниченного про-теолиза с участием ферментов семейства ци-тозольных Са2+-активируемых цистеиновых протеаз [14]. Эти полипептиды могут быть идентифицированы в иммуноблоттинге при условии, что их антигенные детерминанты сохраняются в нативном состоянии.
Рисунок 2 - Иммуноблотинг цитоскелетных фракций белков головного мозга солнечного окуня, обитающих в условиях хронического воздействия алюминия (А1); К - контрольные группы рыб. Возрастные группы:
1 - 0,5 года; 2 - 2-3 года; 3 - более 5 лет
Результаты иммуноблотинга цитоскелетных фракций белков мозга особей рыб контрольных и экспериментальных групп представлены на рисунке 2.
Сравнительный анализ состава полипептидных фрагментов ГФКБ показал значительное увеличение содержания продуктов протеолити-ческой деградации интактной субъеденицы 49 кДа во всех возрастных группах.
Выявленные различия свидетельствуют об индукции ионами алюминия интенсивных процессов реорганизации цитоскелета астроцитов нервной ткани особей солнечного окуня всех возрастных групп.
Определение содержания конечных продуктов ПОЛ также позволило выявить достоверные различия между соответствующими возрастными экспериментальными и контрольными группами (рис. 3).
Рисунок 3 - Сравнительное содержание конечных продуктов ПОЛ в головном мозге солнечного окуня разных возрастных групп в условиях хронического
загрязнения среды ионами алюминия (А1) по сравнению с контрольными группами рыб (К); * -Р <0,05; ** - Р <0,01 - достоверность разницы в сравнении с контролем
Наиболее значительное возрастание продуктов ПОЛ выявлено в группе рыб в возрасте более 5 лет - в 1,7 раза (Р<0,01). Такое существенное увеличение показателя ПОЛ в мозге данной группы рыб может быть связано как с возрастными изменениями экспрессии ферментов антиоксидантной защиты, так с характерным для позвоночных нарушением баланса между повреждениями и репарацией митохон-дриальных мембран в процессе онтогенеза.
Результаты определения активности одного из ключевых ферментов антиоксидантной защиты - супероксиддисмутазы (СОД) представлены на рисунке 4.
Рисунок 4 - Сравнительная динамика активности супероксиддизмутазы в головном мозге солнечного
окуня различных возрастных групп в условиях хронического загрязнения среды ионами алюминия (А|) по сравнению с контрольными группами рыб (К);
* - Р <0,05; ** - Р <0,01 - достоверность разницы в сравнении с контролем
В мозге всех экспериментальных групп солнечного окуня выявлены достоверные различия активности этого фермента по сравнению с
: № 1(17), 2015
контролем. Следует отметить, что при сопоставимом увеличении этого показателя в группах возрастом 6-7 месяцев (в 2,19 раза, Р<0,01) и 2-3 года (в 2,06 раза, Р<0,01), рост активности супероксиддисмутазы в группе особей старше 5 лет был минимальным - в 1,79 раз (Р<0,05).
Изменения активности были выявлены также для другого фермента антиоксидантной защиты - каталазы (рис. 5).
Минимальный рост активности каталазы выявлен в клетках наиболее взрослых особей солнечного окуня, но даже в этой возрастной группе активность каталазы клеток головного мозга превышала этот показатель клеток головного мозга контрольной группы в среднем в 1,5 раза (Р<0,01).
Представленные результаты свидетельствуют о том, что реактивный ответ астроцитов мозга солнечного окуня различных возрастных групп характерно отражает неблагоприятное влияние ионов алюминия. В нервной ткани астроглиоз тесно ассоциирован с развитием оксидативного стресса. Показатели оксидативного стресса и реактивного ответа астроглии в условиях токсического действия ионов алюминия адекватно отражают адаптивные возможности гидробионтов к неблагоприятным условиям окружающей среды.
Комплексное определение активности ферментов антиоксидантной защиты, сравнительный корреляционный анализ молекулярных, физиологических, морфометрических и поведенческих характеристик гидробионтов является перспективным направлением в поиске про-
Рисунок 5 - Активность каталазы в головном мозге солнечного окуня различных возрастных групп в условиях хронического загрязнения среды ионами алюминия (А1) по сравнению с контрольными группами рыб (К); * - Р <0,05; ** - Р <0,01 -достоверность разницы в сравнении с контролем
гностических маркеров адаптивного потенциала водных организмов в условиях глобального загрязнения окружающей среды. Подобный анализ может быть перспективным инструментом изучения особенностей онтогенеза отдельных биологических видов.
Литература:
1. Verstraeten S. V., Golub M.S., Keen C.L.. Myelin is a preferential target of aluminum-mediated oxidative damage// Arch. Biochem. Biophys, 1997. V. 344 (2). P. 289-294.
2. Impact of early salmon louse, Lepeophtheirus salmonis, infestation and differences in survival and marine growth of sea-ranched Atlantic salmon, Salmo salar L., smolts 19972009./ O.T. Skilbrei, B. Finstad, K. Urdal, G. Bakke, F. Kroglund, R. Strand // J Fish Dis., 2013. V. 36(3). P. 249-260.
3. Physiological, molecular, and cellular mechanisms of impaired seawater tolerance following exposure of Atlantic salmon, Salmo salar, smolts to acid and aluminum /M.Y. Monette, T. Yada, V. Matey, S.D. McCormick // Aquat Toxicol. 2010. V. 99(1). P. 17-32.
4. Использование цитоскелетных молекулярных компонентов в качестве биомаркера состояния гидробионтов (на примере плотвы обыкновенной)./ Новицкий, М.Г. Малик, В.С. Недзвецкий, Е.В. Сухаренко// Гидробиологический журнал. 2009. Т. 45, № 5. С. 81-88.
5. Пат. 106145 Украина, МПК G01N 33/00 (2006.01). Споаб визначення стану попупяцм риб в умовах забруднення се-редовища юнами металiв / Сухаренко Е.В., Недзвецкий В.С., Новицкий РА.; вл.
References:
1. Verstraeten S. V., Golub M.S., Keen C.L.. Myelin is a preferential target of aluminum-mediated oxidative damage// Arch. Biochem. Biophys, 1997. V. 344 (2). P. 289-294.
2. Impact of early salmon louse, Lepeophtheirus salmonis, infestation and differences in survival and marine growth of sea-ranched Atlantic salmon, Salmo salar L., smolts 19972009./ O.T. Skilbrei, B. Finstad, K. Urdal, G. Bakke, F Kroglund, R. Strand // J Fish Dis., 2013. V. 36(3). P. 249-260.
3. Physiological, molecular, and cellular mechanisms of impaired seawater tolerance following exposure of Atlantic salmon, Salmo salar, smolts to acid and aluminum /M.Y. Monette, T. Yada, V. Matey, S.D. McCormick //Aquat Toxicol. 2010. V. 99(1). P. 17-32.
4. The use of cytoskeletal molecular components as biomarkers of the condition of aquatic organisms (for example, roach ordinary)./ Nowicki, M., Malik, V. S. Niedzwiecki, E. C. Sukharenko//Hydrobiological journal. 2009. T. 45, No. 5. P. 81-88.
5. PJSC. 106145 Ukraine, IPC G01N 33/00 (2006.01). The method of determining the status of fish populations in conditions of environmental pollution by metals ions / Sukharenko E. C., Niedzwiecki C. S., Nowicki,
Сухаренко Е.В. № а201301623 ; дата подачи 11.02.2013 ; опубл. 25.07.2014, Бюл. № 14.
6. Kinetic constraints in acute aluminium toxicity in the rainbow trout (Oncorhynchus mykiss)/ C. Exley, A.J. Wicks, R.B. Hubert, J.D. Birchall // J. Theor. Biol. -1996. - V. 179(1). -Р. 25-31.
7. Новицкий Р. А., Сухаренко Е.В., Недзвец-кий В.С. Молекулярные биомаркеры эффектов ионов Al3+ на генерацию оксида-тивного стресса и клеточную реактивацию в организме Lepomis gibbosus (Pisces: Centrarchidae)/ // Гидробиол. Журнал. 2013. Т. 49, № 6. С. 65-75
8. Aluminium, iron and copper in human brain tissues donated to the medical research council's cognitive function and ageing study / E. House, M. Esiri, G. Forster, P.G. Ince, C. Exley // Metallomics. 2012. V. 4. P. 56-65.
9. Thresholds for short-term acid and aluminum impacts on Atlantic salmon smolts / S.D. McCormick, D.T. Lerner, A. M. Regish , M.F. O'Dea, M.Y. Michelle // Aquaculture. 2012. V.362-363. P. 224-231.
10. Чугунова И. И. Методика изучения возраста и роста рыб. М.: Сов. наука, 1952. 175 с.
11. Miller G. L. Protein determination for large numbers of samples // Anal. Chem. 1959. V. 31, №5. Р. 964-966.
12. Королюк М.А., Иванова Л.И., Токарев В.Е. Метод определения активности катала-зы // Лаб. дело. 1988. №1. с. 16-19.
13. Чевари С. Чаба И., Секей Й. Роль суперок-сиддисмутазы в окислительных процессах клетки и метод определения ее в биологических материалах// Лаб. дело.1985. №11. с. 678-681
14. Mouser P. E. Kwang-Ho E., Troy T. R. Caspase-Mediated Cleavage of Glial Fibrillary Acidic Protein within Degenerating Astrocytes of the Alzheimer's Disease Brain// American Journal of Pathology. 2006. V.168, № 3. P. 936-946.
15. Kirsche W. On postembryonic matrix zones in the brain of various vertebrates and their relationship to the study of the brain structure // Z. Mikrosk Anat. Forsch. - 1995. № 77. P. 313-406.
R. A.; VL. Sukharenko E. C. No. a ; filing date 11.02.2013 ; publ. 25.07.2014, bull. No. 14.
6. Kinetic constraints in acute aluminium toxicity in the rainbow trout (Oncorhynchus mykiss)/ C. Exley, A.J. Wicks, R.B. Hubert, J.D. Birchall // J. Theor. Biol. -1996. - V. 179(1). - P 25-31.
7. Novitsky, R. A., Sukharenko E. C., Niedzwiecki C. S. Molecular biomarkers of the effects of ions Al3+ on the generation of oxidative stress and cell reactivation in the body Lepomis gibbosus (Pisces: Centrarchidae) // Hydrobiol. Log. 2013. So 49, No. 6. P. 65-75
8. Aluminium, iron and copper in human brain tissues donated to the medical research council's cognitive function and ageing study / E. House, M. Esiri, G. Forster, P.G. Ince, C. Exley // Metallomics. 2012. V. 4. P. 56-65.
9. Thresholds for short-term acid and aluminum impacts on Atlantic salmon smolts / S.D. McCormick, D.T. Lerner, A. M. Regish , M.F. O'Dea, M.Y. Michelle // Aquaculture. 2012. V.362-363. P. 224-231.
10. Chugunova I. I. The methods of studying the age and growth of fish. M: Modern science, 1952. 175 P.
11. Miller G. L. Protein determination for large numbers of samples // Anal. Chem. 1959. V. 31, №5. P. 964-966.
12. Korolyuk M. A., Ivanov, L. I., Tokarev C. E. Method for the determination of catalase activity // laboratory. case. 1988. No. 1. P. 16-19.
13. Chivari S. Csaba, I., Szekely J. Role of superoxide dismutase in oxidative processes in cells and the method for its determination in biological materials// lab. case.1985. No. 11. P. 678-681
14. Mouser P. E. Kwang-Ho E., Troy T. R. Caspase-Mediated Cleavage of Glial Fibrillary Acidic Protein within Degenerating Astrocytes of the Alzheimer's Disease Brain// American Journal of Pathology. 2006. V.168, № 3. P. 936-946.
15. Kirsche W. On postembryonic matrix zones in the brain of various vertebrates and their relationship to the study of the brain structure // Z. Mikrosk Anat. Forsch. - 1995. № 77. P. 313-406.
