CC BY
5VETERINARY SCIENCES
ЭФФЕКТИВНОСТЬ КОМПЛЕКСНОГО СРЕДСТВА ПРОТИВ ЯИЦ TOXOCARA CANIS В
ЛАБОРАТОРНОМ ОПЫТЕ IN VITRO
Сафиуллин Р. Т.
доктор ветеринарных наук, профессор, Сафиуллин Р.Р.
кандидат биологических наук Москва
Всероссийский научно-исследовательский институт фундаменальной и прикладной паразитологии
животных и растений - филиал Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Федеральный научный центр - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко Российской академии наук»
EFFICIENCY OF COMPLEX AGAINST EGGS TOXOCARA CANIS IN VITRO LABORATORY
EXPERIMENT
Safiullin R.,
doctor of veterinary sciences, professor
Safiullin R.
candidate of biological sciences Moscow
All-Russian Scientific Research Institute for Fundamental and Applied Parasitology of Animals and Plant -a branch of the Federal State Budget Scientific Institute "Federal Scientific Centre VIEV"
DOI: 10.5281/zenodo.7673201
Аннотация
Для борьбы с гельминтозами плотоядных животных усилиями ученых и практиков предложено ряд препаратов и средств как против эндогенных стадий, так и против экзогенных. Проблема токсокароза плотоядных животных продолжает ставить задачи перед исследователями, а именно совершенствовать меры борьбы с экзогенной стадией развития яиц. Из современных средств, используемых против экзогенных стадий развития яиц токсокар плотоядных следует отметить препараты, созданные на основе хлора, фенола, йода, едких щелочей и другие, которые в своем большинстве являются моновалентными и по своей эффективности не устраивают запросы ветеринарной практики. Исходя из отмеченного перед собой поставили задачу испытать овоцидную активность комплексного средства цистодез, состоящего из глутаро-вого альдегида, алкил диметилбензил аммония хлорида, изопропилового спирта, полиэтиленгликоля 400, против яиц Toxocara canis в лабораторном опыте in vitro.
Комплексное средство дезинвазии цистодез в лабораторном опыте in vitro в 3%-ной концентрации против яиц Toxocara canis показало 94,06%-ную интенсэффективность. В концентрациях 4 и 5% интенсэф-фективность испытуемого средства против яиц токсокар собак составила 100%. Препарат сравнения фенол 4%-ный обеспечил 86,5%-ную интенсэффективность.
Abstract
To combat helminthiases in carnivores, scientists and practitioners have proposed a number of drugs and agents against both endogenous and exogenous stages. The problem of toxocariasis in carnivores continues to pose challenges for researchers, namely, to improve measures to combat the exogenous stage of egg development. Of the modern drugs used against the exogenous stages of development of eggs of toxocara carnivores, it should be noted drugs based on chlorine, phenol, iodine, caustic alkalis and others, which are mostly monovalent and do not suit the requirements of veterinary practice in terms of their effectiveness. Based on the above, we set ourselves the task of testing the ovocidal activity of the complex agent cystodesis, consisting of glutaraldehyde, alkyl dime-thylbenzyl ammonium chloride, isopropyl alcohol, polyethylene glycol 400, against Toxocara canis eggs in an in vitro laboratory experiment.
The complex agent of disinvasion cystodesis in a laboratory experiment in vitro at a 3% concentration against eggs of Toxocara canis showed 94.06% intensification. At concentrations of 4 and 5%, the intensity of the test agent against eggs of Toxocara dogs was 100%. Comparator phenol 4% provided 86.5% intensification.
Ключевые слова: яйца Toxoсаra canis, комплексное средство дезинвазии, интенсэффективность.
Keywords: eggs of Toxocara canis, complex means of disinfestation, intensity efficiency.
Введение
Проведенными исследованиями установлено, что зараженные гельминтами животные ежедневно с фекалиями выделяют большое количество яиц,
которые контаминируют объекты внешней среды инвазионными элементами. При этом инвазионные элементы многих паразитов животных весьма устойчивы во внешней среде и сохраняют свою
жизнеспособность в течение длительного времени: ооцисты эймерий птиц, свиней и крупного рогатого скота больше года, цисты балантидий свиней больше года, яйца трихоцефал свиней, яйца токсо-кар плотоядных - больше двух лет, яйца свиной аскариды - больше четырех лет.
Для достижения устойчивых результатов в борьбе с гельминтозами плотоядных животных усилиями ученых и практиков предложено ряд препаратов и средств как против эндогенных стадий, так и против экзогенных. Проблема токсокароза плотоядных животных продолжает ставить задачи перед исследователями, а именно совершенствовать меры борьбы с экзогенной стадией развития яиц. Из современных средств, используемых против экзогенных стадий развития яиц токсокар плотоядных следует отметить препараты, созданные на основе хлора, фенола, йода, едких щелочей и другие, которые в своем большинстве являются моновалентными и по своей эффективности не устраивают запросы ветеринарной практики.
Исходя из отмеченного перед собой поставили задачу испытать овоцидную активность комплексного средства цистодез, состоящего из глутарового альдегида, алкил диметилбензил аммония хлорида, изопропилового спирта, полиэтиленгликоля 400, против яиц Toxocara canis в лабораторном опыте in vitro.
Материалы и методы
При испытании овоцидной активности комплексного средства цистодез против яиц Toxocara canis работа состояла из двух этапов: приготовление культуры яиц Toxocara canis и изучение ово-цидных свойств разных концентраций комплексного средства цистодез по сравнению с базовым препаратом фенол в лабораторном опыте in vitro.
Приготовление культуры яиц Toxocara canis. Яиц токсокар собак собирали из свежих фекалий инвазированного молодняка собак шестимесячного возраста при исследовании по флотационному методу Фюллеборна. Сбор яиц токсокар проводили с помощью паразитологической петли, снимая поверхностную пленку раствора в чашку Петри с дистиллированной водой, их трижды отмывали от соли водой, подсчитывали количество яиц в 1 мкл и в 1 мл, перемешивали с 1%-ным раствором соляной кислоты и использовали в своей работе.
Были приготовлены рабочие растворы, содержащие 3; 4 и 5%-ную концентрацию комплексного средства цистодез и с 4%-ной концентрацией базового препарата фенола. Изучение овоцидной активности разных концентраций комплексного средства цистодез и рекомендованной концентрации фенола проводили в опыте по культивированию яиц Toxocara canis в термостате при 26-28°С в чашках Петри в условиях влажной камеры в течение 30 суток и в каждую камеру закладывали по 500 экз.яиц. В первой камере культивирование проходило в физрастворе, она была контрольная. Во вторую, третью и четвертую камеры вносили растворы, содержащие 3; 4 и 5%-ную концентрацию комплексного средства цистодез соответственно. 4%-ную концентрацию фенола вносили в пятую камеру. Через 24 часа
яйца Toxocara canis из второй по пятую камеру отмывали трехкратно дистиллированной водой, мик-роскопировали для выявления изменений структуры, целостности оболочки, добавляли воду и ставили на культивирование. В период культивирования яиц один раз в два дня проводили аэрацию и вели наблюдения за эмбриогенезом. Жизнеспособность яиц Toxocara canis устанавливали по внешнему виду при световой микроскопии (10х40) и путем окрашивания.
Интенсэффективность испытанных в опыте средств дезинвазии определяли, используя следующую формулу:
ЮКЖЯк—КЖЯо /-./л
=-х 100, где
КЖЯк
ИЭ - интенсэффективность средства (препарата), %;
КЖЯК - количество жизнеспособных яиц в контрольной группе;
КЖЯо - количество жизнеспособных яиц в опытной группе.
Результаты исследований
При осмотре под микроскопом после 24-часовой экспозиции яиц T.canis в разных дезинфектан-тах каких-либо изменений в их структуре перед постановкой на культивирование не выявили. А яйца контрольной группы, находящиеся в физиологическом растворе были на стадии двух бластомеров. В дальнейшем, при осмотре через 2; 4; 6 и 8 суток в них наблюдали активное развитие бластомеров, их было от 4 до 32 и т.д. Во второй группе, где яйца T.canis были обработаны 3%-ным раствором комплексного средства цистодез в указанные сроки развития бластомеров наблюдали у 3-10% яиц. Тогда как в третьей и четвертой группах, где яйца T.canis были обработаны 4 и 5%-ными растворами комплексного средства цистодез во все сроки наблюдения развития бластомеров и личинок в яйцах не отмечали. В пятой группе, где яйца T. canis были обработаны базовым препаратом фенолом 4%-ным, развитие бластомеров, а затем и личинок в разное время отмечали у 9-17% яиц.
Проведенные нами наблюдения через 9; 11; 13 суток и дальше с начала культивирования показали процесс развития личинок внутри яиц T. canis, которые делали активные движение до 24-26-суточ-ного периода, а затем у них наступил период покоя и они двигались только при подогревании.
Наиболее четкая картина развития бластомеров и личинок внутри инвазионных яиц T.canis была нами отмечена в контрольной группе.
Во второй и пятой группах бластомеры и личинки развивались не во всех яйцах T.canis, которых находили и выделяли для дальнейшего наблюдения.
Через 30 суток культивирования яиц T.canis в термостате проводили заключительную оценку, согласно которой в контрольной группе 488 яиц T.ca-nis имели развившихся внутри личинок, что составляет 97,6% от исходно заложенных 500 экз. и этот
показатель мы использовали при расчете интенсэф-фективности испытанных дезинфектантов. Во второй группе после обработки 3%-ной концентрацией комплексного средства цистодез всего 29 яиц T.ca-nis имели внутри развившихся личинок, что составляет 5,8% от первоначально заложенных яиц 500 экз., отсюда интенсэффективность составила 94,06%. А в пятой группе после обработки 4%-ным раствором фенола яиц токсокар имели внутри развившихся личинок, что составляет 13,2% от первоначально заложенных яиц.
Интенсэффективность комплексного средства цистодез против яиц T.canis в 3%-ной концентрации составила 94,06%, в 4 и 5%-ной концентрациях - 100%. Фенол, взятый в качестве базового препарата, обеспечил 86,5%-ную интенсэффективность.
Дифференциацию живых яиц от погибших осуществляли путем окрашивания по 30 яиц из каждой группы. Для окраски яиц T.canis использовали раствор, состоящий из метиленового синего, молочной кислоты и едкой щелочи в соотношении: 0,05; 0,5 г и 15 мл, соответственно. Живые яйца из камер не окрашивались, а зародыши мертвых яиц были окрашены в синий цвет.
В результате проведенных исследований определена активная и эффективная концентрация комплексного средства цистодез против яиц T.canis в лабораторном опыте, которая пригодна для дезин-вазии объектов внешней среды.
Заключение
Комплексное средство дезинвазии цистодез в лабораторном опыте in vitro в 3%-ной концентрации против яиц Toxocara canis показало 94,06%-ную интенсэффективность. В концентрациях 4 и 5% интенсэффективность испытуемого средства против яиц токсокар собак составила 100%. Препарат сравнения фенол 4%-ный обеспечил 86,5%-ную интенсэффективность. В контрольной группе жизнеспособных яиц Toxocara canis было 97,5%, которые внутри имели развившихся личинок.
Список литературы
1. Акбаев М.Ш., Василевич Ф.И., Акбаев Р.М. и др. Паразитология и инвазионные болезни животных. - М. - 2008. - 776 с.
2. Котельников, Г.А. Гельминтологические исследования животных и окружающей среды. -М., 1984. - 208 с.
3. Методические указания по снижению риска заражения населения возбудителями парази-тозов. МУ 3.2.1022-01. М., 2001 - 85 с.
4. Правила проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора. М., 2002 - 74 с.
5. Сафиуллин Р.Т., Шибитов С.К. Средство для дезинвазии против цист букстонелл крупного рогатого скота. Патент №2673677. Бюл.34 от 29.11.2018. - 11 с.
