CC BY
12
MICROBIOLOGY
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2021
Домотенко Л. В.1, Морозова Т. П.1, Шепелин А. П.1, Миронов А. Ю.2
ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРОВЕДЕНИЯ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИХ ТРАНСПОРТНЫХ СРЕД
1ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Роспотребнадзора, 142279, п. Оболенск, г. о. Серпухов, Московская обл., Россия;
2ФБУН «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского» Роспотребнадзора, 125212, Москва, Россия
Цель исследования - оценка эффективности проведения контроля качества транспортных сред в соответствии с требованиями отечественных и международных стандартов с использованием аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.
Представлены результаты сравнительной оценки выживаемости 10 штаммов аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов после хранения в полужидкой транспортной среде Эймса в течение 24 и 48 ч при температуре (4-8)° С и (20-25)° С в соответствии с требованиями отечественных и международных стандартов.
Методика, описанная в МУК 4.2.2316, вызывает ряд технических трудностей, ведущих к невоспроизводимым результатам. Оценка выживаемости микроорганизмов в полужидких транспортных средах по ГОСТ ISO 11133-2016 является качественной. Количественная оценка получена с использованием двух методов Swab Elution и Roll Plate, рекомендованных стандартом CLSIM40-A2.
Ключевые слова: микробиологические транспортные системы; выживаемость микроорганизмов; среда Эймса;
оценка качества; стандарт CLSIM40-A2. Для цитирования: Домотенко Л. В., Морозова Т. П., Шепелин А. П. Миронов А. Ю. Оценка качества транспортных систем в микробиологических лабораториях. Клиническая лабораторная диагностика. 2021; 66 (6): 374-378. DOI: http://dx.doi.org/10.51620/0869-2084-2021-66-6-374-378 Domotenko L.V.1, Morozova T.P.1, ShepelinA.P.1, MironovA.Yu.2 EFFICIENCY OF BACTERIOLOGICAL TRANSPORT MEDIA QUALITY CONTROL
1State Research Center for Applied Microbiology and Biotechnology, 142279, Obolensk, Serpukhov, Moscow region, Russia;
2G.N. Gabrichevsky Research Institute for Epidemiology and Microbiology, 125212, Moscow, Russian Federation
The aim of the study is to assess the effectiveness of quality control of transport environments in accordance with the requirements of domestic and international standards using aerobic and optional anaerobic microorganisms. The results of a comparative assessment of the survival of 10 strains of aerobic and optional anaerobic microorganisms after storage in the semi-liquid transport environment of Ames for 24 and 48 hours at temperatures (4-8)0 C and (20-25)0 C in accordance with the requirements of domestic and international standards are presented.
The methodology described in ICC 4.2.2316 causes a number of technical difficulties leading to non-reproducible results. The survival rate of microorganisms in semi-liquid transport environments under ISO 11133-2016 is of high quality. The quantitative assessment is based on two Swab Elution and Roll Plate methods recommended by the CLSI M40-A2 standard.
Key words: microbiological transport systems; Survival of microorganisms Ames' environment; Assess quality CLSI M40-A2.
For citation: Domotenko L. V., Morozova T. P., Shepelin A. P., Mironov A. Yu. Efficiency of bacteriological transport media quality control. Klinicheskaya Laboratornaya Diagnostika (Russian Clinical Laboratory Diagnostics). 2021; 66 (6): 374-378 (in Russ.). DOI: http://dx.doi.org/10.51620/0869-2084-2021-66-6-374-378
For correspondence: Domotenko L. V, Leading Researcher, Laboratory of Nutrient Medium Development; e-mail: domotenko@list.ru Information about authors:
Domotenko L. V., http://orcid.org/0000-0002-4785-6418; Morozova T. P., https://orcid.org/0000-0002-1891-9918; Shepelin A. P., http://orcid.org/0000-0002-8253-7527; Mironov A. Yu., https://orcid.org/0000-0002-8544-5230. Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest. Acknowledgment. The study had no sponsorship.
Received 15.03.2021 Accepted 25.03.2021
Введение. Инфекционные заболевания и связанная с ними смертность по-прежнему представляют серьёзную опасность для здоровья и жизни людей во всем мире. В XXI веке появились новые болезни, приводящие к эпидемиям и даже пандемиям, вызванные неизвестными ранее патогенами [1, 6]. Не снижают своей роли известные «старые» инфекции:
туберкулёз, менингиты, внебольничные пневмонии, вызывающие наиболее тяжёлые расстройства здоровья, приводящие к хроническим нарушениям, инвалидности и даже смерти [6]. В Российской Федерации сохраняется высокий уровень заболеваемости кишечными инфекциями и наносимого ими экономического ущерба [2].
Для корреспонденции: Домотенко Любовь Викторовна, вед науч. сотр. лаб. разработки питательных сред; e-mail: domotenko@list.ru
Сложившаяся эпидемиологическая ситуация ставит перед лабораториями, выполняющими микробиологические исследования, задачи по повышению качества лабораторной диагностики инфекций с целью более эффективного использования результатов в лечебном процессе [3]. Качество лабораторного теста рассматривается как достоверность и возможность его воспроизведения. К одним из основных факторов, влияющих на достоверность и воспроизводимость результатов лабораторного анализа, относятся качество лабораторных материалов [4,5], к которым относятся транспортные системы и их составляющие: транспортная среда и устройство для взятия аналита.
Бактериологические лаборатории всё чаще получают пробы инфицированного материала на тампонах, помещённых в сухую пробирку или в транспортную среду. Многие врачи предпочитают отбор и транспортирование проб в транспортных системах из-за простоты использования, низкой стоимости и доступности.
Влияние типа транспортной системы и её составляющих на результаты исследований часто недооценивается. Вероятно, это связано с безоговорочной верой в то, что требования, предъявляемые к транспортным средам, обязательно выполняются. Исходя из определения, транспортная среда в отличие от питательной среды должна обеспечивать сохранение жизнеспособности микроорганизма и обязана предупредить или в значительной степени лимитировать размножение микроорганизмов.
Оценке качества транспортных систем, транспортных сред и тампонов посвящено большое количество публикаций, в основном, зарубежных исследователей [7-12]. В медицинских учреждениях часто используется только один тип тампона и транспортной среды для удовлетворения всех потребностей в микробиологическом анализе, например, в скрининговых тестах на статус бактериального носитель-ства, для диагностики инфекций кожи и слизистых оболочек или конъюнктивы глаз или для получения образцов во время операций и др.
Доступными являются коммерческие транспортные системы, содержащие различные транспортные среды и устройства для взятия аналита. Транспортные среды представлены, в основном, полужидкими средами Кэри-Блэра, Стюарта (с углём или без угля), Эймса (с углём или без угля), жидкими средами - модифицированной средой Эймса и специальными средами, предназначенными конкретно для разных видов клинического материала. Устройства для взятия аналита представляют тампон на палочке (зонд-аппликатор), называемые в англоязычной литературе transport swab, в немецкой tupfer, по-русски - тампон-зонд, зонд-тампон и др. Тампоны в этих устройствах в классическом варианте изготовлены из хлопкового или вискозного волокна. Современные тампоны, укомплектованные с жидкими транспортными средами, изготовлены из вспененного полиуретана или нейлонового флок-волокна. Объём, удерживаемый тампонами, может различаться. Зонды-аппликаторы отличаются используемым материалом (деревянные, пластиковые, алюминиевые) или формой (алюминиевые стандартные, алюминиевые мягкие, алюминиевые витые и др.).
Выбор оптимальной транспортной системы осуществляют с использованием тест-штаммов микроорганизмов в соответствии с требованиями современных стандартов.
Цель исследования - оценка эффективности проведения контроля качества транспортных сред в соответствии с требованиями отечественных и международных стандартов с использованием аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.
Материал и методы. Использованы тест-штаммы Haemophilus influenzae ATCC 10211, Haemophilus influenzae ATCC 49247, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Staphylococcus aureus ATCC
МИКРОБИОЛОГИЯ
25923, Shigellaflexneri la 8516, Escherichia coli АТСС 25922, Pseudomonas aeruginosa АТСС BAA - 427, Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Moraxella catarrhalis ATCC 25238, полученные из Государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур «ГКПМ-Оболенск»; транспортная среда Эймса сухая производства ФБУН ГНЦ ПМБ. Оболенск, РУ № РЗН 2018/7437, приготовленная в соответствии с инструкцией производителя и разлитая в стеклянные пробирки с завинчивающимися пробками; тампоны-зонды полимерные с вискозным наконечником стерильные в индивидуальной упаковке производства Ningbo Greetmed Medical Instruments Co. LTD, China, серия 20012018, годен до 19.01.2023.
H. influenzae засевали на шоколадный агар с ростовой добавкой (РУ № ФСР 2012/13081), S. pneumoniae, S. pyogenes, K. pneumoniae, M. catarrhalis на кровяной агар, приготовленный на основе колумбийского агара (РУ № РЗН 2020/12505), S. aureus, S. flexneri, E. coli, P. aeruginosa на питательную среду № 1 ГРМ (РУ № ФСР 2011/ 11415). Посевы инкубировали при температуре 35±20 С. Культивирование H. influenzae, S. pneumoniae, S. pyogenes осуществляли в капнофильной атмосфере, обогащенной 5% СО2.
Для определения сохранения жизнеспособности микроорганизмов в транспортных средах согласно рекомендациям МУК 4.2.2316-08 готовили суспензии соответствующих тест-штаммов в стерильном 0,85% растворе хлорида натрия по стандартному образцу мутности 10 ЕД (ОСО 10 МЕ) c концентрацией приблизительно 1,0*109 микробных клеток/мл. Согласно требованиям МУК, необходимо внести в 4 пробирки с транспортными средами по 1 мл суспензии из разведений 10-5 и 10-6. Из двух засеянных пробирок сразу после посева (0 проба), тщательно перемешав содержимое, произвести высев по 0,1 мл взвеси на чашки Петри с шоколадным агаром и инкубировать посевы в соответствующих условиях. Остальные пробирки с посевами выдержать при температуре (18-24)0 C в течение 24 ч, затем высеять на чашки Петри с соответствующими средами аналогично посеву 0 пробы.
Согласно стандарту M40-A2, готовили суспензии тест-штаммов бактерий в стерильном 0,85% растворе хлорида натрия по ОСО 10 МЕ. Для «Roll plate» метода использованы суспензии тест-штаммов из разведений 10-3-10-5. По 0,1 мл каждого разведения вносили в 3 стерильные пробирки, помещали в них стерильные тампоны-зонды, выдерживали их 10 с до полного впитывания тампоном суспензии и погружали в пробирки с транспортной средой так, чтобы тампон не доходил до дна пробирки 1,5-2,0 см и не касался стенок пробирки. Тампоны хранили в транспортной среде при регулируемой комнатной температуре (20-25)0 C и при температуре (4-8)0 С в течение 0, 24, 48 часов. После соответствующего времени хранения, включая 0 ч (через 10-15 с после инокуляции) для каждого разведения микроорганизмов, тампоны извлекали из транспортной среды и производили посев вращательными движениями тампона во всей поверхности соответствующих питательных сред (как бы прокатывая тампон). После инкубации посевов визуально учитывали результаты. Для получения достоверных результатов подсчёт колоний производили только на чашках, где росло от 25 до 250 колоний.
При использовании «Swab Elution» метода процедура приготовления суспензий тест-штаммов, их разведений, внесение тампонов-зондов в транспортные среды проводили аналогично «Roll plate» методу, но используя только одно разведение суспензии 10-3. Концентрация инокулята, внесённого с тампоном-зондом в транспортную среду, составляла 105 КОЕ/мл.
По окончании времени экспозиции (0 ч, 24 ч, 48 ч) тампоны извлекали из транспортных сред, помещали в пробирку с 1 мл стерильного 0,85% раствора хлорида натрия. Содержимое пробирок энергично перемешивали на вихревой мешалке типа Vortex в течение 15-20 с, готовили три деся-
MICROBIOLOGY
тикратных разведения в 0,85% растворе хлорида натрия. По 0,1 мл суспензий из всех полученных разведений высевали на чашки Петри с соответствующей питательной средой. По окончании инкубации подсчитывали количество выросших колоний, учитывая посевы, где наблюдался рост от 25 до 250 колоний. Количество жизнеспособных микроорганизмов после хранения в транспортной среде выражали в виде среднего значения, полученного для трёх образцов, вычисляли десятичный логарифм (lg) изменения концентраций жизнеспособных микроорганизмов относительно их количества в нулевой пробе (0 ч).
При использовании метода контроля качества полужидких транспортных сред, описанного в ГОСТ ISO 11133-2016, транспортную среду инокулировали тест-штаммами H. influenzae ATCC 10211 и P. aeruginosa АТСС BAA-427 с концентрацией инокулята 2-3*105 КОЕ /мл. Тампон-зонд помещали в 0,1 мл суспензии тест-штамма на 10 с, затем инокулировали им транспортную среду. Инокулированную транспортную среду инкубировали при температуре (20-25)0 C и при температуре (4-8)0 С в течение 24 и 48 часов. По окончании инкубации пересевали на соответствующие питательные среды и инкубировали посевы в необходимых условиях. После инкубации визуально отмечали наличие роста микроорганизмов.
Результаты и обсуждение. Процедура контроля качества транспортных сред (систем) регламентирована отечественными и международными нормативными документами. К ним относятся:
МУК 4.2.2316-08 «Методы контроля бактериологических питательных сред», рекомендованные для контроля качества питательных сред, в том числе транспортных для клинической и санитарной микробиологии [13]. В методических указаниях раздел 7.11. посвящён определению показателей сохранения жизнеспособности и стабильности основных биологических свойств микроорганизмов в транспортных средах;
ГОСТ ISO 11133-2016 «Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред», предназначенный для контроля качества питательных сред (включая транспортные среды), используемых в санитарной микробиологии [14]. С 2016 г. в ГОСТе впервые появился раздел 9.3 «Метод испытания транспортных сред»;
Международный стандарт CLSI М40-А2 «Quality control of Microbiological Transport systems» (Контроль качества микробиологических транспортных систем) специально предназначен для контроля качества микробиологических транспортных систем [15].
Существуют национальные стандарты других стран, например, германский DIN 58942-4-2003 «Medical microbiology - Culture media - Part 4: Transport systems for specimens containing bacteria» и DIN 58942-4-2003 Beiblatt 1 «Medical microbiology - Culture media - Part 4: Transport systems for specimens containing bacteria - Systems, media and conditions for the transport of selected pathogens in clinical specimens».
В России действуют два документа МУК 4.2.2316-08 и ГОСТ ISO 11133-2016. В иностранных публикациях ссылаются на использование методов контроля, описанных в первом или втором издании CLSI М40-А или CLSI М40-А2.
При сравнении методик контроля качества, приведённых в перечисленных документах, следует отметить, что они отличаются по процедуре и по оценочным критериям. В соответствии с требованиями МУК 4.2.2316-08 анализ проводится с помощью 5 штаммов микроорганизмов (S. aureus ATCC 25923, E. coli ATCC 25922, H. influenzae ATCC 49247, S. pneumoniae ATCC 49619, Candida albicans ATCC 24433), количество которых в транспортной среде после хранения в течение 24 ч при комнатной температуре (18-240 С) не должно отличаться от первоначального более чем в 10 раз.
В соответствии с требованиями ГОСТ ISO 11133-2016 для полужидких транспортных сред проводится качественный контроль, для жидких - подсчитывается количество микроорганизмов после хранения в транспортной среде, которое должно находиться в пределах ±30% от первоначального количества. Оценка качества проводится в условиях, принятых на практике или установленных в конкретном стандарте. В качестве тестируемых выбирают те виды микроорганизмов, для транспортировки которых используется контролируемая транспортная среда.
Международный стандарт CLSI М40-А2 предназначен для производителей и для лабораторий, использующих транспортные системы, контейнеры для мочи и фекалий. Для гарантии чувствительности устройств и их надёжности производителям рекомендуется осуществлять контроль полуколичественным методом посева тампоном (Roll-plate method) и количественным методом элюции тампона (Swab Elution method), при температуре (20-25)0 С и (2-8)0 С через 24 и 48 ч хранения с помощью 10 штаммов: P. aeruginosa ATCC BAA-427; S. pyogenes ATCC 19615; S. pneumoniae ATCC 6305; H. influenzae ATCC 10211; N. gonorrhoeae ATCC 43069; B. fra-gilis ATCC 25285; P. anaerobius ATCC 27337; F. nucleatum ATCC 25588; P. acnes ATCC 6919; P. melaninogenica ATCC 25845.
Лабораториям при валидации транспортной системы рекомендовано использовать оба метода или любой из них. В стандарте подробно описано проведение исследований для обоих методов, которые, несмотря на трудоёмкость выполнения, обеспечивают точность и надёжность результатов [8].
Для количественного метода оценки стандартом M40-A2 обозначены следующие критерии: для образцов, хранившихся при 40 C или комнатной температуре, допускается снижение КОЕ не более чем на 3 lg, в случае избыточного роста для образцов, хранившихся при 40 C, допускается увеличение КОЕ не более чем на 1 lg. Для качественного метода оценки допускается такое же увеличение КОЕ для образцов, хранившихся при 40 C. Стандартом не регламентируется увеличение количества КОЕ для образцов, хранившихся при комнатной температуре.
На примере полужидкой среды Эймса проведены сравнительные исследования по оценке качества с использованием различных методик. Оценка качества по методике, рекомендованной МУК 4.2.2316-08, вызывает ряд трудностей, связанных с невозможностью равномерно перемешать среду Эймса с суспензией тест-штаммов и отобрать пробу для посева из-за высокого содержания агара в среде, равной 4 г/л. При использовании данной методики получить воспроизводимые результаты не удается. Данный метод подходит для контроля качества только жидких транспортных сред.
Методика контроля качества полужидких транспортных сред, предлагаемая ГОСТ ISO 11133-2016, является качественной. При её использовании зарегистрировано наличие роста обоих тест-штаммов микроорганизмов после хранения в транспортной среде при обеих температурах через 24 и 48 ч, причём рост P. aeruginosa АТСС BAA-427 более интенсивный, чем рост H. influenzae ATCC 10211.
Количественная оценка выживаемости микроорганизмов в транспортной среде, обеспечивающая воспроизводимость результатов, получена только при использовании обоих методов - Roll plate и Swab Elution. Результаты исследований с использованием 11 тест-штаммов аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов, приведены в табл. 1 и 2.
В процессе хранения в среде Эймса может происходить гибель или усиленный рост тест-штаммов в зависимости от вида микроорганизма и условий хранения. Концентрации микроорганизмов со сложными питательными потребностями, таких как H. influenzae, S. pyogenes, S. pneumoniae, S. aureus, M. catarrhalis снижается на 1-2 lg. Такое поведение требовательных к условиям роста микроорганизмов согласуется с опубликованными результатами исследований
МИКРОБИОЛОГИЯ
Таблица 1
Количество жизнеспособных микроорганизмов после хранения в среде Эймса при различных температурах в течение 24 ч и 48 ч
при использовании Swab Elution метода
№ п/п Тест-штаммы Концентрация микроорганизмов в образце (КОЕ/мл) Десятичный логарифм изменения концентраций жизнеспособных микроорганизмов относительно 0 ч
0 ч 4-80 C 20-250 C 4-8 0 C 20-250 C
24 ч 48 ч 24 ч 48 ч 24 ч 48 ч 24 ч 48 ч
1. Haemophilus influenzae ATCC 10211 8,70> 104 6,45> <104 8,45> 103 6,53> 103 8,40> 102 -0,11 -1,00 -1,11 -2,00
2. Haemophilus influenzae ATCC 49247 1,05> 105 6,80> <104 8,86> 103 5,40> 104 3,42> 103 -0,17 -1,04 -0,27 -1,47
3. Streptococcus pyogenus ATCC 19615 5,32> 104 4,55> <104 1,05> 104 4,08> 103 9,10> 102 -0,07 -0,70 -1,12 -1,76
4. Streptococcus pneumoniae ATCC 6503 1,40> 105 5,95> <104 7,95> 103 6,10> 103 2,30> 103 -0,38 -1,26 -1,36 -1,77
5. Staphylococcus aureus ATCC 25923 2,00> 105 1,85> <105 1,24> 105 1,40> 105 9,82> 104 -0,04 -0,20 -0,14 -0,31
6. Moraxella catarrhalis ATCC 25238 1,72> 104 1,32> <104 1,20 >10 1,25> 104 4,05> 103 -0,11 -0,14 -0,13 -0,62
7. Pseudomonas aeruginosa АТСС BAA - 427 1,30> 105 3,74> <105 6,90> 105 6,55> 106 8,15> 107 +0,46 +0,73 +1,69 +2,78
8. Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853 1,15> 105 1,86> <105 3,55> 105 8,15> 106 9,40> 107 +0,26 +0,49 + 1,84 +2,91
9. Escherichia coli АТСС 25922 1,17> 105 1,94> <105 7,16> 105 2,75> 106 8,86> 107 +0,24 +0,78 +1,38 +2,88
10. Shigella flexneri 1a 8516 1,27> 105 1,50> <105 2,05> 105 1,05 >10 2,00> 107 +0,04 +0,26 +0,91 +2,12
11. Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 1,30> 105 1,47> <105 9,77> 105 2,55> 105 8,05> 106 +0,04 +0,88 +0,30 + 1,79
Таблица 2
Количество жизнеспособных микроорганизмов после хранения в среде Эймса при различных температурах в течение 24 ч и 48 ч,
определенное Roll plate методом
№ п/п Тест-штаммы Концентрация микроорганизмов в образце (КОЕ/мл) Десятичный логарифм изменения концентраций жизнеспособных микроорганизмов относительно 0 ч
0 ч 4-8 0 C 20-250 C 4-8 0 C 20-250C
24 ч 48 ч 24 ч 48 ч 24 ч 48 ч 24 ч 48 ч
1 Haemophilus influenzae ATCC 10211 4,10> <104 2,80> 104 3,00> 103 3,22> 103 3,88> <102 -0,17 -1,14 -1,11 -2,03
2. Haemophilus influenzae ATCC 49247 6,15> <104 3,72> 104 4,25> 103 2,40> 104 1,15> <102 -0,23 -1,15 -0,42 -2,71
3. Streptococcus pyogenus ATCC 19615 2,98> <104 2,17> 104 6,55> 103 2,65> 103 5,72> <102 -0,14 -0,65 -1,04 -1,71
4. Streptococcus pneumoniae ATCC 6503 8,20> <104 3,24> 104 5,20> 103 4,50> 103 1,10> <102 -0,39 -1,20 -1,26 -2,86
5. Staphylococcus aureus ATCC 25923 1,55> <105 1,10> 105 8,80> 104 9,15> 104 9,27> <104 -0,14 -0,25 -0,23 -0,24
6. Moraxella catarrhalis ATCC 25238 1,10> <104 8,85> 103 8,40> 103 7,25> 103 2,85> <103 -0,07 -0,12 -0,11 -0,58
7. Pseudomonas aeruginosa АТСС BAA - 427 9,16> <104 3,22> 105 5,30> 105 5,70> 106 6,95> <107 +0,46 +0,76 +1,79 +2,85
8. Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853 8,75> <104- 1,05> 105 2,37> 105 6,00> 106 6,85> <107 +0,07 +0,43 +1,83 +2,89
9. Escherichia coli АТСС 25922 7,95> <104 1,15> 105 5,80х105 1,58х106 6,70> <107 +0,14 +0,86 +1,30 +2,92
10. Shigella flexneri 1a 8516 8,85> <104 9,30> 104 1,70> 105 8,25> 105 1,60> <107 +0,05 +0,28 +0,96 +2,25
11. Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 9,22> <104 9,85> 104 8,64> 105 1,78> 105 7,15> <106 +0,04 +0,96 +0,30 + 1,83
ряда зарубежных авторов, в которых описано даже полная гибель микроорганизмов при их хранении в некоторых транспортных системах [16]. Хранение P. aeruginosa и E. coli сопровождалось усиленным ростом на 2-3 lg особенно при комнатной температуре. Наиболее заметные изменения
концентраций жизнеспособных микроорганизмов наблюдались через 48 ч хранения в транспортной среде. Хранение тест-штаммов S. aureus ATCC 25923, S. flexneri 1a 8516 в транспортной среде не вело к заметным изменениям концентраций.
MICROBIOLOGY
Более высокие концентрации жизнеспособных микроорганизмов после хранения в транспортной среде, определённые количественным методом Swab Elution, объясняются техникой проведения исследования. При выполнении данного метода извлечение микроорганизмов, адсорбированных на тампоне, производилось на вихревой мешалке типа Vortex, при Roll plate методе извлечение микроорганизмов происходит при контакте тампона с поверхностью питательной среды.
При анализе полученных результатов с позиций оценочных критериев трёх рассмотренных стандартов, получается, что по требованиям МУК 4.2.2316-2008, транспортная среда не может быть использована в работе, поскольку допустимо только изменение концентрации соответствующих тест-штаммов в процессе хранения не более чем в 10 раз. Качественная оценка по требованиям ГОСТ 11133-2016, количественная и полуколичественная оценка по требованиям CLSI M40-A2 допускают применение данной транспортной среды. Необходимо учитывать поведение в транспортных средах различных микроорганизмов особенно при их совместном присутствии в анали-те, взятом из нестерильных в норме локусов. Важно объективно обнаружить именно возбудитель инфекции, а не комменсальный микроорганизм.
Заключение. Транспортные системы стали неотъемлемой частью рутинной работы микробиологической лаборатории. Выбор оптимальной транспортной системы для выполнения конкретной задачи в целях стандартизации исследований подтверждает необходимость проведения процедуры контроля качества транспортной системы.
Среди методов контроля, приведённых в трёх стандартах, оптимальными по процедуре исполнении и критериям качества, являются два метода CLSI M40-A2. Этот стандарт не переведён на русский язык и отсутствует в открытом доступе. Назрела необходимость в актуализации МУК 4.2.2316 в части контроля качества транспортных сред и транспортных систем.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Финансирование. Работа выполнена в рамках отраслевой программы Роспотребнадзора.
ЛИТЕРАТУРА (пп . 1, 7-12, 15, 16 см .REFERENCES)
2. О состоянии санитарно-эпидемиологического благополучия населения в Российской в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека; 2020. URL: https://www.rospotrebnad-zor.ru/upload/iblock/8e4/gosdoklad-za-2019_seb_29_05.pdf (дата обращения 12.02.2021).
3. Меньшиков В.В. Зачем клинической лаборатории нужна стандартизация и как её применить на практике? Учебно-методическое пособие. М.: Лабора; 2012.
4. ГОСТ Р ИСО 15189-2015. Лаборатории медицинские Частные требования к качеству и компетентности: Дата введения 201606-01. URL: https://files.stroyinf.ru/Data2/1/4293764/4293764303. pdf (дата обращения 28.01.2021).
5. Дятлов И. А., Миронов А. Ю., Шепелин А. П., Алёшкин В. А. Состояние и тенденции развития клинической и санитарной микробиологии в Российской Федерации и проблема импортозамеще-ния. Клиническая лабораторная диагностика. 2015: 60 (8): 61-5.
6. Микробиология и иммунология. Учебник. Воробьёв А.А., ред. 2-е изд. М.: Медицина; 2005.
13. Методы контроля бактериологических питательных сред. Методические указания. М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора; 2008.
14. ГОСТ ISO 11133-2016. Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство,
хранение и определение рабочих характеристик питательных сред: дата введения 2017-07-01. URL: https://meganorm.ru/ Data/631/63141.pdf (дата обращения 12.02.2021).
REFERENCES
1. World Health Organization SARS (Severe Acute Respiratory Shttps://www.rospotrebnadzor.ru/upload/iblock/8e4/gosdoklad-za-2019_seb_29_05.pdf yndrome). 2019. URL: https://www.who. int/ith/diseases/sars/en/ (Date of treatment 02/28/2021).
2. On the state of the sanitary-epidemiological well-being of the population in the Russian Federation in 2019: State report. Moscow: Rospotrebnadzor; 2020. URL: (Date of treatment 02/28/2021). (in Russian)
3. Men'shikov V.V. Why does the clinical laboratory need standardization and how to apply it in practice? Teaching aid. Moscow: Labora; 2012. (in Russian)
4. GOST R ISO 15189-2015. Medical laboratories. Requirements for quality and competence: Date of introduction 2016-06-01. URL: https://files.stroyinf.ru/Data2/1/4293764/4293764303.pdf (Date of treatment 02/28/2021). (in Russian)
5. Dyatlov I. A., Mironov A. Yu., Shepelin A. P., Alyoshkin V. A. The state and trends of clinical and sanitary microbiology in the Russian Federation and the problem of import substitution. Klinicheskaya laboratornaya diagnostika. 2015: 60 (8): 61-5. (in Russian)
6. Microbiology and immunology. Textbook [Mikrobiologiya i immunologiya. Uchebnik]. Vorob'yov A.A., ed. 2nd ed. Moscow: Meditsina; 2005. (in Russian)
7. Warnke P., Warning L., Podbielski A. Some Are More Equal - A Comparative study on swab uptake and release of bacterial suspensions. PLoS ONE. 2014; 9: e102215. doi:10.1371/journal.pone.0102215.
8. Gizzie N., Adukwu E. Evaluation of liquid-based swab transport systems against the new approved CLSI M40-A2 standard. J. Clin. Microbiol. 2016; 54: 1152-6. doi:10.1128/JCM.03337-15.
9. Nys S., Vijgen S., Magerman K., Cartuyvels R. Comparison of Copan eSwab with the Copan Venturi Transystem for the quantitative survival of Escherichia coli, Streptococcus agalactiae and Candida albicans. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 2010; 29: 453-6. doi: 10.1007/s10096-010-0883-5.
10. Tano E., Melhus A. Evaluation of three swab transport systems for the maintenance of clinically important bacteria in simulated mono- and polymicrobial samples. APMIS. 2011; 119: 198-203. doi:10.1111/j.1600-0463.2010.02710.x.
11. Tan T. Y., Yong Ng L. S., Fang Sim D. M., Cheng Y., Hui Min M. O. Evaluation of bacterial recovery and viability from three different swab transport systems. Pathology. 2014; 46: 230-3. doi:10.1097/ pat.0000000000000074.
12. Elcocks E., Adukwu E.C. Laboratory evaluation of the Sigma Tran-swab transport system for the recovery of Candida species using the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) document M40-A2. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 2021; 40: 735-8 doi: 10.1007/s10096-020-04062-9.
13. Methods for the control of bacteriological culture media: Methodical instructions. Moscow: Federal'nyi Tsentr gigieny I epidemiolo-gii Rospotrebnadzora; 2008. (in Russian)
14. GOST ISO 11133-2016. Microbiology of food, animal feed and water. Preparation, production, storage and performance testing of culture media: introduction date 2017-07-01. URL: https://meganorm. ru/Data/631/63141.pdf (Date of treatment 02/12/2021). (in Russian)
15. CLSI. Quality control of Microbiological Transport systems; Approved Standard - Second Edition. CLSI М40-А2. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standard Institute. 2014; 34: 54.
16. DeBurger B., Mortensen J. What's New in the World of Swabs? Journal of Continuing Education Topics and Issues. 2008; Article 332: 18-22.
Поступила 15.03.21 Принята к печати 25.03.21
