CC BY
61
УДК:616.233-002-036.12]-085
Вестник СПбГУ. Сер. 11. 2012. Вып. 4
Е. В. Евсюкова1, М. Н. Палей1, А. В. Вьюшина2, А. В. Притворова2
ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ АНТИОКСИДАНТОВ В КОМПЛЕКСНОЙ ТЕРАПИИ ХРОНИЧЕСКОЙ ОБСТРУКТИВНОЙ БОЛЕЗНИ ЛЕГКИХ
1 ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный университет», медицинский факультет;
2 ФГБУН «Институт физиологии им. И. П. Павлова» РАН, Санкт-Петербург
Хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ) представляет серьезную проблему в современной медицине, поскольку распространенность и летальность от этого заболевания постоянно увеличивается [1, 2]. Частота среднетяжелого течения болезни во всем мире составляет среди женщин 5,1-16,7% случаев, среди мужчин — 8,5%-22,2%, причем среди лиц старше 55 лет число больных достигает 10%. При этом смертность от ХОБЛ колеблется от 4,4 на 100 тысяч населения в Японии до 130 на 100 тысяч в Китае [3, 4]. В России число больных ХОБЛ превышает 11 миллионов [5].
Для хронической обструктивной болезни легких характерны прогрессирующая необратимая обструкция дыхательных путей с преимущественным поражением дис-тальных отделов (бронхиолит) и деструкция паренхимы легких (эмфизема). В настоящее время исследователи уделяют особое внимание изучению патогенеза данного заболевания, что позволит определить новые подходы к терапии и профилактике. Установлено, что центральным звеном в патогенезе ХОБЛ является развитие экссудативного, продуктивного и склеротического воспаления, при котором нейтрофилы, макрофаги, лимфоциты и эпителиальные клетки воздухоносных путей выделяют большое количество различных хемокинов и хемоаттрактантов, что ведет к развитию дисбаланса в системе протеазы-антипротеазы и окислительному стрессу [6-8]. Окислительный стресс сопровождается избыточным образованием активных форм кислорода (АФК) в условиях хронического воспаления в сочетании с воздействием реактивных радикалов кислорода и азота, имеющихся в сигаретном дыме [9].
Известно, что генерация АФК происходит в различных субклеточных структурах в процессе нормально протекающих окислительно-восстановительных реакций. В организме здорового человека существует баланс между интенсивностью свободно-радикального окисления (СРО) и активацией механизмов антиоксидантной защиты, ее специфических и неспецифических компонентов, что препятствует активации пере-кисного окисления липидов. При патологических состояниях увеличение АФК приводит к окислительной деструкции белков, липидов, углеводов и нуклеиновых кислот. Активация факторов транскрипции с увеличением экспрессии провоспалительных генов, а также ремоделирование хроматина в результате окислительного стресса является одной из основных причин персистирующего воспаления при ХОБЛ [8].
К сожалению, современная фармакотерапия ХОБЛ, включающая ингаляционные бронхолитики и глюкокортикостероиды, не способна предотвратить прогрессирующее снижение функции внешнего дыхания и способствовать увеличению продолжительности жизни больных [10, 11]. В связи с этим представляется целесообразным включение в комплексную терапию ХОБЛ антиоксидантов для воздействия на основное звено патогенеза этого заболевания.
© Е. В. Евсюкова, М. Н. Палей, А. В. Вьюшина, А. В. Притворова, 2012
Поскольку ХОБЛ характеризуется снижением проходимости бронхов, то уже на ранних стадиях заболевания развивается гипоксия, приводящая к нарушению энергетического обмена на клеточном уровне в результате подавления функции элементов митохондриальной дыхательной цепи. Это сопровождается нарушением тканевого дыхания и является причиной поражения не только дыхательной, но и других функциональных систем организма больных ХОБЛ. Известно, что в присутствии специфических антигипоксантов — корректоров энергетического обмена — полностью или частично предупреждаются или купируются нарушения синтеза энергии и энергозависимой функциональной активности клеток [12]. Поскольку при хронической обструктивной болезни легких наряду с гипоксией происходит активация свободно-радикального окисления, мы полагали, что эффективности патогенетической терапии можно достичь при использовании препаратов, обладающих как антигипоксическим, так и антиоксидантным свойствами. Показано, что подобными свойствами обладает убихинон [13, 14]. Проникая через биологические мембраны и встраиваясь в мито-хондриальную дыхательную цепь в условиях острой гипоксии, экзогенный убихинон способствует восстановлению ее электрон-транспортной функции. Антиоксидантное действие убихинона сходно по своему механизму с таковым у токоферолов [12]. Убихинон (коэнзим Q10) синтезируется в организме из аминокислоты тирозин при участии витаминов В2, В3, В6, Вш С, фолиевой и пантотеновой кислоты, а также ряда микроэлементов. Получена восстановленная форма кофермента Q — убихинол (биологически активная добавка к пище «Кубинол» фирмы «Витамакс»). Убихинол содержит две дополнительные гидроксильные группы, что делает его более растворимым и обеспечивает высокую биологическую доступность и проникающую способность [15].
Цель настоящего исследования — изучить эффективность применения БАД Куби-нол в комплексном лечении больных ХОБЛ.
Материал и методы. Обследовано 49 больных ХОБЛ различной степени тяжести в фазе ремиссии заболевания. Диагноз выставляли на основании оценки клинической картины и результатов исследования функции внешнего дыхания в соответствии с классификацией ХОБЛ по степени тяжести заболевания (GOLD 2003). Основную группу (I) составили 25 человек, которые получали БАД Кубинол по 1 таблетке 2 раза в день в течение 30 дней. Среди них у 4 имелась первая стадия заболевания, у 8 — вторая, у 9 — третья и у 4 — четвертая. Средний возраст пациентов составил 59,40±1,46 лет, а индекс курящего человека — 45,18±2,60 пачка/лет. В группу сравнения (II) вошли 24 больных ХОБЛ, не получавших Кубинол. Среди них у 4 имелась первая стадия заболевания, у 9 — вторая, у 8 — третья и у 3 — четвертая. Средний возраст пациентов составил 59,54±0,99 лет, а индекс курящего человека — 49,92±3,64 пачка/лет. В период исследования пациенты обеих групп, имевшие первую и вторую стадии заболевания, не получали бронхолитическую и противовоспалительную терапию, тогда как больные, имевшие третью и четвертую стадии заболевания, принимали тиотропия бромид (Спирива) по 18 мкг в сутки и беродуал по потребности. Контрольную группу составили 23 здоровых некурящих добровольца, не имеющих хронической бронхоле-гочной патологии и аллергических заболеваний.
Перед началом и на 30-й день лечения наряду с оценкой клинического состояния у больных ХОБЛ исследовали показатели функции внешнего дыхания до и после проведении бронхолитической пробы (ЖЕЛ — жизненная емкость легких, ФЖЕЛ — форсированная жизненная емкость легких, ОФВ1 — объем форсированного выдоха за
первую секунду, ОФВ1/ФЖЕЛ — тест Тиффно, ПОСвыд — пиковая объемная скорость выдоха, МОС50% и МОС75% — максимальная объемная скорость выдоха при 50% и 75% форсированной ЖЕЛ) с помощью спирометра «Диамант». Проводили также определение насыщения гемоглобина кислородом (SaO2) с помощью пульсоксиметра «NIKSY» (модель MD300 C1, производитель Beijing Choice Electronic Technology CCo, China). Исследования повторяли на 30-й день терапии и через 14 дней после ее окончания у больных основной группы и через 45 дней у пациентов группы сравнения. В эти же сроки осуществляли забор венозной крови для исследования окислительной модификации белков и количества восстановленных тиолов.
Для количественного определения продуктов окислительной модификации белков применяли метод, основанный на реакции взаимодействия карбонильных производных окиотенных аминокислотных остатков белков с 2,4-динитрофенилгидразином (2,4-ДНФГ) с образованием 2,4-динитрофенилгидразонов, которые регистрировали спектрофотометрически [16]. Перед исследованием сыворотку разводили физиологическим раствором в 10 раз (1:10). Содержание белка в сыворотке крови измеряли по методу Лоури. Для исследования уровня спонтанной ОМБ к 50 мкл разведенной сыворотки приливали 0,95 мл 0,01 М №-К-фосфатного буфера. Для определения стимулированной ОМБ количество буфера уменьшали до 0,75 мл. В качестве стимулирующей системы Фентона в пробу добавляли 0,1 мл смеси 10 мМ Fe2+ и ЭДТА 10 Мм (1:1) и 0,1 мл 0,1 М H2O2. Ставили две параллельные пробы, одна из которых служила контролем. Конечный объем проб составлял 1 мл. Контрольные и опытные пробы инкубировали в течение 15 мин при 37°С. После инкубации в пробы добавляли 1 мл холодной 20% ТХУ для осаждения белка, затем в опытные пробы добавляли 1 мл 0,1 М 2,4-динитрофенилгидразина для окрашивания продуктов ОМБ, а в контрольные добавляли 1 мл 2 М HCL. Окрашивание проводили в течение одного часа при комнатной температуре. Затем пробы центрифугировали при 200g в течение 10 мин в центрифуге К-26. Осадок дважды промывали 2-3 мл смеси этанол-этилацетат (1:1), высушивали и растворяли в 3 мл 8 М мочевины с добавлением 1 капли 2 М HCL.
Продукты реакции — карбонильные производные белков, образовавшиеся на стадии инициации процесса, регистрировали при длине волны 270 нм, а на стадии элонгации — при 363 нм и 370 нм. Количество продуктов ОМБ выражали в единицах оптической плотности, рассчитанной на 1 мг белка (Е/мг белка). Для оценки стимулированной ОМБ использовали величину приращения ОМБ, вычитая из значений, полученных в пробе после индукции реактивом Фентона, значения спонтанной ОМБ. Измерения проводили на спектрофотометре СФ 26.
Спонтанная (СП) ОМБ является показателем, характеризующим базальный уровень окисленных белков. Индуцированная (ИНД) ОМБ указывает на наличие субстрата для свободно-радикальных процессов, т. е. является показателем устойчивости системы к переокислению.
Количество восстановленных тиолов определяли по методу В. В. Соколовского (1997). Результаты выражали в мкМ в расчете на 1 мл. Уровень восстановленных ти-олов является показателем, характеризующим работу многих компонентов АОС. Во-первых, они сами являются низкомолекулярными антиоксидантами, так называемыми «тушителями» АФК. Во-вторых, от их концентрации зависит активность ферментов глютатионпероксидазы и глютатионредуктазы, участвующих в антиоксидантной защите организма.
Статистическую обработку материала проводили с помощью стандартного приложения прикладных программ <^1а1М1са» ^6. для персонального компьютера 1Р 166 ММХ. Достоверность различий между средними величинами параметров определяли с помощью непараметрических критериев Вилкоксона для зависимых выборок, а для независимых — и-критерия Манна—Уитни. Критический уровень достоверности нулевой статистической гипотезы принимали равным 0,05.
Результаты исследований и обсуждение. Результаты исследований показали, что у больных ХОБЛ даже в фазу ремиссии заболевания повышено содержание карбонильных производных, образовавшихся на стадии инициации спонтанного окисления аминокислотных остатков белков (0,025±0,005 Е/мг против 0,011±0,002 Е/мг у здоровых, Р < 0,05). О высоком уровне СРО белков свидетельствует значительное их снижение и на стадии элонгации процесса (0,013±0,002 Е/мг против 0,020±0,003 Е/мг у здоровых, Р < 0,05). Известно, что в составе сигаретного дыма присутствуют некоторые стабильные водно-растворимые оксиданты, которые вызывают окисление белков плазмы и окислительную деградацию микросомальных белков в тканях легких, сердца, печени [17]. Кроме того, токсическое действие АФК проявляется не только при значительной активации свободно-радикальных процессов, но и при снижении активности антиок-сидантной защиты. У больных ХОБЛ наблюдается низкий уровень восстановленных тиолов (0,417±0,015 мкМ/л против 0,524±0,012 мкМ/л у здоровых лиц, Р < 0,001), что является свидетельством истощения антиоксидантных резервов.
Влияние Кубинола на показатели окислительной модификации белков и уровень восстановленных тиолов у больных основной группы продемонстрировано в таблице 1.
Таблица 1. Показатели ОМБ и уровень восстановленных тиолов при включении Кубинола в базисную терапию больных ХОБЛ
Этапы определения показателей ОМБ и тиолов (25 больных) Показатели ОМБ Тиолы (мкМ/л)
270 нм 363 нм
спонтанная (Е/мг) индуцированная (Е/мг) спонтанная (Е/мг) индуцированная (Е/мг)
До лечения 0,025±0,005 0,114±0,010 0,013±0,002 0,146±0,007 0,417±0,015
Через 30 дней лечения 0,011±0,004 0,125±0,011 0,016±0,002 0,138±0,007 0,363±0,011
Через 14 дней после лечения 0,016±0,004 0,127±0,008 0,023±0,008 0,149±0,006 0,370±0,012
Р1 <0,05 <0,001 >0,05 >0,05 =0,001
Р2 =0,05 >0,05 >0,05 <0,05 >0,05
Примечание: достоверность различий между показателями до лечения и через 30 дней лечения — Р1, через 30 дней лечения и через 14 дней после его окончания — Р2.
К концу лечения (30-й день) наблюдается снижение уровня спонтанного окисления белков на стадии инициации процесса, которое приближается к таковому у здоровых людей. При этом возрастает индуцированная окислительная модификация белков
в модели металлкатализируемого окисления in vitro, что указывает на наличие дополнительных резервов для окисления. Полученные данные свидетельствуют о нормализации свободно-радикальных процессов в результате применения больными Кубино-ла, следствием чего является качественное изменение гем-содержащих белков и кисло-родтранспортной функции эритроцитов. Так, увеличивается насыщение гемоглобина кислородом после лечения (SaO2 97,76±0,24% по сравнению с 97,08±0,28%, Р = 0,001). Возможно, уменьшение интенсивности СРО, а значит, деградации белков на фоне лечения Кубинолом, способствует улучшению функции внешнего дыхания у больных ХОБЛ (табл. 2, 3).
Таблица 2. Исходные показатели функции внешнего дыхания у больных ХОБЛ, получавших (I) и не получавших (II) Кубинол, перед началом лечения (А) и через 30 дней лечения (В)
Группы Показатели
ЖЕЛ ФЖЕЛ ОФВ1 ОФВ1/ ФЖЕЛ ПОСв^1д МОС50% МОС75о%
I А 75,96±3,93 74,39±4,08 54,90±4,34 57,15±2,49 58,36±3,90 25,38±2,85 22,19±1,88
В •• 78,17±3,72 ••• 76,80±3,95 ••• 58,14±4,30 •• 58,53±2,19 60,57±3,87 ••• 29,31±3,10 ••• 25,81±1,91
II А 78,33±3,50 76,03±3,70 56,75±4,38 57,05±2,12 62,64±4,10 28,91±4,13 22,71±3,32
В 77,98±3,76 75,91±3,70 56,40±4,34 57,04±2,13 62,28±4,16 28,72±4,05 22,76±3,41
Примечание: достоверность различий между показателями А и В — Р < 0,05 •, Р < 0,01 ••, Р < 0,001 •••.
Таблица 3. Постбронходилатационные показатели функции внешнего дыхания у больных ХОБЛ, получавших (I) и не получавших (II) Кубинол, перед началом лечения (А) и через 30 дней лечения (В)
Группы Показатели
ЖЕЛ ФЖЕЛ ОФВ1 ОФВ1/ ФЖЕЛ ПОСвыд МОС50%% МОС75%%
I А 78,62±3,92 77,85±3,96 58,36±4,53 56,97±2,29 61,81±3,91 28,26±3,00 23,87±1,90
В 80,93±3,60 •• 79,80±3,85 ••• 61,44±4,39 ••• 61,84±2,53 63,30±4,01 ••• 32,64±3,62 ••• 28,62±2,08
II А 79,28±3,41 77,68±3,62 58,20±4,51 57,51±2,35 65,00±4,38 31,67±4,56 26,10±4,10
В 79,33±3,51 •• 76,76±3,77 •• 56,92±4,26 57,05±2,01 •• 63,68±4,27 30,93±4,56 25,38±3,75
Примечание: достоверность различий между показателями А и В — Р < 0,05 •, Р < 0,01 ••, Р < 0,001 •••.
Из таблиц видно, что к концу лечения у больных, получавших Кубинол, повышаются как исходные, так и постбронходилатационные значения показателей вентиляционной способности легких на уровне проксимальных и дистальных отделов бронхиального дерева, хотя бронхиальная обструкция остается необратимой.
У больных, не получавших Кубинол в комплексной терапии ХОБЛ, показатели окислительной модификации белков и уровень восстановленных тиолов остались без изменений (табл. 4). При этом у больных наблюдалась тенденция к снижению насыщения гемоглобина кислородом ^а02 97,25±0,33% против 97,46±0,32%, Р > 0,05). Кроме того, уменьшились постбронходилатационные значения показателей функции внешнего дыхания (табл. 3), что можно связать с изменением состояния рецепторного аппарата мембран, которое способствовало снижению реакции бронхиального дерева на бронхолитик. Так, изменение пиковой скорости выдоха (ПОСвыд) после ингаляции беротека уменьшилось к концу лечения с 2,36±0,79% до 1,41±0,52% (Р < 0,05), а форсированной жизненной емкости легких — с 2,03±0,69% до 0,91±0,54% (Р < 0,05). Изменение объема форсированного выдоха за первую секунду также имело тенденцию к уменьшению с 1,47±0,49% до 0,52±0,51% (Р = 0,09).
Таблица 4. Показатели ОМБ и уровень восстановленных тиолов у больных ХОБЛ, получавших
базисную терапию без Кубинола
Этапы определения показателей ОМБ и тиолов (24 больных) Показатели ОМБ Тиолы (мкМ/л)
270 нм 363 нм
спонтанная (Е/мг) индуцированная (Е/мг) спонтанная (Е/мг) индуцированная (Е/мг)
До лечения 0,029±0,005 0,108±0,013 0,020±0,003 0,126±0,010 0,384±0,016
Через 30 дней 0,034±0,004 0,111±0,008 0,018±0,003 0,119±0,008 0,379±0,018
Через 45 дней 0,038±0,005 0,111±0,008 0,018±0,002 0,113±0,009 0,376±0,016
Р1 >0,05 >0,05 >0,05 >0,05 >0,05
Р2 >0,05 >0,05 >0,05 >0,05 >0,05
П р и м е ч ан и е: достоверность различий между показателями до лечения и через 30 дней — Р1, до лечения и через 45 дней — Р2.
Следует отметить тот факт, что у больных ХОБЛ как при обычной бронхолитиче-ской терапии, так и при комбинации ее с Кубинолом остается сниженным по сравнению со здоровыми уровень восстановленных тиолов. Известно, что аскорбиновая кислота и восстановленные тиолы, в частности глутатион, функционируют в качестве основных антиоксидантов цитозоля [18]. Восстановленная форма глутатиона защищает клетки от токсических ксенобиотиков и поддерживает клеточный гомеостаз белковых тиолов и низкомолекулярных антиоксидантов. Восстановленный глутатион используется глутатионпероксидазой в защитных реакциях организма [18]. Возможно, низкий уровень глутатиона при обычной бронхолитичекой терапии у больных ХОБЛ обусловлен сохраняющимся у них окислительным стрессом, который, как показали другие исследователи, характеризуется низким содержанием сульфгидрильных групп в плазме крови [19]. Мы полагаем, что при применении антиоксиданта Кубинола в сочетании с обычной терапией у больных ХОБЛ проявляется эффект заместительной терапии, при котором хотя и снижается продукция эндогенного глутатиона, но антиоксидант-ная защита при этом не страдает, о чем свидетельствует нормализация окислительной модификации белков.
Результаты исследования дают основания полагать, что эффективность биологически активной добавки Кубинол в комплексной терапии ХОБЛ обеспечивается не только его антиоксидантными свойствами, но и выраженным антигипоксическим действием, которое осуществляется путем коррекции энергетического обмена клетки и улучшения ее энергозависимой функциональной активности.
Однако через 14 дней после прекращения приема Кубинола у больных вновь наблюдается умеренное усиление спонтанной окислительной модификации белков на стадии инициации процесса, тогда как на стадии элонгации спонтанная и индуцированная ОМБ по-прежнему не отличаются от таковых у здоровых людей (спонтанная соответственно 0,023±0,008 Е/мг и 0,020±0,003 Е/мг, Р > 0,05, а индуцированная — 0,149±0,006 Е/мг и 0,153±0,013 Е/мг, Р > 0,05). У больных, не получавших БАД Кубинол, показатели ОМБ не претерпели существенных изменений в течение 45 дней базисной терапии ХОБЛ.
Таким образом, результаты наших исследований свидетельствуют о том, что патогенетическая терапия ХОБЛ должна осуществляться с использованием антиокси-дантов и антигипоксантов, среди которых эффективным является обладающий этими свойствами Кубинол. Необходимы дальнейшие исследования дозы и режима применения антиоксидантов и антигипоксантов в зависимости от стадии заболевания ХОБЛ и образа жизни больного (интенсивности курения).
Литература
1. €Jhapman K. R., Mannino D. M., Soriano J. B. et al. Epidemiology and costs of chronic obstructive pulmonary disease // Eur. Respir. J. 2006. Vol. 27. P. 188-207.
2. Глобальная инициатива по хронической обструктивной болезни легких (Global Initiative for Chronic Obstructive Lung Disease — GOLD), пересмотр 2008 г. / пер. с англ. М.: Издательский холдинг «Атмосфера», 2009. 100 с.
3. Хронический бронхит и обструктивная болезнь легких / под ред. А. Н. Кокосова. СПб.: Издательство «Лань», 2002. 288 с.
4. Chung K. F., Adcock J. M. Multifaceted mechanisms in COPD: inflammation, immunity and tissue repair and destruction // Eur. Respir. J. 2008. Vol. 31, N 6. P. 1334-1356.
5. Рациональная фармакотерапия заболеваний органов дыхания. Руководство для практикующих врачей / под ред. А. Г. Чучалина. М.: Литера, 2004. 874 с.
6. Tetley Т. D. Inflammatory cells and chronic obstructive pulmonary disease // Curr. Drug Targets Inflamm. Allergy. 2005. Vol. 4, N 6. P. 607-618.
7. MacNee W. Pathogenesis of Chronic Obstructive Pulmonary Disease // Proc. Am. Thorac. Soc. 2005. Vol. 2. P. 258-266.
8. MacNee W., Tuder R. M. New Paradigms in the Pathogenesis of Chronic Obstructive Pulmonary Disease I // Proc. Am. Thorac. Soc. 2009. Vol. 6. P. 527-531.
9. Mak J. C. W. Pathogenesis of COPD. Part II. Oxidative-antioxidative imbalance // Int. J. Tuberc. Lung Dis. 2008. Vol. 12, N 4. P. 368-374.
10. Sadowska A. M., Luyten C., Vints A.-M. et al. Systemic antioxidant defences during acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease // Respirology. 2008. Vol. 11. P. 741-747.
11. Цой А. Н., Лазарева Н. Б. Возможности влияния современной фармакотерапии на исход заболевания при хронической обструктивной болезни легких // Пульмонология. 2008. Т. 1. С. 110-114.
12. Крылов В. Н., Лукьянова Л. Д. Антигипоксическое действие экзогенного убихинона (коэн-зима Q) // Проблемы гипоксии: молекулярные, физиологические и медицинские аспекты / под ред. Л. Д. Лукьяновой, И. Б. Ушакова. М., 2004. С. 188-513.
13. Донченко Г. В. Биохимия убихинола (Q). Киев: Наук. думка, 1988. 240 с.
14. Littarru G. P., Tiano L. Bioenergetic and antioxidant properties of coenzyme Q10: recent developments // Mol. Biotechnol. 2007. Vol. 37, N 1. P. 31-37.
15. Вездесущий коэнзим — настоящее чудо // Журнал дистриб. комп. Витамакс. 2010. № 4. С. 22-25.
16. Levine R. L., Carland D., Oliver C. N. et al. Determination of carbonyl content in oxidatively modified proteins // Methods Enzymol. 1990. Vol. 186. P. 464-478.
17. Gardner P. R., Raineri I., Epstein L. B., White C. W. Superoxide radical and iron modulate aconi-tase activity in mammalian cells // J. Biol. Chem. 1995. Vol. 270, N 22. P. 13399-13405.
18. Дубинина Е. Е. Продукты метаболизма кислорода в функциональной активности клеток (жизнь и смерть, созидание и разрушение). Физиологические и биохимические аспекты. СПб.: Медицинская пресса, 2006. 400 с.
19. Квакина Е. Б., Тарасьянц Ф. М., Шихлярова А. И. Сульфгидрильные группы плазмы крови как тест повышения неспецифической резистентности при лечении магнитным полем // Тез. докл. Куйбышевской обл. конф. ВОИР «Применение магнитных полей в клинике». Куйбышев, 1976. С. 108-110.
Статья поступила в редакцию 2 июля 2012 г.
