CC BY
34
Медицинская иммунология 2001, Т. 3, №> 1, стр 95-98 © 2001, СПб РО РААКИ
Краткие сообщения
ЭФФЕКТИВНОСТЬ РОНКОЛЕЙКИНА В КОМПЛЕКСНОЙ ТЕРАПИИ ВРОЖДЕННЫХ ПНЕВМОНИЙ У НЕДОНОШЕННЫХ ДЕТЕЙ
Никулин Л.А., Боровиков О.В.*, Левченко Л.А., Боровикова Е.В., Ханферян Р.А.*
Кубанская государственная медицинская академия, г. Краснодар
* Институт аллергии и астмы, г. Краснодар
Резюме. Под наблюдением находились две однородные группы недоношенных детей с гестационным возрастом 32-36 недель, страдающих врожденными пневмониями бактериального генеза. Все больные в качестве базовой терапии получали антибиотики, кроме того, в основной группе дети получали ронколейкин в дозе 100 ООО ЕД внутривенно капельно 1 раз в сутки 2 раза с интервалом 48 часов. У недоношенных детей, несмотря на наличие врожденной пневмонии, концентрация лейкоцитов незначительно превышала аналогичные значения относительно здоровых детей соответствующего гестационного возраста. В то же время концентрация CD3+ была достоверно ниже контроля, главным образом за счет субпопуляции CD4+ (р<0,001). Количество CD16+ и лимфоцитов, экспрессирующих активационный антиген CD69+, более чем в два раза превышало контрольные значения. На 5 сутки терапии отмечалось увеличение (р<0,01) концентрации лейкоцитов, CD4+, CD16+, CD69+, бактерицидной активности фагоцитов по сравнению с группой детей, получавших традиционную терапию. К моменту окончания активной терапии в основной группе концентрация IgM, CD4+ была более высокой, a CD16+ и CD69+ практически соответствующей норме. Таким образом, применение рекомбинантного IL-2 - ронколейкина в терапии врожденных пневмоний приводит к адекватной активации механизмов иммунной системы и к более быстрой элиминации антигена, отражением чего является нормализация иммунологических показателей.
Юиочевые слова: врожденные пневмонии, недоношенные дети, ронколейкин.
Nikulin L.A., Borovikov О. V., Levchenko L.A., Borovikova Е. V., Khanferyan R.A.
EFFICACY OF RONCOLEUKIN IN ADJUNCTIVE TREATMENT OF CONGENITAL PNEUMONIA IN PREMATURE INFANTS
Abstract. Two similar groups of premature infants with gestation period of32-36 weeks suffering from congenital pneumonia of bacterial genesis have been under study. All the patients received antibiotics as base therapy. Besides that, infants in the main groups received Roncoleukin 100000 units intravenous through dropper once a day two times with the interval of 48 hours. Leukocyte concentration in premature infants in spite of congenital pneumonia insignificantly exceeded that of healthy infants with the same gestation period. At same time concentration of CD3^ significantly decreased mainly owing to the decrease in CD4+ level (p<0.001). Quantity of CD16+ and lymphocytes expressing CD69+ activation antigen exceeded figures by more than twice. On the 5th day of therapy the increase (p<0.01) in concentrations of leukocytes, CD4+, CD 16+, CD69+ and bacterial activity of phagocytes in comparison with infants receiving traditional therapy were observed. By the end of active therapy in the main group concentrations of IgM and CD4+ were higher and concentrations of CD16+ and CD69+ corresponded the norm. Thus, addition of recombinant IL-2 - Roncoleukin to congenital pneumonia treatment leads to adequate activation of immune system and to faster elimination of the antigen. (Med.Immunol., 2001, vol.3, N1, pp 95-98)
Введение TepI- Период новорожденное™, и тем более недоно-
Внутриутробному инфицированию плода наря- ценность с иммунологической точки зрения харак-
ду с хронической пренатальной гипоксией принад- теризуется физиологическим иммунодефицитным
лежит ведущая роль в рождении недоношенных де- состоянием [3]. Интерлейкин-2 (IL-2) является ак
Адрес для переписки:
350614 Краснодар, ул. Седина, д.4, Кубанская государственная медицинская академия.
Тел./факс: (8612) 68-49-56, Ханферян Роман Авакович, д.м.н., профессор.
тивным ауто- и гетерокринным эффекторным и регуляторным цитокином, и эффекты его действия приводят к плейотропному ответу с участием практически всех популяций и субпопуляций клеток иммунной системы [6]. Учитывая факт низкого синтеза 1Ь-2 у недоношенных и новорожденных детей, особенно иммунологически компрометированных в результате внутриутробного инфицирования, пренатальной гипоксии и травматизации в родах, применение этого интерлейкина в комплексной терапии недоношенных детей с врожденными бактериальными пневмониями является методом патогенетически обоснованной иммуномодулирующей и, отчасти, заместительной терапии [ 1 ]. К тому же известно, что экзогенный 1Ь-2 повышает резистентность к бактериальным [2, 4, 7] и вирусным инфекциям, в особенности у новорожденных [5]. Исходя из изложенного, целью настоящей работы являлось клинико-иммунологическое обоснование возможности применения ронколейкина в терапии врожденных пневмоний у недоношенных детей.
Материалы и методы
Под наблюдением находились две однородные группы (по 18 человек) недоношенных детей с гес-тационным возрастом 32-36 недель, страдающих подтвержденными врожденными пневмониями бактериального генеза. Кроме того, у всех детей отмечалась разной степени выраженности хроническая внутриутробная перинатальная энцефалопатия ги-поксически-травматического генеза. Все больные дети в качестве базовой терапии получали аминог-ликозидный антибиотик третьего поколения нетро-мицин. При необходимости, исходя из чувствительности штамма, добавляли другие антибиотики, в основном цефалоспорины второй и третьей генерации. Кроме того, в основной группе дети получали ронколейкин (инъекционная лекарственная форма рекомбинантного дрожжевого 1Ь-2 человека производства ООО БИОТЕХ, Санкт-Петербург) 100 ООО ЕД внутривенно капельно (в течение 4-х часов) 1 раз в сутки 2 инфузии с интервалом 48 часов. В период лечения больным не назначали препараты иммуноглобулинов, плазму и другие лекарственные вещества, обладающие иммуномодулирующим эффектом. До начала терапии все больные дети подвергались иммунологическому обследованию. При этом анализировались лейкоформула с расчетом абсолютного и относительного содержания нейтро-фильных лейкоцитов и лимфоцитов. Количественное определение популяций и субпопуляций лимфоидных клеток производили с использованием мышиных моноклональных антител серии ОКТ производства ООО Сорбент (г. Москва) в реакции непрямой иммунофлуоресценции. В качестве проявляющих использовали меченные ФИТЦ антитела
против иммуноглобулинов мыши. Регистрацию проводили на люминесцентном микроскопе ЛЮ-МАМ-ИЗ. Выявляли относительную (%) и абсолютную (п х 109/л) концентрации CD3 (Т-лимфоци-тов), CD4 (Т-хелперов), CD8 (Т-цитотоксичес-ких), CD19 (В-лимфоцитов), CD16 (NK-клеток). Кроме того, определяли количество лимфоцитов, экспрессирующих активационный антиген CD69 (DAKO, Финляндия). Концентрацию основных классов иммуноглобулинов определяли спектрофотометрически. Фагоцитарную активность нейтро-фильных лейкоцитов изучали в отношении Staph, aur. Штамм Р 209 с учетом поглотительной и бактерицидной фаз фагоцитоза. При этом рассчитывали процент активных фагоцитов, фагоцитарное число (ФЧ - среднее количество микробных тел, фагоцитированное одним активным фагоцитом), фагоцитарный индекс (ФИ - среднее количество микробных тел, которое может быть фагоцитировано одним потенциальным фагоцитом), процент бактерицидное™ (%Б - относительное количество умерщвленных микроорганизмов по отношению ко всем фагоцитированным, выраженное в процентах), индекс бактерицидности (ИБ - соотношение количества умерщвленных микроорганизмов внутри фагоцита к оставшимся живым). О гибели микроорганизмов внутри фагоцита судили по его морфологическим изменениям и по тинкториальным свойствам (появление эозинофилии) при окраске по методу Романовского - Гимза в модификации Паппенгейма при рН-7,8.
Результаты и обсуждение
Выраженных побочных реакций после и во время введения ронколейкина не наблюдалось. У двух детей во время введения на 20-30 минуте наблюдалось повышение температуры на 0,3-0,4 градуса. В этих случаях введение препарата прекращали на 20-30 минут и продолжали инфузию с меньшей скоростью. Исследованиями установлено (табл. 1), что у недоношенных детей с врожденными бактериальными пневмониями концентрация лейкоцитов лишь незначительно превышала аналогичные значения у относительно здоровых детей соответствующего ге-стационного возраста, что является отражением гипореактивности, в том числе иммунной и гемопоэ-тической систем у недоношенных детей. В то же время концентрация Т-клеток у детей с врожденной пневмонией была значительно (Р<0,001) ниже контроля, главным образом за счет субпопуляции CD4 клеток. В противоположность этому, количество естественных киллерных клеток (CD 16 ) было более чем в два раза выше, также как и активированных лимфоцитов. Увеличение активности данных популяций лимфоцитов при пневмонии у недоношенных, с нашей точки зрения, является компенса-
Табл. 1. ДИНАМИКА ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ НЕДОНОШЕННЫХ ДЕТЕЙ С ВРОЖДЕННЫМИ БАКТЕРИАЛЬНЫМИ ПНЕВМОНИЯМИ В УСЛОВИЯХ РАЗЛИЧНЫХ ВАРИАНТОВ ЛЕЧЕНИЯ (Х+х; Р)‘
Показатели Здоровые Лечение с применением ронколейкина Традиционная терапия
дети До лечения 5-е сутки терапии 15-е сутки терапии До лечения 5-е сутки терапии 15-е сутки терапии
СОЗТо №107л 69,3+1,2 2,36±0,20 53,2±1,6 2,51+0,19 59,7±2,3 3,76±0,22 61,4±1,8 " 3,4±0,16‘" 52,8±1,7 2,56±0,17 53,6±1,9 2,51 ±0,17 57,7±1,7‘ 3,0±0,14*
С04+% №109/л 53,4+2,9 1,82±0,16 30,1 ±1,5 1,42±0,14 ..39,9+2,1"' ...2,5±0,18‘" -38,3±1,1‘” 2,12±0,13" 30,21,3 1,46±0,14 31,9±1,5 1,50+0,12 33,4±1,4 1,74±0,12
С08+ % Мх109/л 23,6+1,5 0,80±0,09 23,2+1,3 1,08+0,11 19,6+1,1' 1,23±0,09 23,4± 1,4 1,29±0,12 22,6±1,2 1,09±0,13 21,9±1,5 1,02±0,11 23,5±1,1 1,22±0,1
С04+/С08+ 2,26±0,13 1,30±0,07 ...2,03±0,11'" .1,65+0,06'" 1,34+0,09 1,45±0,09 1,42±0,07
С019+% Мх109/л 18,6±1,5 0,57+0,06 23,8±1,9 1,12±0,07 23,1 ±2,2 1,45±0,09 21,2± 1,7 1,17±0,12 24,6±2,1 1,19+0,10 24,5±1,6 1,15±0,13 23,3±1,6 1,21 ±0,09
С016+% №109/л 5,0+0,5 0,27+0,02 11,1+08 0,52±0,04 .20,9+3,1'' ...1,31 ±0,16'" 8,3±0,4” 0,46±0,03 10,7±0,7 0,52±0,04 12,1 ±1,2 0,57±0,05 9,1 ±0,8 0,47±0,05
С069+% №107л 6,1 ±04 0,21+0,02 12,2+1,0 0,57+0,04 ...23,1 ±2,9'" ...1,45±0,11"* •7,4±0,5‘" 0,41 ±0,03" 12,6±0,7 0,61 ±0,05 13,3+1,7 0,62±0,07 9,2±0,8" 0,48±0,03
ІдА г/л 0,23+0,03 0,36±0,04 0,34±0,04 0,38±0,03 0,39±0,05 0,39±0,03 0,37±0,03
ІдЄ г/л 8,77+1,07 6,83+1,16 6,51 ±0,73 5,60±0,82 6,92±0,63 6,33±0,57 5,51 ±0,56
ІдМ г/л 0,18+0,01 0,3 0+0,02 0,36±0,04 ...0,53±0,05"’ 0,31 ±0,03 0,33±0,04 0,38±0,05
Примечания: 1. р<0,05; р<0,01; р<0,001. 2. Значки , приведенные справа вверху от значения показателя, указывают на
достоверность различий внутри группы до, во время и после лечения. 3. Значки , приведенные слева внизу от значения показателя, указывают на достоверность различий между группами в соответствующие сроки лечения.
Табл. 2. ФАГОЦИТАРНАЯ АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ НЕДОНОШЕННЫХ ДЕТЕЙ С ВРОЖДЕННЫМИ БАКТЕРИАЛЬНЫМИ ПНЕВМОНИЯМИ (Х+х; Р)'
Показатели Здоровые Лечение с применением ронколейкина Традиционная терапия
дети До лечения 5-е сутки терапии 15-е сутки терапии До лечения 5-е сутки терапии 15-е сутки терапии
Процент фагоцитоза 61,0±3,2 55±2,5 64,7±3,3 57,8±2,6 54,7±3,4 55,3+3,1 56,4±3,7
Фагоцитарное число 3,7±0,19 3,40±0,15 ...4,62±0,23'" 3,51+0,22 3,52±0,19 3,48±0,21 3,57±0,13
Фагоцитарный индекс 2,26±0,11 1,90±0,11 ...2,99±0,16"' 2,36±0,14' 1,93±0,09 1,92+0,15 2,22±0,10
Микробная емкость крови №109/л 14,58±1,51 12,25±1,03 ...20,67±1,66'" 11,27±1,17 12,44±1,62 12,36±1,41 12,21 ±1,18
% бактерицидное™ 57,2+4,0 46,3±2,5 85,8+3,4'" 66,0±2,3"' 47,7+2,4 ,.67,3±2,9'" 64,7±3,Г
Индекс бактерициди ости 1,33±0,15 0,86±0,11 ...6,04±0,4Г" 1,94±0,13 1,25+0,12 ...2,06±0,21 1,83±0,19'
Примечания: 1. * - р<0,05; р<0,01; р<0,001. 2. Значки , приведенные справа вверху от значения показателя, указывают на достоверность различий внутри группы до, во время и после лечения. 3. Значки , приведенные слева внизу от значения показателя, указывают на достоверность различий между группами в соответствующие сроки лечения.
торной реакцией в ответ на бактериальную инфекцию. Концентрация IgM у детей с врожденными пневмониями была достоверно более высокой, вероятно за счет внутриутробной стимуляции инфекционными агентами иммунной системы, функциональная активность которой является почти сформированной уже к 14-18 неделе гестации. Более низкая концентрация IgG у этих детей по-види-мому, обусловлена выходом данного класса иммуноглобулинов в воспалительный очаг. Фагоцитарная активность нейтрофильных лейкоцитов (табл. 2) также была нарушена за счет снижения их бактерицидной активности при практически интактных первых фазах фагоцитоза.
На пятые сутки терапии в группе детей, в комплексную терапию которых был включен рекомбинантный IL-2, отмечался лейкоцитоз с достоверным по сравнению с группой, получавшей традиционную терапию, повышением абсолютного содержания лимфоцитов, главным образом за счет CD4 субпопуляции. Резко повышалась как относительная, так и абсолютная концентрация естественных клеток киллеров и активированных лимфоцитов (Р<0,001).
Весьма демонстративным эффектом применения ронколейкина было повышение поглотительной и, в особенности, ранее супрессированной бактерицидной функции нейтрофильных лейкоцитов. Но все же столь значительное увеличение бактерицидной потенции микрофагов в данный период нельзя объяснить, с нашей точки зрения, только стимулирующими эффектами ронколейкина, тем более, что такая же тенденция наблюдалась и в группе сравнения. Возможно, данный факт обусловлен высокими концентрациями антибактериальных препаратов в крови, которые могли оказать токсическое воздействие на тест- объект (Staph, aur. Р 209). Следует все же учесть, что индекс бактерицидное™ в основной группе в этот период был почти в два раза более высоким, чем в группе сравнения.
К моменту окончания активной терапии пневмонии разница между сравниваемыми группами в значительной степени нивелировалась. Однако необходимо отметить, что в группе детей, получавших терапию ронколейкином, восстановление индуцированных инфекционным процессом реактивных изменений иммунной системы происходило значительно быстрее и полноценнее. Так, по-прежнему отмечались достоверные различия между сравниваемыми группами в концентрации Т-хелперов, соотношений CD4 /CD8 . Количество активированных лимфоцитов в группе реконвалесцентов, получавших ронколейкин было достоверно более низким,
что свидетельствует, если учесть высокое их количество на фоне введения IL-2, о более полноценной элиминации антигена.
Чрезвычайно интересным является факт значительного роста концентрации IgM в данной группе, гак как известно, что IL-2 оказывает относительно слабое влияние на функциональную активность В-системы. Все же можно предположить, что данное явление обусловлено улучшением презентации антигена активированными клетками мононуклеарно-фагоцитарной системы, либо результатом лучшего функционирования Т-хелперного звена.
Таким образом, применение рекомбинантного аналога IL-2- ронколейкина для лечения недоношенных детей с врожденными пневмониями бактериального генеза является адекватным и эффективным средством стимулирующей и заместительной терапии, так как позволяет уменьшить нагрузку антибиотиками, приводит к более быстрому снятию синдрома интоксикации и дыхательных расстройств, снижает риск осложнений, способствует адекватному реагированию иммунной системы на антигенную нагрузку и ее ускоренному созреванию.
Литература
1. Ивановская Т.Е., Зайрабьянц О.В., Леонова Л.В., Волощук И.Н. Патология тимуса у детей// СОТИС,- 1996.-С. 271.
2. Останин А.А., Пальцев А.В., Леплина О.Ю., Ше-вела Е.Я., Черных Е.Р. Опыт использования экстракорпоральной иммунотерапии в лечении хирургических больных с гнойно - септическими заболеваниями/ Медицинская иммунология,- 2000, Т.2, с. 43-51.
3. Chapel Н., Haeney М. Essentials of Clinical Imunology// Blackwell Science.- 1993.- P.336.
4. Chong K.T. Prophylactic administration of interleukin-2 protects mice from letal challenge with gram-negative bacteria// Infect. Immun..- 1987,- Vol. 56, №3,- P. 668-673.
5. Korl, Lian Sim Loo. Use of interleukin-2 and macrophages to treat herpes simplex virus infection in neonatal mice// J. Inf. Dis.- 1988.- Vol. 156, №6,- P. 1187-1192.
6. Kowano Y., Noma T. Yata. Improvement of decreased interleukin-2 (IL-2) responsiveness and IL-2 production in autologous mixed lymphocytes by interferon-y, and IL-2 and the role HLA DR antigen// Cell Immunol.- 1987.- Vol. 110, №1,- P. 56-57.
7. Nitshe D. Vermendung von interleukin-2 bei ausgebehnten bacteriellen infection// Patent №39100011.1, Germany, 1989.
поступила в редакцию 21.09.2000 отправлена на доработку 03.10.2000 принята к печати 25.01.2001
