CC BY
37
Аграрная наука Евро-Северо-Востока, №6(61), 2017 г. УДК 636.084.56:636.087.73
Эффективность использования биологически активных веществ торфа в кормлении быков-производителей Русаков Роман Васильевич, кандидат биол. наук, доцент, зав. лабораторией, Вылегжанин Андрей Владимирович, младший научный сотрудник ФГБНУ «Зональный научно-исследовательский институт сельского хозяйства Северо-Востока имени Н.В. Рудницкого», г. Киров, Россия
E-mail: romanrusakov@mail.ru
Цель исследований - оценить эффективность скармливания быкам-производителям биологически активной добавки с антиоксидантными свойствами, полученной из торфа, в отношении качества спермопродукции. Исследования проводили в 2016 г по методу групп-периодов (предварительный, опытный и заключительный) в условиях специализированного племпредприятия ОАО «Кировплем» Кировской области. Было сформировано 2 аналогичные группы животных - опытная и контрольная по 10 голов в каждой. В опытный период в течение 30 дней животным опытной группы скармливали изучаемую добавку, содержащую 8,3% гуминовых и 24,7% фульвовых кислот, в количестве 50 мл на голову в сутки в смеси с комбикормом. В предварительный и заключительный периоды, продолжительностью по 60 дней каждый, добавку в рационе не использовали. В ходе исследований установлено, что комплекс веществ с антиоксидантными свойствами, входящих в состав добавки, обладал положительным эффектом в отношении поддержания высокого качества спермопродукции животных. В опытный период концентрация сперматозоидов в эякуляте быков, получавших кормовую добавку, увеличилась на 0,07млрд/мл, или 7,4%, в заключительный период - на 0,08 млрд/мл, или 8,4% (Р<0,05) в сравнении с предварительным периодом опыта. У быков контрольной группы данный показатель не имел существенных отличий. Активность сперматозоидов у животных опытной группы в опытный период увеличилась на 0,56 балла или 8,7% (Р<0,05) к предварительному периоду, в то время как у быков в контроле только на 0,3 балла или 4,8%. Биологически активные вещества в составе добавки, действуя на организм племенных быков, оптимизировали метаболические процессы в сперматозоидах, что способствовало повышению их устойчивости к криоконсерви-рованию, в результате количество выбракованных замороженных спермодоз за период наблюдений в опытной группе животных в среднем на одного быка было на 44,3 дозы, или 60,5 % меньше, чем в контроле.
Ключевые слова: антиоксиданты, быки-производители, кормление, биологически активная добавка, репродуктивные функции
Интенсификация молочного скотоводства во многом зависит от активности использования элитных быков-улучшателей. Получаемая от них спермопродукция должна отвечать требованиям высокого качества. Однако неполноценное или несбалансированное питание животных приводит к снижению продуктивности, нарушению воспроизводительной функции и естественной резистентности. Следствием дисбаланса питательных веществ в рационе животных может быть возникновение недостаточности биоантиок-сидантов в организме и развитие цепных сво-боднорадикальных процессов, которые усугубляют патологические состояния, связанные с нарушениями обмена веществ [1, 2, 3, 4, 5]. В результате уменьшаются сроки и эффективность использования производителей и снижается рентабельность их содержания в целом.
С целью профилактики нарушений обмена веществ и развития свободнорадикальных процессов в состав рационов животных вводят различные премиксы и биологически активные добавки, восполняющие дефицит минеральных веществ, витаминов и других биологически активных компонентов с антиоксидантными свойствами [6, 7, 8, 9, 10].
В последние годы широкое распростране-
ние в животноводстве и, особенно, в ветеринарной медицине получили препараты гуминовых и фульвовых кислот. Содержат в своем составе макро-, микроэлементы, витамины. Применяются как кормовые добавки, так и парэнтераль-но. В основном используются для повышения резистентности организма животных [11].
Убедительные данные А.М. Берковича и соавторов [12] об антиоксидантном эффекте гуминовых веществ на организм животных, способность гуминовых кислот и их производных, полученных путем переработки торфа, повышать активность иммунной и кроветворной систем, положительно влиять на перевариваемость питательных веществ, повышать общую неспецифическую резистентность организма, а также данные А.И. Горовой и соавторов [13] о влиянии гуминовых веществ на качество спермы быков-производителей, явились основанием для выбора в качестве объекта исследований кормовой биологически активной добавки из торфа.
Цель исследований - оценить эффективность скармливания быкам-производителям биологически активной добавки с антиокси-дантными свойствами, полученной из торфа, в отношении качества спермопродукции.
Материал и методы. Исследования выполняли в 2016 г. на базе лаборатории кормления сельскохозяйственных животных НИИСХ Севе-
ро-Востока и в ОАО «Кировплем» (г. Киров). Для изучения эффективности скармливания кормовой добавки, содержащей гуминовые кислоты, было сформировано две аналогичные группы животных - опытная и контрольная по 10 голов в каждой. При подборе быков в группы учитывали возраст (3,9-4,2 года), породу (черно-пестрая голштинизированная) и исходную биопродуктивность животных. Условия кормления и содержания, а также эксплуатационные режимы использования быков-производителей в обеих группах были идентичными. В рационе содержалось 59% сухого вещества (СВ); концентрация обменной энергии в 1 кг СВ составляла 9,1 МДж; содержание сырого протеина было на уровне 160, а сырой клетчатки -220 г/кг СВ. По основным компонентам рацион был сбалансирован и соответствовал нормам кормления быков-производителей живой массой 1000 кг со средней нагрузкой 1-2 дуплет-ные садки в неделю.
Изучение эффективности скармливания добавки и ее влияния на биопродукцию быков-производителей выполняли по принципу групп-периодов. В первый (предварительный) период продолжительностью 60 дней быки опытной группы получали основной рацион без включения добавки. Во второй (опытный) период в течение 30 дней в составе рациона подопытным животным изучаемую биологически активную добавку скармливали в смеси с комбикормом в количестве 50 мл на голову в сутки. В заключительный период, продолжительностью 60 дней, животные опытной и контрольной групп вновь содержались на одинаковом основном рационе, по составу и
Таблица 1
Показатели нативной спермы (М±т)
питательности соответствующем рационам предварительного и опытного периодов, без включения изучаемой добавки.
В исследованиях использовали биологически активную добавку, являющуюся водным экстрактом торфа, полученную путем диспергирования и экстрагирования в установившемся поле ультразвукового воздействия. Добавка представляла собой густую жидкость темно-коричневого цвета, содержащую 8,3% гуминовых и 24,7% фульвовых кислот.
В ходе исследований у быков учитывали количественные и качественные показатели спермопродукции. Определяли концентрацию и активность сперматозоидов, количество полученных эякулятов, объемы выбракованной спермы, количество замороженных и поступивших в банк спермодоз. При оценке качества спермопродукции пользовались методиками, изложенными в [14]. Оценку значимости результатов проводили с использованием ^критерия Стьюдента и и-критерия Манна-Уитни.
Результаты и их обсуждение. В ходе исследований установлено, что общее количество полученных эякулятов от подопытных животных обеих групп имело тенденцию к снижению в течение всего опыта (табл. 1). Количество качественных эякулятов у быков опытной группы в течение всего периода наблюдений оставалось стабильным; у быков контрольной группы имело тенденцию к увеличению в опытный и заключительный периоды на 4,1 и 6,0% (Р>0,05), в сравнении с предварительным периодом опыта. Число выбракованных эякулятов за период опыта имело тенденцию к снижению в обеих группах животных.
Показатель Период
предварительный опытный заключительный
Получено эякулятов, всего 8,43±0,80 9,00±0,51 8,14±0,54 8,57±0,65 8,29±0,82 8,50±0,53
В т.ч. качественные 6,64±0,80 7,34±0,74 6,91±0,64 7,37±0,75 7,04±0,80 7,28±0,62
брак 1,78±0,48 1,66±0,43 1,23±0,41 1,21±0,34 1,24±0,46 1,22±0,35
Объем эякулята, мл 5,88±0,42 4,86±0,37 6,11±0,60 4,50±0,33 6,44±0,75 4,88±0,45
Концентрация, млрд/мл 0,91±0,04 0,95±0,04 0,90±0,04 1,02±0,03* 0,99±0,05 1,03±0,04*
Активность, балл 6,21±0,35 6,45±0,20 6,51±0,28 7,01±0,18* 6,98±0,32 6,89±0,34
Примечания: числитель - данные *Р<0,05 в сравнении
контрольных животных; знаменатель - опытных; с предварительным периодом
Концентрация сперматозоидов - важный показатель качества спермы, необходимый для расчета степени разведения полученного эякулята. Чем выше концентрация сперматозоидов и больше объем эякулята, тем большее количество спермодоз может быть получено. В результате исследований установлено, что применение биологически активной добавки в течение 30 дней в составе рациона кормления быков способствовало достоверному (Р<0,05), зависимому от использования добавки, увеличению концентрации сперматозоидов в эякуляте быков опытной группы в сравнении с контрольными животными. В опытный период концентрация сперматозоидов в эякуляте быков, получавших изучаемую добавку, увеличилась на 7,4%, в заключительный период - на 8,4% (Р<0,05) в сравнении с предварительным периодом опыта. При этом у быков контрольной группы, не получавших кормовую добавку, концентрация сперматозоидов в эякуляте в опытный период не имела существенных отличий от предварительного периода, а в заключительный период данный показатель имел тенденцию к увеличению на 8,8% (Р>0,05).
Активность сперматозоидов в эякуляте быков обеих групп имела тенденцию к увеличению в течение всего периода наблюдений. При этом скармливание добавки способствовало увеличению количества сперматозоидов с прямолинейно-поступательными движениями у животных опытной группы во второй период на 8,7% (Р<0,05) к предварительному периоду, в то время как у быков в контроле только на 4,8% (Р>0,05). В заключительный период активность спермиев в эякуляте опытных быков снизилась
почти на 2% к опытному периоду.
Таким образом, полученные результаты свидетельствуют об эффективности изучаемой биологически активной добавки из торфа в отношении поддержания высокого качества спер-мопродукции быков-производителей. Комплекс веществ с антиоксидантными свойствами, входящих в состав добавки, оказал положительное влияние на концентрацию сперматозоидов в эякуляте и стимулировал их активность. По-видимому, биологически активные вещества в составе добавки стимулировали метаболизм в организме быков, способствовали оптимизации жирового и белкового обменов, что отразилось на синтезе половых гормонов, которые, в свою очередь, оказали стимулирующее влияние на репродуктивные функции животных.
В таблице 2 представлены количественные показатели спермопродукции, характеризующие эффективность эксплуатации быков-производителей, и влияние на них скармливания изучаемой биологически активной добавки. Количество нативной (неразбавленной) спермы в среднем за период в ходе эксперимента у быков опытной группы было выше, чем у контрольных животных, и отличалось большей стабильностью. При этом количество забракованной нативной спермы у животных опытной группы было зависимо от использования добавки, что выражалось в снижении количества брака в опытный период на 45,2% (Р<0,05) в сравнении с предварительным периодом и последующей тенденции к увеличению данного показателя в заключительный период на 24,4% (Р>0,05) в сравнении с опытным.
Таблица 2
Количественные показатели спермопродукции быков (М±т)
Показатель Период
предварительный опытный заключительный
Нативная сперма, мл 44,43±4,70 48,93±5,47 37,14±3,38 48,21±4,62 40,64±3,76 47,36±3,50
из них брак 8,21±2,28 11,21±2,05 6,07±1,87 6,14±1,33* 6,29±2,13 7,64±1,79
Заморожено, доз 951,79±117,30 954,29±172,95 997,50±106,59 845,00±88,94 1055,71±110,41 1038,21±143,47
из них брак 75,36±14,57 89,29±8,42 118,57±15,06* 95,00±13,39 148,57±31,32* 118,21±19,45
Оприходовано, доз 876,43±109,34 865,00±176,80 878,93±98,50 750,00±85,89 907,14±98,92 920,00±152,56
Примечания: числитель - данные контрольных животных; знаменатель - опытных; *Р<0,05 в сравнении с предварительным периодом
Основным и конечным показателем, характеризующим продуктивность быков-производителей, является количество замороженных спермодоз. Это определенные объемы разбавленной спермы, пригодной для осеменения коров, направляемых в банк спермопродукции, и в последующем реализуемых в хозяйства, занимающиеся молочным скотоводством. На этапе замораживания и перед передачей в банк-хранилище производится оценка качества получаемых спермодоз. Не отвечающие требованиям дозы выбраковываются.
Использование в рационе кормления изучаемой биологически активной добавки с антиоксидантным действием не оказало существенного влияния на общее количество замороженных спермодоз. При этом было отмечено достоверное влияние скармливания добавки на их качество перед передачей в хранилище. Так, у контрольных животных за период наблюдений количество бракованных спермодоз возросло на 97,1% (P<0,05), в то время как у быков опытной группы увеличение данного показателя в заключительный период составило 32,4% по отношению к периоду до опыта.
Таким образом, можно предположить, что биологически активные вещества в составе добавки, действуя на организм быков-производителей, оптимизировали метаболические процессы в сперматозоидах, что способствовало повышению их устойчивости к криоконсервированию.
Выводы. Комплекс веществ с антиок-сидантными свойствами, входящих в состав биологически активной добавки из торфа, при скармливании быкам-производителям в течение 30 дней оказал влияние на концентрацию сперматозоидов в эякуляте и стимулировал их активность. Так, в опытный период концентрация сперматозоидов в эякуляте быков, получавших изучаемую добавку, увеличилась на 7,4%, в заключительный период - на 8,4% (Р<0,05) в сравнении с предварительным периодом опыта. У быков контрольной группы данный показатель не имел существенных отличий. Количество сперматозоидов с прямолинейно поступательными движениями у животных опытной группы в опытный период увеличилось на 8,7% (Р<0,05) к предварительному периоду, в то время как у быков в контроле только на 4,8%. Биологически активные вещества в составе изучаемой добавки, действуя на организм быков-производителей, оптимизировали метаболические процессы в сперматозоидах, что способствовало повышению их устойчивости к криоконсер-
вированию. У контрольных животных за период наблюдений количество бракованных спермо-доз возросло на 97,1% (P<0,05), в то время как у быков опытной группы увеличение данного показателя в заключительный период составило 32,4% по отношению к периоду до опыта.
Список литературы
1. Амерханов Х.А., Абилов А.И., Ескин Г.В., Ком-барова Н.А., Турбина И.С., Федорова Е.В., Варенников М.В., Гусев И.В. Содержание тестостерона и холестерина в сыворотке крови быков-производителей в зависимости от типа продуктивности, возраста и сезона года // Сельскохозяйственная биология. 2014. №2. С. 59-66.
2. Близнецова Г.Н., Рецкий М.И., Нежданов А.Г., Венцова И.Ю., Сафонов В.А. Состояние пероксидного окисления и системы антиоксидантной защиты у коров при патологическом течении послеродового периода и бесплодии // Современные проблемы диагностики, лечения и профилактики инфекционных болезней животных и птиц: сб. науч. тр. Екатеринбург: Уральское издательство, 2008. С. 38-48.
3. Кузнецов С., Кузнецов А. Витаминно-минераль-ное питание и воспроизводительная функция животных // Комбикорма. 2010. №1. С. 78-80.
4. Weiss W.P. Selenium nutrition of cattle: Presented at the 2002 Pacific Northwest Animal Nutrition Conference, Vancouver, BC, Canada. Originally published in Proceedings Pacific Northwest Nutrition Conference. 2002. P. 1-10.
5. Cortinhas C.S., Botaro B.G., Sucupira M.C.A., Ren-no F.P., Santos M.V. Antioxidant enzymes and somatic cell count in dairy cows fed with organic source of zinc, cooper and selenium // Livestock science. 2010. Jan. 127 (1). Р. 84-87.
6. Комбарова Н.А. Причины снижения воспроизводительной способности быков-производителей // Актуальные проблемы биологии воспроизведения животных: мат. Междунар. научн.-практич. конф. Дубровицы: ВНИ-ИЖ, 2007. С. 278-284.
7. Нетеча З.И., Фомичев Ю.П., Комбарова Н.А., Гвоздь В.Ф., Макеев Р.В., Федорова Е.В. Коррекция обменных процессов у быков-производителей со сниженной спермопродукцией // Актуальные проблемы биологии воспроизведения животных: мат. Междунар. научн.-прак-тич. конф. Дубровицы: ВНИИЖ, 2007. С. 344-349.
8. Буркат В.П., Бегма Л.А., Иванченко Н.И.. Повышение спермопродуктивности быков-производителей препаратами эхинацеи пурпурной // Актуальные проблемы биологии воспроизведения животных: мат. Междунар. на-учн.-практич. конф. Дубровицы: ВНИИЖ, 2007. С. 263-265.
9. Русаков Р.В. Комплекс БАВ с антиоксидантными свойствами в кормлении глубокостельных коров // Аграрная наука Евро-Северо-Востока. 2015. №6 (49). С. 65-69.
10. Сысуев В.А., Василенко Т.Ф., Русаков Р.В. Проблемы развития молочного животноводства в России и современные подходы к их решению // Достижения науки и техники АПК. 2017. Т.31. №3. С. 20-24.
11. Безуглова О.С., Зинченко В.Е. Применение гуми-новых препаратов в животноводстве (обзор) // Достижения науки и техники АПК. 2016. Т.30. №2. С. 89-93.
12. Беркович А.М., Бузлама В.С., Мещеряков Н.П. Лигфол - адаптоген стресс-корректор нового поколения. Повышение продуктивного здоровья животных // Под ред. А.М. Берковича. Воронеж: Из-во «Кварта», 2003. 148 с.
13. Горовая А.И., Орлов Д.С., Щербенко О.В. Гуми-новые вещества: строение, функции, механизм действия, протекторные свойства, экологическая роль. Киев: Науко-ва думка, 1995. 303 с.
14. Национальная технология замораживания и использования спермы племенных быков-производителей. / Под ред. Н.И. Решетниковой. М.:, 2008. 160 с.
The effectiveness of use of peat's biologically active substances in feeding of bulls
Rusakov R.V., PhD, associate professor, head of laboratory,
Vylegzhanin A.V., associated researcher
North-East Agricultural Research Institute, Kirov, Russia
The purpose of the research is to evaluate the effectiveness of bulls-producers feeding with biologically active food supplements with antioxidant properties derived from peat as to the quality of sperm. The study was carried out in 2016 by the method of group-periods (preliminary, experimental and final) in specialized breeding enterprises of the Kirov region. It was formed 2 analogous groups of animals - experimental and control one - 10 animals each. In the experimental period of 30 days the animals of the experimental group were fed with the studied Supplement containing 8.3% of humic and 24.7% fulvic acids in an amount of 50 ml per head per day mixed with feed. In the preliminary and final periods of 60 days each, the Supplement is not used. The studies established that the complex of substances with antioxidant properties that are included in the supplements had a positive effect in maintaining the high quality of the sperm of animals. In the experimental period, the concentration of sperm in the ejaculate of bulls that received feed additive increased by 0.07 billion/ml or 7.4%; in the final period by 0.08 billion/ml or 8.4% (p<0.05) in comparison with the prior period. In bulls of control group this indicator had no significant differences. The spermicidal activity in animals of the experimental group in the experimental period increased by 0.56 points or 8.7% (p<0.05) for the preliminary period while in control bulls only by 0.3 points or 4.8%. Biologically active substances in the additive, acting on the body of breeding bulls, optimized metabolic processes in sperm thereby increasing their resistance to cryopreservation; as a result, the number of culled frozen sperm doses for the observation period in the experimental group animals, in average per bull was 44.3 dose or 60.5% less than in control.
Key words: antioxidants, bulls, feeding, biologically active additive, reproductive function.
References
1. Amerkhanov Kh.A., Abilov A.I., Eskin G.V., Kom-barova N.A., Turbina I.S., Fedorova E.V., Varennikov M.V., Gusev I.V. Soderzhanie testosterona i kholesterina v syvorotke krovi bykov-proizvoditeley v zavisimosti ot tipa produktivno-sti, vozrasta i sezona goda. [The content of testosterone and cholesterol in blood serum of bulls depending on the type of productivity, age and season]. Sel'skokhozyaystvennaya bi-ologiya. 2014. no.2. pp. 59-66.
2. Bliznetsova G.N., Retskiy M.I., Nezhdanov A.G., Ventsova I.Yu., Safonov V.A. Sostoyanie peroksidnogo okis-leniya i sistemy antioksidantnoy zashchity u korov pri pato-logicheskom techenii poslerodovogo perioda i besplodii. [The state of peroxidation and antioxidant defense system in cows at pathological course of the postpartum period and infertility]. Sovremennye problemy diagnostiki, lecheniya i profilak-tiki infektsionnykh bolezney zhivotnykh i ptits: sb. nauch. tr. [Modern problems of diagnostics, treatment and prevention of infectious diseases of animals and birds: sb. nauch. tr.]. Ekaterinburg: Ural'skoe izdatel'stvo. 2008. pp. 38-48.
3. Kuznetsov S., Kuznetsov A. Vitaminno-mineral'noe pitanie i vosproizvoditel'naya funktsiya zhivotnykh. [Vitamin and mineral nutrition and reproductive function of animals]. Kombikorma. 2010. no. 1. pp. 78-80.
4. Weiss W.P. Selenium nutrition of cattle: Presented at the 2002 Pacific Northwest Animal Nutrition Conference, Vancouver, BC, Canada. Originally published in Proceedings Pacific Northwest Nutrition Conference. 2002. pp. 1-10.
5. Cortinhas C.S., Botaro B.G., Sucupira M.C.A., Renno F.P., Santos M.V. Antioxidant enzymes and somatic cell count in dairy cows fed with organic source of zinc, cooper and selenium. Livestock science. 2010. 127 (1). pp. 84-87.
6. Kombarova N.A. Prichiny snizheniya vosproiz-voditel'noy sposobnosti bykov-proizvoditeley. [Reasons for the decline in reproductive ability of bulls]. Aktual'nye problemy biologii vosproizvedeniya zhivotnykh: mat. Mezhdunar. nauchn.-praktich. konf. [Current issues of biology of animals reproduction: materials of International scientific-practical conference]. Dubrovitsy: VNIIZh, 2007. pp. 278-284.
7. Netecha Z.I., Fomichev Yu.P., Kombarova N.A., Gvozd' V.F., Makeev R.V., Fedorova E.V. Korrektsiya obmen-nykh protsessov u bykov-proizvoditeley so snizhennoy sper-
moproduktsiey. [Correction of metabolic processes in bulls with lower sperm production]. Aktual'nye problemy biologii vosproizvedeniya zhivotnykh: mat. Mezhdunar. nauchn.-prak-tich. konf. [Current issues of biology of reproduction of animals: materials of International scientific-practical conference]. Dubrovitsy: VNIIZh, 2007. pp. 344-349.
8. Burkat V.P., Begma L.A., Ivanchenko N.I. Povysh-enie spermoproduktivnosti bykov-proizvoditeley preparatami ekhinatsei purpurnoy. [Improving spermproducing of bulls with preparations of Echinacea purpurea]. Aktual'nye prob-lemy biologii vosproizvedeniya zhivotnykh: mat. Mezhdunar. nauchn.-praktich. konf. [Current issues of biology of reproduction of animals: materials of International scientific-practical conference]. Dubrovitsy: VNIIZh, 2007. pp. 263-265.
9. Rusakov R.V. Kompleks BAV s antioksidantnymi svoystvami v kormlenii glubokostel'nykh korov. [The complex of biologically active substances with antioxidant properties in feeding cows in late pregnancy]. Agrarnaya naukaEvro-Seve-ro-Vostoka. 2015. no. 6 (49). pp. 65-69.
10. Sysuev V.A., Vasilenko T.F., Rusakov R.V. Problemy razvitiya molochnogo zhivotnovodstva v Rossii i sovremennye podkhody k ikh resheniyu. [Problems of dairy farming development in Russia and modern approaches to their solution]. Dos-tizheniya nauki i tekhniki APK. 2017. Vol. 31. no. 3. pp. 20-24.
11. Bezuglova O.S., Zinchenko V.E. Primenenie gumi-novykh preparatov v zhivotnovodstve (obzor). [The use of humic preparations in animal husbandry (review)]. Dostizheniya nauki i tekhniki APK. 2016. Vol. 30. no. 2. pp. 89-93.
12. Berkovich A.M., Buzlama V.S., Meshcheryakov N.P. Ligfol - adaptogen stress-korrektor novogo pokoleniya. Povyshenie produktivnogo zdorov'ya zhivotnykh. [Ligfol -adaptogen stress-corrector of new generation. Increase of productive animal health]. Pod red. A.M. Berkovicha. Voronezh: Iz-vo «Kvarta», 2003. 148 p.
13. Gorovaya A.I., Orlov D.S., Shcherbenko O.V. Gu-minovye veshchestva: stroenie, funktsii, mekhanizm deystviya, protektornye svoystva, ekologiche-skaya rol'. [Humic substances: structure, function, mechanism of action, protective properties, ecological role]. Kiev: Naukova dumka, 1995. 303 p.
14. Natsional'naya tekhnologiya zamorazhivaniya i is-pol'zovaniya spermy plemennykh bykov-proizvoditeley. [National technology for freezing and usage of semen of breeding bulls]. Pod red. N.I. Reshetnikovoy. Moscow, 2008. 160 p.
